电镜技术
形态学研究中的扫描电镜技术
形态学研究中的扫描电镜技术形态学是生物学的一个重要分支。
它研究生物体的形态结构,包括细胞、组织、器官、生物体等。
形态学的研究方法主要包括显微技术、电镜技术等。
其中,扫描电镜技术被广泛应用于生物形态学的研究中。
一、扫描电镜技术的概述扫描电镜技术是一种高分辨率的电子显微镜技术,它可以在非真空下对样品进行观察。
扫描电镜将电子束定向向样品表面扫描,然后通过对扫描电子的反射、散射和吸收来诱发样品表面的二次电子发射。
这些二次电子被探测器捕获并转化为图像。
扫描电镜技术可以提供高分辨率和三维图像,同时不需要对样品进行切片和染色。
因此,扫描电镜技术被广泛应用于生物学、材料科学、化学等领域的研究中。
二、扫描电镜技术在生物形态学研究中的应用1. 细胞结构研究扫描电镜技术可以用于研究细胞表面的形态结构,以及各种微细结构的形态变化。
例如,用扫描电镜观察红细胞可以看到其表面的微细绒毛和凹陷。
2. 组织学研究扫描电镜技术可以帮助研究活体组织、细胞和器官的形态结构。
解剖学家和生物学家可以使用扫描电镜技术来描绘人体各个组织和细胞的形态,制作出许多精美的三维影像。
扫描电镜也可以用于观察细胞的超微结构,例如细胞核、线粒体等。
3. 功能性研究扫描电镜技术可以用于研究生物体内的神经和感觉器官等功能性结构。
例如,使用扫描电镜可以观察蛇的毒牙和水母的刺细胞等功能性结构。
4. 疾病研究扫描电镜技术可以用于研究疾病的发生、发展和治疗。
例如,使用扫描电镜可以观察癌细胞的表面形态和结构变化。
5. 物种分类研究扫描电镜技术可以帮助研究不同物种的形态结构差异,从而推断它们之间的亲缘关系。
例如,使用扫描电镜可以观察昆虫体表的微结构和毛发,推断它们的物种分类。
三、扫描电镜技术应用的局限性1. 样品制备的困难扫描电镜技术需要对样品进行制备,包括表面覆膜、清洗、干燥等。
制备样品的过程需要精密的仪器和操作,并对样品进行高度的保护,以保证扫描电镜观察到的是样品的真实表面形态。
免疫电镜技术步骤
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免疫电镜技术基本原理
免疫电镜技术基本原理
免疫电镜技术是一种结合了免疫学和电镜学的高级技术,它可以用来检测细胞和组织中的蛋白质、抗原和抗体等分子。
免疫电镜技术的基本原理是利用抗体与抗原的特异性结合来标记细胞或组织中的分子,然后通过电镜观察标记物的位置和形态。
免疫电镜技术的步骤包括样品制备、抗体标记和电镜观察。
首先,需要将样品制备成超薄切片,通常使用冷冻切片技术来保持样品的原始结构和形态。
然后,将抗体与标记物结合,通常使用金粒子或荧光染料等标记物来标记抗体。
标记后的抗体可以与样品中的抗原结合,形成抗原-抗体复合物。
最后,使用电镜观察样品中的标记物,可以通过电镜的高分辨率来观察标记物的位置和形态。
免疫电镜技术的优点是可以在细胞和组织水平上观察分子的位置和形态,可以提供高分辨率的图像,可以检测低浓度的分子,可以检测细胞和组织中的多种分子。
但是,免疫电镜技术也存在一些缺点,如样品制备复杂、标记物选择有限、标记效率低等。
免疫电镜技术是一种重要的生物学研究技术,它可以用来研究细胞和组织中的分子,可以提供高分辨率的图像,可以帮助我们更好地理解生物学现象。
4.1催化剂表征技术-电镜技术
4.1 电镜技术 4.2 多晶X射线衍射 4.3 X射线 光电子谱(XPS) 4.4 全自动比表面及孔隙度分析仪 4.5 红外吸附 4.6 热分析技术 4.7 程序升温分析技术 4.8 核磁共振技术 4.9 原位技术 4.10 激光拉曼技术
前言
TEM的形式
透射电子显微镜(简称透射电镜,TEM),可以以几种 不同的形式出现,如: 高分辨电镜(HRTEM) 透射扫描电镜(STEM) 分析型电镜(AEM)等等。 入射电子束(照明束)也有两种主要形式: 平行束:透射电镜成像及衍射 会聚束:扫描透射电镜成像、微分析及微衍射。
TEM原理
透射电子显微镜是以波长很短的电子束做照明源,用电 磁透镜聚焦成像的一种具有高分辨本领,高放大倍数的电 子光学仪器。 以高能电子(50-200 KeV)穿透样品,根据样品不同 位置的电子透过强度不同或电子透过晶体样品的衍射方向 不同,经过后面的电磁透镜的放大后,在荧光屏上显示出 图象;透射电镜在加速电压Ep=100 KeV下,电子的波长为 3.7 pm。
