水城产中华大蟾蜍血细胞的显微观察
蟾蜍的消化系统(生物技术实验报告)
光镜下显微观察蟾蜍肠系膜毛细血管，蟾蜍消化系统的解剖实习一，实验目的：1，观察蟾蜍肠系膜毛细血管2，观察蟾蜍的消化系统二，实验原理：1，蟾蜍的正确握拿方法，动物探针的正确使用2，蟾蜍的“双毁髓”手术技术3，两栖类动物的解剖技术及手术剪的使用三，动物与器材：实验动物：雄性蟾蜍一只实验器械：显微镜，手术剪，骨剪，镊子，吸水纸，大头针，解剖针，解剖盘，有孔的蜡板。
四，实验步骤：1，左手食指与中指、无名指与小指分别夹着前肢、后肢，握住蟾蜍，拇指按住吻端使头部上下活动，两耳后腺间出现一道褶线，此线中点或用金属毁髓针沿头背中线向后移动触到一凹陷处，即枕骨大孔。
拇指下压使头前俯与脊柱相连处凸起，同时将毁髓针由凹陷处垂直刺入0.5~1mm，再将针从枕骨大孔向前平行刺入颅腔并在颅腔内搅动捣毁脑，然后再将毁髓针撤回至枕骨大孔，反向插入脊椎管破坏脊髓，检查蟾蜍四肢肌肉完全松驰后处死成功2，将蟾蜍置于有孔的蛙板上，腹部朝上，四肢伸展后用大头针固定。
左手用镊子提起腹部皮肤，用手术剪前端1/3处剪开一小口，并从小口处向前将腹部皮肤剪开至下颚前端。
向后剪至两后肢基部之间，泄殖孔稍前方再将皮肤向两侧拉开。
3，用镊子提起腹部肌肉，用剪刀沿腹部中线剪开腹壁，拉出一段小肠，用大头针将肠系膜展开并固定在有孔的蜡板上。
将肠系膜置于显微镜下观察，找到毛细血管，观察血液的流动并拍摄照片。
4，向两侧拉开蟾蜍的腹部肌肉找到蟾蜍的消化系统，小心地用剪刀和手术剪将其分离，置于解剖盘上并拍摄图片。
5，处理掉蟾蜍，洗净解剖盘和实验器械，将显微镜收好放入柜中。
五，实验结果：1，2，六，实验结论：1，毛细血管是体内分布最广、管壁最薄、口径最小的血管，仅能容纳1个红细胞通过。
其管壁主要由一层内皮细胞构成，在内皮外面有一薄层结缔组织。
毛细血管血流很慢，通透性大。
这些特点有利于血液与组织之间充分进行物质交换。
2，蟾蜍的肝脏在体腔的前部，呈红棕色，不完全地环绕着心包，一般蛙类至少有中，右，左三叶。
鲫鱼、中华蟾蜍、巴西彩龟血细胞形态、数量及Hb含量的研究
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目录
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摘 要....................................................................................................................I ABSTRACT（英文摘要）.................................................................................II 目 录....................................................................................................................III 第一章 引 言.........................................................................................................1
1.1课题的背景和意义 ......................................................................................1 1.2血液的组成成分 ..........................................................................................2 1.3变温动物血细胞的种类 ..............................................................................2
蟾蜍血细胞内DNA显示的孚尔根反应
蟾蜍血细胞内DNA显示的孚尔根反应侯艳香;任来峰【摘要】目的熟悉并掌握孚尔根反应的原理及实验操作方法,观察DNA细胞的形态和结构.方法取蟾蜍血细胞涂片,60℃ 1NHCL水解后,用Schiff试剂染细胞核,亮绿复染细胞质.结果显微镜下观察到细胞核被染成紫红色,细胞质为绿色.结论 DNA 细胞的核质红绿染色鲜明且清晰美观,让学生对生物学研究有了初步的认识.【期刊名称】《延安大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2015(013)004【总页数】2页(P9-10)【关键词】DNA;蟾蜍血细胞涂片;孚尔根反应【作者】侯艳香;任来峰【作者单位】山西医科大学汾阳学院检验系,山西汾阳032200;山西医科大学汾阳学院检验系,山西汾阳032200【正文语种】中文【中图分类】R394-33;Q954.6DNA(脱氧核糖核酸)是生物遗传的物质基础，主要存在于细胞核中。
