大脑中动脉缺血再灌注大鼠脑组织PAR

大脑中动脉缺血再灌注大鼠脑组织

PAR拟1表达与炎症反应的关系

（作者：_________ 单位：___________ 邮编：___________ ）

作者：周青珍，王华梅，吴家幕

【摘要】目的：研究脑缺血再灌注（CIR）后脑组织中蛋白酶激活

受体拟1（PAR拟1）的表达及其与炎症反应的关系。方法:40只雄性SD大鼠线栓法建立大脑中动脉栓塞（MCAO模型，再灌注后于3、6、12 h及1、2、3、7 d取脑，免疫组化法和脑组织匀浆法检测PAR 拟1、超氧化物歧化酶（SOD和丙二醛（MDA的含量。结果：缺血再灌注后脑组织PAR拟1表达增加（P V 0.01 ）, MDA含量增多（P V 0.01 ）, SOD舌性降低（P v0.01 ）; PAR拟1表达与MDA含量正相关（r1=0.844,P v 0.05 ），与SOD含量负相关（r2=-0.901,P v 0.01 ）。结论:CIR后PAR11 1表达增多可加重脑组织炎性反应。

【关键词】大脑中动脉；栓塞；蛋白酶激活受体拟1

Abstract: Objective To inv estigate the correlati on betwee n protease 拟activated receptor 拟1（PAR 拟1） expression and inflammatory reaction of brain tissue after cerebral ischemia

reperfusion(CIR).Methods Fourty SDrats were randomly divided

into eight groups:sham group,CIR3 h,CIR6 h,CIR12 h,CIR1 d,CIR2 d, CIR3 d,a nd CIR7 d group( n=5).To establish middle cerebral artery occlusion(MCAO) model with Longa' methods.At the indicated timepoint,the rat was sacrificed and its brain was removed.PAR 扌以 1 wasdetected with immunohistochemistry,SOD and MDA contents in brain homogenate were measured.Results Compared with sham group,PAR 拟1 expressi on was in creased obviously (P v 0.01 ) .Con te nts of MDA were in creased with the time of CIR prolonged ( P v

0.01 ) ,and there was positive correlation between PAR 拟1 expression and MDA content

(r1=0.844,P v 0.05 ) ,but SODactivity was decreased ( P v 0.01 ) ,and negatively correlated with PAR 勘：1 expression

(r2=-0.901,P v 0.01 ) . Con clusi on In creased PAR)； 1 expression may aggravate in flammatory reacti on of brain tissue in rats after CIR with MCAO.

Key words: Middle cerebral artery;Occlusi on ;Protease 拟, activated receptor 拟1

近年来研究发现中性粒细胞的聚集、黏附和浸润，以及炎性因子的大量产生是缺血再灌注损伤的重要因素［2］。脑缺血再灌注

(cerebral ischemia reperfusio n,CIR )后中性粒细胞在凝血酶作

用下趋化于缺血组织周围，通过激活蛋白酶激活受体-1 ( protease

拟activated receptor 拟■〔‘PAR扌以1）导致细胞内Ca2+升高，刺激

小胶质细胞的活化和增生［3］,促进炎症因子表达，活化的白细胞释放自由基，引起脑缺血后脑组织损害。本实验通过建立大脑中动脉栓塞（Middle cerebral artery occlusion,MCAO ）模型，了解CIR 后脑组织中PAR拟1表达与代表自由基水平的超氧化物歧化酶

（superoxide dismutase，SOD 和丙二醛（malondialdehyde，MDA 之间的相关性，以探讨PAR头1在CIR后脑组织炎症反应中的作用。

1材料和方法

1.1实验动物与分组

健康雄性SD大鼠40只，体重270〜320 g（南京青龙山实验动物养殖中心提供），随机分为8组：假手术组，缺血再灌注3、6、12 h 及1、2、3、7 d 组（n=5）。

1.2脑缺血再灌注模型的制备

选用日本产钓鱼尼龙线，直径0.2 mm每段长4 cm,头端烧成杵状备用。参照Zea Longa报道的线栓法［1］建立大鼠大脑中动脉栓塞MCAOI型。术后2 h,外拉尼龙线，使其球端回至颈外动脉残端，恢复大脑中动脉供血，实现再灌注，于上述不同时间点断头取脑；假手术组除插入尼龙线15 mm外，余步骤同手术组，术后24 h断头取脑。

1.3免疫组化染色

在相应时间点，大鼠深度麻醉后，打开腹腔，由左心耳灌注生理盐水100 mL再用4%甲醛内固定后断头取脑。标本置中性福尔马林中固定、包埋。按下述步骤行PAR以1免疫组化染色：切片、微波修复抗原、3%过氧化氢抑制、兔血清封闭、加一抗（山羊抗小鼠多克隆抗

体，美国Santa Cruz公司）、4 C过夜、加生物素二抗（兔抗山羊IgG）、加SABC DAB显色，苏木素复染。

1.4脑组织匀浆制备及SOD MDA含量测定

将左侧脑组织称重后置于玻璃匀浆管内，0.9%的生理盐水作为匀浆介质（是脑组织的9倍），充分磨碎使脑组织匀浆化，离心15 min, 取上清液，即为10%面组织匀浆。SOD MDA含量测定严格按试剂盒说明书进行。

1.5 结果分析

高倍镜下随机选取左侧海马皮质相邻而不重叠的4个视野区，用图像分析软件计算PA戌以1阳性表达细胞数。用SPSS11.0软件进行方差分析，所得PA^1. 1、SOD MDA值用均数士标准差（x 士s）表示，P V 0.05有统计学意义。

2结果

2.1 PAR拟1表达和SOD MDA含量

与假手术组相比，CIR 3 h后PAR拟1表达明显增多，3 d时达高峰（P v0.01 ）; SOD活性显著降低（P v0.01 ）,且随时间变化延长而逐步