柱层析技术
分析化学中的柱层析技术发展
分析化学中的柱层析技术发展柱层析技术是分析化学中一种常用的分离和纯化方法，它在化学分析、生物医药、环境监测等领域发挥着重要作用。
随着科学技术的不断进步和需求的不断增长，柱层析技术也在不断发展和改进。
柱层析技术最早起源于20世纪50年代，当时主要应用于有机化学领域。
最早的柱层析技术主要是基于液相层析原理，通过将待分离物溶解在流动相中，经过填充在柱子中的吸附剂或离子交换剂，实现待分离物的分离和纯化。
然而，由于吸附剂或离子交换剂的选择性有限，分离效果不够理想，柱层析技术的应用受到了一定的限制。
随着科学技术的进步，新的柱层析技术不断涌现。
其中，高效液相层析（HPLC）技术是目前应用最广泛的柱层析技术之一。
HPLC技术通过使用高压泵将流动相推动通过柱子，使分离效果更加理想。
与传统的液相层析技术相比，HPLC技术具有分离效率高、分离时间短、分析灵敏度高等优点。
它广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域，为科学研究和工业生产提供了强有力的支持。
除了HPLC技术外，气相层析（GC）技术也是一种常用的柱层析技术。
GC技术通过将待分离物蒸发成气态，通过柱子中的固定相实现分离。
GC技术具有分离效果好、分析速度快、分析灵敏度高等优点，广泛应用于石油化工、食品安全、环境监测等领域。
随着科学技术的进步，GC技术也在不断改进，例如引入质谱联用技术，可以实现更加精确的分析和鉴定。
除了HPLC和GC技术外，还有许多其他的柱层析技术在不断发展。
例如，离子色谱（IC）技术通过使用离子交换柱实现对离子物质的分离和分析。
IC技术在环境监测、食品安全等领域具有重要应用价值。
另外，超高效液相层析（UHPLC）技术是近年来发展起来的一种新型柱层析技术，它通过使用更小粒径的填料和更高压力，实现更高的分离效率和分析速度。
柱层析技术的发展离不开新材料的应用。
例如，随着纳米技术的发展，纳米材料在柱层析技术中得到了广泛应用。
纳米材料具有较大的比表面积和特殊的物化性质，可以增强柱层析的分离效果，提高分析灵敏度。
柱层析原理
柱层析原理
1. 柱层析原理
柱层析是一种常用的分离技术，它用于分离杂质中的组成部分，
将它们不纯的原料拆分成纯组分。
柱层析拥有良好的分析性能，应用
非常广泛，是化验室检测中非常重要的一种分析仪器。
柱层析在实验中是通过柱层（也称为柱英）完成的，柱层由一种
能调整膨胀、压缩的功能组成的管状内芯和一种外直径稍大的网格组成，可以在立式柱网或布置在横式柱网中。
柱内的纤维材质是根据不
同的检测类型使用的，离子交换，有机吸附类的柱层材料都有，而且
柱层结构也有所不同。
经过有效调节，能够将杂质做有效分离，一般分离过程是对被分
离物体在特定条件下，因具有不同外观特征，离子强度等属性，物质
会产生不同的移动速度，从而实现材料的分离。
在分析实验中，通过柱层的操作，可以将原料的杂质进行有效的
柱层分离，因此，柱层分析是色谱分析分析中非常重要的一环，柱层
分析对检测微量成分具有重要意义。
柱层分析用于分离微量物质，可
以将物质空间分类，实现选择性分离和提取，从而获得更准确的化学
分析结果。
柱层分析不但可以用来分离，还能够进行测定量的定量。
其原理是，当检测物质定义使用，曲线的周长就能够表示测定量，也就是说，
在已知的条件下，可以根据实验设计的检测方法，测定物质的微量定量，提高化学分析的精度。
总之，柱层析是particle separation and purification的重要手段，它可以提高杂质的性质，将分析物质的检测和定量准则和精确度更好地表达出来。
层析柱柱效
层析柱柱效层析柱柱效是一种用于分离和分析混合物的技术，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
本文将介绍层析柱柱效的原理、应用和发展趋势。
一、层析柱柱效的原理层析柱柱效是基于层析技术的一种分离方法，它利用不同物质在固定相和流动相之间的相互作用力差异来实现分离。
层析柱柱效中，两根柱子分别填充不同的固定相，流动相从两根柱子的顶部进入，经过固定相的作用，不同组分被分离出来，并从两根柱子的底部分别收集。
层析柱柱效的分离原理主要包括吸附、离子交换、分配和凝胶渗透等。
吸附层析柱柱效是利用固定相对样品中的目标物质具有吸附作用，实现目标物质的分离。
离子交换层析柱柱效则是通过样品中的离子与固定相上的离子交换，实现目标物质的分离。
分配层析柱柱效是利用样品中的目标物质在两个不同的相中分配比例不同，实现目标物质的分离。
凝胶渗透层析柱柱效是利用固定相的孔隙大小选择性地限制目标物质的渗透，实现目标物质的分离。
层析柱柱效在化学、生物、环境等领域具有广泛的应用。
在化学领域，层析柱柱效被广泛用于有机合成中的分离纯化、药物分析、天然产物提取等。
在生物领域，层析柱柱效被广泛应用于蛋白质纯化、酶活性分析、基因组分离等。
在环境领域，层析柱柱效被广泛用于水质分析、土壤污染物检测等。
层析柱柱效具有分离效果好、分离速度快、操作简单等优点，因此得到了广泛的应用。
同时，层析柱柱效也存在一些挑战和问题，如样品复杂性、固定相选择、柱效和流量控制等方面的优化。
因此，不断改进和发展层析柱柱效技术对于提高分离效果和提高分析速度具有重要意义。
三、层析柱柱效的发展趋势随着科学技术的不断发展，层析柱柱效也在不断演进和改进。
一方面，新型的固定相材料不断涌现，如疏水相、亲水相、离子交换相等，可以更好地适应不同样品的分离需求。
另一方面，自动化和智能化的层析柱柱效设备也不断出现，实现了对流动相、柱效、流量等参数的精确控制，提高了分析的准确性和稳定性。
层析柱柱效与其他分离技术的结合也是未来的发展方向。
层析柱原理和使用方法
层析柱原理和使用方法层析柱是一种常用的分离技术，它基于化合物在不同相（固相和液相）之间的分配系数不同而实现分离。
