大黄蒽醌类成分的提取方法筛选及均匀设计优化工艺研究
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定
实验5-1大黄中蒽醌的提取分离与鉴定一、实验目的：1、了解一个天然药物中含有的主要有效成分并对其进行提取分离。
2、掌握植物中活性成分的化学检测方法，并进行初步的鉴定工作。
二、实验原理：大黄是一味天然草药，具有泻下通便之效果。
其主要活性成份是大黄素与蒽醌类物质，其中瑞贝洛Ⅱ（rustbelineⅡ）、大黄素（emodin）、芦丁（rutin）等，在医学上有广泛的应用。
大黄素与蒽醌类物质在自然状态下大多处于质子化状态，存在于与水相较弱的有机溶剂中。
为了获得高品质的大黄素与蒽醌类物质，需要对有机溶剂进行筛选，筛选出适宜的溶剂并对大黄中的主要成分进行提取与分离工作。
三、实验步骤：A. 大黄中蒽醌的提取分离1、将粉末大黄紫锥子取 1g 加入圆底烧瓶中，加入 15 mL 95% 乙醇溶液，加热回流30分钟。
2、冷却后用干净的滤纸分离上清液用热水冲涤保持颜色相同（保留水冲涤液备用）。
3、将去溶剂后的渣用 10 mL 苯醇溶解，并过滤写滤液保存，不断冲涤干净渣质。
4、将 2mL 苯醇滤液分离于干净的离心管中，在室温下慢慢加入正硫酸，足量使呈酸性.，加入 5 mL 甲醇，蒸去溶剂后，注 1mL 50%氨水，筛过活性炭或过硅酸钠脱除杂物，使溶液呈现深黄色液体。
5、以上溶液在 20ml 分液漏斗中加入 20-25 mL 丙酮，振荡混合，分离两层液体，取下蒸馏收干（可以置于干燥器或开放场地自然干燥，当感觉无水分或连续称量两次称量值一致时即可）6、将干燥沉淀取少量溶解于绝对丙酮中成特邻醌的溶液。
7、分别进行下列试验来分离纯特邻醌：（1）纯特邻醌呈现红色；（2）用极少量生石灰进行检测，呈现橙色。
B. 大黄中大黄素含量的色谱定量测定色谱图谱图峰形面积法进行测定。
1、用同上操作，按“ A ”-“ E ”方法操作，取所得特邻醌溶液 1-5 mL 再加入丙酮使其溶解（溶液的浓度以能出现三个吸光峰为适宜，可调配NaOH溶液调节pH 值，使吸光峰相对集中于三个波长摆荡之一）。
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄是一种广泛应用的中药材，含多种活性成分，其中最重要的是蒽醌类化合物。
这些化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，因此成为广泛应用的化合物之一。
本文将介绍大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定过程。
大黄通常通过醇提、水提、超声波提取等方式提取蒽醌类成分。
醇提法是最常用的提取方法之一。
一般可以采用乙醇、甲醇或酒精等有机溶剂进行提取。
以乙醇为例，其提取过程如下：（1）将大黄切碎，加入适量的96%的乙醇。
（2）加热回流提取1小时。
（3）过滤，滤去残渣。
（4）将过滤液浓缩至干燥。
（5）得到蒽醌类化合物粗提取物。
大黄中的蒽醌类成分通常需要通过柱层析、薄层层析、高效液相色谱等多种色谱技术进行分离。
其中，高效液相色谱技术最常用。
根据不同的色谱柱填料、移相系统、检测器等条件的不同，可以对获得的粗提取物进行进一步分离。
以高效液相色谱为例，其分离过程如下：（1）将粗提取物溶于少量甲醇中。
（2）进行反相或正相高效液相色谱分离。
大黄中蒽醌类成分的鉴定主要采用紫外分光光度法、质谱分析法和红外光谱法等技术。
其中，以紫外分光光度法为例，其鉴定过程如下：（1）使用UV特征峰进行鉴定。
（2）将标准品或纯品溶于适量的甲醇中，按比例稀释。
（3）将样品溶液置于紫外分光光度计检测器中。
（4）记录在特定波长下的吸光度。
（5）通过计算溶液中所含的蒽醌类成分的浓度来鉴定蒽醌类化合物。
总之，大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定可以采用多种技术进行。
通过这些技术的应用，可以得到单纯、纯度高的化合物，为下一步的药理、毒理研究提供了保障。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定(实验报告)
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。
仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。
三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 3大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。
大黄中蒽醌类成分的提取工艺流程
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大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄蒽醌类成分是一类具有重要药用和工业价值的化合物，广泛应用于医药、染料和化学工业等领域。
提取、分离和鉴定大黄蒽醌类成分的方法对于进一步研究其生物活性和应用具有重要意义。
本文将介绍一种常用的大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定方法。
我们需要准备待提取的植物材料。
大黄是一种常见的含有蒽醌类成分的植物，可以作为提取的原料。
为了提高提取效果，可以将大黄切碎或研磨成较小的颗粒。
接下来，我们可以选择合适的提取剂。
一般来说，乙醇、甲醇或乙醚等有机溶剂是常用的提取剂。
将大黄与提取剂充分混合并浸泡一定时间，以促进目标成分的溶解和转移。
提取完成后，我们需要对提取液进行分离。