DNA的分子结构中带有醛基-CHO，在60℃1NHCL水解作用下，糖苷键断裂，在脱氧核糖的C1位置形成游离的醛基，醛基和Schiff试剂结合，形成紫红色的复合物，这是DNA特有的显色反应，为孚尔根反应(Feulgen)[1]。
蟾蜍的红细胞较大，具有细胞核，是一种显示细胞核内DNA的较理想材料。
亮绿复染后细胞质呈绿色，核质红绿对比染色，便于学生认识、区分、观察和研究生物细胞。
[2]1.1 材料活蟾蜍、麻醉缸、剪刀、玻片、水浴箱、解剖盘、镊子、酒精灯、乙醚、1NHCL、Schiff试剂、1%亮绿染液、显微镜、擦镜纸、吸水纸等。
1.2.1 取材用乙醚将蟾蜍麻醉后置于解剖盘中，腹面向上，用镊子夹起腹面后部中央的皮肤，用剪刀剪一丁字口，自后向前将皮肤剪开。
用同样的方法，将肌肉从后往前剪至剑胸骨处，用手分开左右肩带部分，露出心脏，再用剪刀将心包膜剪开，在心室部分剪一裂口，用玻片的一边蘸取少量血液，进行涂片。
1.2.2 涂片将蘸血的玻片以30°～45°角置于另一玻片边缘上，轻轻向前推进，制成薄而均匀的舌状血膜，将血涂片在酒精灯上微烘干燥。
蟾蜍血涂片
实验二细胞的形态结构和化学组成院系：基础医学院课程名称：医学生物学实验授课时间：2007年10月27日实验目的：一、 熟悉光镜下细胞的一般形态结构。
二、 初步学会从电镜照片和录相片上观察细胞的亚显微结构。
三、 了解细胞化学反应的基本原理。
四、 掌握DNA、RNA在细胞内分布的显示方法。
实验用品：一、 材料：兔肾切片、平滑肌制片、神经细胞制片、猫脊髓横切片、兔脊神经节切片、蟾蜍二、试剂：70%乙醇、0.1%酸性固绿染液（PH2.0-2.5）、0.1%碱性固绿染液（PH8.0-8.5）、甲基绿-派咯宁混合染液实验内容与方法：.一、动物细胞的各种形态结构（一）、上皮细胞：上皮组织分布于各种器官的内表面或外侧。
上皮组织中的细胞叫上皮细胞。
今日看的肾切片，因为肾脏是管状组织，所以其是上皮细胞。
HE染色（苏木素-伊红染色）：细胞质，嗜酸性，染成红色，细胞核，嗜碱性，染成蓝色。
肉眼：呈一锥体形的红蓝色组织切片，锥体底染色较深，尖端染色较浅。
低倍镜：观察尖端染色较深的部分，有许多形状不一、大小不等的小管切面，肾小管是弯曲的，切面中的视野有横、纵、斜等，管壁有许多单层上皮细胞组成，细胞间界限清楚，细胞的形状有的呈柱状，有的立方形，有的扁平。
高倍镜：可见细胞质被染成极浅的红色，圆形的细胞核被染成蓝色。
（二）、平滑肌细胞：取平滑肌细胞制片，低倍镜下可见许多长梭形的细胞，注意在高倍镜下观察的呈柱状的细胞核位于细胞中间。
（三）、神经细胞：神经细胞是高等动物神经系统的结构单位和功能单位，镜下呈星形，每个神经细胞体都具有长短不一、数目不等的细胞质突起，因为切法不一样，可能又有不完整的，一半一半的。
细胞中央有一个圆形的核，核内有着色深的核仁。
二、光镜下的细胞器（一）、线粒体（蟾蜍肾切片）线粒体是细胞中能量储存和供应的中心，视野中有许多圆形或椭圆形的肾小管断面，中央为管腔，管壁细胞彼此界限不甚分明，但可依据核的位置大致确定细胞的范围。
蟾蜍血细胞标本实验报告
1. 学习并掌握蟾蜍血细胞标本的制作方法。
2. 观察并分析蟾蜍血细胞的形态和分布。
3. 了解血细胞在维持生物体生理功能中的作用。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：蟾蜍、生理盐水、吸管、载玻片、盖玻片、显微镜、显微镜切片机、酒精灯、火柴等。
2. 仪器：显微镜、显微镜切片机、酒精灯、火柴、烧杯、试管、剪刀、镊子等。
三、实验步骤1. 材料准备：将蟾蜍置于生理盐水中，使其失去挣扎能力。
用剪刀剪开蟾蜍的后肢，取出心脏，用吸管吸取心脏中的血液。
2. 标本制作：将吸取的血液滴在载玻片中央，用另一张载玻片轻轻压在血液上，使血液均匀分布。
用镊子夹取盖玻片，轻轻放置在血液上，避免产生气泡。
3. 标本固定：将制作好的标本放置在酒精灯火焰上方，用火柴点燃酒精灯，使标本固定在火焰上方，持续1-2分钟。
4. 标本染色：将固定好的标本放入染色液中，染色时间为5-10分钟。
染色液可用瑞氏染色液或姬姆萨染色液。
5. 标本观察：将染色后的标本置于显微镜下观察，记录血细胞的形态和分布。
四、实验结果与分析1. 血细胞形态观察：在显微镜下观察到蟾蜍血细胞呈圆形、椭圆形或不规则形状，细胞核较大，染色质较深，细胞质较少，含有较多的颗粒物质。
2. 血细胞分布观察：蟾蜍血细胞在标本中呈均匀分布，细胞间距离适中，无明显的聚集现象。
3. 血细胞功能分析：蟾蜍血细胞主要包括红细胞、白细胞和血小板。
红细胞负责运输氧气和二氧化碳，白细胞具有吞噬和抵御病原微生物的作用，血小板具有凝血和止血功能。
这些血细胞共同维持着蟾蜍的正常生理功能。
1. 本实验成功制作了蟾蜍血细胞标本，并观察到了血细胞的形态和分布。
2. 蟾蜍血细胞在维持蟾蜍生理功能方面起着重要作用，包括运输氧气、抵御病原微生物和凝血止血等。
3. 通过本次实验，加深了对血细胞功能的认识，为今后相关研究奠定了基础。
六、实验注意事项1. 操作过程中应保持环境安静，避免外界干扰。
2. 制作标本时，血液不宜过多，以免影响观察。
蟾蜍的外形观察和内部解剖
实验步骤
掏 毁 脊 髓 时 后 肢 强 直 状
实验步骤
掏 毁 脊 髓 状
实验步骤
剪 开 腹 部 皮 肤
实验步骤
剪 开 腹 面 左、 右 肢 皮 肤
实验步骤
胃
实验步骤
肝 脏
