利用SDS_PAGE鉴定水稻品种组合的真实性和纯度
水稻叶片质膜的纯化及质膜蛋白质双向电泳分析
水稻叶片质膜的纯化及质膜蛋白质双向电泳分析水稻是我国最主要的农作物之一，它拥有丰富的营养元素和优良的加工性能，它正直接影响着人们的健康。
水稻叶片质膜是水稻细胞中微量物质汇集的地方，包括脂肪酸、糖类、氨基酸、蛋白质等，而这些物质的研究有助于更好地理解水稻叶片的生理功能和生物学过程。
因此，研究水稻叶片质膜的纯化和质膜蛋白的双向电泳分析技术变得越来越重要。
水稻叶片质膜的纯化是指将其中成分保持完整的过程，包括离子溶液分离等技术。
该方法首先利用早期三维结构解析，抽取水稻叶片质膜蛋白质，然后经过离子溶液分离，去除杂质，最后得到纯化的水稻叶片质膜蛋白质。
此外，还可以利用高效液相色谱（HPLC）和聚焦色谱（FPLC）技术对水稻叶片质膜分子进行纯化。
水稻叶片质膜的蛋白质双向电泳分析技术是将质膜蛋白分离并分析其特征结构的一种方法。
该技术首先将蛋白质溶液经过衰减级联电泳（SDS-PAGE）分离，然后将蛋白质溶液再次分离，最后通过检测可见光，得出可读的结果。
其中，聚苯乙烯电泳（PVDF）、聚丙烯电泳（PVDF）以及凝胶电泳（GE）等电泳技术可用于水稻叶片质膜蛋白质双向电泳分析，可以得出准确的结果。
在水稻叶片质膜的研究中，该技术发挥着重要作用。
首先，该技术可以提供更为准确的信息，可以帮助研究人员更好地了解水稻叶片的特征结构。
其次，它可以用于检测水稻叶片中不同蛋白质的数量，从而帮助研究人员更好地了解水稻叶片的生物学功能。
最后，该技术有助于研究者们更好地理解水稻叶片中脂肪酸、糖类和氨基酸等成分的分布情况。
综上所述，水稻叶片质膜的纯化和质膜蛋白的双向电泳分析技术是研究水稻叶片的生理功能和生物学过程的重要工具。
该技术可以为我们提供准确的数据，帮助我们更全面地了解水稻叶片的组成，从而为人们提供更好的营养和健康。
两系杂交水稻品种真实性和种子纯度的检测方法及评价
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两 系法 杂交水 稻 的选 育成 功 ， 水 稻 杂种 优 势 为 利用 开辟 了一 条新 途 径 Ｊ ０多年 来 ， 国两 系 杂 。３ 我 交 水稻 制种 技术 逐渐 完 善 ， 是 由于 光温 敏不 育 系 但
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种子蛋白质电泳在品种纯度鉴定中的应用
种子蛋白质电泳在品种纯度鉴定中的应用种子蛋白质电泳在品种纯度鉴定中的应用种子蛋白质电泳（SDS-PAGE）是一种广泛用于分析蛋白质组学的常见方法。
它以及其衍生的所有形式都已成为生物化学和免疫学实验中不可或缺的工具。
随着研究和开发的不断深入，其重要性也正日益凸显。
近年来，SDS-PAGE在品种纯度鉴定中的应用也越来越广泛。
种子蛋白质电泳在品种纯度鉴定中的应用，主要是通过测定采用SDS-PAGE技术分析不同品种中的蛋白质组成来对样品进行纯度分析。
SDS-PAGE具有高灵敏度、低成本、简便快捷等优势，能够准确检测出各种蛋白质的组成和分子量，用于品种纯度鉴定具有重要意义。
SDS-PAGE首先将样品中的蛋白质用0.1% SDS（十二烷基硫酸钠）和2-mercaptoethanol调节。
然后，将调节后的蛋白液加入凝胶，用固定的电流，在特定的pH和温度下缓慢运行，使蛋白在凝胶中移动，最终形成蛋白质电泳图谱。
经过色谱定位和计量，可以获得蛋白质的分子量以及它们的组成比例，从而为品种纯度鉴定提供可靠的依据。
根据蛋白质电泳的原理，结合不同品种种子中蛋白质的组成结构，采用SDS-PAGE电泳技术，可以分析出不同品种种子中蛋白质的组成和比例，从而对种子来源进行有效的鉴定。
例如，在水稻品种纯度鉴定中，可以通过SDS-PAGE电泳技术对水稻种子中的蛋白质组成进行比较，以此来鉴定水稻品种的纯度。