通常使用离心、过滤或萃取等方法，将固体颗粒和溶液分离开。
这样可得到含有目标成分的溶液。
为了进一步纯化目标成分，我们可以使用柱层析、薄层层析或高效液相色谱等分离技术。
这些技术可以根据成分的物化性质，如极性、分子大小和亲水性等进行选择。
通过不断进行分离和收集，我们可以得到纯度较高的目标成分。
在分离得到目标成分后，我们需要进行鉴定。
常用的鉴定方法包括红外光谱、质谱和核磁共振等技术。
红外光谱可以用来确定分子的官能团和结构特征。
质谱可以提供分子的相对分子质量和结构信息。
核磁共振可以用来确定分子的空间结构和化学环境。
还可以通过比较样品与标准物质的色谱保留时间和质谱图谱等数据，来确定目标成分的纯度和结构。
如果有条件，还可以进行生物活性实验，评估目标成分的药理活性和毒理学特性。
大黄蒽醌类成分的提取、分离和鉴定是一项复杂而重要的工作。
通过合理选择提取剂、分离技术和鉴定方法，我们可以得到高纯度的目标成分，并进一步研究其应用前景和药理学特性。
这对于推动大黄蒽醌类成分的研究和开发具有重要意义。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.
试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定（一）概述大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。
大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll ）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。
已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：OOHR 2OHR 112-H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH大黄素(Emodin)橙色针晶 256~257℃ -H-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶 206~208℃ -CH 3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H-CH 3大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196℃大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。
大黄酸连有-COOH ，酸性最强；大黄素连有β-OH ，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH ，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH 3和-CH 3，后者只连有-CH 3，因而后者酸性排在第四位。
（二）实验目的和要求1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。
2．掌握PH 梯度法的原理及操作技术。
3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作技术。
4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。
（三）实验方法1．大黄总蒽醌苷元的提取大黄粗粉（100g）加20%H2SO4水溶液200ml，氯仿500ml，水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。
残渣氯仿提取液（约450ml）注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定是一项重要的分析化学工作。
通常采用溶剂提取法将大黄中的蒽醌类成分分离。
首先将大黄粉末用60目筛过筛，然后用乙醇将大黄粉末浸泡2~3次，每次浸泡时间为1小时，离心分离液体，将沉淀收集并用肉桂酸重结晶法纯化获得大黄中的蒽醌类成分。
对所提取的大黄蒽醌类成分进行鉴定时，需采用高效液相色谱和质谱联用技术。
高效液相色谱条件为：色谱柱为C18（250mm×4.6mm，5μm），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm，梯度洗脱方式：A相为甲醇，B相为水，梯度程序：0~12min，A相从30%逐渐升高到98%，12~15min，A相维持在98%。
通过高效液相色谱检测，可以得到大黄中蒽醌类成分的相对保留时间和峰面积，并使用质谱联用技术对其分子式进行鉴定。
同时，通过实验数据对大黄中蒽醌类成分的含量进行确定，并与国家药典规定的标准相比较，以确保其质量符合相应的药品标准。
实验八 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液
展开剂：甲苯 显色剂：0.5%醋酸镁甲醇溶液
四、思考题
1．在实验过程中采用pH梯度萃取法分离游离蒽醌，萃取过程中 若出现乳化现象，应如何处理？ 2．大黄酚和大黄素甲醚结构相似，怎样分离？
③
芦荟大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用0.5%NaOH水溶液，以洗去碱液。合并NaOH和水的提取液， 加盐酸调pH2~3，放置。抽滤析出沉淀，收集沉淀， 经水洗，抽干移至表面皿上，干燥后称重。
碱溶酸沉法 适用于具有 酚羟基的醌 类化合物， 由于其可溶 于碱液，加 酸后又沉 淀出。
游离蒽醌与蒽醌 苷的分离
游离蒽醌 的分离
蒽醌苷 的分离
利用苷与苷 元极性不同 ，溶解度不 同的特点进 行分离。
