1L--色氨酸含量的测定
色氨酸ep中检测有关物质含量计算公式
色氨酸ep中检测有关物质含量计算公式以色氨酸（ep）中检测有关物质含量计算公式色氨酸（ep）是一种重要的氨基酸，它在生物体内具有多种功能。
为了研究和评估色氨酸在不同生物体或样品中的含量，科学家们开发了一些方法来检测和计算色氨酸的含量。
本文将介绍一种常用的计算公式来确定色氨酸（ep）的含量。
该计算公式的基本原理是通过测定色氨酸（ep）溶液的吸光度来确定其含量。
测定溶液吸光度的方法包括紫外-可见吸收光谱法和高效液相色谱法。
无论使用哪种方法，最终都要通过计算公式来确定色氨酸（ep）的含量。
下面是这个计算公式的具体内容：色氨酸（ep）含量（mg/L）=（A × B）/ C其中，A代表样品的吸光度，B代表标准曲线的斜率，C代表样品的体积。
需要制备一条标准曲线来确定B的值。
制备标准曲线的方法是测定不同浓度的色氨酸（ep）标准溶液的吸光度，并绘制吸光度与浓度的曲线。
通过线性回归分析，确定标准曲线的斜率B。
然后，测定待测样品的吸光度A，并确定样品的体积C。
将A、B和C的值代入计算公式中，即可得到色氨酸（ep）的含量。
需要注意的是，在进行测定和计算前，需要保证样品和试剂的质量和纯度。
同时，还需要控制好实验条件，如温度、pH值等，以确保测定结果的准确性和可重复性。
为了提高测定的精确性，可以采用多次测定的方法，并计算均值和标准差。
通过均值和标准差的计算，可以评估测定结果的可靠性和精确度。
通过测定色氨酸（ep）溶液的吸光度，并利用计算公式来确定其含量，可以为研究和评估色氨酸在不同生物体或样品中的水平提供重要的参考。
然而，需要注意的是，该计算公式只是一种常用方法，具体的实验条件和测定方法还需要根据具体情况进行调整和优化。
色氨酸的测定和丝氨酸含量测定
色氨酸的测定丝氨酸含量测定一、方法原理根据《中国药典》色氨酸含量测定：取本品约0.15g，精密称定，加无水甲酸3ml使溶解，加冰醋酸50ml，照电位滴定法，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定。
每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg的色氨酸。
色氨酸含量：药典2010版二部281页二、实验仪器及推荐配置雷磁自动电位滴定仪231-01 pH玻璃电极217-01甘汞参比电极三、实验试剂1、滴定液：0.1mol/L高氯酸溶液配制取无水冰醋酸（按含水量计算，每1g水加醋酐 5.22ml）750ml，加入高氯酸（70%-72%）8.5ml，摇匀，在室温下缓缓滴加醋酐23ml，边加边摇，加完后摇匀，放冷，加无水冰醋酸适量使成1000ml，摇匀，放置24小时。
2、基准纯邻苯二甲酸氢钾：在105℃干燥至恒重3、样品四、样品分析及结果计算1、标定取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.16g，精密称定，加无水冰醋酸20ml使溶解。
在自动电位滴定仪上滴定至终点，每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。
按下列公式计算C HClO4=0.1(m邻苯二甲酸氢钾/0.02042)/V HClO40.1 –高氯酸标准溶液理论浓度（mol/L）C HClO4–高氯酸标准溶液浓度（mol/L）V HClO4 - 滴定至终点时消耗高氯酸的体积（ml）m邻苯二甲酸氢钾- 称取的邻苯二甲酸氢钾质量（g）0.02042 - 与1.00ml高氯酸标准溶液[c(HClO4)0.1mol/L]相当的邻苯二甲酸氢钾的质量（g）2、样品分析取样品约0.15g，精密称定，加无水甲酸3ml使溶解，加冰醋酸50ml，在雷磁自动电位滴定仪上，用高氯酸滴定液（0.1 mol/l）滴定。
按下列公式计算色氨酸含量=0000.02042100%0.1⨯⨯c V m 0.1 – 高氯酸标准溶液理论当量浓度（mol/L ）c 0 – 高氯酸标准溶液实际标称浓度（mol/L ）V 0 - 滴定突跃点时消耗高氯酸的体积（ml ）m 0 - 样品质量（g ）0.02042 - 与1.00ml 高氯酸标准溶液[c(HClO 4)0.1mol/L]相当的色氨酸的质量（g ）五、 结果（谱图）仪器准备，参照自动电位滴定仪说明书六、 结论与建议参比电极内充液更换为非水溶剂的氯化钾或氯化锂饱和溶液，分析效果较好。
色氨酸测定方法
1适用范围
本方法适用于饲料原料中色氨酸含量的测定。
2原理
在非水溶液介质中，以高氯酸标准溶液滴定试样，进行中和反应，根据消耗高氯酸的体积计算L-苏氨酸的含量。
3 仪器设备
3.1 分析天平：感量0.0001g
3.2 三角瓶：250ml
3.3 刻度吸管：10ml
3.4 酸式滴定管：50ml
4 试剂和溶液
4.1 60g/L氯化汞乙酸溶液
4.2 α—萘酚苯基指示剂：0.2%甲醇溶液
4.3 0.1 mol/L高氯酸标准溶液
5 测定步骤
称取样品0.1g,称准至0.0001g,加3ml甲酸溶解后，加冰乙酸50ml,再加10滴
0.2% a—萘酚苯基甲醇指示剂，用0.1mol/l高氯酸标准溶液滴定至溶液从橙黄色变
为黄绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。
每1ml高氯酸滴定溶液（0.1mol/l）相当于11.91mg的色氨酸(C11H12N2O2)
6 结果计算
（V1-V0）×C×0.1191 204.2 色氨酸含量（%）= ×100×
m 119.12
式中：V1—滴定试样时高氯酸标准溶液的消耗体积（ml）；
V0 —滴定试剂空白试验时高氯酸标准溶液的消耗体积（ml）；
0.1191 —滴定度（每1ml高氯酸滴定溶液（0.1mol/l）相当于11.91mg的
苏氨酸(C4H9NO3)
m —试样的质量，（g）；
C —高氯酸标准溶液的浓度（mol/l）
204.2 —色氨酸分子量
重复性
每个试样，应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果，两个平行样测定值相差不得超过0.3%，否则应重做。
基于比色法快速测定尿液中色氨酸的含量
基于比色法快速测定尿液中色氨酸的含量
李婷婷;刘若男;顾月清
【期刊名称】《生命科学仪器》
【年(卷),期】2018(016)001
【摘要】L-色氨酸表达异常与多种疾病相关,我们建立一种方法检测尿液中色氨酸含量.首先通过SCX强阳离子交换剂对尿液进行前处理,回收率为78.2％,再利用埃利希氏反应对尿液色氨酸进行检测,采用紫外-可见分光光度计测定595nm处吸收值,在0-200μM范围内呈线性,线性相关系数达到0.9928.本研究实现了尿液中色氨酸的简单、快速、可视化检测.