实验步骤
胆 囊
实验步骤
胰 管, 输 胆 总 管
实验步骤
胰 管 , 输 胆 总 管
实验步骤
肾 脏
实验步骤
输 精 尿 管
两栖类对陆生生活的初步适应
皮肤的角质化
角质化程度低，疏松，保持水分的能力也较低
五趾型附肢
陆上运动，但运动装置不完善，只能跳跃运动
肺
具肺，结构简单，须有皮肤辅助呼吸
血液的双循环ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
较原始，不完全的双循环
外形观察
身体分为头、躯干和四 肢 皮肤粗糙、疣粒 头部：眼、耳后腺、鼓 膜、外鼻孔，鼻瓣
眼，具上下眼睑，只有 下眼睑能活动，瞬膜
实验步骤
输 精 细 管 观 察 法
实验步骤
输 精 细 管
实验步骤
输 精 细 管
实验步骤
膀 胱
实验步骤
卵 巢， 输 卵 管
实验步骤
未 发 育 卵 巢
实验步骤
喇 叭 口
实验步骤
子 宫
实验步骤
脂 肪 体 ， 毕 达 氏 器
实验步骤
脂 肪 体 ， 毕 达 氏 器
实验步骤
米 氏 管
实验步骤
蟾蜍的外形观察 解剖
实验目的 1.熟识蟾蜍的外形和内部构造。 1.熟识蟾蜍的外形和内部构造。 熟识蟾蜍的外形和内部构造 2.了解两栖动物的一般构造。 2.了解两栖动物的一般构造。 了解两栖动物的一般构造
实验四 蛙类毛细血管血液循环的观察
实验四蛙类毛细血管血液循环的观察一、实验目的1、掌握观察微循环血流的方法。
2、观察不同组织和血管内的血流特点。
二、实验原理微循环是指血液在微动脉和尾静脉间的流动，是血液与组织液直接进行物质交换的场所。
在体组织只要是比较菲薄、易于透光的部位，都可以直接在显微镜下观察它们的血液流动情况。
蛙类的肠系膜、舌、后肢足蹼、膀胱，以及肺等组织均可以观察。
三、实验材料蟾蜍、显微镜、常用手术器械、大头针、表面皿、2~5ml注射器、20%氨基甲酸乙酯、任氏液四、实验步骤1、蟾蜍的麻醉蟾蜍称重后，按照2~3mg/g体重的剂量从皮下后淋巴囊注入20%氨基甲酸乙酯，5~10分钟后便进入麻醉状态。
2、观察肠系膜的微循环血流1）蛙体仰置于蜡板上，从躯体腹侧中央切开一个小口，打开腹腔，用镊子将小肠拉到体外。
将蟾蜍移动到表面皿中，将肠系膜平铺在载玻片上，不要将肠系膜拉的太紧，将表面皿置于显微镜下观察肠系膜的微循环。
2）观察时先用低倍镜，可见到粗细不等的血管。
小动脉是血液由主干流向细分支，小静脉是血液由细分支流向主干。
两者之间的是毛细血管，其中的血液流动很慢。
3、观察膀胱的微循环血流将膀胱置于显微镜下观察微循环血流。
4、观察蛙肺部的微循环血流暴露出蛙的肺，若肺内充满空气，用针尖将肺刺破一个小口使之萎缩塌陷，将肺拉向一侧，置于显微镜下观察。
蛙肺的微循环血流很丰富，呈鱼网状。
五、注意事项在观察蛙的肠系膜、膀胱、舌或肺的微循环血流时，要注意经常用任氏液保持湿润。
六、试验结果1、区分小动脉和小静脉的最重要标志是什么？2、描述观察的3个部位微循环血流的特点，并图示。
中华大蟾蜍肺毛细血管的扫描电镜观察
中华大蟾蜍肺毛细血管的扫描电镜观察
俞诗源
【期刊名称】《西北师范大学学报：自然科学版》
【年(卷),期】1995(031)004
【摘要】用扫描电镜观察了ＡＢＳ丁酮溶液灌注的中华大蟾蜍肺毛细胞管构筑情况，其肺壁被内面的施工网状隔膜分隔成许多小室－肺泡；在网状隔膜，肺泡壁上均有丰富的毛细血管，且相互吻合成单层密集网；肺泡毛细血管网眼多，由五边形的毛细管环构成，毛细血管直径９．５３－１６．７３μｍ，网眼孔径９１．７－２５．１８μｍ；在毛细血管铸型上有明显的内皮细胞核的压迹。
【总页数】3页(P47-49)
【作者】俞诗源
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】Q959.53
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中华蟾蜍血细胞的观察
中华蟾蜍血细胞的观察郭宪光;张耀光;王志坚;张贤芳【期刊名称】《四川动物》【年(卷),期】2002(021)004【摘要】应用常规血涂片Wright氏染色、活体观察和血细胞计数法研究中华蟾蜍(Bufo gargarizans)的血细胞形态.结果表明:红细胞有有核和无核两种类型.有核红细胞较大,椭圆形,平均19.41×14.25μm,细胞核染色质密集.白细胞圆形或椭圆形,直径比红细胞长径短,核比例一般较大.白细胞中,淋巴细胞最多,其次为中性粒细胞和单核细胞,嗜酸性粒细胞少,嗜碱性粒细胞极少.红细胞和淋巴细胞均有直接分裂现象.红细胞平均值为7.67×105/mm3,白细胞平均值为0.75×105/mm3.血栓细胞纺锤形或卵圆形,胞质少或裸核状,推测为红细胞的衍生物.【总页数】4页(P211-214)【作者】郭宪光;张耀光;王志坚;张贤芳【作者单位】西南师范大学生命科学学院,重庆市水产科学技术重点实验室,重庆,400715;西南师范大学生命科学学院,重庆市水产科学技术重点实验室,重庆,400715;西南师范大学生命科学学院,重庆市水产科学技术重点实验室,重庆,400715;西南师范大学生命科学学院,重庆市水产科学技术重点实验室,重庆,400715【正文语种】中文【中图分类】Q959.5【相关文献】1.血细胞分析仪与血细胞形态观察的应用效果评价与意义分析 [J], 祝慧; 马明; 王建红2.血细胞分析仪联合血细胞形态学观察筛查血液系统疾病中的价值研究 [J], 尹德珍3.血细胞分析仪联合血细胞形态学观察筛查血液系统疾病中的价值研究 [J], 尹德珍4.中华蟾蜍与黑斑蛙消化道黏液细胞的观察 [J], 周长文;楚德昌;李春华5.中华蟾蜍皮肤的组织学观察 [J], 张贤芳;张耀光;王志坚;郭宪光因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蟾蜍血细胞实验报告