pH梯度 萃取法 此法是分 离游离蒽 醌最常用 的方法。 是利用其 酸性的差 异进行分 离的。
色谱法 常用的吸附 剂有硅胶和 聚酰胺，慎 用氧化铝， 因羟基蒽醌 能与氧化铝 形成牢固的 螯合物，难 以洗脱。
蒽苷的分离 比苷元困难 ，分离前一 般先用溶剂 法除去大部 分杂质，得 较纯的总苷 后，再用柱 色谱分离。
②
大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用5%Na2CO3水溶液每次 15～20ml如上法相同萃取数次，直至提取液呈色较浅时为止， 约需6～7次，合并Na2CO3提取液，小心滴加盐酸酸化至pH2~3， 放置待沉淀析出，抽滤收集析出物经水洗涤，抽干移至表面皿上， 干燥后称重。
④
大黄酚和大黄素-6-甲醚的分离
（3）薄层检识
吸附剂：硅胶CMC-Na薄层板。 样品：各蒽醌成分的1%三氯甲烷溶液 对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液 展开剂：苯-醋酸乙酯（8∶2）；苯-甲醇（8∶1） 显色：氨熏后观察或喷5%氢氧化钾溶液后观察
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄蒽醌类成分是指一类存在于大黄根茎中的化学成分，主要成
分包括大黄素、大黄酸与大黄蒽醌等。
提取分离与鉴定这些化学成分
需要以下几个步骤：
1. 样品的准备：采集大黄根茎样品，削去外皮和细根，切碎成小
块或粉碎成粉末状。
2. 提取：将样品加入适量的有机溶剂中进行提取，常用的有机溶
剂有乙醇、乙醚、丙酮等。
提取可以采用不同的方法，比如浸泡提取、超声波提取等。
3. 结晶：将提取得到的药材颗粒溶解在有机蒸馏水中，然后用双
水浴器加热到一定温度，待溶液浓缩到一定程度时，停止加热，继续
搅拌至其冷却结晶。
4. 分离：用过滤或分离漏斗等方法将结晶物分离出来，再用洗涤
剂或其他方法对其进行提纯。
5. 鉴定：利用色谱法、红外光谱法、核磁共振法等手段对所提纯
的化合物进行鉴定，确定其结构和成分。
以上是大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定的基本步骤，可以根据
实际情况进行调整和优化。
天然药化大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
滤渣
滤液 滤液移入 500ml 的蒸馏烧瓶中，体积勿超 过瓶容积的 1/2， 常压下回收乙醇至糖浆状 （勿太稠厚） ，得乙醇总提物。加入乙醚 60ml（丙酮 10ml） ，时时振摇，将上层乙 醚液倾入另一三角烧瓶中，残渣加乙醚 40ml（丙酮 2ml） ，合并乙醚提取液。 总游离蒽醌
2．游离蒽醌的分离 乙醚提取物 （1）5%NaHCO3 水溶液萃取 3 次
OH
O
OH
CH3O O
CH3
大黄素-6-甲醚（Physcion） 4．大黄酚（Chrysophanol） 本品六方形或单斜形结晶（乙醇或苯） ，熔点 196℃；具升华性，几乎不溶于水，略溶 于冷乙醇，易溶于沸乙醇，溶于苯、氯仿、乙醚及丙酮等。
OH
O
OH
CH3 O
大黄酚（Chrysophanol） 5．芦荟大黄素（Aloe emodm） 橙色针状结晶（甲苯） ，熔点 223-224℃。易溶于热乙醚中。在乙醚及苯中呈黄色，氨 水及硫酸中呈绯红色。
OH HO O OH
OH
OH OO
O CH2 OO OH OH OH
OH HO O OH OH O OH
CH3 OH OH
芦丁(rutin)
槲皮素（quercetin）
CH2O H O
OH O
OH
OH
H OH
OH
CH3
H OH
OH OH
葡萄糖
鼠李糖
三、实验内容（12 学时） 1．芦丁的提取、精制 槐花米粗粉（60g） 置 1000ml 烧杯中，加水 600ml，加入石灰乳（大约 2-3g） ，搅拌， 调 PH8-9，加热至微沸，保持 30 分钟（维持 PH8-9）趁热先用脱 脂棉过滤，然后抽滤。
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄（Rhizoma Rhei）是一种常用中药，主要含有蒽醌类化合物，如大黄素、大黄酚、大黄酸等。
提取、分离和鉴定大黄中的蒽醌类化合物的常用方法如下：
1. 提取：将大黄粉末与适量的乙醇或乙醚等有机溶剂进行浸泡提取，较常用的是乙醚提取。
在恒温搅拌的条件下，将大黄与乙醚按一定比例混合30分钟以上，然后进行过滤，过滤液即为提取液。
2. 分离：提取液中含有大黄中的多种化合物，其中包括蒽醌类化合物。
为了分离和纯化蒽醌类化合物，通常采用柱层析、薄层层析等技术。
柱层析是将提取液通过填料（如硅胶、活性炭等）柱进行洗脱，根据化合物在柱上的亲疏性和相互间作用力的差异，逐步分离目标化合物。
薄层层析则是将提取液涂抹在硅胶或其他载体上的薄层，再通过浸泡，将化合物分离开。
3. 鉴定：分离到目标化合物后，可以通过理化性质和光谱分析进行鉴定。
常用的鉴定方法有红外光谱（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）等。
红外光谱可以用于确定化合物的官能团，质谱可以用于分析分子的质量和结构信息，核磁共振则可以提供化合物的详细结构信息。
以上是大黄中蒽醌类化合物的提取、分离和鉴定的常用方法，通过这些方法可以对大黄中的蒽醌类化合物进行有效地提取、分离和鉴定。
大黄中蒽醌类成分的提取 - 大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴别
e.显色：在可见光下观察，记录黄色斑点出现的位置，然后用浓氨水熏 或喷5%醋酸镁甲醇溶液，斑点显红色。
f.观察记录：记录图谱并计算Rf值。
四、思考题
1．大黄中5种羟基蒽醌化合物的酸性和极性大小应如 何排列?为什么?
