抗肿瘤药物评价技术ppt课件
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抗肿瘤药物PPT课件
而抑制RNA合成的药物。
放线菌素D(更生霉素，DACT)、多柔比星、柔红霉素
7
抗肿瘤药物的分类
——化疗药物根据作用分 为
四、抑制蛋白质合成与功能的药物
⒈微管蛋白活性 抑制剂：长春碱 类、紫杉醇类
⒊影响氨基
酸供应的药 物：L-门冬酰
胺酶
⒉干扰核蛋 白体功能的 药物：三尖 杉生物碱类
8
抗肿瘤药物的分类
——化疗药物根据作用分 为
五、调节体内激素平衡的药物：
适用于某些与相应激素水平有关的肿瘤如乳腺癌、前列 腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、卵巢癌、睾丸肿瘤等。应用 激素或其拮抗药来改变激素平衡失调状态，以抑制这些 激素依赖肿瘤的生长，且无骨髓抑制等不良反应。
常用药物：雌激素类、雄激素类、甲羟孕酮酯、他莫昔芬、 糖皮质激素类、安鲁米特（AG）
1
内容提要
2
定义
肿瘤：（Tumor）是机体在各种 致癌因素作用下，局部组织细胞 异常增生而形成的新生物。一般 将肿瘤分为良性和恶性两大类。
抗肿瘤药：（Antineoplastic Agents）是指抗恶性肿瘤的药物，
又称抗癌药。
3
抗肿瘤药物的分类
简单分为化疗药物
和生物制剂。
4
抗肿瘤药物的分类
20
化疗药物使用注意事项
1、用紫杉醇化疗前必须用地塞米松、西咪替丁、苯海拉明预处理，开 始输注15min内要有医生在岗，及时处理可能发生的过敏反应。
2、用多西紫杉醇化疗必须用地塞米松预处理3-5天，从化疗前1天开始。 3、单次顺铂静脉给药剂量超过60mg时必须先水化，并用生理盐水配制。 4、奥沙利铂（Oxaliplatin）必须用葡萄糖注射液配制。 5、异环磷酰胺的毒性必须用美司钠解毒。 6、注意其它化疗药物的特殊注意事项。 7、大剂量MTX（氨甲喋呤）化疗必须有血药浓度监测和相应解毒措施。
放线菌素D(更生霉素，DACT)、多柔比星、柔红霉素
7
抗肿瘤药物的分类
——化疗药物根据作用分 为
四、抑制蛋白质合成与功能的药物
⒈微管蛋白活性 抑制剂：长春碱 类、紫杉醇类
⒊影响氨基
酸供应的药 物：L-门冬酰
胺酶
⒉干扰核蛋 白体功能的 药物：三尖 杉生物碱类
8
抗肿瘤药物的分类
——化疗药物根据作用分 为
五、调节体内激素平衡的药物：
适用于某些与相应激素水平有关的肿瘤如乳腺癌、前列 腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、卵巢癌、睾丸肿瘤等。应用 激素或其拮抗药来改变激素平衡失调状态，以抑制这些 激素依赖肿瘤的生长，且无骨髓抑制等不良反应。
常用药物：雌激素类、雄激素类、甲羟孕酮酯、他莫昔芬、 糖皮质激素类、安鲁米特（AG）
1
内容提要
2
定义
肿瘤：（Tumor）是机体在各种 致癌因素作用下，局部组织细胞 异常增生而形成的新生物。一般 将肿瘤分为良性和恶性两大类。
抗肿瘤药：（Antineoplastic Agents）是指抗恶性肿瘤的药物，
又称抗癌药。
3
抗肿瘤药物的分类
简单分为化疗药物
和生物制剂。
4
抗肿瘤药物的分类
20
化疗药物使用注意事项
1、用紫杉醇化疗前必须用地塞米松、西咪替丁、苯海拉明预处理，开 始输注15min内要有医生在岗，及时处理可能发生的过敏反应。
2、用多西紫杉醇化疗必须用地塞米松预处理3-5天，从化疗前1天开始。 3、单次顺铂静脉给药剂量超过60mg时必须先水化，并用生理盐水配制。 4、奥沙利铂（Oxaliplatin）必须用葡萄糖注射液配制。 5、异环磷酰胺的毒性必须用美司钠解毒。 6、注意其它化疗药物的特殊注意事项。 7、大剂量MTX（氨甲喋呤）化疗必须有血药浓度监测和相应解毒措施。
药物化学13-抗肿瘤药PPT课件
个性化治疗
根据患者的基因组、表型等特征 ，选择最合适的治疗方案，实现 个体化精准治疗。
基因治疗与免疫治疗在抗肿瘤领域的应用
基因治疗
通过修改或调控肿瘤细胞的基因表达 ，抑制肿瘤生长、扩散或诱导细胞凋 亡。
免疫治疗
利用免疫系统激活剂或调节剂，增强 机体对肿瘤的免疫应答，控制肿瘤生 长。
THANKS.