一、实验目的1. 了解蟾蜍血液的组成和血细胞的类型。
2. 观察并分析蟾蜍血细胞的形态和功能。
3. 掌握显微镜观察血细胞的方法。
二、实验原理蟾蜍血液中含有多种血细胞，包括红细胞、白细胞和血小板。
红细胞主要负责运输氧气和二氧化碳；白细胞具有吞噬和消灭病原体的作用；血小板则参与血液凝固过程。
通过显微镜观察蟾蜍血液涂片，可以了解蟾蜍血细胞的形态和功能。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜蟾蜍血液、生理盐水、盖玻片、载玻片、吸管、显微镜等。
2. 仪器：显微镜、离心机、显微镜载物台、滴管等。
四、实验步骤1. 处理蟾蜍：取一只健康的蟾蜍，用酒精消毒其四肢，用剪刀剪开蟾蜍的后肢，挤出少量血液。
2. 制备血涂片：将血液滴在载玻片上，用另一张载玻片边缘刮取血液，制成均匀的血涂片。
3. 干燥与固定：将血涂片在空气中自然干燥，然后用95%酒精固定10分钟。
4. 染色：用瑞氏染液染色5分钟，然后用蒸馏水冲洗。
5. 水洗与干燥：用蒸馏水冲洗染色的血涂片，然后用吸水纸吸干。
6. 观察与记录：在显微镜下观察血涂片，记录红细胞、白细胞和血小板的形态和数量。
五、实验结果与分析1. 红细胞：蟾蜍红细胞呈圆形，直径约为7-8微米，边缘较薄，中央较厚，含有大量的血红蛋白，负责运输氧气和二氧化碳。
2. 白细胞：蟾蜍白细胞主要有两种类型，一种为大型多核白细胞，直径约为15-20微米，呈圆形或椭圆形，核较大，染色较深；另一种为小型单核白细胞，直径约为5-10微米，呈圆形或椭圆形，核较小，染色较浅。
白细胞具有吞噬和消灭病原体的作用。
3. 血小板：蟾蜍血小板呈不规则形状，大小不一，直径约为2-5微米，无细胞核，参与血液凝固过程。
六、实验讨论1. 通过本次实验，我们成功观察到了蟾蜍血细胞的形态和功能，了解了蟾蜍血液的组成。
2. 在实验过程中，需要注意血涂片的制备、干燥、固定和染色等步骤，以确保实验结果的准确性。
3. 实验过程中，我们发现蟾蜍白细胞数量较多，说明蟾蜍的免疫系统较为发达，能够有效抵御病原体的侵袭。
蟾蜍肠系膜微循环标本制作以及在体微循环显微观察
蟾蜍肠系膜微循环标本制作以及在体微循环显微观察；蟾蜍消化系统的解剖实习一、实验目的1、熟练掌握“双毁髓”手术技术。
2、熟练使用手术器械。
尤其是手术剪。
3、蟾蜍肠系膜微循环标本的制作。
4、用低倍、光镜下观察微循环（注意动脉、静脉与毛细血管）。
5、注意观察蟾蜍体腔内寄生虫。
6、尽可能完整取出“消化系统”，于解剖盘空白处，拍照后插入实验报告。
二、实验原理1、四大基本系统：运动与支持（包括肌肉、骨骼、结缔，有保护功能），神经，循环，免疫2、内环境稳态：免疫-神经-内分泌网络稳定。
3、疾病分类：内环境失调，创伤，癌症，外部致病原4、癌症成因：原癌基因（细胞因子，控制细胞分裂）过度表达，抑癌基因（P53基因）表达不足。
癌症细胞间转移，由于抑癌基因受癌症部位切除而停止表达导致原癌基因在各处容易过量表达；或癌细胞随血液转移至各处。
5、内脏定义：有管道，直接或间接与体外连接。
6、排泄与排异：泌尿属于排泄，排除代谢产物。
排便属于排异，未经过同化。
7、循环系统维持内环境稳态，世代交替维持种系稳态。
8、循环系统：a、心血管系：心脏，动脉，毛细血管，静脉。
肝门静脉收集营养血过肝脏。
b、淋巴系：淋巴导管，器官脾脏（无导管非内脏），淋巴结，毛细淋巴管9、消化系统：蟾蜍的消化系统由消化道及连附于消化道旁的各种消化腺所组成，直接或间接担任食物的消化与吸收。
其组成如下：（1）消化道a)食管，亦称食道，长度不到一公分，位于喉的背面，身体正中线。
外表光滑，内壁有纵行褶皱，下端和胃相连。
b)胃，是消化管中最庞大的部分，微微偏居体腔左侧，有左向右形稍弯曲，前阔后狭。
上连食道的一段称贲门，其下为胃底，再下端连接小肠处称幽门，有一圈括约肌所形成的幽门瓣，可以控制幽门开闭。
背侧有腹膜经折叠而成的网膜，腹侧有胃肝指肠韧带，即小网膜，用以和十二指肠与肝维系。
c)小肠：起于幽门之后，其弯向前方的一小段是十二指肠，长度约等于为的一半，胰脏即位于此套弯中。
蟾蜍血细胞内DNA显示的孚尔根反应
胞涂片 ， ６ ０ ℃１ Ｎ Ｈ Ｃ Ｌ水解后 ， 用Ｓ ｃ ｈ ｉ ｆ试剂 染细胞核 ， 亮绿 复染细胞质 。结果
色， 细胞质为绿色 。结论 关键词 ： Ｄ Ｎ Ａ； 蟾蜍血细胞涂 片 ； 孚尔根反应
中 图分 类 号 ： Ｒ ３ ９ ４— ３ ３ ； Ｑ ９ ５ ４ ． ６ 文献标识码 ： Ａ
dna的分子结构中带有醛基一cho在601nhcl水解作用下糖苷键断裂在脱氧核糖的c1位置形成游离的醛基醛基和schiff试剂结合形成紫红色的复合物这是dna特有的显色反应为孚尔根反应feulgen?