2．pH梯度法的原理是什么?适用于哪些中药成分的分离?
三、操作要点
1.提取、分离流程（如图一）
2.总蒽醌苷元的提取
大黄粗粉100 g，加20％硫酸溶液300 ml润湿，再加氯 仿500 ml，回流提取2hr，稍冷后过滤，残渣弃去，氯仿提 取液于分液漏斗中，分出酸水层，得氯仿提取液。
图1.大黄提取分离流程图
3.蒽醌苷元的分离和精制
（1）蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验
（2）分离与精制
a.大黄酸的分离和精制
将含有总蒽醌的氯仿液450 ml于1000 ml分液漏斗中，加pH 8缓冲液150 ml充分振摇，静置至彻底分层，分出碱水层置250 ml烧杯中，在搅拌下滴 加20％盐酸至pH 3，待沉淀析出完全后，过滤，并用少量水洗沉淀物至洗 出液呈中性，沉淀干燥后，样品加冰醋酸10 ml加热溶解，趁热过滤，滤液 放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，得黄色针晶为大黄酸。
b.醋酸镁试验 分别取蒽醌结晶数毫克，置于小试管中，各加乙醇l ml使 溶解，滴加0.5％醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化。
(2)色谱鉴识
a.薄层板：硅胶G-CMC-Na板。
b.点样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的 氯仿溶液及各对照品氯仿溶液。
c.展开剂：石油醚－乙酸乙酯－甲酸（15:5:1）上层溶液。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴别
一、实验目的 1. 掌握蒽醌苷元的提取方法——酸水解法。 2. 掌握缓冲纸色谱的原理及基本操作技术。 3. 掌握pH梯度萃取法的原理及操作技术。 4. 通过大黄酚和大黄素甲醚的分离实验，熟悉柱色 谱的操作技术。 5. 熟悉蒽醌类化合物的鉴定方法。
大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定
5%NaHCO3水溶液萃取3次，每次40、 30、30ml，至水层颜色变浅
乙醚层
5%Na2CO3水溶 液萃取3次，每 次40、35、35ml
碱水层
酸化，抽滤 水洗，干燥
沉淀Ⅱ 大黄素
乙醚层
2021/4/9
碱水层
滴加HCl酸化，静置沉淀，抽 滤，水洗至中性，干燥
沉淀I，大黄酸 乙醚层
2%NaOH水溶液萃取3次， 每次30ml，
大黄中蒽醌类成分的提取分 离与鉴定
天然药物化学教研室
2021/4/9
1
实验目的
1．掌握PH梯度萃取的原理及操作技术； 2．掌握蒽醌类化合物鉴定方法； 3.了解液液萃取法分离混合物的实验方法；
2021/4/9
2
实验原理
利用乙醇为提取溶剂，可把不同类型性质互异的蒽醌类成 分提取出来；
总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度，故回收乙醇后得总 提取物可用乙醚提取总苷元；
2021/4/9
7
思考题
❖ PH梯度萃取的原理是什么？ ❖ 大黄中各蒽醌化合物的酸性及极性强弱顺序如何？ ❖ 根据大黄中所含五种羟基蒽醌的结构，说明为什么
它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？
2021/4/9
8
感谢您的阅读收藏，谢谢！
2021/4/9
9
根据蒽醌衍生物的酸性强弱，用不同的碱液进行萃取，最 后得到不同的蒽醌苷元。
2021/4/9
3
实验方法
1、大黄中总蒽醌成分的提取分离
大黄粗粉100g
置1000ml 圆底烧瓶中，加入95%乙醇250ml， 回流提取2hr，趁热抽滤
醇液
药渣
加入95%乙醇200ml，回流提取1.5hr， 趁热抽滤
实验四--大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
实验四大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、概述植物来源：大黄系蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatum L．)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim. ex Balf．)或药用大黄(Rheum offcinale Baill．)的干燥根及根茎。
大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，具有泻下、健胃、清热解毒等功效。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典收载的世界性药材。
功效：大黄具有多方面的生物活性，其抗菌、抗感染及抗肿瘤活性有效成分主要为蒽醌类衍生物，如：大黄酸、大黄素和芦荟大黄素；止血的主要有效成分为大黄酚；泻下的有效成分是结合型的蒽苷类。