水稻种子中的蛋白质以globulin、glutelin、albumin等为主，其中globulin含量最高，glutelin含量次之，而albumin含量最低。
根据SDS-PAGE 测定的蛋白质比例，可以知道水稻种子中globulin、glutelin和albumin的比例，并且可以分析出不同品种水稻种子中蛋白质的组成比例，从而对其品种纯度进行鉴定。
另外，SDS-PAGE电泳法还可以用于棉花品种纯度鉴定中。
棉花种子中的蛋白质主要有globulin、glutelin、albumin三种，其中globulin和glutelin的比例是棉花品种的重要特征。
一种利用水稻种子快速检测分子特征和品种纯度的方法[发明专利]
![一种利用水稻种子快速检测分子特征和品种纯度的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/af078c0b102de2bd9705881f.png)
专利名称：一种利用水稻种子快速检测分子特征和品种纯度的方法
专利类型：发明专利
发明人：季静,张思琪,王罡,张松皓
申请号：CN201910872688.5
申请日：20190916
公开号：CN110616274A
公开日：
20191227
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种利用水稻种子快速检测分子特征和品种纯度的方法，步骤：(1)水稻种子PCR模板的制备：将水稻种子放于水中浸泡，取1粒加NaOH溶液，NaOH溶液的溶剂为含有EDTA的水，研碎，加热，冷却至室温，加入Tris‑HCl，涡旋混匀，室温下离心，取上清加入(NH)SO水溶液，即为水稻种子PCR模板；(2)PCR扩增，得到扩增产物；(3)产物检测：将扩增产物电泳分析，得到检测结果。
本发明的方法利于储存，稳定性高。
本发明的方法所需材料较少、成本较低、操作较简便快捷，能够在短时间内处理大量的样本，因此能够对大量的水稻样品进行分子特征和品种的种子纯度检测。
申请人：天津大学
地址：300072 天津市南开区卫津路92号
国籍：CN
代理机构：天津市北洋有限责任专利代理事务所
代理人：曹玉平
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水稻清蛋白电泳鉴定方法及应用
水稻清蛋白电泳鉴定方法及应用水稻是世界上最重要的粮食作物之一，对水稻的品质的鉴定和研究对于提高水稻产量、提高品质至关重要。
水稻清蛋白电泳鉴定方法是一种常用的鉴定水稻清蛋白组分的方法，具有灵敏度高、分辨率高、操作简便等优点。
本文将详细介绍水稻清蛋白电泳鉴定方法及其应用。
水稻的清蛋白主要由谷蛋白、珍珠蛋白和球蛋白等组成。
水稻清蛋白电泳鉴定方法主要利用电泳原理和分子量差异，通过将水稻清蛋白样品分离电泳，进而确定水稻清蛋白的组成及其分子量。
具体步骤如下：1. 样品准备：将水稻籽粒研磨成细粉后，加入适量的提取缓冲液使其成为悬浮液。
悬浮液中的水稻清蛋白将被释放到缓冲液中。
2. 样品处理：将悬浮液离心，去除杂质。
取上清液后，进行加热处理，以去除一些非特异性蛋白质。
3. 准备电泳胶：根据需要选择合适的电泳胶，如聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）或聚丙烯酰胺凝胶双隔离梯度电泳（SDS-PAGE）。
4. 样品加载：将上一步得到的样品按照一定比例和一定量加载到电泳胶中。
5. 电泳：将电泳胶放入电泳槽中，加入适量的电泳缓冲液，连接电源进行电泳。
根据需要选择合适的电泳条件，如电流、电压和电泳时间等。
6. 显色：电泳结束后，将电泳胶取出，进行染色和显色。
常用的染色方法有银染色、考马斯亮蓝染色等。
7. 分析和解读：使用分子量标记物作为参照，通过对电泳胶的显色带进行分析和解读，确定水稻清蛋白的组成及其分子量。
1. 鉴定水稻品种的谷蛋白和珍珠蛋白的组成及其分子量，有助于评估水稻品种的营养价值和加工品质。
2. 研究水稻谷蛋白和珍珠蛋白的多态性和遗传变异，为选育高蛋白水稻品种提供理论依据。