抗肿瘤药的疗效与副
04
作用
抗肿瘤药的疗效评估
01020304临床试验通过对照实验的方式，比较抗 肿瘤药治疗组与对照组的疗效
差异。
生存率
评估患者接受抗肿瘤药治疗后 生存时间的延长情况。
肿瘤缩小率
观察抗肿瘤药对肿瘤的抑制作 用，以肿瘤体积缩小程度为指
标。
症状改善
评估抗肿瘤药对患者症状的改 善程度，提高患者生活质量。
抗肿瘤药的制备工艺
化学合成法
通过一系列化学反应，将原料转 化为目标药物。工艺流程长、技
术难度高，但成本较低。
生物工程技术
利用基因工程和细胞工程技术， 在微生物或细胞中表达目标蛋白 或抗体，再通过分离纯化得到药 物。工艺相对简单，但成本较高。
天然产物提取法
从天然资源中提取具有抗肿瘤活 性的化合物，再进行分离纯化和 结构修饰。成本低，但产量有限。
抗肿瘤药的质量控制
杂质控制
对抗肿瘤药物中的杂质 进行严格控制，确保药 物的安全性和有效性。
稳定性研究
研究药物的稳定性，确 保药物在储存和运输过 程中不会发生降解或变
质。
质量标准制定
制定严格的质量标准， 对抗肿瘤药物的各项指
标进行检测和控制。
生产过程监控
对药物的生产过程进行 实时监控，确保生产出 的药物符合质量要求。
根据患者的基因组、表型等特征 ，选择最合适的治疗方案，实现 个体化精准治疗。
基因治疗与免疫治疗在抗肿瘤领域的应用
基因治疗
通过修改或调控肿瘤细胞的基因表达 ，抑制肿瘤生长、扩散或诱导细胞凋 亡。
免疫治疗
利用免疫系统激活剂或调节剂，增强 机体对肿瘤的免疫应答，控制肿瘤生 长。
THANKS.