层析柱广泛应用于化学、生物、药物等领域，是一种非常有效的分离和纯化方法。
本文将介绍层析柱的原理和使用方法，帮助读者更好地了解和掌握这一技术。
层析柱的原理主要是利用化合物在固相和液相之间的分配系数不同而实现分离。
当混合物通过固定在柱子中的吸附剂时，不同成分因其在吸附剂上的亲和力不同而在柱子中以不同速度移动，从而实现了混合物的分离。
在层析柱中，固相是固定在柱子中的吸附剂，液相是混合物溶解在的溶剂。
使用层析柱的第一步是选择合适的固相。
固相的选择应根据待分离化合物的特性来确定，例如极性、分子大小等。
选择合适的固相可以提高分离效率和纯度。
常见的固相包括硅胶、氨基硅胶、C18等。
第二步是装填柱子。
在装填柱子时，需要先将柱子底部封闭，然后依次加入固相和液相，确保固相均匀分布在柱子中。
装填后，需要进行适当的压缩，以确保固相不会因为柱子振动而移动。
第三步是样品加载。
将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，然后通过柱子，让混合物在固相上分配。
不同成分会根据其在固相和液相之间的分配系数不同而以不同速度通过柱子，从而实现分离。
第四步是洗脱和收集。
洗脱是指用洗脱剂将化合物从固相中洗出，收集不同时间点洗出的溶液，可以得到不同成分的纯度较高的化合物。
层析柱是一种非常有效的分离和纯化方法，它可以根据不同的固相和液相组合，实现对不同化合物的分离。
在实际应用中，需要根据待分离化合物的特性和需要纯度来选择合适的固相和液相，并严格按照操作步骤来进行操作，以确保分离效果和纯度。
总之，层析柱是一种重要的分离技术，它基于化合物在不同相之间的分配系数不同而实现分离。
掌握层析柱的原理和使用方法，对于化学、生物、药物等领域的研究和生产都具有重要意义。
希望本文能够帮助读者更好地了解和掌握层析柱技术，促进科研和生产的进步和发展。
柱层析法的原理和方法ppt课件
实验案例讨论与经验分享
案例介绍
介绍几个典型的柱层析法应用案例，包括实验设 计、操作过程、结果分析等。
经验分享
分享实验过程中积累的操作技巧、注意事项、故 障排除等方面的经验。
互动交流
鼓励与会者提问、分享自己的实验经验和心得， 进行深入的讨论和交流。
总结与展望
06
柱层析法原理与方法的总结回顾
柱层析法原理
方法 调整流动相的组成和pH值
优化柱温和流速
参数优化的方法和原则
• 选择合适的色谱柱和填料
参数优化的方法和原则
原则 通过实验确定最佳参数组合
根据目标物质的性质和分离要求进行参数优化 注意避免参数变化过大，以免对分离效果造成不利影响
结果分析方法和技术
方法 峰面积和峰高比较法
标准曲线法
结果分析方法和技术
离、纯化和鉴定。
生物样品分析
柱层析法可用于生物样品中痕量 物质的分离和分析，如生物碱、 氨基酸等，提高分析的灵敏度和
准确性。
柱层析法在食品安全检测中的应用实例
01
农药残留检测
柱层析法可用于食品中农药残留的分离和检测，通过合适的填料和洗脱
条件，将农药与食品中的其他成分分离，提高检测的准确性和可靠性。
发展历程
自20世纪初开始，柱层析法逐渐从基础的实验室技术发展为高效、自动化的现 代分离分析方法。
柱层析法的重要性和应用
重要性
柱层析法在化学、生物、医药、环境等领域发挥着重要作用 ，为复杂混合物的分离和纯化提供了有效手段。
应用
药物研发、天然产物提取、环境监测、食品安全等领域广泛 应用柱层析法。
柱层析法的基本原理
实验操作和案例分
05
析
柱层析
柱层析技术柱层析技术也称柱色谱技术。
一根柱子里先填充不溶性基质形成固定相，将蛋白质混合样品加到柱子上后用特别的溶剂洗脱，溶剂组成流动相。
在样品从柱子上洗脱下来的过程中，根据蛋白质混合物中各组分在固定向和流动相中的分配系数不同经过多次反复分配，将不同蛋白组分逐一分离。
根据填充基质和样品分配交换原理不同，离子交换层析，凝胶过滤层析和亲和层析是三种分离蛋白质的经典层析技术。
柱层析分离净化的实验技巧和方法1柱层析操作方法的选择目前,柱色谱分离的操作方式,主要包括常压分离、减压分离和加压分离3种模式。
常压分离是最简单的分离模式方便、简单,但是洗脱时间长。
减压分离尽管能节省填料的使用量,但是由于大量的空气通过填料会使溶剂挥发,并且有时在柱子外面会有水汽凝结,以及有些易分解的化合物也难以得到,而且还必须同时使用水泵或真空泵抽气。
加压分离可以加快淋洗剂的流动速度,缩短样品的洗脱时间,是一种比较好的方法,与常压柱类似,只不过外加压力使淋洗液更快洗脱。
压力的提供可以是压缩空气,双连球或者小气泵等。
2柱子规格的选择市场上有各种规格的柱层析分离柱。
柱子长了,相应的塔板数就高,分离就好。
目前市场上的柱子,其径高比一般在1: 5～10范围,在实际使用时,填料量一般是样品量的30～40倍,具体的选择要根据样品的性质和含量进行具体分析。
如果所需组分和杂质的分离度较大,就可以减少填料量,使用内径相对较小的柱子(如 2 cm ×20 cm的柱子) ;如果Rf相差不到0.1,就要加大柱子,增加填料量,比如用 3 cm内径的柱子。
3装柱柱层析色谱柱的填装主要有湿法和干法两种,湿法省事,一般用淋洗剂溶解样品,也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等,但溶剂越少越好,不然溶剂就成了淋洗剂了。
柱子底端的活塞一定不要涂润滑剂,否则会被淋洗剂带到淋洗液中,可以采用聚四氟乙烯材料的阀门。
干法和湿法装柱没什么实质性差别,只要能把柱子装实就行。
装完的柱子应该有适度的紧密(太密了淋洗剂流速太慢) ,并且一定要均匀,不然样品就会从一侧斜着流动。
实用柱层析技术
一般的策略
目标产物与杂质Rf值相差较大(>0.2)的样品 小目数吸附剂，较大极性，快速搞定
目标产物与杂质Rf值相差很小（0.1~0.2）难以分 离的样品 增加吸附剂的目数和用量，减小洗脱极性， 延长洗脱时间； 或者先进行粗分，除去容易出去的杂质，再 二次层析