3. 分析不同品种的水稻在谷蛋白和珍珠蛋白组分上的差异，为选育不同用途的水稻品种提供参考。
4. 研究环境因素对水稻谷蛋白和珍珠蛋白的组成和含量的影响，了解环境因素对水稻品质的影响机制。
杂交水稻品种真实性和纯度的SSR分子标记鉴定
SSR引物来自中华人民共和国农业行业标准NY/ T1433-2007上公布的引物序列，并由上海英骏生物技术有 限公司合成。PCR反应体积为10µL，其中含模板1.0µL (浓 度为50ng/µL)，2*Taq PCR MasterMix 6.0µL(天根生化科技， 北京), 正反向引物各0.5µL(50ng/µL)。PCR反应条件为94℃变 性4min，94℃变性30s，56℃ 退火30s，72℃延伸1min，34 个循环，再72℃延伸7min，12℃保存。PCR扩增完成后， 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，经银染后观察统计带型。 1.2.4 田间种植鉴定
33 311 真实性不合格 性状不典型
34 350
未检测
性状不典型 无标准样品
35 359 真实性不合格 性状不典型
36 362
未检测
性状不典型 无标准样品
37 363
未检测
性状不典型 无标准样品
38 365
未检测
性状不典型 无标准样品
39 366
未检测
性状不典型 无标准样品
40 367
未检测
性状不典型 无标准样品
17 216 真实性不合格 性状不典型
18 217 真实性不合格 性状不典型
水稻清蛋白电泳鉴定方法及应用
水稻清蛋白电泳鉴定方法及应用
水稻清蛋白是指水稻中无任何杂质的纯净蛋白质。
清蛋白电泳是一种常用的水稻清蛋白鉴定方法，通过电泳将蛋白质分离，然后观察其迁移行为，从而确定水稻中的清蛋白。
水稻清蛋白电泳鉴定方法一般包括以下步骤：
1. 蛋白提取：将水稻样品研磨并加入提取缓冲液，震荡搅拌，离心收集上清液即可获得蛋白提取物。
2. SDS-PAGE电泳：将蛋白提取物与样品缓冲液混合，并加热至95℃，然后将混合物加入凝胶孔中。
通过电泳过程中的电流作用，蛋白分子将根据其分子量的大小而迁移，从而在凝胶上形成带状的蛋白条带。
3. 凝胶染色：将电泳完毕的凝胶进行染色，常用的染色方法有银染和胶体银染。
染色后的凝胶通过特定的显像方法观察条带的分布情况。
水稻清蛋白电泳鉴定方法的应用包括以下几个方面：
1. 水稻品种鉴定：通过对不同水稻品种的清蛋白进行电泳分析，可以得到不同品种之间清蛋白的区别，从而实现水稻品种的鉴定。
2. 水稻性状分析：不同性状的水稻在清蛋白电泳图谱上可能会有不同的条带分布，通过对比分析，可以探究不同性状的水稻在蛋白质水平上的差异。
3. 水稻突变体鉴定：通过清蛋白电泳分析不同突变体与野生型水稻的差异，可以鉴定突变体的性质及其对水稻清蛋白的影响。
4. 遗传多样性研究：通过清蛋白电泳对不同地理种质、不同时期的水稻进行分析，可以了解不同种质之间的遗传多样性，为水稻遗传改良提供基础数据。
水稻清蛋白电泳鉴定方法是一种先进的技术手段，可以对水稻中的清蛋白进行鉴定和分析，为水稻的品种鉴定、性状分析、突变体鉴定和遗传多样性研究提供了可靠的依据。
杂交水稻种子真实性与纯度鉴定
杂交水稻种子真实性与纯度鉴定赖元洪（福建省上杭县南阳农业技术推广站，364211）摘要：分析比较当下杂交水稻种子真实性及品种（组合）纯度鉴定的常用方法，探讨种子真实性及品种（组合）纯度鉴定技术的发展思路。
关键词：杂交水稻；种子真实性；品种纯度；鉴定方法杂交水稻种子是指采用高纯度优质不育系作母本，强配合力优良恢复系作父本规模杂交制种生产，从母本植株上收获的F 1种子（颖果），但从其F 1植株上收获的子粒（F 2）为不具种用价值的颖果，与常规稻种子存在本质区别。
杂交水稻种子常温贮存寿命一般8 12个月[1-2]，故需每年繁殖制种，生产繁制（或待播种）的每一批杂交水稻种子，必须取得准确的种子真实性与品种纯度鉴定结果后，才可进入种子市场应用于农业生产，尤其是两系杂交水稻制种生产的种子。