抗肿瘤药的疗效与副
04
作用
抗肿瘤药的疗效评估
01020304临床试验通过对照实验的方式，比较抗 肿瘤药治疗组与对照组的疗效
差异。
生存率
评估患者接受抗肿瘤药治疗后 生存时间的延长情况。
肿瘤缩小率
观察抗肿瘤药对肿瘤的抑制作 用，以肿瘤体积缩小程度为指
标。
症状改善
评估抗肿瘤药对患者症状的改 善程度，提高患者生活质量。
抗肿瘤药的制备工艺
化学合成法
通过一系列化学反应，将原料转 化为目标药物。工艺流程长、技
术难度高，但成本较低。
生物工程技术
利用基因工程和细胞工程技术， 在微生物或细胞中表达目标蛋白 或抗体，再通过分离纯化得到药 物。工艺相对简单，但成本较高。
天然产物提取法
从天然资源中提取具有抗肿瘤活 性的化合物，再进行分离纯化和 结构修饰。成本低，但产量有限。
抗肿瘤药的质量控制
杂质控制
对抗肿瘤药物中的杂质 进行严格控制，确保药 物的安全性和有效性。
稳定性研究
研究药物的稳定性，确 保药物在储存和运输过 程中不会发生降解或变
质。
质量标准制定
制定严格的质量标准， 对抗肿瘤药物的各项指
标进行检测和控制。
生产过程监控
对药物的生产过程进行 实时监控，确保生产出 的药物符合质量要求。
抗肿瘤药物ppt课件
5、稳定性 一．水溶液中很不稳定
1. 氮芥在pH 7以上的水溶液将分解而失活
二．水溶液pH为3~5，
三．水溶液注射剂的pH必须保持在3.0~5.0
Cl N
Cl
H2O pH>7
O H N
O H
7
6、缺点 一．
二． 三．
只对淋巴瘤有效
对其它肿瘤如肺癌、肝癌、胃癌等无效
不能口服
选择性差
毒性大
N
（特别是对造血器官）
P
N
Cl Cl
phosphamidemustard
H N
Cl Cl
normustard
+ CH2 CHCHO acrolein
一．在正常组织中进行酶催化反应生成无毒化合物
二．肿瘤组织因缺乏正常组织所具有的酶，经非酶促反应 生成* * *具有较强的烷基化能力
11
3、抗瘤谱（了解）
一．
二． 三．
用于恶性淋巴瘤，急性淋巴细胞白血病，多发性骨髓瘤、肺 癌、神经母细胞瘤等
成亲电性的强烷化剂
二． 极易与细胞成分的亲核中心起烷化作用
R N
Cl Cl
-Cl-
N+
R
X- R N
X -Cl-
Cl
Cl
N+ R
Y-
R N
X
X
Y
6
脂肪氮芥的烷基化历程
一．
双分子亲核取代反应（SN2）
反应速度取决于烷化剂和亲核中心的浓度
二．
属强烷化剂 对肿瘤细胞的杀伤能力较大，抗瘤谱较广 选择性比较差，毒性比较大
cl
环磷酰胺
一． Cyclophosphamide 二． 癌得星（Endoxan，Cytoxan)
抗肿瘤药物实验法课件
理论上用带有自发肿瘤模型筛选药物较理想。然而，动物自发肿瘤的病因取决于的遗传特性，与人癌病因区别较大。
很难在限定期间内得到大量生长均匀的带瘤动物，各动物肿瘤之间生长速度差异也较大，给评价带来困难。
此类肿瘤常用于特殊目的试验或作为“二级筛选”模型。
对自发肿瘤总的评价
该模型较好地再现了人类肿瘤发生发展的完整变化，包括机体从正常演变为癌前病变进而发展为恶性肿瘤的全过程，该模型也为相关基因与肿瘤的关系在整体水平研究和基因药物的研发提供了良好的手段。
02
【操作步骤】 （1）25ml培养瓶中加入细胞4×104个、受试药40μl，终体积4ml， （2）5%CO2，37℃培养48～96h。 （3）取细胞悬液0.4ml，加0.4%台盼蓝液0.1ml，在室温作用5min，在15min内，细胞计数板计数约200个细胞中死细胞（蓝色）的个数。 【结果评定】 （1）活细胞率%=（未染色细胞数/细胞总数）×100%。 （2）将活细胞率与药物浓度的对数作图，可得到S形剂量反应曲线，计算半数杀伤浓度（LC50）。 （3）当LC50<10μg/ml并能重复时，提示药物应进一步实验。
一般给药7-10天，第8-11天解剖动物。
观察指标：一般状况，体重变化及死亡率，判断药物是否有明显的抑制肿瘤生长的作用，为抗癌药物临床疗效提供有意义的依据。
动物移植性肿瘤是任何体外试验不能代替的。
3
2
1
4
移植性肿瘤实验法
一种药物未必对各种类型的移植性肿瘤有效，选择某一瘤株供筛选都可能漏筛药物。