【总页数】6页(P43-47,37)
【作者】李婷婷;刘若男;顾月清
【作者单位】中国药科大学生物医学工程教研室,江苏南京210009;中国药科大学生物医学工程教研室,江苏南京210009;中国药科大学生物医学工程教研室,江苏南京210009
【正文语种】中文
【中图分类】O0657.3
【相关文献】
1.发酵液中色氨酸含量的快速测定 [J], 王健;陈宁;徐咏全;杨海军;张克旭
2.二羟基乙酸盐比色法测定饲料中色氨酸的含量 [J], 李永才
3.对二甲氨基苯甲醛比色法测定饲料中色氨酸的含量 [J], 李永才;张晓梅
4.酶水解比色法测定奶液中色氨酸含量的研究 [J], 斯钦;巴图
5.发酵液中色氨酸含量高通量快速测定 [J], 于金龙;郭长江;黄英武;徐琪寿
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表面活性剂增敏分光光度法测定L-色氨酸
收 稿 日期 ：２ ０ ０ ９—１ ２—０ ８
基 金项 目 ：国 家 自然科 学 基 金 资助 项 目（ ０ ７ ０ ２ ２８５８）
此 ， 试 验 采 用 表 面 活 性 剂 增 敏 分 光 光 度 法 测 定 色 氨 酸 ， 色 氨 酸 在 ＨＮＯ 作 用 下 被 氧 化 生 成 有 本 。 色 物 质 口 ， 入 表 面 活 性 剂 Ｔ ｉ ｎＸ ｌ４胶 束 后 体 系 吸 光 度 大 大 增 强 ， 加 ｒ ｏ —１ ｔ 由此 建 立 一 种 测 定 Ｌ 色 氨 酸 一
中 图分 类 号 ：Ｏ ５ ． ２；Ｏ ２ ． １ ６７３ ６ ９ ７ 文献 标 志 码 ：Ａ 文章 编 号 ：１ ０ ０ ７—８ ４ ２ １ ） １—０ ３ ２ Ｘ（ ０ Ｏ ０ ０ ４—０ ４
， 色 氨酸 是重要 的氨 基酸 ， 『 是人 体和 动物生 命 活动 中必需 的氨基 酸 之一 ， 其在饮 食 中存在 对于 组 织合 成很 重要 ， 被称 为第 二必需 氨基 酸． ㈩ 色氨 酸广 泛应 用于 医药 、 品和饲 料等方 面 ， 食 是一种 国际
酸钠 ， 入烧 杯 中 ， 放 以蒸 馏水 溶解 ， 然后 移入 ２ ０ｍＩ 容 量瓶 ， 以蒸 馏 水 定 容 ；Ｎａ ５ 再 ＯＨ 溶 液 （ ５ ） １ ；
Ｔ ｉ ｎＸ ｌ４溶 液 （ ） 盐 酸 溶 液 （ ｌ Ｉ ； ｒ ｏ —１ ｔ １ ； ６ｍｏ ・ ） ＫＯＨ 溶 液 （０ ） 一 １％ ． ＵＶ一５ １型 紫 外 一 见 分 光 光 度 计 （ ２０ 可 日本 岛 津 公 司 ） ｐ 一５型 ｐ 计 （ 海 精 科 雷 磁 厂 ） Ｓ ２ ； ＨＳ ２ Ｈ 上 ；Ｂ ２ ４ 电 子 天 平 （ 京 赛 多 利 斯 天 平 有 限公 司 ） ＨＨ２ 北 ； ２数 字 恒 温 水 浴 锅 （ 州 国 华 电 器 有 限 公 司 ） 常 ．
色氨酸的测定-碱水解法
水解氨基酸（色氨酸）样品前处理方法
碱水解法（LiOH法）
1.准确称取固体样品50-200mg（精确至0.1mg），称样量可根据样品
中氨基酸大体含量或测试谱图实际效果增减。
A300全自动氨基酸分析仪常规进样浓度为100nmol/ml，可根据此浓度控制样品前处理中的称样量、定容刻度和稀释比例。
2.将称量后的样品置于聚四氟乙烯衬管中，加入1.50 ml LiOH水解
液（4M）。
3.将聚四氟乙烯衬管放入水解玻管中，置于氮吹仪上吹氮15min后，
用酒精喷灯封管。
4.将密封后的水解管放入恒温干燥箱110℃下水解20h。
5.取出水解管，自然冷却至室温，开管。
6.将水解液转移10ml-25ml容量瓶，加入1.00ml HCl溶液（6M）中
和控制pH，然后用超纯水定容至刻度。
7.用一次性注射器取定容后的样品适量，经0.45或0.22μm针头滤膜
过滤至1.5ml进样瓶，供测试使用。
8.实际测试中可以根据需要，使用样品稀释液（醋酸锂缓冲溶液，
pH≈2.2）按比例稀释样品，调节进样浓度。
L-色氨酸检测方法(AJI92)
L-色氨酸检测方法（AJI92）比旋度取本品，精密称定，加水溶解并稀释成每1m1中约含10mg的溶液，依法测定，比旋度为－30.5°至－32.5°。
pH 取本品0.50，加水50m1溶解后，依法测定，pH值应为 5.4～6.4。
溶液的透光取本品0.5g，加2mol/L盐酸溶液20ml溶解后，照分光光度法，在430nm的波长处测定透光率，不得低于95.0%。
氯化物取本品0.25g，依法检查，与标准氯化钠溶液 5.0ml制成的对照液比较，不得更浓(0.02%)。
硫酸盐取本品 1.0g，依法检查，与标准硫酸钾溶液 2.0m1制成的对照液比较，不得更浓(0.02%)。
铵盐取本品0.10g，依法检查，与标准氯化铵溶液 2.0ml制成的对照液比较，不得更深(0.02%)。
其他氨基酸取本品0.30g，加1mol/L盐酸溶液1ml，加水适量使溶解，并稀释成20ml，作为供试品溶液；精密量取适量，加水稀释成每1ml中含75μg溶液，作为对照溶液。