据统计，上杭县2013年杂交水稻种植总面积28559.4hm 2，占水稻复种总面积的82.5%，杂交水稻种子用量456.95t ，其中三系籼型杂交水稻种子占91.4%。
种子检验是确保符合国家种子质量标准的合格种子进入市场应用于农业生产，杜绝不合格种子和假种子进入市场的法定程序。
种子真实性是指所属品种（组合）与文件（标签）描述是否相符合。
品种纯度是指样品中本品种（株穗）数量占供检本作物总数量的百分数。
种子真实性与品种纯度鉴定是种子检验全部（真实性、纯度、净度、含水量和发芽率）项目中的先决和关键项目。
1 杂交水稻种子真实性及品种（组合）纯度鉴定的现状1.1 田间小区种植鉴定 选择品种（组合）特征特性表现最典型的抽穗扬花期，考察小区内种植的全部植株性状，结合幼苗期和成熟期植株特征特性进行比较鉴别，获得田间小区种植种子真实性和品种纯度鉴定结果。
这是目前公认最直观准确和最具权威性的种子真实性和纯度鉴定方法，一般需要一个生长季节才能取得结果。
基本营养型和感温型组合可利用海南省温光资源优势作早春播种种植鉴定，但感光型品种（组合）需下一个生长季节才可取得鉴定结果，鉴定受季节和时间的严格限制，鉴定结果远远滞后于农业生产用种进程。
分子标记技术在快速鉴定杂交稻种真伪和纯度方面的应用[发明专利]
![分子标记技术在快速鉴定杂交稻种真伪和纯度方面的应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1556d58e25c52cc58ad6be16.png)
专利名称：分子标记技术在快速鉴定杂交稻种真伪和纯度方面的应用
专利类型：发明专利
发明人：杨剑波,汪秀峰,李莉,向太和,倪大虎,王永杰,皮桃花,张毅,吴家道
申请号：CN99103764.2
申请日：19990410
公开号：CN1237328A
公开日：
19991208
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种分子标记技术在快速准确鉴定水稻杂交组合/品种真实性和纯度方面的应用，就是将PAPD标记经克隆、测序后设计出稳定的PCR引物，进而利用SCAR标记可在1～2天内对水稻杂交组合/品种的种子进行真实性和纯度鉴定，其准确度与种植鉴定的准确度一样可靠。
本发明可直接应用于杂交水稻不同组合及其亲本的真实性和纯度的鉴定。
申请人：安徽省农业科学院
地址：230031 安徽省合肥市农科南路40号
国籍：CN
代理机构：安徽省专利事务所
代理人：吴启运
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电泳条件及不同胶浓度配制
试剂配制：（1）30%聚丙烯酰胺贮液：将聚丙烯酰胺（电泳级）150g，N,N′—甲叉双丙烯酰胺（电泳级）4g溶剂于400ml双蒸水中，补充双蒸水至500ml，滤纸过滤后，于棕色瓶中4℃避光保存。
（2）1.5mol/l Tris碱（pH8.8）：将90.75Tris碱溶解于400ml双蒸水中，用1mol/l HCl调至pH8.8，补充双蒸水定容至500ml，4℃冰箱保存。
（3）1.0mol/l Tris碱（pH6.8）：将12.1Tris碱溶解于80ml双蒸水中，用1mol/l HCl调至pH6.8，补充双蒸水定容至100ml，4℃冰箱保存。
（4）10%SDS：将10gSDS溶剂于100ml双蒸水中，混匀后，室温保存。
（5）10%过硫酸铵：将0.1过硫酸铵（电泳级）溶解于1ml双蒸水中（用时加水溶解），4℃冰箱保存。
（6）10倍电泳缓冲液（25mmolTris,192mmol甘氨酸，0.1%SDS，pH8.3）：在10L大玻璃管中加8L双蒸水，303gTris碱，1442g甘氨酸，100gSDS溶解后调pH8.3补水至10L，混匀后，室温保存。
（7）样品缓冲液：将1.6ml10%SDS，0.8ml甘油，1.0ml1.0mol/l Tris（pH6.8），加入到4.0ml 双蒸水中，加0.01%溴酚蓝，0.4ml巯基乙醇。