为此,1986年,宾尼博士和罗雷尔与发明电子显
微镜的鲁斯卡获诺贝尔物理学奖。
一、扫描隧道显微镜的工作原理
扫描隧道显微镜 (Scanning Tunneling Microscope)的工 作原理是基于量子力学中的隧道效应。 一般认为,金属中处于费米能级(EF)上的自由电子,若 想逐出金属表面,则必须获得足以克服金属表面逸出功()的 能量。 但量子力学理论认为,由于金属中的自由电子具有波动 性,电子波()向表面传播,在遇到边界时,一部分被反射(反 射波R),而另一部分则可透过边界(透射波T),从而形成金 属表面上的电子云。 当金属1与金属2靠得很近(通常小于1 nm)时,两金属表面 的电子云将相互渗透(两金属透射波T1与T2相互重叠)。此即 称之为电子隧道效应。
生物冷冻电镜的技术及应用
生物冷冻电镜的技术及应用随着生物学的发展,现代科学对生物结构和功能的研究已经到达了一个新的高度。
其中,冷冻电镜成为了生物结构研究中不可或缺的重要技术手段。
与传统的电镜技术不同,冷冻电镜技术可以使生物样品在冷冻状态下被固定,不失真和干扰,从而更为准确地观察和研究生物体内各种微观结构,尤其是高分子复合物的结构与互作。
一、冷冻电镜技术的基本原理冷冻电镜技术是通过将生物样品在快速冷冻的状态下迅速固定,避免样品在固化过程中产生化学反应,从而保持了样品在自然状态下的形态结构。
通常,样品的冷冻速度可达到10000-60000℃/s,减少了溶剂结晶对样品的损伤。
电子显微镜可以将冷冻过程的各个环节迅速观察和记录下来,尤其是高分子复合物的高分辨率成像,更好地反映了样品的自然结构。
二、冷冻电镜技术的发展历程冷冻电镜技术自1950年代开始,随着电子显微技术的发展不断完善和改进,鲜明的发展成果已经在现代生物学研究中不可忽视。
1950年代,人们通过旋转模型来模拟生物大分子的三维结构。
60年代初期,Patrick Boyer首次使用冷冻电镜研究鱼的肌肉组织,成功地观察到鱼肌纤维,开创了冷冻电镜领域新的历史篇章。
随后,人们开始使用冷冻技术尝试研究生物样品,1967年,探针技术的出现被认为是冷冻电镜技术具有突破性进展的标志。
1980年代,高分辨率微镜的发明,使得冷冻电镜技术的分辨率被提高到0.2奈米级别。
随着技术的发展,冷冻电镜技术已成为人们研究微生物学、生物医学和生物工程学等领域不可或缺的技术之一。
三、冷冻电镜技术的应用冷冻电镜技术广泛应用于从分子结构到大分子复合物的细胞研究,已经成为各种生物学领域的重要技术手段。
当下,主要的应用领域包括:1、细胞结构研究。
冷冻电镜技术是观察细胞组织和细胞配件的理想手段,可以在非常高的空间解析度下获取细胞超结构的实时图像,增强细胞结构研究的深度和广度。
2、蛋白质与生物大分子的研究。
冷冻电镜技术可直观地观察高级生物大分子的结构,从而使生物高分子结构和功能的研究更加精确和深入。
电镜技术及超薄切片技术(研究生)医学
• 电镜技术简介 • 超薄切片技术简介 • 电镜技术与超薄切片技术在医学中的
应用 • 电镜技术与超薄切片技术的发展趋势
与展望 • 实验操作与注意事项
01
电镜技术简介
电镜技术的发展历程
电子显微镜的发明
1926年由德国科学家Max Knoll和 Ernst Ruska发明,标志着电镜技术的 诞生。
安全防护措施
确保实验室通风良好,减少有害气体和粉尘的暴露;定期检查和维护仪器设备,确保其正常运行;对于有毒有害 的化学品和废弃物,应按照相关规定进行妥善处理。
THANKS
感谢观看
电镜技术的初步发展
现代电镜技术的进步
20世纪80年代以后,电镜技术不断更 新换代,分辨率和成像质量得到显著 提高。
20世纪30年代至50年代,电镜技术逐 渐应用于医学、生物学等领域。
电镜技术的原理及应用
原理
电镜技术利用电子代替传统显微镜的光源,通过电子束与样品相互作用产生图 像,再通过显像管显示出来。
药物作用机制探讨
通过观察药物对细胞器、细胞膜等结 构的影响,探讨药物的作用机制,为 临床用药提供依据。
04
电镜技术与超薄切片技术的发展趋势
与展望
新技术新方法的探索与应用
冷冻电镜技术
随着冷冻电镜技术的发展,可以 直接观察生物大分子的结构和动 态,为生物医学研究提供了新的