制备色谱分离：制备高效液相，Biotage自动柱层 析仪
塔板理论
基于热力学的塔板理论
它是色谱学的基础理论，塔板理 论将色谱柱看作一个分馏塔，待分离 组分在分馏塔的塔板间移动，在每一 个塔板内组分分子在固定相和流动相 之间形成平衡，随着流动相的流动， 组分分子不断从一个塔板移动到下一 个塔板，并不断形成新的平衡。一个 色谱柱的塔板数越多，则其分离效果 就越好。
乙酸乙酯：石油醚—丙酮：石油醚—二氯甲 烷:(乙酸乙酯)：石油醚—乙酸乙酯：正己烷（价 格贵不推荐）
甲醇：氯仿—甲醇：二氯甲烷—乙醇：二氯甲 烷
比如，有的物质在乙酸乙酯里溶解度很差， 上柱后样品不能有效的溶解在流动相中， 影响分离，可以改用丙酮、二氯甲烷、或 者三种溶剂同时混合使用
比如，使用甲醇：二氯甲烷体系极性较大 时，可以改换乙醇：二氯甲烷体系，就可 能得到较好的分离效果
优点：与TLC板情况比较吻合，操作简便
而且适用于溶解性差的样品，使用湿 法则需要较多的溶剂，导致上样层变厚
湿法
湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展 开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以 用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样 品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液， 沿着层析柱内壁均匀加入。
优点：简便
洗脱与收集
考虑三因素：溶解性，亲和力，分离度（Rf值） 固定比例洗脱剂；梯度洗脱
正己烷和石油醚<环己烷<四氯化碳<三氯乙烯<二 硫化碳<甲苯<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯 <丙酮<丙醇<乙醇<甲醇<水<吡啶<乙酸
关于柱层析的实验方法和技巧
关于柱层析的实验方法和技巧柱层析是一种广泛应用于分离、纯化和分析复杂混合物的技术。
其基本原理是根据混合物组分的相互作用力的不同，在柱状填料上发生不同程度的分配与吸附，从而使混合物分离成单个或少量组分。
柱层析实验方法主要包括以下步骤：1.选择柱层析填料：根据所需分离的混合物的特性和目的，选择合适的填料。
常用填料有硅胶、反相填料等。
2.准备样品：将待分离的混合物以适当的溶剂溶解，并过滤除去悬浮物。
3.将填料装入层析柱中：将选择好的填料按照提供的方法装入层析柱，并确保填充完全均匀。
4.平衡填料：用适当的洗脱剂通过填料进行平衡，以除去填料表面的杂质和待分离混合物外的其他杂质。
5.加样分析：在柱层析填料上均匀加样，并注意避免柱尾部的重叠现象，以免影响分离效果。
6.洗脱剂流出：用相应的洗脱剂缓慢流过填料层，将待分离的组分逐渐从填料中洗脱出来。
7.采集分离组分：根据所需分离组分的不同，采用不同的方法收集和提取洗脱液中的分离组分。
8.结果分析：通过检测和分析分离得到的组分，确定柱层析的分离效果，并进一步进行定量分析或纯化操作。
柱层析实验中的技巧有：1.选择合适的填料和洗脱剂：填料的选择应考虑到混合物的性质和目的，洗脱剂的选择应使待分离的组分具有较大的差异性。
2.注意填料装填的均匀性：填料装填均匀可以提高柱层析的分离效果和分辨率，避免填料不均匀造成的漏洗现象。
3.适当控制洗脱剂的流速：流速过快会导致分离不彻底，流速过慢则会延长分析时间。
应根据填料和样品特性调整流速。
4.注意样品加样的均匀性：样品加样均匀可以避免出现分离过早或过晚的现象，影响柱层析的分离效果。
5.经常检查柱的状态和泄漏情况：柱层析过程中，需要时常检查柱的状态，如填料是否松动、泄漏等，及时发现和处理问题。
6.根据分离效果调整实验参数：根据分离效果的实际情况，进行必要的参数调整，如填料种类、洗脱剂浓度、流速等。
柱层析实验技术范文
柱层析实验技术范文柱层析实验技术是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术。
它通过溶液在固定相填充的柱子中的分配行为，将混合物中的分离物分离开来。
柱层析实验技术具有分离效率高、分离速度快、重复性好等特点，被广泛应用于有机合成、药物分析、环境监测等领域。
柱层析的原理主要由平衡原理和分配原理组成。
平衡原理是指在溶液中溶解的物质在固定相和流动相之间建立平衡。
分配原理是指混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配比例与它们之间的平衡常数有关。
柱层析的步骤主要包括填充柱子、装载样品、流动相、洗脱、监测和分析等。
首先，选择适当大小的柱子，并将固定相填充到柱子中。
然后，将样品溶解在流动相中，并将样品装载到柱子中。
接下来，选择合适的流动相，使其在柱子中流动。
通过调整流动相的性质和流速，使各组分在柱子中发生分配。
随后，选择合适的洗脱剂，将目标物质从柱子中洗脱出来。
最后，通过适当的监测方法，如紫外可见光谱、质谱等，对得到的洗脱物进行分析。
常用的柱层析技术主要包括液相柱层析和气相柱层析。
液相柱层析是指以液态为流动相的柱层析技术，主要应用于有机物的分离和分析。
常见的液相柱层析技术有固相萃取柱层析、离子交换柱层析、高效液相柱层析等。
气相柱层析是指以气态为流动相的柱层析技术，主要应用于描写气体或描写性精油的分离和分析。
常见的气相柱层析技术有气相色谱柱层析法、毛细管气相柱层析法等。
在进行柱层析实验时，需要注意实验条件的选择和优化。
选择合适的固定相和流动相、调整流动相的性质和流速、优化柱子的温度条件等都能够提高柱层析实验的分离效果和分离速度。
此外，还需要注意样品的装载量和洗脱剂的选择等因素。
总的来说，柱层析实验技术是一种重要的分离技术，广泛用于分析化学领域。
通过掌握柱层析的原理、步骤和常用技术，能够有效地进行分离和分析工作，为科研和工程实践提供有力支持。
柱层析的实验方法和技巧