第ｌ ３卷第 ４期
２ ０ １ ５年 １ ２月
延 安大学学报 （ 医学科 学版）
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重金属离子对中华大蟾蜍蝌蚪红细胞核异常的诱导
５ 个浓度组（ 浓度单位为ｍ ・ ） 氯化镉配置成ｃ ｇ ， Ｌ ｄ
浓 度 为 ０１７ 、０３ ５ ．５ ．、３的 ５个 浓度 ．８ ５ ． 、０７ 、１ ７ ５ 组 （ 度单 位 为 ｍｇＬ ） 设 一不 加 任 何 试 剂 的对 浓 ・。．另
照组．
实验 中观察到 ３ 种重金属离子诱发其红细胞产 生的核异常类型包括了上述提到的核质外凸、 核内 凹、 双核 、 内空泡和无核 ， 中核质外凸和核内 核 其 凹较多． 除了这些类型外 ， 在本次实验中还发现了
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第２ 卷 第 １ １ 期
２ ０ 年 ３月 ０８
宁 波 大学 学 报 （
【版 ）
Ｖ ｌ ｌ ＮＯ １ ｏ ２ ． Ｍ ａ． ２ ０ ｒ ０ ８
Ｊ ＯＵＲＮＡＬＯＦＮＩ ＮＧＢ ＵＮＩ ＲＳ Ｔ （ Ｏ ＶＥ Ｉ Ｙ ＮＳＥ ） Ｅ
实验在 ５０ Ｌ的烧杯 内进行 ， ０ｍ 每杯装 ２０ Ｌ ０ｍ 溶液 ，每种浓度设 ３ 个重复组． 每—烧杯 中放入 ８ 只体质健康 、 大小相似的蝌蚪 ． ２ 每 ４ ｈ更换一次处
理 液 ，以减少蝌 蚪 分泌物 对 实验 结果 的影 响 ．同时
浓度． 确定最高染毒浓度以 ４ 内蝌蚪不出现死亡 ８ ｈ
和 明显 异常 （ 如形 态 、行 为异 常等 ） 为标 准 ． 依 次 再
收稿 日期 ：２ ０－７０． ０ ７０－３ 宁 波大 学学报 （ 工版 ）网址 ：ｈｔ：３ ｂ ｂ ． ｕｃ 理 ｔ ／ｘ． ｕ ｄ． ｐ／ ｎ ｅ ｎ 基 金项 目 ：宁 波市 科技 汁划 项 目 （ ０６ ００ ２） 波大 学学 科项 目 （ Ｋ２０４ ． ２ ０Ｃ１０５ ；宁 Ｘ ０ ５３） 第 一作者 ：张 永靖 （ ９ ７ ） １４ 一 ．男 ．上 海人 ．硕 士／ 授 ，主要 研究 方 向 ：动 物学 Ｅｍａ：ｈｎ ｙ ｎ ｎ 《ｎ ｕｅｕｃ 教 － ｉ ｚａｇ ｏ由ｉｇ ｂ ． ｎ ｌ ｄ
水城县米箩乡中华蟾蜍的分子鉴定
第29卷第6期2017年12月六盘水师范学院学报Journal of Liupanshui Normal UniversityVol.29NO.6Dec.2017中华蟾蜍（Bufo gargarizans ）隶属蟾蜍科（Bu-fonidae ）蟾蜍属（Bufo ），包含三个亚种，即指名亚种（Bufo gararizans gararizans ）、华西亚种（Bufogararizans andrewsi ）以及岷山亚种（Bufo garari-zans minshanicus ）。
中华蟾蜍在贵州省记载有两个亚种，即指名亚种（Bufo gararizans gararizans ）及华西亚种（Bufo gararizans andrewsi ）。
指名亚种分布于遵义、绥阳、正安、仁怀、赤水、江口、印江、德江、松桃、水城、毕节、大方、金沙、雷山、贵定、贵阳、务川等地；而华西亚种分布于威宁、兴义、荔波、绥阳、江口等（费梁等，2009）。
已有的分子遗传研究报道了绥阳、江口和威宁种群的分子数据，3个种群分别属于不同的支系（Fu J Z 等，2005；Zhan A B ，Fu J Z ，2011；熊荣川等，2014）。
本研究针对采自贵州省水城县米箩乡的蟾蜍标本进行DNA 提取，并克隆其线粒体16S rRNA 基因，收稿日期：2016-09-23基金项目：贵州省科学技术基金项目（黔科合J 字LKLS[2013]06号）；国家自然科学基金项目（31360512）；贵州省教育厅贵州省教育厅自然科学研究项目（黔教合KY 字[2015]387号）。
第一作者简介：熊荣川（1981-）男，贵州六盘水人，副教授，主要从事动物分子生物学研究。
Email ：xiongrongchuan@.水城县米箩乡中华蟾蜍的分子鉴定熊荣川1,2喻廷君1,3李正富4曹东1任梅梅1詹秀秀1（1六盘水师范学院生物科学与技术学院，贵州六盘水553001；2六盘水市生物研究所，贵州六盘水553001；3贵州大学昆虫研究所，贵阳550025；4水城县石丫口小学，贵州六盘水553000）摘要：中华蟾蜍（Bufo gargarizans ）一直是分类学研究的热点物种之一。
细胞生物学实验手册：动物细胞的基本形态观察和显微测量实验原理及步骤
实验一动物细胞的基本形态观察和显微测量【实验目的】制备不同细胞的临时制片，观察、了解细胞的基本形态，学会使用测微尺，通过测量对红细胞的进化进行分析。
【实验用品】一、材料和标本蟾蜍一只，人血液一滴。
二、器材和仪器配有目镜测微尺的显微镜一台、载片十张、盖片三张、吸水纸、手术器材一套、解剖盘一个、镜台测微尺一个、小平皿一个、牙签。
三、试剂 1％甲苯胺兰、1％甲基兰、Ringer氏液(两栖类用)。
【实验内容】一、细胞的基本形态观察(一)原理细胞的形态结构与功能相关是很多细胞的共同特点，在分化程度较高的细胞更为明显，这种合理性是生物漫长进化过程所形成的。
例如：具有收缩机能的肌细胞伸展为细长形；具有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一的树枝状突起；游离的血细胞为圆形、椭圆形或圆饼形。
不论细胞的形状如何，细胞的结构一般分为三大部分：细胞膜、细胞质和细胞核。
但也有例外。
例如：哺乳类红细胞成熟时细胞核消失。
(二)观察方法与结果1．制备蟾蜍脊髓压片观察脊髓前角运动神经细胞。
取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓，在口裂处剪去头部，除去延脑，剪开椎管，可见乳白色脊髓，取下脊髓放在平皿内，用Ringer氏液洗去血液后放在载片上，剪碎。
将另一载片压在脊髓碎块上，用力挤压。
将上面的载片取下即可得到压片。
在压片上滴一滴甲苯胺兰染液，染色10分钟，盖上盖片，吸去多余染液。
在显微镜下观察，染色较深的小细胞是神经胶质细胞。
染成兰紫色的、大的、有多个突起的细胞是脊髓前角运动神经细胞，胞体呈三角形或星形，中央有一个圆形细胞核，内有一个核仁(参照照片)。
2．蟾蜍骨骼肌细胞的剥离与观察剪开蟾蜍腿部皮肤，剪下一小块肌肉，放在载片上，用镊子和解剖针剥离肌肉块成为肌束，继续剥离，可得到很细的肌纤维(肌细胞)。