视角。
电子断层扫描技术
通过多角度观察样品,获取三维重 构图像,提高了对复杂样品结构的 认识。
根据样品类型和观察要求选择合 适的切片机和切片刀。
切片操作
将样品固定在切片机上,调整切 片厚度,进行切片。
切片观察
将切片转移到电镜载网上,进行 观察和拍照。
电镜的图像处理技术
电镜的图像处理技术电子显微镜(简称电镜)是一种高科技装置,可以高精度地观察物质微观结构,它的出现推动了纳米科学、纳米技术的不断发展。
在电镜取得的图像中,图像处理技术可以为我们提供更多的细节信息,让人类更好地认识和利用物质世界,将在此阐述一些常用的图像处理技术。
1、对比度调整调整对比度可以使图像更加清晰,让目标物体的特征更加明显。
电镜的图像通常比较暗淡,如果不进行对比度调整,会很难看清物体的表面结构和内部形态。
为此,我们需要使用图像处理软件,在里面打开电镜图像,通过调节对比度和亮度等参数,使得图像更加明亮、细节更加清晰。
2、去噪电镜图像通常包含噪声,在处理图像前,我们需要把噪声移除,这可以通过各种滤波算法来实现。
常用的去噪算法有中值滤波、高斯滤波、维纳滤波等。
中值滤波将每个像素的值都改为周围像素的中值,具有去除噪声的效果;高斯滤波是一种基于像素点附近值的加权平均值的算法,可以消除高频噪声;维纳滤波可以对加性噪声进行去噪。
3、边缘检测边缘检测是图像处理中的一种常见操作,它可以帮助我们寻找图像中各个物体的边缘。
在电镜图像处理中,边缘检测可以帮助我们更加清晰地观察物体的表面形态和内部结构。
常用的边缘检测算法有Canny算法、Sobel算法、Laplacian算法等。
这些算法都可以在图像中寻找边缘,并将其以线条的形式标记出来,方便我们分析和研究。
4、三维可视化在电镜实验中,我们经常需要观察物体的三维形态,这可以通过三维可视化技术来实现。
在图像处理软件中,我们可以将电镜图像进行三维建模,然后通过旋转、拉伸等操作,让物体的三维形态更加清晰地呈现出来。
此外,还可以使用虚拟现实技术来进行三维可视化,让用户身临其境地观察物体的微观结构。
5、人工智能技术辅助分析随着人工智能技术的不断发展,电镜图像处理也不再局限于传统的方法,人工智能技术在其中扮演越来越重要的角色。
比如,我们可以使用卷积神经网络等深度学习技术来自动识别物体的形态、结构等信息,帮助我们更快速地进行图像分析和处理。
电镜
1、电子显微镜(electron microscope), 简称电镜, 是使用电子来展示物件的内部或表面结构的显微镜。
是显微镜的一种!但电镜是大型精密仪器,其原理、结构与光镜显著不同。
2、原理: 高速运动的电子在电场或磁场的作用下,会发生折射,并且能被聚焦,能聚焦即能成像。
高速运行的电子的波长比可见光的波长短(波粒二象性), 电子显微镜的分辨率(约0.1纳米)远高于光学显微镜的分辨率(约200纳米, 光学显微镜的分辨率受其使用波长的限制)。
3、电镜的种类:按目的分:透射电镜、扫描电镜 分析装置:X-rays 波谱仪、能谱仪;按用途分:生物医学用电子显微镜、非生物医学用电子显微镜; 按原理分:场发射、非场发射; 分辨率:显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距。
其计算公式是σ=λ/NA 式中σ为最小分辨距离;λ为光线的波长;NA 为物镜的数值孔径。
可见物镜的分辨率是由物镜的NA 值与照明光源的波长两个因素决定。
NA 值越大,照明光线波长越短,则σ值越小,分辨率就越高。
要提高分辨率,即减小σ值,可采取以下措施:(1) 降低波长λ值,使用短波长光源。
(2) 增大介质n 值以提高NA 值(NA=nsinu/2)。
(3) 增大孔径角u 值以提高NA 值。
(4)增加明暗反差。
放大倍数到一定程度时就图像模糊,而电子显微镜用电子做光源,可以清晰。
5、常见电镜技术 1、超薄切片技术2、负染色技术3、冰冻复型技术4、冷冻超薄切片技术5、电镜酶细胞化学技术6、免疫电子显微镜技术7、电镜放射自显影技术8、核酸大分子的电镜样品制备技术9、SEM 电镜样品制备技术10、电子探针;11、电镜原位杂交技术。
7、EM 在医学中的应用 ①在基础医学方面:a.观察细胞的亚微结构:线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体等细胞器的接构及病理变化。