照薄层色谱法(附录V B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水 (3∶1∶1)为展开剂，展开后，晾干，喷以茚三酮的丙酮溶液（1→50）。
在80℃干燥10分钟，立即检视。
供试品溶液所显杂质斑点的颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深（0.5%）。
干燥失重取本品，在105℃干燥3小时，减失重量不得过0.2%。
炽灼残渣不得过0.1%。
铁盐取本品 1.0g，炽灼灰化后,残渣加盐酸2ml,置水浴上蒸干,再加稀盐酸4ml,微热溶解后,加水30ml与过硫酸铵50mg,依法检查，与标准铁溶液 2.0ml制成的对照液比较，不得更深（0.002%）。
重金属取炽灼残渣下项下遗留的残渣,依法检查，含重金属不得过百万分之十。
砷盐取本品 2.0g，加盐酸5ml与水23ml溶解后，依法检查，应符合规定（0.0001%）。
含量取本品约0.15g，精密称定，加无水甲酸3ml与冰醋酸50m1溶解后，照电位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。
饲料色氨酸含量测定
测定方法：分光光度法GB/T 15400-94
分析步骤 1.工作曲线的绘制 （1）吸取色氨酸浓度为100 μ g/mL的标准溶液5.00、7.50、 10.00、12.50、15.00、17.50mL分别置于25mL棕色容量瓶中 用水定容，摇匀。溶液浓度分别为20、30、40、50、60、70 μ g/mL。 （2 ）吸取各浓度溶液1mL，分置具塞试管中，空白管加 1mL水向每支试管内加入氢氧化钾溶液1mL，混匀，将试管放 入冷水盆中，加5mL对二甲氨基苯甲醛溶液，从冷水盆中取出 试管，摇匀，在室温（20～30℃，下同）放置30min。 （3 ）向上述每支试管内加0.2mL亚硝酸钠溶液，摇匀，室 温放置25min。 （4 ）以空白管调零，在590nm波长下，以1cm光径测定各 溶液吸光度值。 （5 ）以色氨酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制工 作曲线，或列出回归方程式。
测定方法：分光光度法GB/T 15400-94
仪器、设备 分析天平：感量0.1mg。 分光光度计。 离心机：转速4000r/min。 实验室用粉碎机。 培养箱。 容量瓶：25mL、50mL、250mL。 10mL具塞试管。 刻度吸管：0.5mL、2mL、5mL、25mL。
测定方法：分光光度法GB/T 15400-94
测定方法：分光光度法GB/T 15400-94
2.样品测定 （1）称样：按附表A建议的称样量称取脱脂试样两份，精 确至0.1mg。 （2） 水解：将试样置于50mL容量瓶中，在轻轻振摇中缓 慢加入25mL氢氧化钾溶液，使试样湿润且丌粘壁，置40±1℃ 培养箱中水解16～18h。 （3）离心：取出水解液冷却至室温后，用水定容，摇匀， 取部分水解液以4000r/min转速离心15min。 （4）显色：取2mL上清液置具塞试管中，并将试管放入冷 水盆中，加入5mL对二甲氨基苯甲醛溶液，摇匀。每个试样另 取2mL上清液于具塞试管中，加5mL硫酸溶液作为样品空白， 摇匀，室温放置30min。然后向每支试管内加入0.2mL亚硝酸钠 溶液，摇匀，室温放置25min。 （5）比色：以样品空白调零，在590nm波长处1cm光径测 定样品溶液的吸光度值。
色氨酸含量测定方法
色氨酸含量测定方法
1. 你知道高效液相色谱法吗？就像给色氨酸做一次特别的“体检”。
比如说，我们想知道牛奶里色氨酸的含量，就可以用这个方法呀！把样本放进去，仪器就像个聪明的侦探，能准确找出色氨酸的量呢！
2. 纸层析法也不错哦！这就好像给色氨酸画一张独特的“地图”。
比如检测麦粒里的色氨酸，用这种方法慢慢展开，色氨酸的位置就清晰可见啦，神奇吧！
3. 分光光度法呢，如同给色氨酸安上一个“信号灯”。
像是在研究某种保健品中色氨酸含量时，通过特定的光线照射，就能知道色氨酸有多少啦。
4. 荧光光度法呀，简直就是给色氨酸加上了一层“闪耀的外衣”。
举个例子，检测药品里的色氨酸含量，那闪烁的光芒就是色氨酸在“亮相”呢！
5. 氨基酸分析仪测定法，好像是为色氨酸准备的专属“舞台”。
想要精确知道饲料里色氨酸的量，让它在这个“舞台”上好好表现一下就知道啦。
6. 酶联免疫吸附测定法呢，就像是给色氨酸设下的一个“陷阱”。
比如在检测血液样本中的色氨酸时，它乖乖地就“落网”啦。
7. 气相色谱法也能用来测定色氨酸哦，这相当于为色氨酸造了一条特别的“跑道”。
拿植物样本来说，色氨酸就能在这条跑道上被检测到呢。
8. 微生物法呀，就如同让色氨酸去参加一场“比赛”。
好比检测食品中的色氨酸含量，它在这个“比赛”中的表现就决定了它的数量呢！我觉得呀，这些方法都各有奇妙之处，都能帮我们准确了解色氨酸的含量呢！。