柱层析的实验方法和技巧柱层析法（Column chromatography）是一种常用的化学分离和纯化技术，可以用于从混合物中分离出多种化合物。
本文将介绍柱层析法的实验方法和一些实验技巧。
一、实验方法：1.准备工作：a.准备固定相：将固定相填充到柱中，并充填好；可以使用硅胶、氧化铝或C18等材料作为固定相；b.准备混合物：将待分离化合物溶解在适当的溶剂中；c.准备洗脱剂：根据实验需求选择合适的洗脱剂；2.柱层析操作步骤：a.将固定相填充到柱中。
b.添加适量的固定相保护剂：一般使用不溶于溶剂的物质作为固定相保护剂，以避免固定相的挤压；c.向柱中加入样品溶液，可使用注射器或滴管将样品缓慢滴入；d.加入适量的洗脱剂，使样品溶液通过柱时能够清除杂质；e.收集落下液：通过检测进样后的溶液，根据待分离化合物的特点来控制洗脱剂的加入；f.收集洗脱液：通过改变洗脱剂的性质和量，逐渐改变洗脱液中化合物的组成，实现化合物的分离；g.检测：对收集的液体进行分析和检测，确认化合物的纯度。
二、实验技巧：1.选择合适的固定相：根据待分离物质的性质选择合适的固定相。
一般来说，伯胺、硅胶C（C18）适用于一般的分离，而硅胶S（C2），硅胶A（C4）适用于疏水性化合物的分离，氧化铝适用于酸性物质的分离。
2.控制流速：流速过快会导致分离不彻底，流速过慢则浪费时间。
一般来说，柱床高度不同，流速也会有所不同，对于较长的柱床应采用较快的流速。
3.控制样品量：样品量过多可能会使分离效果不理想，样品量过少则浪费固定相。
应根据待分离化合物的性质和固定相的吸附容量来选择适当的样品量。
4.控制洗脱剂的pH值和溶度：柱层析中的选择性很大程度上取决于洗脱剂的pH值和溶度。
应根据待分离物质的性质和固定相的特点选择合适的洗脱剂。
5.收集洗脱液：在开始柱层析实验时，收集过程中的溶液可能是混合物，因此从开始收集时就需要根据所得的混合物变清的时间点调整洗脱剂的性质和量。
简述柱层析的一般流程。
简述柱层析的一般流程。
柱层析（Column Chromatography）是一种常用的分离和纯化技术，广泛应用于化学、生物学和制药等领域。
它通过利用不同物质在固定相和流动相之间的差异，将混合物中的组分逐个分离出来。
柱层析的一般流程包括样品制备、柱层析条件选择、柱充填、样品加载、洗脱和收集，下面将详细介绍每个步骤。
首先是样品制备。
在进行柱层析之前，需要将待分离的混合物样品制备好。
通常采用溶解样品于适当的溶剂中，使其达到适宜的浓度和体积。
有时还需要进行前处理步骤，如过滤、浓缩或前处理反应等，以去除杂质或改变混合物的性质。
第二步是柱层析条件选择。
在进行柱层析之前，需要选择合适的柱层析条件。
这包括选择固定相、流动相和柱层析方法。
固定相是填充在柱子中的固体材料，其具有一定的吸附性能，可以与混合物中的组分发生相互作用。
流动相是通过柱子的液体，它可以通过改变流动相的成分和流速来实现对混合物中不同组分的分离。
柱层析方法包括常压柱层析、高效液相柱层析、气相柱层析等，根据不同的需求选择合适的方法。
第三步是柱充填。
柱充填是将选好的固定相填充到柱子中的过程。
首先将柱子清洗干净，然后将固定相均匀地充填到柱子中，使其形成一定的高度和压实度。
柱充填的质量和均匀性对柱层析的分离效果有重要影响。
第四步是样品加载。
样品加载是将制备好的样品溶液加载到柱子上，使其通过固定相。
样品加载的方式有两种：一种是静态加载，即将样品溶液直接滴于柱子顶部；另一种是动态加载，即将样品溶液通过注射器或泵注入柱子顶部。
加载样品时需要控制流速和样品量，以避免固定相过饱和和样品带走。
第五步是洗脱。
洗脱是通过改变流动相的成分和流速，使混合物中的各组分逐个从柱子中洗脱出来。
洗脱的过程中，不同组分会按照其与固定相的相互作用力的大小，以不同的速率通过柱子。
根据需要，可以采用梯度洗脱、等温洗脱或逆洗脱等方法。
最后一步是收集。
在洗脱过程中，洗脱出的组分会通过柱子流出，需要及时收集。
柱层析法的原理和方法分析
柱层析法的原理和方法分析
简介
柱层析法（column chromatography）是化学分离分析中具有极大的价值的方法，由于它可以将有机混合物分离成许多组分，并可以提取其中的活性组分。
柱层析是一种利用吸附的原理进行物质分离的技术，被广泛应用于有机合成，有机物分析，分析检测，矿物检测，生物化学等领域。
本文将介绍柱层析的原理和操作流程。
一、原理介绍
柱层析是一种利用物质在不同介质中的溶解性和吸附性而基于多种形式的分析方法，主要利用柱体中柱层中溶剂的不同极性和吸附层的不同性质，将物质从混合物中分离出来。
柱层析的原理如下：
1）物质溶解定律：一定优势的溶剂会溶解，而另一定优势的溶剂不能溶解，这叫“物质溶解定律”；
2）溶质和溶剂的吸附：一些离子和分子在植物保护剂层中与当地分子产生强烈的相互作用，有时形成吸附！
3）层析效应：一种溶质在柱体中运动时，它的移动速度一般比另一种溶质的移动速度要快，这种效应叫做层析效应；
4）聚集效应：由于柱体内的相互作用，一些溶质会相互聚集，改变原来的移动速度。
5）滞留效应：一些溶质会在柱体内滞留，而不像其他溶质那样继续移动，这种现象叫滞留效应。
柱层析的基本操作过程
柱层析的基本操作过程
柱层析是一种化学分离技术，它是通过将混合物溶解在移动相中，在柱状填料（固定相）中进行分离。
下面是柱层析的基本操作过程。
1. 准备样品和固定相：选择适当的柱层析填料，将其装入柱中，并保证填充均匀、紧密。
选择合适的流动相，加入固定相之前，要求固定相先与流动相进行混合，使其湿润，并去除任何未吸附的溶剂。
2. 样品的加载：将待分离的混合物溶解在流动相中，然后通过注射器或者样品加载器注入到柱中。
3. 选择流动相：根据待分离物质的特性，选择合适的流动相，并将其以一定的流速通过柱层析装置。
4. 分离过程：混合物分离后，在柱中不同位置的组分按其亲和力不同，发生分离。
在流动相的作用下，组分会逐一从柱底部向上升移。