b.观察药物的代谢机理及对亚微结构的影响。
c. 研究病毒的作用机理及作用靶。
d.探讨分子病理学的发生机制。
电镜技术在生物医学研究中的应用
电镜技术在生物医学研究中的应用电镜技术是现代生物学研究中不可或缺的一项技术,它通过观察细胞内结构和超微结构的变化来理解生命现象的基本机制。
本文将介绍电镜技术在生物医学研究中的应用。
一、扫描电镜在生物医学研究中的应用扫描电镜(Scanning Electron Microscope,简称SEM)是通过扫描样品表面来获取确定位点的高分辨率图像的技术。
它具有三维图像清晰、分辨率高、表面形貌细节丰富、观察样品不需切片等优点。
在生物医学研究中,SEM应用广泛。
例如,可以使用SEM来研究骨骼生物学。
骨骼是由组织和细胞构成的,并且是活生生的组织。
SEM可以对骨骼细胞、骨基质和矿物类成分进行观察,从细胞水平、分子水平对骨骼形成的机制进行研究。
二、透射电镜在生物医学研究中的应用透射电镜(Transmission Electron Microscope,简称TEM)是一种利用高能电子束穿透样品,探测样品透过电子束所发生变化的技术。
TEM可以提供具有高分辨率的阳极空间电子图像,可用于精细细胞解剖学和生物化学的微观结构研究。
在生物医学研究中,TEM也有广泛的应用。
例如,可以使用TEM来研究癌细胞。
癌细胞与正常细胞明显不同,TEM可以将癌细胞的超微结构与正常细胞进行比对,观察细胞膜、线粒体、内质网、核糖体等结构的形态和数量的变化,并且可以了解肿瘤的组成成分,从而为癌症治疗提供有力的依据。
三、扫描透射电镜在生物医学研究中的应用扫描透射电镜(Scanning Transmission Electron Microscope,简称STEM)集扫描电镜与透射电镜的优势为一体,具有较低探针尺寸,高分辨率,成像清晰的特点。
在生物医学研究中,STEM可以用于研究神经元。
神经元是人和动物神经系统的基本单位,STEM可以探测出神经元内蛋白质的分布和数量,对神经元的结构、功能、信号传递机制等进行深入研究。
STEM也可以用于人体器官结构的研究。
电镜技术在肝脏疾病诊断中的作用及注意事项
生化指标检测
生化指标检测是肝脏疾病诊断的常用 方法之一,通过检测血液中各种生化 指标的水平,可以了解肝脏的功能和 损伤程度。
电镜技术可以提供更深入的病理组织 学信息,与生化指标检测相结合,可 以更全面地评估肝脏疾病的病情和预 后。
影像学检查
影像学检查是肝脏疾病诊断的重要手 段之一,通过超声、CT、MRI等技术 可以观察肝脏的形态和血流情况,对 于判断肝脏疾病的类型和严重程度具 有重要意义。
VS
电镜技术与影像学检查相互补充,可 以更全面地了解肝脏疾病的病理生理 变化和发病机制。
05
电镜技术的未来展望
电镜技术的改进与创新
分辨率提升
通过改进透镜设计和使用新材料, 提高电镜的分辨率,使其能够更 清晰地观察细胞和组织的超微结 构。
自动化与智能化
引入人工智能和机器学习技术,实 现电镜图像的自动分析和识别,提 高诊断的准确性和效率。
它能够提供比光学显微镜更高分辨率的图像,从而更准确地观察 细胞超微结构。
电镜技术的发展历程
1931年,德国科学家Max Knoll和Ernst Ruska发明 了第一台电子显微镜。
1949年,第一台商用电子显微镜问世,并逐渐应用 于医学领域。
1960年代,随着透射电镜和扫描电镜的发明,电镜 技术得到了进一步发展和完善。
脂肪肝的诊断
脂肪肝是由于脂肪代谢异常导致的肝脏脂肪堆积,电镜技术 可以观察肝细胞内的脂肪滴大小、形态等超微结构,有助于 脂肪肝的诊断。
电镜技术可以观察肝细胞内的线粒体、内质网等细胞器的变 化,有助于了解脂肪肝的发病机制。
其他肝脏疾病的诊断
电镜技术还可以应用于其他肝脏疾病的诊断,如肝炎、肝 硬化、肝衰竭等。
样本标记
免疫标记电镜技术
免疫标记电镜技术
(1)原理:是利用电镜下可见的示踪标记物标记特异性抗体(或抗原),使之与组织超薄切片中的相应抗原(或抗体)反应,形成不溶
性免疫复合物,用电镜观察可见的标记物,间接证实免疫反应的发生。
(2)常用的免疫标记电镜技术:
①铁蛋白标记免疫电镜技术:抗体与铁蛋白通过低分子量的双功
能试剂结合为一种双分子复合物。