尽可能拉直肌纤维。
在显微镜下观察，肌细胞为细长形，可见折光不同的横纹，每个肌细胞有多个核，分布于细胞的周边(参照照片)。
3．蟾蜍肝脏压片的制备与观察剪开蟾蜍腹腔，取一小块(约2～3mm 3)肝放在平皿内，用Ringer氏液洗净，用镊子轻压将肝中的血挤出。
蟾蜍心血涂片实验报告
一、实验目的1. 观察蟾蜍心脏的结构和功能。
2. 了解血液的组成和分布。
3. 学习使用显微镜观察细胞和组织的技巧。
二、实验原理蟾蜍的心脏由四个腔室组成，分别是左心房、左心室、右心房和右心室。
心脏的跳动通过心瓣膜的开启和关闭，使血液在心脏和全身循环中流动。
血液由红细胞、白细胞和血小板组成，通过显微镜观察可以了解血液的组成和分布。
三、实验材料1. 实验动物：蟾蜍一只2. 实验器材：解剖剪、镊子、培养皿、载玻片、盖玻片、显微镜、生理盐水、碘酒、酒精、蒸馏水3. 实验试剂：瑞氏染液四、实验步骤1. 杀死蟾蜍，解剖心脏，取出心脏放入生理盐水中。
2. 用解剖剪沿心脏中线切开，暴露心脏内部结构。
3. 取出左心室，用生理盐水冲洗干净。
4. 将左心室放在载玻片上，用解剖剪剪取一小块心肌组织。
5. 将心肌组织放入生理盐水中，用镊子轻轻搅动，使细胞分散。
6. 取出细胞悬液，滴加瑞氏染液，染色约5分钟。
7. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的染液。
8. 将载玻片放在显微镜下观察。
五、实验结果1. 心脏结构：蟾蜍心脏由四个腔室组成，左右心房和左右心室，心房和心室之间有瓣膜连接，保证血液单向流动。
2. 血液组成：显微镜下观察到红细胞呈圆形，无细胞核，白细胞呈球形或椭圆形，有细胞核，血小板呈圆形或不规则形状。
3. 血液分布：血液在心脏内流动，通过心瓣膜的开启和关闭，使血液在心脏和全身循环中流动。
六、实验讨论1. 蟾蜍心脏的结构与哺乳动物心脏相似，但蟾蜍心脏没有动脉瓣，血液在心脏内流动时可能存在返流现象。
2. 红细胞是血液中主要的细胞成分，负责运输氧气和二氧化碳。
白细胞具有防御功能，可以吞噬病原体。
血小板具有凝血功能，可以防止出血。
3. 通过显微镜观察血液的组成和分布，可以了解血液在身体内的作用。
七、实验结论本次实验成功观察了蟾蜍心脏的结构和功能，以及血液的组成和分布。
通过实验，我们了解了心脏在血液循环中的作用，以及血液的组成和功能。
温度对中华大蟾蜍和中华鳖冬眠前离体红细胞免疫功能及其大小的影响
温度对中华大蟾蜍和中华鳖冬眠前离体红细胞免疫功能及其大小的影响董晓敏;周显青;王迎【期刊名称】《动物学杂志》【年(卷),期】2009(44)3【摘要】为了探讨温度变化对中华大蟾蜍(Bufo gargarizans)和中华鳖(Trionyx sinensis)离体红细胞免疫功能及细胞大小的影响,我们设计了10℃、20℃、30℃、37℃4个温度组,通过红细胞C3b受体花环试验和红细胞免疫复合物花环试验检测红细胞免疫活性,同时测量其红细胞大小。
结果表明,温度对中华大蟾蜍离体红细胞C3b受体花环率影响显著,随着温度的升高,中华大蟾蜍离体红细胞C3b受体花环率逐渐降低,在30℃和37℃时,其红细胞C3b受体花环率明显比10℃时低;而温度对其离体红细胞免疫复合物花环率和红细胞大小却没有显著影响。
温度对中华鳖离体红细胞C3b受体花环率、免疫复合物花环率及其大小亦没有显著影响。
除了10℃时中华鳖离体红细胞免疫复合物花环率与中华大蟾蜍没有明显差别外,其余各温度下中华鳖离体红细胞C3b受体花环率和免疫复合物花环率均明显比中华大蟾蜍的高,而其红细胞的长径和短径却明显比中华大蟾蜍红细胞的小。
这说明,温度能明显影响中华大蟾蜍离体红细胞免疫功能,而对中华鳖离体红细胞的免疫活性影响不明显,随着动物进化程度的提高,中华鳖红细胞对温度变化的适应能力和免疫活性比中华大蟾蜍明显增强。
【总页数】7页(P101-107)【关键词】温度;中华大蟾蜍;中华鳖;红细胞大小;免疫功能【作者】董晓敏;周显青;王迎【作者单位】首都医科大学基础医学院实验动物学系【正文语种】中文【中图分类】S966.5;X591【相关文献】1.雄性中华大蟾蜍冬眠期和出眠初期部分内脏器官的变化 [J], 史双鸽;王文哲;谷玲军;范佳文;李永亮;熊建利2.中华大蟾蜍冬眠前与出眠初期肝细胞超微结构的观察 [J], 米志平;苏学辉;代庆阳3.中华大蟾蜍和花背蟾蜍间移核胚胎早期发育中染色体... [J], 梁桂霞;毛铭廷4.中华大蟾蜍冬眠期和活动期几种器官中乳酸脱氢酶... [J], 何福元;侯天德5.四种除草剂对中华大蟾蜍蝌蚪红细胞微核及核异常的影响 [J], 耿德贵;张大生;程伟;陈刚;温洪宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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第39卷第4期2011年7月河南师范大学学报(自然科学版)J our nal of H enan N or mal Univ er sity(N atur al Science Ed itio n)Vol.39N o.4J uly.2011文章编号:1000-2367(2011)04-0136-02水城产中华大蟾蜍血细胞的显微观察周庆萍,周雪林,韦国彬(六盘水师范学院生命科学系,贵州水城553004)摘要:为检测动物血细胞的形态参数这一生理指标具有区域性,应用常规血涂片Wr ig ht染色法对中华大蟾蜍(Bufo gar gar izans)血细胞进行显微观察、形态参数测定、图示、描述和比较.结果表明:分布于不用地区的中华大蟾蜍各类血细胞在形态上区别不大,大小上存在差异.关键词:血细胞;中华大蟾蜍;形态特征;比较中图分类号:Q959.5文献标志码:A中华大蟾蜍(Bufo gar gar izans)属两栖纲(A mphibia)无尾目(A nur a)蟾蜍科(Bufonidae)蟾蜍属(Bufo)动物,俗称大蟾蜍、蟾蜍、癞疙疱、癞蛤蟆、癞肚子,为我国特产,广泛应用于医学和生物学实验.对两栖纲动物而言,单个物种的血细胞研究[1-6],不同两栖动物的血细胞比较[7-10]或与其他纲动物的血细胞比较已有一些报道[11-12],但对区域性的同种两栖动物的血细胞进行分析比较却鲜见报道.鉴于此,我们特将分布于贵州省六盘水市水城地区的中华大蟾蜍血细胞进行研究,以期为两栖动物细胞学研究提供多样性资料.1材料和方法中华大蟾蜍(共10只,5a5`)于2009年4月下旬采自贵州省六盘水师范学院校园及附近,该地区的海拔1600~1800 m,均为野生、健康无病、体重基本相近的成体.