（8）染色液配制0.25%考马斯亮蓝（CCB）染色液：考马斯亮蓝R-250甲醇-醋酸混合液。
取1.25g考马斯亮蓝R-250，溶于227ml蒸馏水中，加甲醇227ml，再加入冰乙酸46ml（近似5:5:1）搅拌使其充分溶解，室温保存备用。
（9）脱色液配制：甲醇：水：醋酸=5:5:1混合备用。
或用20%乙醇水溶液。
实验步骤1待测蛋白样品制备（1）根据每种方法提取的蛋白，用含SDS的样品缓冲溶液溶解，充分溶解后沸水加入3-5min，1600r/min离心5min，取3上清液进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
杂交稻种子纯度能鉴定
高质量的杂交稻种子可以显著提高水稻的产量和品质，从而满足人们对粮食的需 求，提高农业生产效益。
维护农民的利益
杂交稻种子纯度能 鉴定
2023-11-11
目 录
• 杂交稻种子纯度鉴定的重要性 • 杂交稻种子纯度鉴定的方法 • 杂交稻种子纯度鉴定的技术流程 • 杂交稻种子纯度鉴定的应用 • 杂交稻种子纯度鉴定的发展趋势 • 杂交稻种子纯度鉴定案例分析
01
杂交稻种子纯度鉴定 的重要性
保证农业生产的质量和产量
维持种群的优良基因型。
提高繁殖效率
通过杂交稻种子纯度鉴定，可以 筛选出优良的杂交后代，提高繁 殖效率和品质，为农业生产提供
更多优质的种源。
防止基因污染
对杂交稻种子纯度的准确鉴定可 以防止基因污染，保证品种的纯
正性和稳定性。
种子市场监管与维权
维护市场秩序
杂交稻种子纯度鉴定在种子市场监管中发挥着重要作用，能够有 效地遏制假冒伪劣种子的流通，维护市场秩序和公平竞争。
保障农民权益
通过杂交稻种子纯度鉴定，可以防止农民购买到低质量的种子，保 障农民的合法权益。
打击违法犯罪行为
对杂交稻种子纯度的鉴定可以协助打击违法犯罪行为，防止不法分 子利用伪劣种子进行欺诈和侵权。
05
杂交稻种子纯度鉴定 的发展趋势
建立完善的标准体系和技术规范
制定严格的杂交稻种子纯度鉴定 标准，包括鉴定方法、操作规程 、数据统计等，确保鉴定过程的
02
杂交稻种子纯度鉴定 的方法
水稻清蛋白电泳鉴定方法及应用
水稻清蛋白电泳鉴定方法及应用引言：水稻（Oryza sativa）是人类主要的食物作物之一，近年来，随着人们对水稻清蛋白的研究日益深入，发现了许多与水稻清蛋白相关的功能，如抗氧化、抗肿瘤、抗病毒和抗菌等。
水稻清蛋白的电泳鉴定方法及应用的研究成为当前热门的研究方向之一。
一、水稻清蛋白电泳鉴定方法水稻清蛋白的电泳鉴定方法主要包括两步，即蛋白质提取和蛋白质电泳。
1. 蛋白质提取蛋白质提取是水稻清蛋白电泳鉴定的第一步，最常用的方法是以三氯醋溶液（TCA）进行提取。
具体步骤如下：（1）将水稻的种子或幼苗取出，洗净。
（2）将洗净的种子或幼苗用液氮研磨至粉末状。
（3）将粉末样品加入已配制好的TCA溶液中，浸泡20分钟。
（4）离心，将上清液去除。
（5）用冷乙醇洗涤沉淀，离心。
（6）将沉淀重悬于溶液中。
2. 蛋白质电泳蛋白质电泳是水稻清蛋白电泳鉴定的第二步，最常用的方法是聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。
具体步骤如下：（1）准备好电泳仪和相应的试剂。
（2）将已提取的水稻清蛋白样品加入离子交换载体。
（3）将样品装入电泳槽中，加电进行电泳。
（4）取出电泳后的凝胶，染色。
（5）观察凝胶上的蛋白带，根据不同的迁移速度进行鉴定。
（6）计算蛋白的分子量。
二、水稻清蛋白电泳鉴定方法的应用水稻清蛋白电泳鉴定方法广泛用于研究水稻清蛋白及其功能。
以下是其主要应用的几个方面：1. 分离和鉴定水稻清蛋白通过水稻清蛋白电泳鉴定方法，可以分离和鉴定不同种类的水稻清蛋白，了解其分子量、数量和迁移速度等特征。
2. 研究水稻清蛋白的功能利用水稻清蛋白电泳鉴定方法，可以研究水稻清蛋白的功能，如抗氧化、抗菌、抗肿瘤和抗病毒等功能。