②酶标记免疫电镜技术:是以酶作为抗原抗体反应的标记物,与
相应的酶底物作用,形成一种不溶性的反应产物。
包括酶标记抗体法、非标记抗体酶法和非标记的过氧化物酶-抗过氧化物酶技术(即PAP 法)。
③胶体金标记免疫电镜技术:是利用胶体金在碱性环境中带有负
电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。
当用金标记的抗体
与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需外加染色。
材料科学中的高分辨率电镜技术的发展趋势
材料科学中的高分辨率电镜技术的发展趋势介绍材料科学是一门致力于改善人类生活,推动经济社会发展的学科,它的发展与新材料的研发密不可分。
高分辨率电镜是现代材料科学的重要手段之一,它在探究材料微观结构、物理性质和化学反应机理方面具有不可替代的作用。
随着材料科学的发展,高分辨率电镜技术也在不断演进。
一、历史发展电镜技术的历史可以追溯到20世纪初。
1931年,德国物理学家根尼奥斯发明了电子显微镜。
随后,1951年美国科学家罗素成功研制出第一台电子衍射仪,标志着电子显微镜技术进入了一个新阶段。
1965年,欧洲原子能委员会(Euratom)成立了一个由10个国家组成的协议,以贡献国内的电子显微镜技术和知识。
1983年,日本制造商日立开发了第一台透射电子显微镜的商业模型,此后电镜技术的应用迅速发展起来。
2009年,美国微观结构研究中心的科学家成功地在世界上首次观察到了准晶体的结构。
这一切的发展促进了高分辨率电镜技术的发展。
二、技术原理高分辨率电子显微镜是一种将电子束聚焦在样品表面或内部,通过观察电子束与物质相互作用所产生的信号来获得显微图像的化学分析和结构分析技术。
其强大分析功能可以使人们直观地观察到原子、分子和纳米尺度晶体结构的微观形态、晶体的结构缺陷、材料导电性和光学性能等各种物理性质,从而为材料研究、微观表征和新材料的研发提供了强有力的支撑。
三、未来发展趋势1. 更高的空间分辨率高分辨率电子显微镜的空间分辨率是衡量其性能的重要指标之一,随着技术的不断发展,其空间分辨率可达到纳米甚至是皮米级别,这使电子显微镜可以直接观察到原子运动的过程。
未来高分辨率电子显微镜将快速增加对低维材料的研究,比如石墨烯、碳纳米管和二维材料等,针对这些低维材料的特殊性质,需要研究新的显微技术。
2. 光学与电子加亮技术的创新由于电子束造成的碰撞过程易于损伤样品,因此样品对电子束的敏感性成为了一个必须考虑的问题。
为了提升显微镜的分辨率和增强信噪比,高分辨率电镜需要光学与电子加亮技术的创新。
单粒子冷冻电镜技术
单粒子冷冻电镜技术
单粒子冷冻电镜技术是一种基于透射电子显微镜(TEM)的技术,可以在低温和高真空环境下对生物大分子进行成像,以观察它们的结构和动力学行为。
该技术的主要优势在于可以在接近生物大分子的自然状态下进行观察,避免了因化学固定或冷冻干燥等处理过程而导致的结构变形。
单粒子冷冻电镜技术的基本原理是将生物大分子样品在液氮温度(-196℃)下冷冻,然后将其转移到透射电子显微镜中进行成像。
在透射电子显微镜中,电子束穿过样品,与样品中的原子相互作用,产生二次电子、背散射电子等信号,这些信号被探测器收集并转化为图像。
通过单粒子冷冻电镜技术,科学家们可以获得生物大分子的高分辨率图像,包括原子分辨率和分子分辨率的图像。
这些图像可以提供生物大分子的三维结构信息,包括它们的原子排列、分子构象、蛋白质-蛋白质相互作用等。
此外,单粒子冷冻电镜技术还可以用于研究生物大分子的动力学行为,如分子运动、蛋白质折叠等。
单粒子冷冻电镜技术是一种非常强大的技术,可以提供生物大分子的高分辨率图像和动力学信息,为生命科学和医学研究提供了重要的工具。
免疫电镜技术步骤
免疫电镜技术步骤免疫电镜技术作为一种重要的生物学研究手段,在细胞学、病理学等领域发挥着重要作用。
通过结合免疫学的原理和电镜技术的高分辨率特点,可以实现对生物样本中特定蛋白质的定位和分析。
免疫电镜技术步骤的研究与优化对于提高实验效率、保证结果准确性具有重要意义。
首先,对于样本的制备是进行免疫电镜实验的第一步。
良好的样本制备是确保实验结果准确性的基础。
在免疫电镜实验中,通常需要对细胞、组织等生物样本进行固定和切片处理。