将中华大蟾蜍称重后,用毁髓针破坏脊髓致瘫,打开围心腔,用针管从主动脉干采血,用常规方法制作血涂片,用W rig ht染液染色10min左右,在XSP-BA310T显微镜下观察;用M o tic DigilabÒ-网络版数码显微互动教室软件成像,随机选取红细胞100个,其余类型的细胞各选取20个用M otic Images A dvanced3.2软件测量其大小.2结果2.1红细胞的显微观察1水城产中华大蟾蜍的成熟红细胞呈长椭圆形,细胞长轴(13.82?0.88)L m,短轴(8.83?0.55)L m,细胞核长轴(4.77?0.40)L m,短轴(3.58?0.31)L m,数量最多,其表面光滑,核椭圆形、中位、染成深蓝紫色,核质紧密,核周与胞浆交界处有一透明的薄环,颜色均匀,细胞边缘界限清楚,细胞质染色比较浅(图1:a).未成熟的红细胞形状为椭圆形,长轴比成熟红细胞短(图1:b);较幼稚的红细胞近似圆形(图1:c);血涂片中同时还观察到正在进行直接分裂(无丝分裂)的红细胞(即分裂期红细胞)(图1:d)和直接分裂后产生的梨形红细胞[5](图1:e).2.2白细胞的显微观察白细胞一般可分为粒细胞和无粒细胞两类.白细胞的形态学参数如附表.2.2.1粒细胞.粒细胞一般分为嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞嗜中性粒细胞多为圆形和椭圆形,少数形状不规则,胞质较丰富,内含许多被染成浅蓝色的嗜中性颗粒;细胞核大,被染成紫色,核质界限明显,核染色质粗糙不均,排列紧密成小块状,细胞核有单叶核和多叶核,多叶核分2~3叶(图1:f),叶间常以核丝相连,各叶大小和形状也不规则.嗜酸性粒细胞近圆形或椭圆形,细胞体积较大,核质界限不明显,细胞核被染成紫红色,较大,几乎位于细胞中央(图1: g),核质粗糙,细胞质内有许多被染成浅紫红色的嗜酸性颗粒.嗜碱性粒细胞形状为圆形或椭圆形,细胞较小,细胞核常常偏向细胞一侧,细胞质中含有许多被染成蓝紫色的嗜碱性颗收稿日期:2011-02-10基金项目:贵州省科学技术厅科研基金(黔科合丁字[2010]2071).作者简介:周庆萍(1965-),女,贵州水城人,六盘水师范学院教授,研究方向:人体解剖及动物生理.粒,颗粒分布不均匀,常常覆盖在细胞核上(图1:h).附表 水城产中华大蟾蜍白细胞的形态学参数白细胞长轴/L m 短轴/L m 周长/L m 嗜中性粒细胞13.53?1.8710.50?2.2037.36?4.62嗜酸性粒细胞14.04?0.1311.10?0.6346.20?1.40嗜碱性粒细胞8.68?0.507.60?0.5426.17?1.89单核细胞11.30?0.6310.6?0.3644.45?0.46淋巴细胞8.84?0.508.08?0.8626.62?2.042.2.2 无粒细胞 无粒细胞可分为单核细胞和淋巴细胞,淋巴细胞包括小淋巴细胞和大林巴细胞.单核细胞形状接近圆形,细胞核形状有不规则圆形、肾形和马蹄形(图1:i)等,细胞质呈灰蓝色,半透明,较丰富.小淋巴细胞近似圆形或椭圆形,细胞核偏于细胞一侧,核质被染成深蓝紫色,细胞边缘有缺刻,细胞质被染成浅蓝色,细胞质很少,只在细胞核外围成一窄环或仅在细胞核凹陷处可见(图1:j).大淋巴细胞形状类似于小淋巴细胞,但细胞核染色比小淋巴细胞稍淡,细胞质比小淋巴细胞丰富(图1:k).2.3 血栓细胞的显微观察水城中华大蟾蜍的血栓细胞呈梭形,细胞长轴(7.33?1.13)L m,短轴(6.19?0.59)L m,在涂片中一般单个分布,细胞核较大,近中位,核质被染成蓝紫色,细胞质被染成浅蓝色,细胞质较少,只在胞核外围成极薄的一圈或偏于一端,大多数仅包裹细胞核(图1:l).3 讨 论一般而言,脊椎动物进化程度越高的种类,红细胞体积越小[13].中华大蟾蜍的红细胞比大多数爬行动物的红细胞大[14],而爬行动物的红细胞又比哺乳动物的红细胞大(人类成熟红细胞直径7L m),符合进化规律.水城中华大蟾蜍的红细胞与重庆北碚中华大蟾蜍红细胞相比,形态上几乎一致,但比重庆北碚中华大蟾蜍的红细胞[5]小,这说明中华大蟾蜍红细胞的大小在不同的区域、环境下具有一定的差异性,除此之外生存环境氧含量也可能影响红细胞的大小[15].水城产中华大蟾蜍白细胞的特点是:嗜酸性粒细胞大于嗜中性粒细胞大于嗜碱性粒细胞,单核细胞大于淋巴细胞.其白细胞与重庆北碚中华大蟾蜍白细胞[5]相比,形态上区别不大,但比重庆北碚中华大蟾蜍的白细胞[5]小,说明中华大蟾蜍白细胞的大小可能与其生活的环境有关.郭宪光等[5]观察到重庆北碚中华大蟾蜍的血栓细胞在涂片中一般成群分布,笔者发现水城产中华大蟾蜍的血栓细胞在涂片中一般单个分布,而且较少,同时,水城中华大蟾蜍的血栓细胞与重庆北碚中华大蟾蜍的血栓细胞[5]相比,形态上区别不大,但明显较小,说明中华大蟾蜍血栓细胞的数量、分布及大小可能与其生活环境或生态分布有关.参 考 文 献[1] 潘玉芝.青蛙血液的组织学研究[J].北京大学学报:自然科学版,1956(1):89-101.[2] 李丕鹏,何国湘,张育辉,等.大鲵的血液学观察[J].陕西师大学报:自然科学版,1989,17(3):50-53.[3] 侯水薇,王秀玲,王志勇,等.新疆北鲵血液的组织学观察[J].两栖爬行动物学研究,1995(4/5):58-62.[4] 范三川.蓝尾蝾螈血液的组织学研究[J ].黔东南民族师专学报,1999,17(3):22-24.[5] 郭宪光,张耀光,王志坚,等.中华蟾蜍血细胞的观察[J].四川动物,2002,2(4):211-214.[6] 周庆萍,李 松,黄 倩.双团棘胸蛙血细胞的显微观察[J].西北师范大学学报:自然科学版,2010,46(4):87-90.[7] 马德滨,吴伟峰,魏 红.东北小鲵和东方蝾螈血细胞形态学参数研究[J].高师理科学报,2003,23(1):44-45.[8] 胡知渊,来雅萍,陈文静.棘胸蛙、虎纹蛙、黑斑蛙血细胞的比较[J].四川动物,2005,24,(1):5-8.(下转第158页)137第4期 周庆萍等:水城产中华大蟾蜍血细胞的显微观察158河南师范大学学报(自然科学版)2011年[2]Jeff Garland,Richard rge-Scale Software Architec ture:A Practical Guide Usi ng UML[M].北京:电子工业出版社,2004:38-39.