蒽醌类衍生物占大黄总化学成分的3％～5％，该类成分少部分以游离状态存在，大部分与葡萄糖结合成苷的形式存在。
此外，大黄还含有鞣质等多元酚类化合物，含量在10％一30％之间，具止泻作用，与蒽苷的泻下作用恰恰相反。
主要化学成分的结构及物理性质大黄中含有多种游离的羟基蒽醌及其与糖所形成的苷类化合物，已知的游离羟基蒽醌主要有以下5种化合物。
大黄酸(rhein)，C15H806，黄色针晶，m.p321—322℃(330℃分解)，UVλmax431，258，231，204。
可溶于碱水，微溶于乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚，不溶于水。
大黄素(emodin)，C15H1005，橙黄色针晶(乙醇)，m.p256—257℃。
UVλmax436，289，266，253，222。
可溶于碱水，微溶于乙醚、三氯甲烷，不溶于水。
芦荟大黄素(aloe emodin)，橙色针晶(甲苯)，m.p223～224℃。
UVλmax429，287，254，225，202。
可溶于乙醚、苯及碱水，不溶于水。
大黄素甲醚(physcion)，砖红色单斜针状结晶(苯)，m.p205—207℃。
溶于苯、三氯甲烷及甲苯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮，不溶于水。
回流法提取大黄总蒽醌类成分的工艺研究
回流法提取大黄总蒽醌类成分的工艺研究本研究采用回流法提取大黄总蒽醌类成分。
通过单因素实验和正交试验优化提取工艺条件，得到最佳提取条件为：乙醇浓度60%、提取时间3h、料液比1:10、提取温度80℃。
在此条件下，大黄总蒽醌类成分的提取率为7.86%，总蒽醌类成分的含量为1.57%。
本研究为大黄的提取工艺提供了参考。
关键词：大黄；总蒽醌类成分；回流法；提取工艺引言大黄是一种常用的中药材，具有泻下通便、清热解毒、消肿止痛等功效。
大黄中主要成分为大黄素、大黄酚、大黄酸等，其中大黄素和大黄酚是总蒽醌类成分，是大黄的主要活性成分。
因此，提取大黄总蒽醌类成分对于大黄的药用价值和应用前景具有重要意义。
目前，提取大黄总蒽醌类成分的方法主要有超声波提取法、微波辅助提取法、水提取法、酸碱提取法、醇提取法等。
其中，醇提取法具有操作简单、成本低、提取效果好等优点，是目前应用较广泛的提取方法之一。
回流法是醇提取法中常用的一种方法，具有提取效率高、操作简便等优点，因此在本研究中采用了回流法提取大黄总蒽醌类成分。
实验方法1. 材料与仪器大黄：购自当地药材市场，粉碎后筛选。
乙醇：优级无水乙醇，购自化学试剂公司。
水浴锅：型号为DZKW-2，购自实验室仪器公司。
紫外分光光度计：型号为UV-1800，购自分析仪器公司。
2. 提取方法将大黄粉末称取5g，加入250mL三口瓶中，加入60%乙醇，料液比1:10，回流3h，提取温度80℃。
提取液过滤，取滤液10mL，定容至100mL，用紫外分光光度计测定吸光度，计算提取率和总蒽醌类成分的含量。
3. 实验设计本研究采用单因素实验和正交试验优化提取工艺条件。
单因素实验中，提取时间、乙醇浓度、料液比、提取温度分别作为研究因素，其他条件不变，每个因素设置3个水平，进行提取实验。
正交试验采用L9(34)正交表，共进行9次实验，优化提取条件。
结果与分析1. 单因素实验结果提取时间、乙醇浓度、料液比、提取温度对大黄总蒽醌类成分的提取率和总蒽醌类成分的含量的影响如表1所示。
大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定
氯仿层
同*
+3%NaOH300mL
沉淀3
乙酸乙酯精制 碱水层
氯仿层
芦荟大黄素
同*
沉淀4
实 验 内 容（二）
蒽醌苷元的分离和精制（3）
柱层析法分离大黄酚、大黄素甲醚
装柱（湿法装柱）
：2）
洗脱剂2 石油醚-乙酸乙酯（95：5）
流份检查（合并相同流份）
大黄中蒽醌类成分的提取、 分离和鉴定
中药化学与分析教研室
实验目的
掌握蒽醌苷元的提取方法——酸水解法 掌握PH梯度萃取法的原理和操作技术 掌握缓冲纸色谱的原理和基本操作技术 通过大黄酚、大黄素甲醚的分离实验，熟悉
柱层析的操作技术 熟悉蒽醌类化合物的鉴定方法
实验内容
总蒽醌苷元的提取 蒽醌苷元的分离和精制 蒽醌类成分的鉴定
B大黄素（emodin）
R1= OH
C大黄素甲醚（physcion）
R1=OCH3
D芦荟大黄素（aloe-emodin） R1=H
E大黄酸（rhein）
R1=H
酸性E>B>D>A≈C
R2= CH3 R2= CH3 R2= CH3 R2=CH2OH R2=COOH
实 验 内 容（一）
总蒽醌苷元的提取
实 验 内 容（三）
大黄蒽醌类成分的鉴定
（1）化学鉴定 （2）色谱鉴识
实 验 内 容（三）
大黄蒽醌类成分的鉴定（1）
化学鉴定
①碱液试验：
样品＋2%NaOH ②醋酸镁试验：
颜色变化
样品（乙醇溶解）＋0.5％醋酸镁 颜色变化
实 验 内 容（三）
大黄蒽醌类成分的鉴定（2） 色谱鉴识
