组织-免疫荧光染色protocol

组织免疫荧光步骤:

1）取出切片，用0.01 M PBS冲洗5min x 3次；

2）滴加10%正常山羊血清37C封闭45 min;

3）吸去多余液体，加入抗TSHR的一抗（1:100）,放入湿盒中，37C 孵育1h后置于4 C冰箱中过夜（保持在湿盒中）；

4）0.01 M PBS冲洗5min x 3 次；

（至下一步开始要适度避光操作，防荧光淬灭！）

5）在黑暗条件下加入山羊抗兔IgG-FITC （1: 200）, 37C温育45 min; 6）在黑暗条件下吸弃二抗（注：不再冲洗），加入DAPI染液（2.5⑷/ml）,室温作用20 min;

7）在黑暗条件下0.01M PBS冲洗5min x 6次；

8）在黑暗条件下防荧光淬灭剂圭寸片，荧光显微镜下观察，用合适波段激发，照相保存实验结果。

核实好下边的问题你就可以操作了：

1、准备0.01 M PBS 500 ml，冲洗时动作既要轻柔防脱片，又要保证冲洗

彻底；

2、抗TSHR的一抗用1: 100,用抗体稀释液稀释；

3、实验室有没有山羊抗兔IgG-FITC，使用浓度是1: 200；

4、DAPI染液（2.5卩g/m）实验室有吗？

5、防荧光淬灭剂封片实验室有吗？