L-色氨酸含量和纯度的测定实验指导书
L-色氨酸含量和纯度的测定 实验指导书一、实验目的1.了解对二甲氨基苯甲醛与L-色氨酸的反应机理；2.了解高效液相色谱分析的基本原理；3.掌握L-色氨酸的测定方法。
二、概述和原理L-色氨酸的分析方法主要有氨基酸自动分析仪分析法、高效液相色谱分析法、毛细管电泳法、薄层色谱法和分光光度法等。
本实验主要采用分光光度法进行L-色氨酸含量测定。
分光光度法测定L-色氨酸的基本原理为：在硫酸溶液中，L-色氨酸与对二甲氨基苯甲醛发生缩合反应，生成的希夫碱对二甲氨基苯甲醛缩色氨酸为蓝色，颜色深度在一定范围内与L-色氨酸含量成线性关系，可在分光光度计下定量测定。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，其系统主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，由于该法具有高效、快速和灵敏等特点，不仅可用于L-色氨酸含量的测定，还可用于纯度的测定。
其工作原理为：储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
三、实验试剂及仪器1.试剂浓硫酸；对二甲氨基苯甲醛；亚硝酸钠；L-色氨酸标准品；磷酸二氢钾；冰醋酸；甲醇（液相纯）；纯净水；乙腈（液相纯）。
2.仪器紫外可见分光光度计，Agilent 1200 Series高效液相色谱仪。
四、发酵液中L-色氨酸含量的测定1.对二甲氨基苯甲醛溶液（3 g/L）制备准确称取0.3 g对二甲氨基苯甲醛，溶于100 mL 1:1浓硫酸中。
2.亚硝酸钠溶液（2%）制备准确称取亚硝酸钠0.2 g于10 mL容量瓶中，以蒸馏水定容，新鲜配制。
3.L-色氨酸标准储备液（100 mg/L）制备准确称取25 mg L-色氨酸标准品，用纯水定容于250 mL棕色容量瓶中，制得浓度为100 mg/L的L-色氨酸标准储备液，于4 ℃冰箱保存备用。
毛细管电泳法测定发酵液中L_色氨酸的含量_陶玉贵
食品与发酵工业 FOOD AND F ERME NT AT ION INDU STRIES
准确量取 L- 色氨酸原发酵液, 4 000 r / min 离心、 用蒸馏水按 1 B50 体积比稀释, 01 45 Lm 微滤膜抽滤 后, 在已优化的 CE 条件下, 对待测 L- 色氨酸发酵液 进行测定, 测得原发酵液 中 L- 色氨酸 的浓度 71 433 mmo l/ L 。毛细管电泳的图谱如图 5、图 6 所示。
极管阵列检测器; 石英毛细管 Beckman ( 总长 421 8 cm, 有 效长 度 36 cm, 内 径为 75 Lm , 外径 为 375
第一作者: 硕士。 * 安徽省高校自然科学基金资助项目( 2008A 078)
收稿日期: 2008- 04- 08, 改回日期: 2008- 06- 16
图 3 分离电压对保留时间的影响
21 2 标准曲线的制作 精密称取 L- 色氨酸标准品 01 051 06 g, 双蒸水定
容至 250 m L, 即获得 1 mmo l/ L 溶液, 分别精确吸取 1、2、4、6、8 mL 置于 10 mL 容 量瓶 中定 容。获 得 01 1、01 2、01 4、01 6、01 8 mm ol/ L 的标准溶液。按表 1 分别进样测定吸收峰面积, 以吸收峰面积为横坐标,
2 方法与结果
发酵液中色氨酸含量的快速测定
发酵液中色氨酸含量的快速测定3王 健 陈 宁 徐咏全 杨海军 张克旭(天津科技大学食品科学与生物工程学院,天津,300222)摘 要 报道了一种利用分光光度法快速测定发酵液中色氨酸的新方法。
该方法基于在硫酸存在下,色氨酸与对二甲胺基苯甲醛缩合生成蓝色化合物,该产物在600nm 处有吸收峰,对色氨酸测定的范围为0～100μg/mL ,工作曲线方程为C =23.56A ,C 为色氨酸,A 为吸光度。
相关系数为R 2=0.9972。
关键词 色氨酸,对二甲氨基苯甲醛,分光光度法 第一作者:博士研究生。
3天津市科委攻关项目(No.983113711) 收稿时间:2003-04-01 发酵液中L 2色氨酸的测定是发酵法生产色氨酸中不可缺少的步骤,它的定性和定量测定方法有纸层析法、薄层分析、比色法、高效液相色谱法、氨基酸分析仪测定法等[1～4]。
比色法有对二甲胺基苯甲醛比色测定法及荧光测定法等[2～4]。
对二甲胺基苯甲醛是L 2色氨酸的特异性显色剂,在实验室常用此法进行L 2色氨酸的定量分析。
已报道的对二甲胺基苯甲醛比色测定法测定时间较长,文中对该方法进行了改进,在硫酸介质中,色氨酸与对二甲胺基苯甲醛发生缩合反应生成的希夫碱在600nm 处有吸收峰。
通过实验讨论了上述缩合反应的条件、反应时间及发酵液中副产氨基酸对测定的影响。
1 材料与方法1.1 仪 器752紫外分光光度计。