动物肿瘤的生物学特点与人类有较大的差距，动物瘤株恶性程度高，生长迅速，对药物的敏感性比人类自发的癌瘤高得多，因此，对动物肿瘤生长有抑制的药物对人癌不一定有效。本法的命中率低。
抗肿瘤药物处方点评指南ppt课件
2 遴选的药品不适宜的；
抗肿瘤药物处方点评细则
抗肿瘤药物处方点评细则
2.动脉插管化疗：对局限性的肿瘤为了提高局部的药物浓度，可采用 动脉介入灌注药物治疗，例如肝癌的肝动脉介入，头颈部癌的颈外动脉 插管等，可选择的药物有：氟尿嘧啶、多柔比星、顺铂、丝裂霉素等。 3.鞘内注射：常用于治疗脑膜白血病或淋巴瘤，或其他实体瘤中枢神 经系统内的转移，也可将抗肿瘤药直接注入脑脊液。 4.局部注射：将抗肿瘤药直接注射到肿瘤内，常用于浅表肿瘤的局部 治疗和肝癌、肺癌等的姑息治疗。 举例： ①依托泊苷注射液静脉推注。分析：依托泊苷注射液属细胞周期特异性 药物，其作用位点是拓扑异构酶Ⅱ。由于其与DNA拓扑异构酶Ⅱ的结合 是可逆的，并作用于细胞周期中持续时间较长的S期、G2期，因此血药 浓度持续时间长短比峰浓度更重要，且高峰浓度(>5-10mg/L)与严重的骨 髓抑制有关，故一般采用静脉滴注，而不用静脉推注，静脉滴注时间不 少于30min。
正确合理地应用抗肿瘤药物是提高肿瘤患者生存率和生 活质量，降低死亡率、复发率和药物不良反应发生率的重要
手段，是肿瘤综合治疗的重要组成部分。鉴于部分抗肿瘤药
物有明显毒副作用，可给人体造成伤害，对抗肿瘤药物的应 用要谨慎合理，因而需进行抗肿瘤药处方点评，促进抗肿瘤 药的合理使用。
抗肿瘤药物分类
抗肿瘤药物分类
抗肿瘤药物处方 点评指南
肿瘤是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上 失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的新生物。学界一 般将肿瘤分为良性和恶性两大类，一般所说的癌即指恶性肿瘤。 抗肿瘤药物的主要适应证是： 1.对某些全身性肿瘤如白血病、绒毛膜上皮癌、恶性淋巴瘤等作为首选的 治疗方法，在确诊后应尽早开始应用； 2.对多数常见肿瘤如骨及软组织肉瘤、睾丸肿瘤、肺癌和乳腺癌等可在术 后作为辅助或巩固治疗，以处理可能存在的远处散播；对某些肿瘤如视网膜 母细胞瘤、肾母细胞瘤等辅助应用抗肿瘤药可提高放射治疗效果； 3.对晚期肿瘤作为姑息治疗，以减轻患者的痛苦，延长寿命； 4.对某些浅表肿瘤如皮肤癌等可试行局部治疗，部分可以治愈。 此外，多种抗肿瘤药还具有免疫抑制作用，可用于治疗某些自身免疫性疾 病，有暂时缓解症状的效果，又可用于防止器官移植的排异反应。
抗肿瘤药物ppt课件
奥沙利铂 31
4.96
氟尿嘧啶 27
4.32
表柔比星 23
3.68
卡铂
21
3.36
吡柔比星 19
3.04
奈达铂 17
2.72
阿糖胞苷 14
2.24
培美曲塞二钠 13
2.08
长春瑞滨 13
2.08
伊立替康 12
1.92
长春新碱 12
1.92
洛铂
11
1.76
合计
554
88.64
注：只包含 ADR 大于PP1T0课例件次的药品。
16
顺铂
铂类 配合 物
卡铂
影响DNA结构和 功能
细胞周期非特异 非精原细胞性睾丸瘤、肺
性药物
癌、头颈部鳞状细胞癌、
卵巢癌、膀胱癌、前列腺
癌、淋巴肉瘤
细胞周期非特异 小细胞肺癌、头颈部鳞癌、
性药物
卵巢癌及睾丸肿瘤
喜树 碱类
鬼臼 生物 碱类
喜树碱
依托泊 苷
影响DNA结构和 功能
细胞周期非特异 胃癌、绒毛上皮癌、恶性
低
依托泊甙、培美曲塞、甲氨蝶呤、丝裂霉
（10％～30％） 素、吉西他滨、阿糖胞苷（用量≤1g／m2
时）、氟尿嘧啶、硼替佐米、西妥昔单抗、
曲妥珠单抗
极低 （＜10％）
贝伐单抗、博来霉素、白消安、克拉屈滨、
氟达拉滨、利妥昔单抗、长春碱、长春新 碱、长春瑞滨
中国医院药PP学T课杂件 志2009年第29卷第15期(1340-134229 )
核苷酸还原酶抑 择性杀伤作用， 显著疗效，对黑色素瘤有暂
制剂
可使肿瘤细胞 时缓解作用，可用作同步化
集中于G1期 药物，增加化疗和放疗的敏
抗肿瘤药物筛选ppt课件
生长因子、胰岛素样生长因子、以及细胞因子白介素-6.