固定的目的是保持样本的形态结构和蛋白质位置,避免其在后续处理过程中发生变化。
常用的固定剂包括乙醛、戊二醛等,选择适合的固定剂可以保证样本的形态结构得到有效保留。
切片处理是指将固定后的样本切割成适合电镜观察的薄片,通常使用超薄切片机进行制备。
在样本制备过程中,需要注意操作规范,避免对样本造成损伤。
其次,抗体的选择与检测试剂的准备是免疫电镜实验中非常重要的环节。
抗体的选择需要考虑到其特异性和亲和力,以确保对目标蛋白的识别和结合。
在实验中,通常会使用一抗和二抗的结合方式,通过不同抗体的配对来实现对目标蛋白的检测。
抗体的制备和标记在实验中也起到关键作用,常见的标记方式包括金粒标记和荧光标记。
通过合适的抗体选择和标记方式,可以实现对目标蛋白的定位和分析。
接着,在免疫电镜实验中,样品的处理和显微观察是实现对目标蛋白定位和分析的关键步骤。
在实验中,通常会对样本进行脱水、透明化和浸渍等处理,以便样本的观察和成像。
脱水的目的是去除样本中的水分,提高电子镜的分辨率;透明化是指将样本透明化,使其更易观察;浸渍是指将样本浸入电子显微镜中以获取高分辨率图像。
通过精心的样品处理和显微观察,可以实现对蛋白质的定位和分析,揭示其在细胞或组织中的分布情况。
最后,在免疫电镜实验中,数据的采集与分析是实验结果验证和解释的关键环节。
通过对显微图像的拍摄和分析,可以获取到目标蛋白的位置和分布情况。
在数据分析过程中,需要对图像进行处理和量化,以便对实验结果进行正确解读。
材料科学中的原位电镜技术
材料科学中的原位电镜技术原位电镜技术是一种在电子显微镜中进行的实时观察材料的方法。
它可以帮助我们更好地了解材料在作用力、温度和环境变化下的行为。
在材料科学领域,原位电镜技术被广泛应用于理解材料的微观机制和结构,进而提高材料的性能和应用。
一、原位电镜技术原位电镜技术是一种通过在电子显微镜中观察材料的实时行为的方法。
它可以允许使用者对材料在不同条件下的行为进行直接观察,例如在受到力、温度和环境变化时。
这项技术是通过支持超高分辨率的显微镜和可以控制样品的实验室设备来实现的。
原位电镜技术通常分为两种类型:透射电子显微镜(TEM)和扫描电子显微镜(SEM)。
TEM原位电镜可以用于研究结构和成分的变化,例如晶体生长和纤维的制备。
而SEM原位电镜通常用于观察表面和界面的变化,例如微观机组件和聚合物的合成。
二、在材料科学中的应用原位电镜技术已被广泛应用于材料科学领域。
这是因为原位电镜技术可以帮助研究者更好地了解材料在不同环境下的行为和性能。
例如,原位电镜技术可以用于分析固体材料的动力学行为。
使用电子显微镜可以观察材料的结构和成分的变化,从而更好地理解化学反应和物理变化的机制。
这可以帮助提高材料的机械和化学性能,并且可以为新材料的发明和开发提供更多的启示。
不仅如此,原位电镜技术还可以被用于研究材料在高温环境下的熔融过程。
例如,对锂离子电池的研究表明,在充电和放电过程中,电池的材料会发生相变。
而使用原位电镜技术可以观察材料在这些相变过程中的结构和成分变化,有助于更好地了解锂离子电池的性能和寿命等问题。
另外,原位电镜技术还可以被用于研究材料的断裂和磨损行为。
例如,在轮胎和飞机材料的研究中,原位电镜技术可以揭示材料如何在受力时产生裂纹、变形和磨损。
这可以帮助设计更好的材料,并且可以为材料在极端环境下的使用提供更多的指导。
三、未来发展前景原位电镜技术已经成为材料科学研究的重要工具。
未来,随着电子显微镜的不断发展,原位电镜技术将变得更加准确、灵活和可控。
电镜技术在细胞学研究中的应用
电镜技术在细胞学研究中的应用随着科学技术的不断发展,关于细胞学的研究也逐渐得到了许多重大的突破。
在这个领域中,电子显微镜(简称电镜)是一种非常重要的工具。
通过电镜技术,可以观察到细胞中微小结构以及细胞内分子的运动情况,为细胞学研究提供了非常重要的信息。
本文将介绍电镜技术在细胞学研究中的应用。
1. 电镜技术基本原理电镜分为透射电镜和扫描电镜两种,透射电镜可以观察细胞内部的微观结构,扫描电镜则主要用于观察细胞表面上的形态和纹理。
他们的基本原理是:透射电镜利用电子束代替光线形成图像,通过控制电子束的速度、大小、方向等参数来形成高分辨率的图像;扫描电镜则通过电子束扫描样本表面生成图像。