[3]万桂怡.网络开放式实验教学资源管理系统的构建[J].实验室研究与探索,2009,28(11):204-206.[4]刘德山,张菁.基于B/S架构的实验教学管理系统设计与开发[J].渤海大学学报:自然科学版,2010,31(1):79-83.[5]张勇,肖利.基于WE B的实验教学管理系统的设计[J].吉林师范大学学报:自然科学版,2009(4):112-115.[6]孙晓捷.开放式考试系统的设计与实现[J].天津理工大学学报,2010,26(4):85-88.[7]周振波.互联网环境下远程考试系统主要功能模块的实现[J].吉林化工学院学报,2010,27(1):77-81.[8]C hristian T hilman Patterns Architectu re,Design,and Process[M].北京:中国电力出版社,2005:4-5.[9]M ike Gunderloy,J oseph L Jorden,David W T sch anz.M astering M icrosoft S QL Server2005[M].北京:电子工业出版社,2006:10-14.Construction of Integrated Experiment ProcessManagement System for Software CollegeZH ANG Xue-qin a,YANG Xiao-rui b,WANG Wei b(a.Sch ool of S oftw ar e Techn ology; b.Admis sion and Career Center,Nanyang Norm al University,Nan yang473061,China)Abstract:A s the experimental teaching sect ion of So ftwa re Co lleg e has a low er infor mation level curr ent ly,the integ rat-ed ex per iment pr ocess management system is developed for So ftwar e Co lleg e by using U M L M odeling,.NET Socket technolo-g y,.N ET pro gr amming technolo gy and SQ L Ser ver database.T he system is dev elo ped base on the complex model of B/S and C/S.T hr ough det ailed ana lysis on the character istics o f ex perimental courses,this pa per pro po ses the design of system and a-l so g iv es a detailed funct ional descr iptio n and t echnical implementation appro ach o f the sy stem.Key words:U M L modeling;.N ET so cket;.N ET;SQL serv er;ex periment process manag ement(上接第137页)[9]刘琳琳,李淑兰,赵文阁.东北产三种林蛙血细胞的比较研究[J].四川动物,2006,25(2):231-233.[10]周庆萍,李松,黄倩,等.棘腹蛙、棘胸蛙和双团棘胸蛙血细胞的比较研究[J].贵州农业科学,2010,38(1):102-104.[11]S zarki H,Czopek G.E ryhrocyte diarneter in s ome am phib-ian s and reptiles[J].Bull Acad Poionaise Ser Sci Biol,1966,14:433-437.[12]张奇亚,李正秋,罗晓春.鳖、蛙、鱼血细胞的显微观察与比较[J].水利渔业,1999,19(3):1-3.[13]周庆萍,黄倩.环颈雉红细胞的显微结构观察[J].河南师范大学学报:自然科学版,2011,39(1):172-174.[14]吴孝兵,张盛周,吴海龙,等.16种爬行动物血细胞形态学参数研究[J].动物学杂志,1993,33(1):29-32.[15]陈玉琴,俞诗源,马正学,等.红腹锦鸡血细胞的光镜和扫描电镜观察[J].动物学杂志,2007,42(2):107-109.Observation on the Blood C ells of Bufo Gargarizans of S huicheng by LMZH OU Q ing-ping,ZH OU Xue-lin,WEI Guo-bin(Departmen t of Biology and Geography,Liupanshu i Normal College,S huich eng553004,China)Abstract:In or der to test the mor pho log ical char acteristic,the physio log ical index o f animals bloo d cells has a reg io nal char acter istic,the r esea rch uses the r outine blood smea r Wr ig ht staining to r esear ch the Blood cells w ith micr oscopic ex amina-t ion,mo rpho lo gical par ameter testing,gr aphic ex pr essio n,description and co mpar ison.T he result indicates t hat the Bufo g ar-g arizans st retching acro ss differ ent r egions show less differentiation in morpholog y,but have differences in size.Key words:blood cells;Bufo g arg ar izans;mo rpholo gica l characterist ic;compariso n。