3. 比较不同水稻品种的清蛋白通过水稻清蛋白电泳鉴定方法，可以比较不同水稻品种的清蛋白差异，为选育优良品种提供参考。
4. 研究水稻清蛋白与其他蛋白质的相互作用利用水稻清蛋白电泳鉴定方法，可以研究水稻清蛋白与其他蛋白质的相互作用，深入探究水稻清蛋白在生物体内的功能及其应用前景。
应用RT2PCR,斑点杂交法和SDS2PAGE检测水稻黑条矮缩病毒
应用RT 2PCR 、斑点杂交法和SDS 2PAGE检测水稻黑条矮缩病毒王朝辉1 周益军23 范永坚2 薛宝娣1 吴淑华2 程兆榜2 张文荟2(1南京农业大学植保学院,南京210095;2江苏省农业科学院植物保护研究所,南京210014)摘要:用RT 2PCR 技术、PCR 标记的探针点杂交和S DS 2PAGE 检测了生产上严重危害玉米和水稻的水稻黑条矮缩病毒(R BS DV )。
由RT 2PCR 扩增的R BS DV 第7片段第921～1411碱基作探针,用PCR 法DIG 标记后点杂交,可以从100ng 玉米病叶中检测到R BS DV ,灵敏度是RT 2PCR 的1/10;10%S DS 2PAGE 只能检测到从1g 玉米病叶中提取的病毒dsRNA ,但对江苏玉米田间分离的不同的R BS DV 样品电泳发现,该病毒基因组dsRNA 有差异,表明该技术是研究R BS DV 基因组多样性的简单有效的方法。
关键词:水稻黑条矮缩病毒;检测;RT 2PCR ;斑点杂交;S DS 2PAGE中图分类号:S4351111149 文献标识码:A 文章编号:1000Ο2030(2001)04Ο0024Ο05Detection of rice black 2streaked dw arf Fijivirus by RT 2PCR,dot 2blot hybridization and SDS 2PAGEWang Zhaohui 1,Zhou Y ijun 23,Fan Y ongjian 2,Xue Baodi 1,Wu Shuhua 2,Cheng Zhaobang 2and Zhang Wenhui 2(1C ollege of Plant Protection ,Nanjing Agric Univ ,Nanjing 210095,China ;2Institute of Plant Protection ,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences ,Nanjing 210014,China )Abstract :The purpose of this study was evaluation of RT 2PCR technique ,dot 2blot hybridization with PCR 2generated probe and S DS 2PAGE for the detection of rice black 2streaked dwarf Fijivirus (R BS DV ).The cDNA probe labeled with dig oxigenin by PCR ,complementary to the region between 921and 1411nucleotides of segment 7of R BS DV from Jiangsu ,was used.In dot 2blot hybridization the probe could detect the viral RNA from 100ng diseased maize leaves ,which is ten times less sensitive than RT 2PCR.10%S DS 2PAGE only could de 2tect the viral dsRNA extracted from 1g diseased maize leaves ,but this technique was