1.2 试 剂色氨酸储备液(1g/L ):准确称取L 2色氨酸(天津德宇生物技术公司)0.1000g (105℃烘1h )于50mL 烧杯中,加入适量蒸馏水溶解,然后移入100mL 容量瓶中,以蒸馏水定容,使用时稀释加入。
对二甲氨基苯甲醛储备液(3g/L ):准确称取对二甲氨基苯甲醛0.3000g ,溶于100mL 1∶1H 2SO 4中,使用时直接取用。
亚硝酸钠溶液(2%):准确称取亚硝酸钠0.200g 于烧杯中,然后移入10mL 容量瓶中,以蒸馏水定容,新鲜配制。
基于甲醛反应分光光度法快速测定鲜奶中L-色氨酸
基于甲醛反应分光光度法快速测定鲜奶中L-色氨酸李静;徐礼生;高贵珍;赵亮;曹稳根;张兴桃【摘要】建立一种基于甲醛反应分光光度法快速测定L-色氨酸的方法.利用L-色氨酸与甲醛在硫酸的介质中反应生成蓝色化合物,该化合物最大吸收峰为455 nm,L-色氨酸的测定范围为0-5 mg/mL,其标准曲线方程为Y=358.81x+0.0955,R2=0.9999,检出限为0.001 mg/mL,回收率为99.3％,其它氨基酸均不干扰对L-色氨酸的测定,该方法与高效液相色谱法测定结果一致,该方法可用于测定鲜奶中L-色氨酸.【期刊名称】《泰山学院学报》【年(卷),期】2017(039)003【总页数】4页(P98-101)【关键词】L-色氨酸;甲醛;分光光度法【作者】李静;徐礼生;高贵珍;赵亮;曹稳根;张兴桃【作者单位】宿州区域发展协同创新中心,安徽宿州,234000;宿州区域发展协同创新中心,安徽宿州,234000;南京大学医药生物技术国家重点实验室,江苏南京,210093;宿州区域发展协同创新中心,安徽宿州,234000;宿州区域发展协同创新中心,安徽宿州,234000;宿州区域发展协同创新中心,安徽宿州,234000;宿州区域发展协同创新中心,安徽宿州,234000【正文语种】中文【中图分类】TQ922L-色氨酸是非神经递质类氨基酸，且都具有生物学活性，它在动植物体内不仅可以转化成为5--HT、褪黑素、尼克酸等生物活性物质，并以此影响血压、痛觉、情绪、睡眠与觉醒及神经内分泌活动，参与代谢调控过程[1]，并且L-色氨酸在医药、食品、饲料等方面也具有广泛的用途.人体中不能自身合成L-色氨酸，为了满足自身需要，需要从外界获取L-色氨酸，而这个来源主要就是食物来源[2].L-色氨酸在人及动物的体内代谢过程发挥着重要的作用，所以L-色氨酸又称为第二必需氨基酸[3].L-色氨酸是一类中性芳香族氨基酸，其中含有一个特征集团为吲哚基，能够产生一些特征性反应.甲醛是一种无色、有强烈刺激性气味的气体.能与水、乙醇和丙酮等有机溶剂按任意比例混溶.甲醛在常温下是气态，通常以水溶液形式出现.甲醛分子中含有醛基，会产生缩聚反应.L-色氨酸的分析方法，目前报道的主要有高效液相色谱法、毛细管电泳法、伏安法、化学发光法、极谱法和氨基酸分析仪测定等[4-13].但是这些方法大都灵敏度不高，有的方法样品处理较复杂.本文利用分光光度法对L-色氨酸与甲醛在硫酸的介质中，生成有颜色化合物，向化合物中滴加一滴亚硝酸钠，然后在80℃水浴加热并且冷却后，分别对此进行吸光值的测定，该法可实现准确、简便并且快速地测定牛奶中L-色氨酸.1.1 试剂和仪器L-色氨酸(质量分数99%，阿拉丁上海剂试公司)；硫酸；亚硝酸钠；甲醛(质量分数为36%)等试剂均为优级纯，鲜奶来自与市售蒙牛集团产品.UV-3310分光光度计(日本日立公司)；HH22恒温水浴锅(常州国华电器有限公司).1.2 实验方法分别取浓硫酸与水50ml放入250ml烧杯中，(1：1 V/V)进行混合，再向其中加入3ml甲醛，并使其充分混合均匀，配成的混合溶液待用.再将L-色氨酸配置浓度为1%的溶液，取1ml的L-色氨酸溶液加入一支试管中，另取之前配好的硫酸与甲醛混合溶液9ml，在试管中摇匀.同时以10ml的硫酸和甲醛的混合溶液作为空白对照.将反应过后的溶液以及空白对照同时放入80℃的水浴锅中加热反应2min，取出，分别向各管中加入一滴1%的亚硝酸钠溶液，混匀后继续在80℃的水浴锅中加热3min.取出，放入冷水中，使其冷却至室温.之后利用分光光度法进行快速测定.将L-色氨酸反应液和空白对照用1cm 的比色皿在波长300～700nm处使用分光光度计进行快速测定其吸光值，检测出反应后的有色产物的最大吸收峰为455nm，每个样品重复测定3次.2.1 检测波长的确定配置L-色氨酸的浓度分别为0.1 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、0.75mg/mL，与甲醛在硫酸的介质下反应后，在80℃水浴中加热2分钟，滴加1滴1%的亚硝酸钠溶液，在相同的温度下继续加热3分钟，然后冷却至室温，利用分光光度计测定不同波长下测定，检测结果如图1，由图1可知，L-色氨酸在波长455nm处有最大吸收值.2.2 试剂用量的确定改变甲醛溶液的用量, 考虑其对体系吸光度的影响.