薄层板：硅胶G板 点 样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素
大黄总蒽醌乙醇提取工艺优化实验
大黄总蒽醌乙醇提取工艺优化实验大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根及根茎，为临床常用中药，药用历史悠久，功效独特，张景岳将它与附子列为“乱世之良将”与“治世之良相”，同人参、熟地共称“药中之四维”，认为“病而至于可畏，势非庸庸所济者，非此四物不可”[1]。
大黄中的有效成分有蒽醌类、芪类、苯丁酮类、鞣质类、色原酮类、萘类、有机酸、糖、蛋白质、甾醇等一百五十多种成分[2]，其中起主要作用的为蒽醌类成分。
有关大黄总蒽醌的提取方法的报道甚多，传统多为水提法。
赵文萍[3]等报道了正交试验法优选大黄提取工艺，均表明大黄渗漉法明显优于水提法，但渗漉法耗时长，不利于工作效率的提高。
黄园等[4]通过正交试验法探讨了水提和醇提对大黄蒽醌提取率的影响，认为醇提对大黄蒽醌类成分的提取效果要优于水提，以80%乙醇为优，且煎煮时间均不宜过长，控制在1 h左右为宜。
本实验同时运用单因素试验法及正交试验法优化大黄总蒽醌醇提工艺。
以总蒽醌含量为考察指标，以紫外分光光度法为测量手段，先通过单因素考察出适合大黄蒽醌类成分提取的温度、粒度及乙醇浓度，再通过正交试验设计优化乙醇提取大黄总蒽醌工艺，从而为日后的蒽醌类成分分离纯化奠定基础。
医学类论文发表1材料1.1仪器与试剂Spectronic GENESYSTM2紫外分光光度计(美1国);SHIMADZU CORPORATION AEG-220万分之一电子分析天平(日本导津);Sartorius BP211D十万分之一天平(瑞士);CQ-200超声清洗仪(上海音波声电科技公司);HH恒温水浴锅(江苏金坛市中大仪器厂)。
所用试剂分析纯来自天津市富宇精细化工有限公司;所用水为双蒸水。
1.2药材与对照品大黄由广州致信中药饮片有限公司提供，经鉴定为四川产药用大黄R. officinale Baill.的干燥根茎。
1,8-二羟基蒽醌对照品(0829-9702)由中国药品生物制品检定所提供;所用试剂分析纯来自天津市富宇精细化工有限公司;所用水为双蒸水。
实验八 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
将含有游离蒽醌的乙醚溶液移至250ml的分液漏斗中，加5% NaHCO3水溶液20ml，振摇。放置分层，放出下层NaHCO3溶 液，置于另一三角瓶中，上层乙醚溶液留存于分液漏斗中，再加 5%NaHCO3溶液15ml萃取一次，每次振摇提取后，放置分层时 间应稍久，以免乙醚溶液混在下层水液中，影响分离效果。提取 过程中，如乙醚挥发，可酌量补加。合并NaHCO3提取液，注意 其呈色，在搅拌下小心滴加盐酸调pH2~3，观察酸化过程中的呈 色变化，析出物抽滤收集，干燥后称重。
（3）薄层检识
吸附剂：硅胶CMC-Na薄层板。 样品：各蒽醌成分的1%三氯甲烷溶液 对照品：1%大黄酸三氯甲烷溶液；1%大黄素三氯甲烷溶液； 1%芦荟大黄素三氯甲烷溶液 展开剂：苯-醋酸乙酯（8∶2）；苯-甲醇（8∶1） 显色：氨熏后观察或喷5%氢氧化钾溶液后观察
（4）纸色谱检识
支持剂：新华色谱滤纸（中速、20cm×7cm） 样品：各蒽醌成分1%三氯甲烷溶液
②
大黄素的分离
留存在分液漏斗中的乙醚液，用5%Na2CO3水溶液每次 15～20ml如上法相同萃取数次，直至提取液呈色较浅时为止， 约需6～7次，合并Na2CO3提取液，小心滴加盐酸酸化至pH2~3， 放置待沉淀析出，抽滤收集析出物经水洗涤，抽干移至表面皿上， 干燥后称重。
④
大黄酚和大黄素-6-甲醚的分离
（三） 蒽醌类化合物的提取与分离
蒽 醌 的 提 取 与 分 离
提取方法
有机溶剂提取法
碱溶酸沉法
游离蒽醌 的分离
利用PH梯度萃取 法分离 利用色谱法分离
分离方法
蒽醌苷和游离 蒽醌的分离
蒽醌苷 的分离
（三） 蒽醌类化合物的提取与分离
提取方法 分离方法
有机溶剂 提取法 常用甲醇或 乙醇提取， 可将不同极 性或类型的 醌类成分都 提取出 来，得到总 醌类再进行 分离。
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· 612 · China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 7
中国药房 2010 年第 21 卷第 7 期
HPLC 仪，以进样量（X，µg）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐
标，进行线性回归。样品线性关系考察结果见表 1。 表 1 样品线性关系考察结果
Tab 1 Linear relation of samples