5. 收集分离物：分离出的组分可通过检测方法进行检测，确定其最终位置并进行采集。
将采集的组分进行分析、鉴定或进一步处理。
6. 洗脱：当流动相通过柱层析后，需要将柱中残存的组分进行清洗，通常使用
洗脱剂进行洗脱。
总之，柱层析技术是一种重要的分离技术，具有高效、准确、可重复、可控性好等特点。
在实际应用中，需要结合不同的分离目的进行优化选择，使分离效果更佳，为实验和工业应用提供准确的数据和支持。
柱层析法的原理介绍
柱层析法的原理介绍
柱层析法是一种物质分离和分析的方法。
它基于样品中的化学物质在柱状固体吸附剂上的不同亲和性，通过控制移动相的流动速度，使不同成分在柱床中以不同的速度和强度被吸附和解吸，从而实现对混合物的分离。
柱层析法的原理主要包括以下几个步骤：
1. 样品进样：将待分离的混合物进样到柱层析柱中。
样品中的成分会被固定相表面上的吸附剂吸附。
2. 洗脱：通过通过移动相的流动，使样品中的成分在柱床中逐渐分离。
移动相的选择是根据样品性质和需求来确定的，可以是液相、气相或两者的组合。
3. 分离：不同成分在柱中的吸附和解吸速度不同，因此在移动相流动的过程中，成分逐渐被分离。
较强的吸附物质会停留在柱中，而较弱的吸附物质会随移动相一起流出。
4. 检测：通过在柱床中进行吸附解吸的成分分别流出后，可以采用各种检测手段来确定和定量各个组分。
常用的检测方法包括紫外光谱、荧光检测、质谱等。
总的来说，柱层析法利用样品中化学物质在固定相表面上的吸附性能不同，通过调控流动相的流速和成分，实现样品的分离、富集和分析。
柱层析法的原理和方法分析
柱层析法的原理和方法分析柱层析法是一种分离和分析混合物中组分的常用方法，它基于不同组分在固定相和流动相之间的不同分配行为，通过在填充在柱中的固定相上的流动相中进行分离。
下面将详细介绍柱层析法的原理和方法。
一、原理：柱层析法基于组分在固定相和流动相之间的相互作用差异来实现分离。
其中，固定相是一种特定的吸附剂或分离介质，它占据了柱子的内部空间。
而流动相是运动的溶液，它通过柱子并与固定相接触。
在固定相的作用下，样品中各个组分会以不同的速度通过柱子。
固定相可以通过物理吸附、化学吸附、离子交换、分子筛等方式与不同组分发生相互作用。
这种作用力会使得样品组分在流动相中的速度不同，从而使得各个组分在柱中分离。
通常情况下，移动相的性质和柱子中固定相的选择是需要考虑的关键因素之一二、方法分析：1.实验准备：确定需要分离的混合物，并选择合适的固定相和流动相组合。
准备量取定量混合物溶液，待用。
2.柱装填：将合适的固定相按照一定方法装填到柱子中。
根据需要，可以选择压缩或不压缩填充方法。
3.样品进样：将预先制备好的样品溶液以适量的体积注入柱子，等待分离进程进行。
4.分离过程：打开进样阀，使样品进入柱中。
样品会在固定相和流动相的作用下发生分离，不同组分会以不同的速度移动。
其中，流动相会冲走一些组分，而其他组分会在固定相上发生吸附。
5.检测和结果分析：使用合适的检测手段如紫外可见光谱检测、荧光检测等，在柱的出口位置定时检测样品的组成。
通过不同组分的峰值高度、面积等参数，可以推断出各个组分的浓度和分离效果。
6.结果计算和报告：根据检测结果，计算各个组分的浓度。
最后做出结果报告，包括每个组分的峰值高度、面积，浓度等。
总结：柱层析法是一种常用的分离与分析方法，其原理基于固定相和流动相之间的相互作用差异，通过对混合物中不同组分在固定相和流动相中分配行为的利用来实现分离。
柱层析法的方法包括实验准备、柱装填、样品进样、分离过程、检测和结果分析、结果计算和报告等步骤。
层析柱原理和使用方法
层析柱原理和使用方法层析柱是一种常见的分离技术，它通过物质在固定相和移动相之间的分配来实现分离和提纯。
层析柱广泛应用于化学、生物化学、制药等领域，是一种非常重要的实验技术。
本文将介绍层析柱的原理和使用方法，帮助读者更好地理解和应用这一技术。
首先，让我们来了解一下层析柱的原理。
层析柱的分离原理基于不同物质在固定相和移动相之间的分配系数不同。
固定相通常是一种多孔的固体材料，如硅胶、纤维素等，而移动相则是一种液体溶剂，如甲醇、乙醇等。
当混合物通过层析柱时，不同成分会根据其在固定相和移动相中的分配系数而被分离开来。
这样，我们就可以通过适当选择固定相和移动相的性质，来实现对混合物中目标成分的选择性提取和纯化。
接下来，我们将介绍层析柱的使用方法。
首先，选择合适的层析柱和填料。
根据待分离物质的性质和分离要求，选择合适的层析柱规格和固定相填料。
其次，装填层析柱。
将固定相填料均匀地装填到层析柱中，并确保填充密实，避免出现空隙。
然后，平衡层析柱。
用适当的移动相预先平衡层析柱，使固定相充分吸附移动相。
接着，样品进样。
将待分离的混合物样品缓慢地加入层析柱顶部，并逐步加入移动相。
最后，收集分离物。
根据不同成分在层析柱中的分配情况，逐步收集分离出的目标成分。
在使用层析柱的过程中，需要注意一些常见的问题和注意事项。
首先，要注意层析柱的操作流程和条件，避免操作失误导致分离效果不佳。
其次，要选择合适的移动相和流速，以确保分离效果和纯度。
另外，要注意层析柱的维护和保养，定期清洗和更换固定相填料，确保层析柱的分离效果和使用寿命。
总之，层析柱作为一种重要的分离技术，在化学、生物化学和制药等领域有着广泛的应用。
通过本文的介绍，相信读者对层析柱的原理和使用方法有了更清晰的认识，希望能够帮助读者更好地应用这一技术，提高实验效率和成果质量。
柱层析的专业概念
柱层析的专业概念柱层析是一种常用的分离纯化技术，它利用固定相和流动相之间的相互作用，将混合物中的组分分离出来。
下面将详细介绍柱层析的相关概念。
1.固定相和流动相在柱层析中，固定相是色谱柱中的填料，通常是固体颗粒或凝胶。
流动相是经过色谱柱的液体，它与固定相相互作用，使混合物中的组分分离。
根据作用方式的不同，固定相和流动相之间存在选择性的相互作用，这种选择性使得不同的组分在色谱柱中以不同的速度通过，从而实现分离。