在100ml硫酸溶液(浓硫酸与水各50ml)中分别加入1ml、2ml、3ml、4ml、5ml的甲醛溶液,充分混合，接着与浓度为0.1%的色氨酸进行反应，经80℃水浴2分钟，向每个试管中各滴加一滴1%的亚硝酸钠溶液，继续在80℃水浴中加热3分钟，分别测定其吸光值.测出的吸光值如图2.由图2可知，在甲醛溶液用量为3mL时, 体系的吸光度达到最大.因此,硫酸溶液的用量为100ml的时候，本试验选择甲醛溶液用量为3mL.2.3 反应时间和温度的影响通常反应时间和温度对化学反应速率的影响很大，考察本实验反应在水浴中的加热时间及加热时的温度对吸光度的影响.取1ml的0.1%的L-色氨酸与硫酸与甲醛的混合液9ml混合均匀，共10个试管，从1-10进行编号.向每支试管中滴加一滴质量浓度为1%的亚硝酸钠溶液，取1-5号试管放入80℃水浴锅中进行加热，设定1分钟、3分钟、5分钟、7分钟、9分钟，1号管在1分钟后取出，并在455nm 处测定其吸光值，其他管操作相同，2号管3分钟后取出，3号管5分钟后取出，4号管7分钟后取出，5号管9分钟后取出.取6-10号试管分别放入20℃、40℃、60℃、80℃、100℃水浴锅中，反应5分钟，并在455nm处测定其吸光值.每个样品重复测定三次，取平均值，测出最佳水浴反应时间为5分钟，80℃是最佳水浴温度.2.4 标准曲线的绘制配置不同L-色氨酸的浓度为0.01 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL、4 mg/mL和5 mg/mL，使其分别与甲醛在硫酸的介质下反应，在80℃水浴中加热2分钟，滴加1滴亚硝酸钠溶液，在相同的温度下继续加热3分钟，然后冷却至室温，测得L-色氨酸与吸光度呈现良好的线性关系.标准曲线方程为：Y=358.81x+0.0955；R2=0.9999，L-色氨酸的检出限为0.001 mg/mL，L-色氨酸回收率为99.3%.2.5 其它氨基酸的影响将L-半胱氨酸、L-络氨酸、L-丝氨酸等其他氨基酸分别加入到L-色氨酸溶液中，含量以5:1的比例进行添加，测得的结果如下表1所示，由表中的结果得知在溶液中其他氨基酸的含量远大于L-色氨酸的含量时，不干扰其测定结果.2.6 鲜奶L-色氨酸的测定采用上述方法进行测定鲜奶中L-色氨酸含量，同时采用高效液相色谱法进行测定比较，先用碱溶液对鲜奶进行水解，得到游离L-色氨酸，测定结果如表2，由表2可知，分光光度法和高效液相色谱法测定结果一致，高效液相色谱法测定时间长，并且仪器昂贵，而分光光度法测定L-色氨酸方便，易推广.利用L-色氨酸与甲醛在硫酸的介质中反应生成蓝色化合物，该化合物最大吸收峰为455nm，L-色氨酸的测定范围为0-5mg/mL,其标准曲线方程为Y=358.81x+0.0955，R2=0.9999，检出限为0.001 mg/ml，回收率为99.3%，其它氨基酸均不干扰对L-色氨酸的测定，该方法与高效液相色谱法测定结果一致，可用于测定鲜奶中L-色氨酸.【相关文献】[1]孙菡丽, 张颖华, 翁尊尧, 等. 肿瘤化学治疗XXXVI DL-N二氯乙酰5-硝基-色氨酸及其有关化合物的合成[J].药学学报, 1979,14(4):253-256.[2]张玉彬,王旻,吴梧桐,等.L-色氨酸酶基因工程菌的构建[J].中国药科大学学报,1996,27(10):624-627.[3]赵春光,程立坤,徐庆阳,等.微生物法生产L-色氨酸的研究进展[J].发酵科技通讯,2008,37(4):34-36.[4]任娇艳,赵谋明,王金水,等.分光光度法测定蛋白酶解物中的色氨酸[J].食品科学,2006,27(12):591-593.[5]王建清,张玉.氨基酸分析仪测定鱼粉中水解色氨酸的试验[J].畜牧与饲料科学,2007,10(6):37-38.[6]胡宝祥,杨木,刘文涵,等.原子吸收光谱间接测定色氨酸的研究[J].光谱实验室,2006,23(6):1308-1310.[7]杨红兵,梁兰秋,鲁立良.流动注射电化学发光法测定色氨酸[J].石河子大学学报(自然科学版),2005,23(6):674-675.[8]李春香,令玉林,邓克勤.电化学还原法的氧化石墨修饰电极检测L-色氨酸[J].分析科学学报,2014,29(2):231-234.[9]张韶虹,史伯安,郗娟.化学发光法同时测定色氨酸和半胱氨酸的研究[J].分析试验室,2007,26(7):5-8.[10]王晓莹,魏永锋,马冬梅,等.线扫伏安法同时测定5-羟基色氨酸和色氨酸[J].化学通报,2007,26(6):459-462.[11]崔竹梅,顾霞,黄有如,等.荧光法测定南瓜子萌芽期色氨酸含量的变化[J].种子,2009,11(28):62-64.[12]徐澜,安伟.紫外分光光度法同时测定色氨酸和酪氨酸[J].光谱实验室,2011,28(5):2321-2323.[13]陶玉贵,王强,李鹤飞,等.毛细管电泳法测定发酵液中L-色氨酸的含量[J].食品与发酵工业,2008,34(9):140-142.。