ABSTRACT OBJECTIVE：To study extraction method of anthraquinones components of Radix et Rhizoma Rhei and optimize extraction technology. METHODS：Ultrasonic extraction，heating reflux extraction and soxhlet extraction were adopted to extract Radix et Rhizoma Rhei respectively. 3 kinds of extraction technology were compared with the content of total anthraquinone， aloe- emodin，rhein，emodin，chrysophanol，physcione as index. The extraction technologies of UV and 5 kinds of anthraquinone compounds were optimized by uniform design method on the basis of previous study. RESULTS：Heating reflux extraction which was optimal extraction technology was as follows：extracting time of 90 min，extracting for 1 time，methanol concentrations of 95％ ，medicinal mesh of 2.000 7. Comprehensive score of anthraquinones could reach 6.556.CONCLUSION：The extraction technology is reasonable，available in quality control. KEY WORDS Radix et Rhizoma Rhei；Anthraquinones components；Heating reflux extraction；Uniform design
表 2 3 种方法提取大黄中蒽醌类成分的含量比较（mg·g- 1） Tab 2 Comparison of content of anthraquinones extracted from Radix et Rhizoma Rhei by 3 kinds of extraction techn-
ologies（mg·g- 1）
r 0.999 2 0.999 7 0.999 1 0.999 5 0.999 2
线性范围/μg 0.32～160.00 0.24～120.00 0.32～160.00 0.728～364.00 0.312～156.00
2.1.4 含量的测定：精密吸取供试品溶液 1 mL，置于具塞试管 中，按“2.1.3”项下方法操作，测定吸光度，代入回归方程，计算
斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取 3 次，每次 10 mL，合并三氯甲烷液，用适量蒸馏水洗至中性，减压回收溶剂 至干，残渣加甲醇使溶解，转移至 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻
度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.2.2 索氏提取法：精密称取大黄粉末 1.5 g（过 4 号筛），置索 氏提取器中，精密加入甲醇 100 mL，提取至无色，放冷，滤过。 精密取续滤液 20 mL，置烧瓶中，挥去溶剂，加 8％盐酸溶液 10 mL，超声处理 2 min，再加三氯甲烷 10 Optimizing Extraction Method and Uniform Design of Anthraquinones Components of Radix et Rhizoma Rhei CUI Hong-hua，WANG Shu-mei（College of TCM，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006， China） ZHAO Ying-r（i College of International Education，Guangzhou University of TCM，Guangzhou 510405，China）
成分
回归方程
芦荟大黄素 Y＝6 884.543 07+4.317 43×106X
大黄酸 Y＝2 422.328 21+2.318 8×106X
大黄素 Y＝467.017 1+1.048 74×106X
大黄酚 Y＝20 856.999 86+6.861 45×105X
大黄素甲醚 Y＝5 645.664 1+3.566 86×106X
2.3 均匀设计试验优化加热回流提取工艺参数 为 了 确 定 最 佳 工 艺 条 件 ，选 取 提 取 时 间（A）、提 取 次 数
2 方法与结果