2.吸附和洗脱在柱层析中，混合物中的组分被固定相吸附，然后通过流动相的洗脱作用，将不同组分逐一分离。
吸附作用主要由组分与固定相之间的分子间作用力决定，而洗脱作用则通过流动相与固定相之间的相互作用来实现。
洗脱液的选择对于分离效果至关重要，它需要与固定相和流动相均产生相互作用，以平衡各组分的吸附和洗脱。
3.分离纯化柱层析的主要目的是将混合物中的各组分分离出来，并进行纯化。
纯化后的组分通常具有更高的纯度和收率，可以用于后续的实验或工业化生产。
为了提高分离效果，可以选择不同的固定相、流动相以及洗脱液来进行优化。
4.分辨率分辨率是衡量柱层析效果的重要指标，它表示分离出的各组分在色谱图中的分离程度。
分辨率越高，各组分在色谱图中的峰形越好，纯度越高。
为了提高分辨率，可以调整色谱条件，如改变固定相的类型和粒径、流动相的组成和流速等。
5.操作条件柱层析的操作条件包括温度、压力、流速等。
这些条件对于分离效果具有重要影响。
在实验过程中，需要根据实际情况对操作条件进行优化，以获得最佳的分离效果。
此外，对于特定的分离任务，还需要选择合适的固定相和流动相，以实现最佳的分离效果。
6.再生和重复使用为了延长色谱柱的使用寿命和提高分离效率，通常需要对色谱柱进行再生和重复使用。
再生是指通过一定的方法使色谱柱恢复到初始状态的过程，例如通过高温处理或化学清洗等。
重复使用则是指在色谱柱经过一次使用后，再次使用其进行分离的过程。
在使用过程中需要注意避免色谱柱的堵塞和损坏，以保证其使用寿命和分离效果。
柱层析纯化
柱层析纯化一、概述柱层析纯化是分离、纯化和富集生物大分子的一种常用技术。
它是利用各种不同的化学和物理性质来分离、提纯和富集混合物中的目标分子，如蛋白质、核酸等。
柱层析纯化技术已经成为生物制药工业中最常用的方法之一，因为它可以高效地从复杂混合物中提取目标分子，并且能够在较短时间内得到高度纯净的产物。
二、柱层析原理柱层析是基于不同组分在固定相上的不同亲和力而进行分离的。
固定相通常是填充在管柱中的小颗粒，这些颗粒可以根据表面化学性质进行选择性修饰。
样品通过固定相时，会与其表面发生相互作用，使其在固定相上停留时间不同，从而实现了对样品组分的分离。
三、柱层析步骤1. 选择填料：根据需要分离的目标分子特异性选择填料；2. 制备填料：将填料与特异性结合剂进行反应；3. 装填柱子：将填料装入柱子中；4. 平衡柱子：在样品加入之前，用适当的缓冲液平衡柱子；5. 加入样品：加入经过前处理的样品；6. 洗脱杂质：用缓冲液洗脱非特异性结合的杂质；7. 洗脱目标分子：用特定条件洗脱目标分子；8. 收集纯化产物：收集纯化后的产物。
四、柱层析类型1. 亲和层析：利用特异性结合剂选择性地捕捉目标分子。
2. 尺寸排除层析：根据分子大小进行分离。
3. 离子交换层析：通过离子交换基团对带电荷的生物大分子进行选择性捕捉。
4. 逆相层析：根据生物大分子在水相和有机相之间的亲和力差异进行分离。
五、优点与局限优点：1. 可以高效地从复杂混合物中提取目标分子，并且能够在较短时间内得到高度纯净的产物。
2. 操作简单，容易掌握，可以快速实现自动化操作。
3. 适用于各种生物大分子的分离纯化，具有广泛的应用前景。
局限：1. 填料选择和柱子操作需要一定的专业知识和经验。
2. 操作过程中可能会引入杂质，影响纯化效果。
3. 操作过程中需要严格控制条件，如温度、pH值等，否则可能会影响纯化效果。
六、应用柱层析技术广泛应用于生物制药工业、生命科学研究领域以及食品和环境监测等领域。
柱层析法的一般技术
一、柱层析法的一般技术1．柱层析柱通常是玻璃的。
总的说来，长柱分辨力好，但大量物质的处理则用粗的柱比较适宜。
层析柱的基本装置如图3-10。
2．层析材料的准备许多材料都可在层析法中使用。
在装柱前这些材料要用溶剂平衡，另外还需作一些预处理。
例如，凝胶层析材料需要溶胀，吸附剂需要加热或酸处理来活化，离子交换树脂需要用酸碱处理来得到所需的电离形式。
在用溶剂平衡时，先使材料沉淀，用倾泻法除去悬浮的细颗粒，否则由于细颗粒的堵塞，溶剂的流速将显著降低（图3-2）。
3．装柱层析柱的填装是先关闭出口，用溶剂灌注至1/3体积，并使支持板下的“死体积”不存有气泡，再慢慢地向溶剂中加浆状物，要小心地沿着玻棒倾注以防止气泡存留在柱内。
让悬浮液沉淀，并放出过多的溶剂，为了避免分层，最好一次装完，如需分几次填装，则在二次填装前应先在已经沉淀的表面用玻棒搅拌后再倾注，重复这个过程，直至装到需要的高度。
用溶剂彻底洗涤层析柱后使液面降到比层析床表面略高一点。
最后覆盖一张圆形滤纸或尼龙布，以免加样时扰乱床表面（图3-1）。
4．加样上柱前，先将样品溶解在溶剂里或对洗脱液透析，样品溶液的浓度应该尽可能高些，以减少样品溶液体积，使区带狭窄。
将样品仔细加到层析床的表面，打开旋塞至液面与床面齐，然后连接溶剂池，保持一定高度的液面。
5．洗脱下一步是用适当的洗脱液把各组分依次从柱上洗脱下来。
在取代扩展法中，溶剂与层析材料的相互作用比柱上的物质与层析材料的相互作用要强，于是与柱结合的分子被取代。
每一个柱能结合多少物质都有一个限度（即总柱容量）。
在取代扩展的情况下，当样品上柱量差不多达到总柱容量的50％时，一般尚能完全分离。
但是为了得到更好的分辨力，洗脱法更为可取。
洗脱法是最常用的方法。
使用洗脱法，上柱量不超过总柱容量的10％，溶剂与柱的相互作用比溶质与柱的相互作用弱，溶剂越过结合的分子，逐渐地将它们从柱上冲洗下来。
在冲洗过程中各组分因为吸附力不同而逐渐分离。
柱层析的实验方法和技巧
柱层析的实验方法和技巧柱层析是一种常见的分离和纯化技术，广泛应用于药物、化学和生物学等领域。
在进行柱层析实验时，需要掌握一些实验方法和技巧，以保证实验的准确性和可重复性。
以下是柱层析的实验方法和技巧的详细介绍。
实验方法：1.样品准备：首先，将待分离的样品准备好。