65、色氨酸检验规程
20℃下对钠光谱
D
线的比旋光度
[
α
]
20 D
，按下式计算：
100×α
[α] 20 D
或
[α] 25 D
=
L×c
式中： D ——旋光仪光源钠光的 D 线波长； α——旋光仪测定的偏转角度数； L ——旋光管长度，单位为分米（dm）； c ——溶液浓度（100mL 溶液中所含物质的克数）。 2.3.5 允许差 同一试样两次测定，绝对值之差不得超过 0.02%。 2.4 干燥失重检验 2.4.1 检验原理 在常压下，将试样置于 103±2 度烘箱中干燥 4h，计算失去的质量。 2.4.2 器材 2.4.2.1 电子天平：精度±0.0001g； 2.4.2.2 称量瓶：玻璃制成，带盖，表面积能使样品铺开约 0.3g/cm2； 2.4.2.3 电热恒温干燥箱：温度可控制在 103℃±2℃； 2.4.2.4 干燥器：具有干燥剂。 2.4.3 操作 称取试样 5g（精确至 0.0001g），平铺于已恒重的称量瓶内，厚度不超过 2mm， 如果样品是晶体，快速粉碎至 2mm 的大小，敞开置于干燥箱内，瓶盖立于旁 边。在 105℃条件下，恒温干燥 4h，结束后盖盖移出，置于干燥器内冷却， 称重，干燥温度波动范围在 2℃之内。 2.4.4 计算
x=
m × 1000
204 . 2 × (V − V 0 )
式中：
m——邻苯二甲酸氢钾质量(g )；
V——滴定时消耗高氯酸滴定液体积数(mL)；
V0——空白试验时消耗高氯酸滴定液体积数(mL)；
204.2——1mol 高氯酸滴定液相当基准邻苯二甲酸氢钾质量（g/mol）。
2.2.3 器材
2.2.3.1 自动电位滴定仪；
平面偏振光通过含有某些光学活性的化合物液体或溶液（即旋光性物质）时，
应用荧光相关光谱测定L-色氨酸的浓度
应用荧光相关光谱测定L-色氨酸的浓度顾颂;朱焯炜;马超群;陈国庆【摘要】应用FLS920P型荧光光谱仪对L-色氨酸溶液进行三维荧光光谱检测,从中发现:L-色氨酸的特征荧光峰位于270/350 nm.设定发射波长为350 nm,测量激发谱.由测量结果发现在250～260 nm区间,谱线斜率较大、线性度好.因此选取250,255和260 nm三个激发波长,在每个激发波长下分别测量相应的荧光发射谱.基于三条不同的荧光发射谱,构建以激发波长为外扰变量的自相关光谱;而以浓度为外扰变量的自相关光谱,是以超纯水在不同激发波长的平均谱作为参考光谱,通过参考光谱与样本平均谱的相关计算得到.在此基础上,将相关光谱数据分别与偏最小二乘回归(PLSR)和径向基神经网络(RBFNN)相结合,建立溶液中L-色氨酸含量的预测模型,研究结果表明:采用浓度为外扰变量构造的荧光相关光谱信噪比较高,建模的预测效果要好;而在外扰变量相同时,基于径向基神经网络建立的预测模型比基于偏最小二乘回归建立的预测模型对溶液中L-色氨酸浓度的预测结果更为准确.其中,以浓度为外扰变量时的径向基神经网络预测模型准确度最高,该模型的预测相关系数为99.91％,预测均方根误差为0.033μg·m L-1.研究结果表明,使用该方法能够对溶液中的物质含量进行准确测定,可为食品安全监管提供帮助.【期刊名称】《光谱学与光谱分析》【年(卷),期】2018(038)008【总页数】5页(P2451-2455)【关键词】L-色氨酸;荧光相关光谱;偏最小二乘回归;径向基神经网络【作者】顾颂;朱焯炜;马超群;陈国庆【作者单位】江南大学理学院 ,江苏无锡 214000;江苏省轻工光电工程技术研究中心 ,江苏无锡 214000;江南大学理学院 ,江苏无锡 214000;江苏省轻工光电工程技术研究中心 ,江苏无锡 214000;江南大学理学院 ,江苏无锡 214000;江苏省轻工光电工程技术研究中心 ,江苏无锡 214000;江南大学理学院 ,江苏无锡 214000;江苏省轻工光电工程技术研究中心 ,江苏无锡 214000【正文语种】中文【中图分类】O657.3引言色氨酸是维持人体生命活动所必需的一种氨基酸。
发酵液中色氨酸含量高通量快速测定
发酵液中色氨酸含量高通量快速测定
于金龙;郭长江;黄英武;徐琪寿
【期刊名称】《氨基酸和生物资源》
【年(卷),期】2008(30)1
【摘要】为了高通量筛选色氨酸工程菌，利用色氨酸与MAA在酸性条件下产生荧光物质（激发波长253nm，发射波长450nm），荧光强度与色氨酸含量在一定范围内成正比的原理，建立了96孔微孔板中高通量测定发酵液色氨酸含量的方法。
反应液80℃反应15min后，测量荧光强度。
线性范围为1mg·L^-1～
100mg·L^-1，为大规模筛选色氨酸基因工程菌打下了基础。
【总页数】3页(P70-71)
【关键词】色氨酸;高通量;荧光测定
【作者】于金龙;郭长江;黄英武;徐琪寿
【作者单位】军事医学科学院放射与辐射医学研究所;军事医学科学院卫生与环境医学研究所;解放军306医院中心实验室
【正文语种】中文
【中图分类】TQ920.1