白介素-8等.这些因子能够诱导刺激肿瘤增殖和迁移.而且, 肿瘤细胞与毛细血管形成结构上的密切关系.此外,肿瘤细 胞和血管细胞具有相互作用.一方面血管内皮细胞产生的 各种生长因子和细胞因子对肿瘤生长起到生长刺激作用; 17
★抑制血管生成药物的筛选方法
子靶点.利用多种多样的分子靶点,将可能发现具有
各种分子作用机制的药物.
• 3.研制靶向性药物. 包括抗体药物和针对特定分
子靶点的小分子抑制剂.
26
动物实验疗效评价
• 动物实验疗效评价是发现新药的依据.不管
采用何种分子靶点和相应的检测方法进行 初筛,都必须经过动物实验疗效评价.动物体 内实验反映药物疗效与毒性的综合结果,是 体外方法与模型不能取代的决定性环节.
是B型精原细胞,其次是A型精原细胞,然后依次为
精子细胞、
精母细胞、精子.
15
• 精原细胞法阳性和抗肿瘤作用的相关性尤
以在抗生素和植物药中较为明显.
• 用精原细胞法检测72种抗生素,精原细胞法
阳性的13种抗生素,据已报道资料均属抗肿 瘤抗生素,其中9种在临床上有一定疗效.
• 精原细胞法阴性的59种抗生素中,除又霉素、
抗肿瘤药物筛选
1Leabharlann 抗肿瘤药物筛选• 是新药发现与开发的重要环节.通常是指从
样品到活性检测至动物实验疗效各个
阶段的工作.
。
• 一般常用以下几种方法:
• 1. 肿瘤细胞组织培养筛选方法
• 2. 微生物学筛选方法
• Antitumor durg screening
2
1. 肿瘤组织细胞培养筛选方法
• 细胞培养法是筛选抗肿瘤药物比较常用的
白介素-8等.这些因子能够诱导刺激肿瘤增殖和迁移.而且, 肿瘤细胞与毛细血管形成结构上的密切关系.此外,肿瘤细 胞和血管细胞具有相互作用.一方面血管内皮细胞产生的 各种生长因子和细胞因子对肿瘤生长起到生长刺激作用; 17
★抑制血管生成药物的筛选方法
子靶点.利用多种多样的分子靶点,将可能发现具有
各种分子作用机制的药物.
• 3.研制靶向性药物. 包括抗体药物和针对特定分
子靶点的小分子抑制剂.
26
动物实验疗效评价
• 动物实验疗效评价是发现新药的依据.不管
采用何种分子靶点和相应的检测方法进行 初筛,都必须经过动物实验疗效评价.动物体 内实验反映药物疗效与毒性的综合结果,是 体外方法与模型不能取代的决定性环节.
是B型精原细胞,其次是A型精原细胞,然后依次为
精子细胞、
精母细胞、精子.