在样品制备方面,透射电镜需要非常小的样品厚度,常采用冻切或者切片技术制备样品,扫描电镜的样品比较坚硬,可以通过金属涂层的方式增强样品的导电性,以便于电子束的扫描。
2.细胞内部结构的观察透射电镜是观察细胞内部结构的重要手段。
在细胞学研究中,我们通常能够看到细胞核、粒体、内质网、高尔基体等结构。
在透射电镜下,我们不仅能够看到这些结构的三维形态,还能够观察到它们的内部结构、膜系统等细节。
例如:可以观察到细胞核内的染色质的空间结构,内质网膜上的核糖体、分泌颗粒的形态等等。
通过这些观察,我们可以更好地理解细胞的组成和生命活动。
3. 细胞表面形态的观察扫描电镜则主要用于观察细胞表面的形态和纹理。
在扫描电镜下,我们不仅能够清晰地看到细胞表面的形态、大小、凹凸不平的特点,还可以观察到一些类似纹理和亮点的结构信息。
例如:通过扫描电镜技术,可以观察到红细胞的平均直径,细胞表面的拱起,病毒颗粒的形态特征等等。
这些形态特征的发现都有助于我们对细胞的认识。
4.电镜技术的尺度限制虽然电镜提供了非常高的分辨率,能够让我们更好地观察到细胞的微小结构和形态,但电镜也存在尺度限制的问题。
测试透射电镜的分辨率通常在几百万分之一厘米级别,扫描电镜则在几十万分之一厘米级别,也就是说,对于更小的颗粒,电镜并不能提供更清晰的观察。
透射电镜技术指标
3).Dark field image observation device高角环形暗场探头(HAADF)
33、能谱仪(EDS)系统
34、底插式CCD相机系统
备品备件及耗材
1、备用场发射灯丝1根
2、主动式防震台1套,有以下组成部分:
4).更换样品及电镜底片时,更换样品时间小于15分钟,更换底片时间小于30分钟
5).样品台移动尺寸:X ≥2mm,Y ≥2mm,Z ≥ ±0.1mm
6).样品台倾斜角度:X ≥ ±25°,Y≥ ±25°
7).样品台移动步长精度:优于3nm/步
8).取出角:≥ 20°
14、真空系统
1).离子泵、油扩散泵
8).放大倍数:优于50~100万倍;放大倍数重复性:< 10%
9).相机长度:80~2,000mm
10).相机长度和放大倍数误差小于5%
13、样品室
1).5轴全自动马达台(X/Y/Z/Tilt X/Tilt Y)
2).样品漂移:≤ 1 nm/min
3).样品复位精度:具有记忆模式功能,将样品从一个位置移动到另一个位置,且X、Y方向复位精度由于200 nm
31).自动马达控制探测器进出无需手动操作
32).通过处理器自动扣除和峰(非软件扣除),自动选择最佳处理时间
33).宽范围电压适配可适用(85~265 VAC)电压
34).所有校准数据均保存与信号处理器中,用户能够自行矫正系统,重装或者升级电脑可由用户自己完成
35).具备零峰修正功能,可以快速稳定谱峰,开机5分钟内能得到稳定的定量结果
20).在中国有TEM电制冷能谱用户且连续正常工作三年以上
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④ 应用Fab’-HRP以减少抗体分子量
⑤ 延长作用时间,4℃过夜
⑥ 反复脱水、水化(不适用于膜受体的研究)
4.超薄切片制备
⒈1%锇酸后固定,1h ⒉0.01mol/L pH 7.4 二甲砷酸钠缓冲液内过夜
⒊脱水、浸透(适当压缩时间)
⒋包埋、聚合
⒌超薄切片(如为免疫酶标,不作对比染色,应尽早
步骤、及所示结果,易获成功
缺点:弥散,密度较低,定位精确性较差,不宜对比染色
PDGF-R
2.铁蛋白
12nm颗粒(大),中心是Fe(OH)3 外围蛋白质 分子量大(440KD),穿透力差 易与环氧树脂非特异吸附而出现背景“着色”
3.胶体金 理想
2HAuCl4+ 3H2O2
(还原剂)
2Au–+8HCl+3O2
电镜观察)
包埋后法
制备超薄切片
(镍网或金网)
→ 免疫细胞化学染色
(无需脱树脂)
优点:简便、重复性好、可作多标记 缺点:操作过程中抗原性受损,阳性率低
对策
⒈改用PG、PLP固定 ⒉改用亲水、低温聚合包埋介质
常规用环氧树脂类(epoxy resins)包埋介质 如epon,spurr,araldite等, 疏水、60℃高温聚合
• 切片 超薄切片50nm ± 粘附于铜网上
• 染色
“电子染色” 结构图像之间的反差 醋酸铀—柠檬酸铅双染色法 重金属盐类染色剂