样品应该经过适当的前处理，如提取、浓缩和纯化等操作。
同时，还需要将样品溶解在适当的溶剂中，以便在柱层析中进行分离。
2.柱层析填充材料的选择：根据样品的性质和分离需求，选择合适的填充材料。
常用的填充材料有硅胶和化学修饰的硅胶，也可以根据需要选择其他填充材料。
填充材料的选择对柱层析的效果和效率有很大影响，因此需要根据具体情况进行选择。
3.柱层析装置的选择：柱层析装置有多种类型，包括玻璃柱、SPE柱和HPLC柱等。
根据实验要求选择合适的柱层析装置。
同时，还需要选择合适的柱层析操作系统，如柱层析系统和高效液相色谱系统等。
4.样品的加载和洗脱：将样品加载到柱层析柱中，并控制好流速和洗脱溶剂的组成。
对于复杂的样品，可以采用梯度洗脱的方法，逐渐改变洗脱溶剂的组成，以实现目标物质的分离。
5.分离物的收集和分析：根据需要，将分离得到的目标物质收集起来，并进行后续的分析和鉴定。
常用的分析方法包括质谱、核磁共振和紫外可见等。
实验技巧：1.柱的制备：在进行柱层析实验前，需要制备层析柱。
首先，选取合适的柱体和填充材料，将填充材料放入柱体中，并按照要求填充紧密。
同时，还需要注意保持柱体的垂直和水平，以避免填充不均匀。
2. 流速控制：在柱层析实验中，需要控制好流速，以避免过高的流速造成分离效果下降。
一般来说，流速应为填充材料建议的范围内，通常为0.5-2.0 mL/min。
3.洗脱溶剂的选择：洗脱溶剂的选择对柱层析的分离效果有很大影响。
一般来说，需要选择合适的极性洗脱溶剂，以满足分离和纯化的要求。
对于复杂的样品，可以采用梯度洗脱的方法，逐渐改变洗脱溶剂的组成。
4.紧密填充和充实度的控制：在填充柱体时，需要注意填充材料的紧密度和充实度。
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塔板理论
理论塔板高度越低，在单位 长度色谱柱中就有越高的塔 板数，则分离效果就越好。 决定理论塔板高度的因素有： 固定相的材质、色谱柱的均 匀程度、流动相的理化性质 以及流动相的流速等。
塔板理论
塔板理论是基于热力学近似的理 论，在真实的色谱柱中并不存在 一片片相互隔离的塔板，也不能 完全满足塔板理论的前提假设。 塔板理论虽然能很好地解释色谱 峰的峰型、峰高，客观地评价色 谱柱地柱效，却不能很好地解释 与动力学过程相关的一些现象， 如色谱峰峰型的变形、理论塔板 数与流动相流速的关系等。
吸附剂的选择
吸附剂的量的选择 一般为5~40倍 常用的为10~20倍 由流动相体系、吸附剂目数综合决定。
流动相体系
正己烷和石油醚<环己烷<四氯化碳<三氯乙烯<二 硫化碳<甲苯<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯 <丙酮<丙醇<乙醇<甲醇<水<吡啶<乙酸 极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统（有时样品溶 解性差的可以加入二氯甲烷） 极性较大的用 甲醇：氯仿系统 极性大的用 甲醇：水：正丁醇：醋酸系统
A B
基本操作程序
清洗砂芯， 检查柱子 装柱：干法， 湿法 上样：干法， 湿法
洗脱：根据TLC 情况配置洗脱液
收集：检测 方法选择
使用常压或减压蒸馏， 冻干等方法除去溶剂
装柱
干法
直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧， 至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度， 最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。 接着是用洗脱剂“走柱子”，一般洗脱剂是采用TLC 分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面 加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。干法装柱较 方便，但最大的缺陷在于“走柱子”时，由于溶剂和硅胶 之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产 生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲 烷更为明显。
硅胶的粒度； 样品层/空白柱层高度比：1:5~1:40； 在TLC上目标物Rf值为0.5的流动相； 预计的分离时间。——决定了在TLC展开剂的基础上放大的倍数
常压、加压、减压 适当的检测方法的选择： UV，HPLC，适 当的显色剂
柱层析的小试到放大
横截面与高度比：保证适当的塔板数
装柱的紧密度
分类
柱层析方法分类： 吸附色谱柱：吸附剂，洗脱剂（流动相）； 分配色谱柱（萃取原理）：载体，固定相， 流动相； 离子交换树脂柱； 凝胶柱
吸附色谱柱较为常用，下面重点讨论
吸附剂
硅胶 中性、酸性，比较适合分离中性或酸性物质 粒度100~200目，200~300目，300~400目，更 高 氧化铝 酸性，适合分离酸性物质 中性，pH值7.5，适合分离碱性物质 碱性，pH值10，适合分离碱性物质 聚酰胺 硅藻土 活性炭
流动相体系的选择
特殊样品：会造成拖尾，严重影响分离效果 碱性物质
先用千分之一到百分之一的氨水、三乙胺或者氨甲醇， 碱化柱子
酸性物质
洗脱剂中加千分之一的醋酸，或苯磺酸
层析柱的选择
关于柱子的尺寸，应该是粗长 的最好 ：横截面/高度比 根据待分离的样品的量进行选 择：装柱太短了可能分离效果不
好，太长了也会由于扩散或拖尾导 致分离效果不好，同时浪费时间， 不稳定的物质还可能会变质。
柱层析技术的讨论
1.基本原理及分类 2.常用吸附剂 3.流动相体系 4.层析柱的选择 5.基本操作和注意事项
基本原理