15
• 精原细胞法阳性和抗肿瘤作用的相关性尤
以在抗生素和植物药中较为明显.
• 用精原细胞法检测72种抗生素,精原细胞法
阳性的13种抗生素,据已报道资料均属抗肿 瘤抗生素,其中9种在临床上有一定疗效.
• 精原细胞法阴性的59种抗生素中,除又霉素、
抗肿瘤药物筛选
1Leabharlann 抗肿瘤药物筛选• 是新药发现与开发的重要环节.通常是指从
样品到活性检测至动物实验疗效各个
阶段的工作.
。
• 一般常用以下几种方法:
• 1. 肿瘤细胞组织培养筛选方法
• 2. 微生物学筛选方法
• Antitumor durg screening
2
1. 肿瘤组织细胞培养筛选方法
• 细胞培养法是筛选抗肿瘤药物比较常用的
第十六节---抗肿瘤药ppt课件
第十六章 抗肿瘤药
第十六章 抗肿瘤药
抗肿瘤药根据其作用机制和化学结构可分为 三类:
烷化剂 抗代谢抗肿瘤药 其它抗肿瘤药
第一节 烷化剂
结构类型 常用烷化剂类抗肿瘤药物 构效关系
结构类型
氮芥类
乙烯亚胺类 磺酸酯类 卤代多元醇类
一/二、常用烷化剂类抗肿瘤药物
定义
常用药物
主要用途
载体 烷化基 部分 部分 因载体R结构不 同又可分为不同的氮芥
OH
N
F
HO N
(16-12)
本品水溶液与溴试液作用，可使溴液颜色消失。与 氢氧化钡溶液作用，生成紫色沉淀。
（三）用途
为抗肿瘤药。本品对绒毛膜上皮癌及恶 性葡萄胎疗效显著；对消化道癌（胃癌 、食管癌、结肠癌、直肠癌、肝癌）和 乳腺癌疗效较好，对卵巢癌、宫颈癌、 膀胱癌等也有一定疗效。是治疗实体肿 瘤的首选药。
（四）贮存
本品应遮光，密封保存。
盐酸阿糖胞苷
（一）结构
NH2. HCl
N ON
O Байду номын сангаасH2OH OH
OH
（二）性质及应用
本品分子结构中具有氮苷键，其水溶液 极不稳定，易水解失效。 应用：常制成粉针供临床使用。
本品的水溶液显氯化物的鉴别反应。
第二节 其它类型抗肿瘤药
其它类型抗肿瘤药物常用的有：
应用：应用：鉴别。将本品与无水碳酸钠加热熔融后 ，冷却，加水溶解，过滤，滤液用硝酸酸化后，显氯 化物与磷酸盐的鉴别反应。
（三）用途
为抗肿瘤药 （四）贮存
应遮光，密封（供口服用）或严封（供注射用），在 30℃以下保存。
三、构效关系
烷化剂能与核酸及酶以共价键结合，干扰其功能而发 挥抗肿瘤作用。由于结构类型不同，抗肿瘤作用机制 不同，构效关系也不相同，本节仅介绍氮芥类。
第十六章 抗肿瘤药
抗肿瘤药根据其作用机制和化学结构可分为 三类:
烷化剂 抗代谢抗肿瘤药 其它抗肿瘤药
第一节 烷化剂
结构类型 常用烷化剂类抗肿瘤药物 构效关系
结构类型
氮芥类
乙烯亚胺类 磺酸酯类 卤代多元醇类
一/二、常用烷化剂类抗肿瘤药物
定义
常用药物
主要用途
载体 烷化基 部分 部分 因载体R结构不 同又可分为不同的氮芥
OH
N
F
HO N
(16-12)
本品水溶液与溴试液作用，可使溴液颜色消失。与 氢氧化钡溶液作用，生成紫色沉淀。
（三）用途
为抗肿瘤药。本品对绒毛膜上皮癌及恶 性葡萄胎疗效显著；对消化道癌（胃癌 、食管癌、结肠癌、直肠癌、肝癌）和 乳腺癌疗效较好，对卵巢癌、宫颈癌、 膀胱癌等也有一定疗效。是治疗实体肿 瘤的首选药。
（四）贮存
本品应遮光，密封保存。
盐酸阿糖胞苷
（一）结构
NH2. HCl
N ON
O Байду номын сангаасH2OH OH
OH
（二）性质及应用
本品分子结构中具有氮苷键，其水溶液 极不稳定，易水解失效。 应用：常制成粉针供临床使用。
本品的水溶液显氯化物的鉴别反应。