• 电镜观察
免疫电子显微镜技术
免疫电镜(Immunoelectron microscopy,IEM ) 免疫细胞化学反应 高电子密度 亚 细胞水平定位抗原(抗体)
探讨:病因、发病机制,组织发生
(饱和第一重一抗之Fc)
多聚甲醛固定
(灭活二抗中未被中和之Fab)
第二重特异一抗
第二重金标记二抗
IEM技术除广泛应用于透射电镜外亦可
应用于扫描及冷冻蚀刻电镜技术(略)
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
IFNg-R
IgG
Κ ,λ
3.免疫细胞化学标记
①用漂染
注意:
② 增加抗体浓度(4~5倍)
③ 1%BSA的应用 ④ 用免疫酶标时,免用H2O2 ⑤ 想方设法增加抗体之穿透力
增加抗体穿透力的措施
① 去垢剂的应用
0.01~0.2% Saponin或Triton X-100 5-10’
② 反复冻融
先浸泡于20%甘油或蔗糖(或10%DMSO),液氮速冻, 室温溶解,重复2~3次
包埋后法(浅表法) 超薄切片制备 → 免疫细胞化学反应→电镜观察
(固定、脱水、包埋、超薄切片)
不包埋法 冰冻超薄切片→免疫细胞化学反应→电镜观察
包埋前法
1. 取材:新鲜、1mm3(脑、脊髓灌注固定后取) 2. 固定与切片: ①前固定:处理好“保持抗原性与保持超微结构”的矛盾 ②复合固定液的应用 PG固定液:1 ~ 4% Paraformaldehyde 0.01~0.2% Glutaraldehyde PLP固定液:Periodate-lysine-Paraformaldehyde (配制方法见附录) ③厚切片(10~40μm) 振动切片机的应用,或浸泡于20~30%蔗糖溶液、 速冻、冰冻切片 ④继续固定 4℃ 4~5h ⑤彻底清洗 4℃ PBS(含2~5%蔗糖)过夜
注意结合光镜
←X7,500
X45,000→
标记物
酶、铁蛋白、胶体金
1 .酶标记-HRP(40KD) 小,易穿透,稳定
通过戊二醛(过碘酸钠),将抗体IgG或SPA与HRP交联 直接法、间接法、PAP法、ABC法等均可 Fab’-HRP 分子量小(70KD)利于抗体穿透
优点:可借鉴免疫组化(光镜)所用之试剂、操作
兼具包埋前法及包埋后法的优点
步骤: 1.小块组织1~4%多聚甲醛固定(增加组织硬度) 2.浸泡于2.3mol/L蔗糖溶液,平衡渗透压 3.包埋于10%明胶,液氮速冻,超薄切片(50~60nm) 4.置镍网免疫细胞化学染色
双标记或多标记
选包埋后法,金标记(针对不同抗原标以不同直径之胶金颗粒), 如用间接法,标以不同直径胶金颗粒之二抗如来自同一种类动物时, 防止叠加污染之方法有: 1.双面分别标记,谨慎操作 2.分步固定(灭活) 第一重特异一抗 过量金标记二抗
改用丙烯酸树脂类(acrylic resins)包埋介质 脱水无需太净,粘性小,聚合温度低,非特异性吸附少 如LR White 48~50℃聚合 Lowiryl K4M -35℃聚合 紫外光照启动聚合 HM20/80 -50℃聚合 紫外光照启动聚合 HM23 -80℃聚合 紫外光照启动聚合
不包埋法(冰冻超薄切片法)
胶体金颗粒 (溶胶) —— Au
IgG
(IG)
Au SPA
(PAG)
密度梯度离心 柱层析(S-400) 去除大颗粒聚合物及未标记蛋白 还原剂 白磷 抗坏血酸 枸橼酸钠 5nm 8~13nm >15nm
双标或多标
TNF-R2 ×46000
TNF-R1 ×21000
VWF ×73000
胶金标记之优点:
免疫电子显微镜技术
0.2mm
0.2μm
0.2nm
像差、衍 射效应 像差
电镜基本技术
取材,固定,脱水,浸透,包埋,切片,染色
• 取材 关键 快、准、轻、小 1mm3 组织块
• 固定 戊二醛 — 锇酸双重固定 保存组织的精细结构
• 脱水 丙酮、乙醇梯度脱水
• 包埋 包埋剂—多用环氧树脂类 高温聚合(60oC 恒温箱)
① ③ ④ ⑤ 抗体活性高 ② 可作光镜对照观察(免疫金银法) 可作对比染色,超微结构清晰 可作双标或多标记 颗粒可定量计数
注意: ⒈ 间接法时,一抗不能用Fab’;用PAG时,一抗不能用羊IgG
⒉
小颗粒(5nm)胶体金不易观察
包埋前法(浸透法) 免疫细胞化学反应→超薄切片制备 → 电镜观察
(厚片)