色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在 两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同 来进行分离的。 由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与 固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随 着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次 的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不 同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适 当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的 分离与检测。
流动相体系的选择
由TLC实验数据推断柱层析流动相配比：
在选择一定的流动相的前提下，调整流动相组分或比例，使目标 物的Rf值为0.5，与邻近杂质的分离度至少在0.1以上（当然是越大 越好，Rf达到0.2~0.3就很容易分离了）
根据所选的吸附剂的目数
因为TLC是高效板，硅胶柱的分离效果较差，所以一般需要在 TLC流动相的基础上放大5~10倍，甚至更多才可以得到相似的分离 度
湿法： 先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填 入柱子中，然后再加压用淋洗剂 “走柱 子”，本法最大的优点是一般柱子装的比 较结实，没有气泡。
上样
干法： 把待分离的样品用少量溶剂溶解后， 在加入少量硅胶（一般是样品的1~2倍量）， 拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小 心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦，但 可以保证样品层很平整。 而且适用于溶解性差的样品，使用湿 法则需要较多的溶剂，导致上样层变厚
吸附剂的选择
中性、酸性物质优先试用硅胶分离，如果 效果不好可以使用氧化铝 碱性物质也可以使用硅胶分离，但需要用 三乙胺等碱性物质碱化吸附剂 如果选择氧化铝分离，需要使用氧化铝TLC 板点板，使用硅胶板不能准确选择流动相 体系
吸附剂的选择
吸附剂目数的选择 对于Rf值>0.4的杂质，可以选择目数100~200的 硅胶 对于Rf值在0.2~0.4的，一般用200~300目 对于Rf值在0.1~0.2的，用300~400目 对于Rf值<0.1的，需要更多的吸附剂用量、较小 的流动相体系、较长的时间
塔板理论
基于热力学的塔板理论 它是色谱学的基础理论，塔板理 论将色谱柱看作一个分馏塔，待分离 组分在分馏塔的塔板间移动，在每一 个塔板内组分分子在固定相和流动相 之间形成平衡，随着流动相的流动， 组分分子不断从一个塔板移动到下一 个塔板，并不断形成新的平衡。一个 色谱柱的塔板数越多，则其分离效果 就越好。
流动相体系的选择
1.
首先从待分离物质的结构上判断
极性基团较多的，如胺基、羧基，选择极性 较大的体系。一般为甲醇：氯仿体系 可形成氢键部位较多的，应选择极性较大的 流动相体系 脂溶性集团较多的，一般乙酸乙酯：石油醚 体系就可以
2.
3.
流动相体系的选择
可替换的流动相体系 考虑到物质的溶解性和极性变化，上述 流动相体系还可以做一些变化：
乙酸乙酯：石油醚—丙酮：石油醚—二氯甲 烷:(乙酸乙酯)：石油醚—乙酸乙酯：正己烷（价 格贵不推荐） 甲醇：氯仿—甲醇：二氯甲烷—乙醇：二氯甲 烷
比如，有的物质在乙酸乙酯里溶解度很差， 上柱后样品不能有效的溶解在流动相中， 影响分离，可以改用丙酮、二氯甲烷、或 者三种溶剂同时混合使用 比如，使用甲醇：二氯甲烷体系极性较大 时，可以改换乙醇：二氯甲烷体系，就可 能得到较好的分离效果
流速的计算
一般的策略
目标产物与杂质Rf值相差较大(>0.2)的样品 小目数吸附剂，较大极性，快速搞定 目标产物与杂质Rf值相差很小（0.1~0.2）难以分 离的样品 增加吸附剂的目数和用量，减小洗脱极性， 延长洗脱时间； 或者先进行粗分，除去容易出去的杂质，再 二次层析 制备色谱分离：制备高效液相，Biotage自动柱层 析仪 对映异构体的分离： 朱景松的例子，或者使用制备SFC（超临界 色谱）分离
实战举例
O
H N
非那雄胺
不合格产品，杂质B相对保留时间 1.16
O
N H
非那雄胺
O H N
TLC实验
O N H
丙酮：石油醚=1：4， 目标物与杂质B的Rf值相差0.2
实际操作
粗品1kg，装柱160~200目硅胶25kg 流动相丙酮：石油醚（1：40）
杂质B
制备板分离
原理同TLC 展 开 制备板：吸附剂GF254 方 向 0.3~0.4mm 载样量<100mg 点样处 操作流程 将样品溶解，用0.5或0.9mm毛细管将样品均 匀的点在板的下方，吹干溶剂，放入展缸展开。 显色或UV确定所要色带，将所需要的色带用小刀 刮下，硅胶用溶解性好的溶剂浸泡，过滤，浓缩， 即可得到产物。 优点：与TLC板情况比较吻合，操作简便
湿法 湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展 开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以 用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样 品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液， 沿着层析柱内壁均匀加入。 优点：简便
洗脱与收集
考虑三因素：溶解性，亲和力，分离度（Rf值） 固定比例洗脱剂；梯度洗脱 如何设定洗脱剂的比例：