第二节 其它类型抗肿瘤药
其它类型抗肿瘤药物常用的有：
应用：应用：鉴别。将本品与无水碳酸钠加热熔融后 ，冷却，加水溶解，过滤，滤液用硝酸酸化后，显氯 化物与磷酸盐的鉴别反应。
（三）用途
为抗肿瘤药 （四）贮存
应遮光，密封（供口服用）或严封（供注射用），在 30℃以下保存。
三、构效关系
烷化剂能与核酸及酶以共价键结合，干扰其功能而发 挥抗肿瘤作用。由于结构类型不同，抗肿瘤作用机制 不同，构效关系也不相同，本节仅介绍氮芥类。
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体外抗肿瘤活性试验
生长曲线测定法
验原理：在最适条件下，肿瘤细胞在培养液中呈指数生长，如取细胞数 数与培养时间作图可得一条直线，故称此时为对数生长期。随着细胞密 断增高，由于代谢产物的积聚及营养物的消耗，细胞生长逐渐减慢以致 ，此时称高坪期或稳定期。因此药物对细胞生长的影响可通过生长曲线 出来 。 法要点： 将浓度为10000个细胞/ml的对数生长期细胞悬液按每瓶5ml种 ml的培养瓶，或按每孔100微升种至96孔板，并加受试样品适量，培养 别于即刻和1、2、3、4、5、6、7d进行检测。前者可采用台盼蓝染色计 活细胞，后者可采用MTT法或SRB法读取OD值，并据此进行作图与计算 测指标 1、倍增时间(TD),将实际生在曲线进行直线回归求出0和t时刻的 论细胞数N0和N t，据此计算：TD=0.301t/（log N t—log N0）；2 增殖 杀伤率（%）=( N0—N0’)/ N0×100%；3 细胞生长饱和密度（N s）， 高坪期每毫升细胞数的均数。
体内抗肿瘤试验必须选用三种以上肿瘤模型，其中至 3 少一种为人癌裸小鼠移植模型或其它人癌小鼠模型。
试验结果三种模型均为有效，再重复一次也为有效
体外抗肿瘤活性试验 试验目的
对候选化合物进行初步筛选 了解候选化合物的抗瘤谱 为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考
体外抗肿瘤活性试验
试验方法
• 选用10-15株人癌细胞株 • 试验还应考察受试物对耐药肿瘤细胞系和正常人源细胞的作用和影
Байду номын сангаас
体外抗肿瘤活性试验
集落形成法
验原理：克隆原细胞具有持续增殖能力，当单个细胞分裂6代或6代以上 后代所组成的群体(集落)便含50个以上细胞。通过集落计数可对克隆原 作定量分析。它反映了单个细胞的增殖潜力，故能较灵敏地测定抗癌药 性，日前被认为是一种较理想的检测方法。 法要点：将浓度为500个细胞/ml的对数生长期细胞悬液2ml种至35ml的 皿，并加受试样品适量，培养7d或更长时间，姬姆萨染色，解剖显微镜 数含50细胞以上的集落。 测指标：根据集落数计算集落形成率，对照组集落形成率不应低于40% 计算用药组的集落形成抑制率，根据情况可进一步采用Logit法计算受试 的IC50值。 集落形成率=集落数/细胞接种数X100% 集落形成抑制率=（1-用药组集落形成率）/对照组集落形成率X100%
值可随放置时间而变，而SRB法无此现象。因此更适用于进行大规模的 验。 法要点： 用10%冷三氯乙酸与4℃固定已经受试样品处理的细胞1h，洗 燥；加入4mg/ml SRB液100微升/孔 染色15min，1%冰醋酸洗涤，干燥 后加入150微升/孔 的Tris溶液，在酶标仪上与515nm波长处检测OD值。 测指标 同MTT法。另外，NCI目前采用以下指标评价化合物的体外抗肿 活性。测定的OD值包括对照组、加药组及加药时的细胞的OD值C、T、