2.1 总蒽醌含量测定 2.1.1 色谱条件：色谱柱为 Kromasil C1（8 250 ㎜×4.0 ㎜，5 μ m），柱温为室温，流动相为甲醇- 0.05％磷酸（75 ∶ 25），检测波 长为 254 nm，流速为 1.0 mL·min- 1。 2.1.2 对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大 黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品各适量，加甲醇使溶解，分别 制成每 1 mL 含 0.016、0.012、0.016、0.036 4、0.015 6 mg 的对照 品溶液。 2.1.3 标准曲线的制备：分别精密吸取各对照品溶液，注入
编号
提取方法 芦荟大黄素 大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚
1
加热回流法 0.214 2 0.023 8 1.012 2 9.357 7 0.369 9
2
索氏提取法 0.059 5 0.008 2 0.341 9 3.000 8 0.116 2
3
超声法
0.026 4 0.008 5 0.272 6 3.090 0 0.121 0
1 材料
1.1 仪器 LC- 2000 型高效液相色谱（HPLC）仪，包括四元梯度泵、
＊讲师，博士。研究方向：中药及中药制剂的分析研究与资源开 发。E- mail：honghuacui@
# 通讯作者：教授，博士。研究方向：中药复方药效物质基础及新 药开发。电话：020- 39352177。E- mail：shmwang@
样品含量。 2.2 提取方法的选择 2.2.1 加热回流法：精密称取大黄粉末 1.5 g（过 4 号筛），置具 塞圆底烧瓶中，精密加入甲醇 25 mL，称重，加热回流 1 h，放
冷，再称重，用甲醇补足失重，摇匀，滤过。精密量取续滤液 5 mL，置具塞圆底烧瓶中，挥去溶剂，加 8％盐酸 10 mL，超声处 理 2 min，再加三氯甲烷 10 mL，加热回流 1 h，放冷，置分液漏
大黄是萝科植物掌叶大黄 Rheum palmatum L.、唐古特大 黄 Rheum tanguticum Maxim. ex Balf.、药 用 大 黄 Rheum oficinale Bail.的干燥根及根茎[1]。大黄有泻热通肠、凉血解毒、 逐瘀通经的功效，现代药理学研究表明其具有导泻、保肝利 胆、抗菌、抗病毒、抗炎、活血止血、降血脂、抗肿瘤等多种生理 活性[2，3]。大黄的泻下、抗炎、抗菌、抗病毒、降血压、减肥等作 用均与蒽醌类成分有关，它是大黄主要有效成分。传统煎煮方 法要求大黄后下，提示其有效成分可能对热敏感。煎煮时间、 煎煮方式对大黄提取物中蒽醌类成分含量影响较大[4]。本研 究考察了超声法、加热回流法和索氏提取法提取大黄中蒽醌 类成分的优劣；并在此基础上进行了加热回流提取的均匀设 计试验，考察了提取时间、提取次数、甲醇浓度、药材粒度对大 黄中蒽醌类成分提取效率的影响，以总蒽醌、芦荟大黄素、大 黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量为考察指标，对提取工 艺进行了优选。
大黄蒽醌类成分的提取方法筛选及均匀设计优化工艺研究
崔红花 1＊，赵英日 2，王淑美 1（# 1.广东药学院中药学院，广州市 510006；2.广州中医药大学国际学院，广州市 510405）
中图分类号 R283；R284
文献标识码 A
文章编号 1001- 0408（2010）07- 0612- 03
摘 要 目的：研究大黄中蒽醌类成分的最佳提取方法并优化其提取工艺。方法：分别用超声法、加热回流法和索氏提取法对大黄 进行提取，以总蒽醌、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量为指标比较 3 种提取方法。在此基础上通过均匀设 计法研究总蒽醌（UV）、5 种蒽醌类化合物的提取工艺。结果：加热回流法为最佳提取方法。最佳提取工艺为提取时间 90 min、提取 次数 1 次、甲醇浓度 95％、药材目数 2.000 7 目，蒽醌类成分综合评分可达 6.556 分。结论：该提取工艺设计合理，质量易于控制。 关键词 大黄；蒽醌类成分；加热回流法；均匀设计法
甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用
三氯甲烷提取 3 次，每次 10 mL，合并三氯甲烷液，用适量蒸馏 水洗至中性，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.2.4 方法比较：结合标准曲线及求得的含量可知，以上 3 种 方法提取蒽醌类成分总体得率由高到低为：加热回流法＞索 氏提取法≥超声法。采用加热回流法提取时 5 种成分含量均 明显高于其他 2 种方法，是索氏提取法的 3 倍左右。索氏提取 法与超声法比较，除芦荟大黄素含量是超声法的 2.25 倍外，其 它成分含量基本接近。结果表明，加热回流提取法为最佳提取 方法。3 种方法提取大黄中蒽醌类成分的含量比较见表 2。