【相关文献】
1.发酵液中色氨酸含量的快速测定 [J], 王健;陈宁;徐咏全;杨海军;张克旭
2.用醋酸铁法测定发酵液中色氨酸的含量 [J], 刘翠玲;柏莉欣;卓文海;周晶
3.HPLC快速测定发酵液中L-色氨酸 [J], 程立坤;徐庆阳;谢希贤;陈宁
4.高效液相色谱法测定发酵液中色氨酸和酪氨酸含量的研究 [J], 纪传侠
5.发酵液中色氨酸含量的快速测定 [J], 王健
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1L--色氨酸含量的测定
1.1实验仪器与试剂
色氨酸样品，甲醇，STI501液相色谱仪梯度系统，UV501紫外检测器，7725I手动进样阀，N2000色谱工作站，0.03%KH2PO4溶液
1.2HPLC色谱分析条件
流动相为0.03%KH2PO4溶液(A)-甲醇(B)，线性梯度淋洗，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长276nm。
流动相时间(t/min)
5101520
A(%)80908070
B(%)20102030
1.3标准溶液的配制
精密称取色氨酸标准标准品50mg，置100ml容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。
1.4标准直线的制作
精密称取色氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg的溶液，注入液相色谱仪，以色氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。
1.5发酵液中样品中色氨酸含量的测定
取发酵液，稀释配制成约500μg/ml的溶液，摇匀，过滤，取25μl进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
2L-精氨酸含量的测定
2.1实验仪器与试剂
L-精氨酸标准样品，乙腈，STI501液相色谱仪梯度系统，UV501紫外检测器，7725I 手动进样阀，N2000色谱工作站，磷酸二氢铵。
PH计，磷酸，
2.2HPLC色谱分析条件
流动相:以磷酸二氢铵溶液(称取磷酸二氢铵1.15g,加水800m溶解后,用磷酸调节pH值至 2.0±0.1,加水稀释至1000ml)-乙腈为流动相，线性梯度淋洗;柱温为30℃检测波长为206nm；进样量：25μl。
2.3标准直线的制作
精密称取精氨酸标准标准品50mg，置100ml容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。
精密称取精氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml中含精氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg的溶液，注入液相色谱仪，以精氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。
2.4发酵液中样品中精氨酸含量的测定
取发酵液，稀释配制成约500μg/ml的溶液，摇匀，过滤，取25μl进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
3L-甘氨酸含量的测定
3.1实验仪器和试剂
乙酸铵溶液；乙腈；L-甘氨酸标准样品；STI501液相色谱仪梯度系统，UV501紫外检测器，7725I手动进样阀，N2000色谱工作站。
3.2ＨＰＬＣ色谱分析条件
流动相:A为0.02%mol/L乙酸铵溶液(PH=6.5):B为乙腈，线性梯度淋洗；流速:110mL/min；柱温:30℃；进样量:２0μL。
梯度洗脱表3
流动相时间(t/min)
102030405060
A(%)806040406080
B(%)204060604020
3.3标准直线的制作
方法同2.2节
3.4发酵液中样品中甘氨酸含量的测定
方法同2.5节
4L-甲硫氨酸含量的测定
4.1实验仪器和试剂
L-甲硫氨酸标准样品；甲醇；醋酸钠；STI501液相色谱仪梯度系统，UV501紫外检测器，7725I手动进样阀，N2000色谱工作站。
4.2HPLC色谱分析条件
流动相:A为甲醇,B为50mmol/L的醋酸钠缓冲溶液;流速1.0mL/min;梯度洗脱见表1，测定波长为262nm，柱温为30℃。
梯度洗脱表4
流动相时间(t/min)
102030405060
A(%)30508085100100
B(%)7050201500
4.3标准直线的制作
方法同2.2节
4.4发酵液中样品中甲硫氨酸含量的测定
方法同2.5节
5回收率实验
称取甘氨酸标准液50μg/ml分别稀释0、1、2、4、6、8、10倍，每份取1ml，按标准样品处理方法，过滤，测定标准样品中的甘氨酸的含量，计算回收率。