响 • 使用MTT还原法、磺酰罗丹明B(SRB)染色法 • 药物与细胞共培养时间一般为48-72 小时，贴壁细胞需先贴壁24
小时后再给药。 • 试验应设阴性、阳性、溶媒对照组，阳性对照用一定浓度的标准抗
肿瘤药。 • 试验至少应重复一次
体外抗肿瘤活性试验
四氮唑盐还原法
验原理：四氮唑[MTT,3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenylazolium bromide]是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NAD 关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲[月替] mazan)，而死的细胞则无此功能。用二甲基亚讽(DMSO)溶解甲[月替 一定波长下用酶标仪测定光密度值，即可定量测出细胞的存活率。 法要点：受试样品处理细胞结束后，加入5mg/ml MTT液20微升/孔，继 养四小时。再加三联液并培养过夜。在酶标仪上于490nm波长处检测O 。 测指标 直接指标为96孔板上各被测孔的OD值；然后按公式（对照组O 治疗组OD值）/对照组OD值×100%计算出相应的细胞生长抑制率；剧
可进一步采用Logit法计算50%生长抑制浓度IC50值。
体外抗肿瘤活性试验
磺酰罗丹明染色法
验原理：SRB(sulforhodamine 是一种蛋白质结合染料，粉红色，可溶于 。 SRB可与生物大分子中的碱性氨基酸结合。其在515 nm波长的OD读 细胞数呈良好的线性关系。故可用作细胞数的定量。MTT法的一个缺点
抗肿瘤药物评价技术
肿瘤药物药效学指导原则
细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究 技术指导原则
化学药物一般药理学研究技术指导原则
指导原
中药、天然药物一般药理学研究技术指导原则
抗肿瘤药物药效学研究的要求
1 体内、体外实验方法相结合；以体内实验为主
•
• 2 体外实验选用10-15株人癌细胞株 ，至少重复一次
0。据此计算： 生长抑制率（%）=（T－T0）/（C—T0）×100% ； 按生长抑制 细胞死亡率对样品浓度绘出量效关系曲线图，并求出IC50
体外抗肿瘤活性试验
染料排斥法
验原理：活细胞有排斥某些染料如伊红、台盼蓝、苯胺黑等的能力，而 胞由于膜完整性的破坏，可被着色。因此培养的肿瘤细胞中加入这些染 定时间后，对着色和未着色的细胞进行计数，即可算出被杀死的细胞比 法要点：向一定容积的待检细胞悬液加入定量的某种染液，最常用的是 %台盼蓝液，混匀，室温染色5-15min，将已染色的细胞悬液滴加至血 计数板，直接在光镜下计数活细胞数和细胞总数。 测指标：按（未染色细胞数/细胞总数）X100%计算活细胞率，对照组活 胞率应在90%以上。根据活细胞率计算受试样品的半数致死剂量（LD5 为药物抗肿瘤活性的指标。
体外抗肿瘤活性试验
阿拉马蓝法
验原理：非荧光性蓝色底物阿拉马蓝可被活细胞中的线粒体内 NADPH相关的脱氢酶类还原为强荧光性粉红色底物，采用微 养板自动读数仪在激发与发射波长分别为530nm和590nm处读 荧光强度值，与活细胞数呈良好的线性关系。 法要点：细胞经受试样品处理后，加入10-20ul阿拉马蓝染液 续培养一定时间，用微培养板自动读数仪在激发与发射波长分 为530nm和590nm处读取荧光强度值。 测指标：根据荧光强度可以计算细胞生长抑制率，适当时可进 步计算IC50值。