紫外光区的特定波长处或一定波长范围内的吸光度,对该物

4.1.1紫外-可见分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内的吸光度，对该物质进行定性和定量分析的方法。本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。

4.1.2 定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品或吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若该物质本身在紫外光区无吸收，而其杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰处该物质无吸收，则可用本法作杂质检查

4.1.3 物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环等发色基团，均可在紫外区（200～400nm）或可见光区（400～850nm）产生吸收。通常使用的紫外-可见分光光度计的工作波长范围为190～900nm

紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。郎伯-比尔（Lambert-Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：

A=log1/T=ECL

式中 A为吸光度；

T为透光率

E为吸收系数

C为溶液浓度

L为光路长度

4.2 仪器

4.2.1 紫外-可见分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。

4.2.2 为了满足紫外-可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。

4.2.3 单色器通常由进光狭逢、出光狭逢、平行光装置、色散元件，聚焦透镜或反射镜等组成。色散元件有棱镜和光栅二种，棱镜多用天然石英或熔融硅石制

成，对200～400nm波长光的色散能力很强，对600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非均排光谱。光栅系将反射或透射光经衍射而达到色散作用，故常称为衍射光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为均排光谱，双光束仪器多用光栅为色散元件。

4.2.4 检测器有光电管和光电倍增管二种

4.2.5 紫外-可见分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同可分为单光束和双光束分光光度计二类。单光束分光光度计有些仍为手工操作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸收度，操作比较费时，用于绘制吸收光谱图时很不方便，但适用于单波长的含量测定。双光束分光光度计籍扇形镜交替切换光路使分成样品（S）和参比（R）两光束，并先后到达检测器，检测器信号经调制分离成两光束对应信号，信号的比值可直接用记录仪记录，双光束分光光度计操作简单，测量快速，自动化程度高，但作含量测定时，为求准确起见，仍宜用固定波长测量方式。

4.3 紫外-可见分光光度计的检定

4.3.1 波长准确度

4.3.1.1 波长准确度的允差范围紫外-可见分光光度计波长准确度允许误差，紫外区为±1.0nm，500nm处±2.0nm，700nm处±4.8nm。

4.3.1.2 波长准确度检定方法

4.3.1.2.1 用低压汞灯检定关闭仪器光源，将汞灯（笔式汞灯最方便）直接对准进光狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，采用波长扫描方式，扫描速度“慢”（如15nm/min）、响应“快”、最小狭缝宽度（如0.1nm）、量程0～100%，在200～800nm范围内单方向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值（若仪器无“峰检测”功能，必要时可对指定波长进行“单峰”扫描）。

4.3.2 吸光度准确度精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，置1000m l量瓶中，用0.005mol/L硫酸液溶解并稀释至1000ml，用配对的1cm 石英池，以0.005mol/L硫酸液为空白，在235，257，313，350nm分别测定吸光

度，然后换算成（E 1%

1cm，测得值应符合下表中规定的允差范围分光光度法允差范围

4.4 样品测定操作方法

4.4.1 吸收系数测定（性状项下）按各品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的波长测定其吸光度，并计算吸收系数，应符合规定范围。

4.4.2 鉴别及检查按各品种项下的规定，测定供试品溶液的最大及最小吸收波长，有的并须测定其在最大吸收波长与最小波长处的吸光度比值，均应符合规定。

4.4.3 含量测定

4.4.3.1 对照品比较法按各品种项下规定的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中所含被测成分标示量的（100±10）%以内，用同一溶剂，在规定的波长处测定供试品溶液对照品溶液的吸光度。

4.4.3.2 吸收系数法按各品种项下配制供试品溶液，在规定的波长及该波长±3nm处测定其吸光度，按各该品种在规定条件下给出的吸收系数计算含量。4.4.3.2.1 采用吸收系数法应对仪器进行校正后测定，如为测定新品种的吸收系数，需按后列“吸收系数测定法”的规定进行。

4.4.3.3 计算分光光度法按中国药典规定，计算分光光度法一般不宜用含量测定，对于少数采用计算分光光度法的品种，应严格按各品种项下规定的方法进行。用本法时应注意：有一些吸光度是在待测成分吸收曲线的上升或下降陡坡处测定，影响精度的因素较多，故应仔细操作，尽量使供试品和对照品的测定条件一致。若该品种不用对照品，如维生素A测定法（见中国药典附录），则应在测定前对仪器作仔细的校正和检定。

4.5 注意事项

4.5.1 试验中所用的量瓶和移液管均应经检定校正、洗净后使用。

4.5.2 使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配对使用，否则必须加以校正。

4.5.3 取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装样品溶液的体积以池体积的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂，为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用醮有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。使用后用溶剂及水冲洗干净，晾干防尘保存，吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸（3：1v/v）混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗后时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶后会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。

4.5.4 测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求，可用1cm石英吸收池盛溶剂以空气为空白（即参比光路中不放置任何物质）测定其吸收度，应符合下表规定，并不得在溶剂的截止使用波长以下测定。

以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸光度的规定

每次测定时应采用同一厂牌子批号,混合均匀的同批溶剂.

4.5.5 称量应按药典规定要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时所取溶剂一般应不少于5ml。含量测定时供试品应称取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应称取2份。吸收系数检查也应称取2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。作鉴别或检查可取样品1份。

4.5.6 供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸光度在0.3～0.7之间为宜，吸光度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸光度线性范围，配制合适的读数浓度。

4.5.7 测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm处，再测几点的吸光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸光度最大波长应在该各品种项下规定的波长±2nm以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的准确度。

4.5.8 用于制剂含量测定时，应注意供试液和对照液PH值是否一致，如PH

值对吸收有影响，则应调溶液的PH值一致后再测定吸光度。

4.6 结果与计算