found to be simple and effective to study the genomic diversity of R BS DV is olated in fields.K ey w ords :Rice black 2streaked dwarf Fijivirus (R BS DV );detection ;RT 2PCR ;dot 2blot hybridization ;S DS 2PAGE水稻黑条矮缩病毒(Rice black 2streaked dwarf Fijivirus ,RBS DV )属于呼肠孤病毒科(Reoviridae )斐济病毒属(Fijivirus ),基因组由10条双链RNA (dsRNA )组成,主要经灰飞虱(L aodelphax striatellus Fall n )以持久性方式传播[1]。
利用SSR分子标记鉴定水稻品种真实性
利用SSR分子标记鉴定水稻品种真实性郭奕生;陆俊;郭奕南【摘要】SSR分子标记鉴定品种真实性具有快速、准确、不受环境影响等特点,解决了田间种植鉴定时间长的难题,是开展品种真实性鉴定的有效途径.利用24对SSR核心引物对2个水稻品种进行鉴定,有4对核心引物扩增产物出现明显差异,另外20对核心引物扩增产物没差异,利用这4对扩增产物有差异的核心引物可有效将这2个品种区分开来.由此可看出,利用SSR分子标记鉴定水稻品种真实性是可行的.【期刊名称】《种子》【年(卷),期】2014(033)006【总页数】4页(P115-118)【关键词】SSR;核心引物;水稻;品种真实性;鉴定【作者】郭奕生;陆俊;郭奕南【作者单位】广东省种子管理总站,广州510500;广东省农业展览馆,广州510080;康采恩集团有限公司, 广州510600【正文语种】中文【中图分类】S511;N33水稻是最重要的粮食作物之一，世界一半以上的人以水稻为主食。
开展水稻品种真实性鉴定对于维护农民合法权益、保障国家粮食安全具有重要意义。
应用分子标记技术鉴定品种真实性，既不受季节和环境因素的制约，也不受组织器官及发育阶段的影响，是一种快速、准确鉴定品种真实性的有效方法。
SSR(simple sequencerepeat)分子标记因其具有多态性高、数量丰富、操作简便等优点，在品种真实性鉴定中发挥着越来越重要的作用。
SSR广泛存在于生物的基因组中，是由1～6个碱基为重复单位组成的串联重复序列，相同座位上的重复序列由于重复次数不同而产生了等位基因的多态性。
SSR侧翼的序列一般是相对保守的序列，通过这段序列可以设计一段互补寡聚核苷酸引物进行PCR扩增，根据扩增产物片段大小的差异可开展品种真实性鉴定。
前人利用分子标记开展品种鉴定上已有过一些研究，彭锁堂等［1～5］利用SSR分子标记对杂交稻种子纯度进行鉴定，肖子发等［6］利用48对SSR引物构建77个杂交水稻品种指纹图谱库，王春喜［7］利用SSR分子标记进行玉米品种鉴定和保护，张彩英等［8］利用SSR分子标记对大豆种质资源的遗传多样性进行分析，孟全业等［9］利用SSR分子标记对杂交向日葵品种纯度进行研究，王志刚［10］利用分子标记开展草莓品种鉴定，郑轶琦等［11］利用SRAP分子标记开展假俭草杂交后代真实性的研究，杨长红等［12］利用PCR-RFLP分子标记对梨品种遗传多态性进行分析，白静等［13，14］利用SSR分子标记对杂交棉品种纯度和真实性进行鉴定，田雷等［15］利用AFLP分子标记对甘蓝种子的真实性和纯度进行鉴定。
水稻清蛋白电泳鉴定方法及应用
水稻清蛋白电泳鉴定方法及应用【摘要】水稻是重要的粮食作物之一，水稻清蛋白在种子中起着重要的营养作用。
本文介绍了水稻清蛋白电泳鉴定方法及其应用。
首先介绍了水稻清蛋白的特点，然后详细阐述了水稻清蛋白电泳鉴定方法，包括原理和步骤。
接着展望了该技术在农业生产和食品加工中的应用前景，指出其在改良水稻品质和增加产品附加值方面具有巨大潜力。
最后探讨了水稻清蛋白电泳鉴定方法及应用的意义，以及未来发展的方向。
水稻清蛋白电泳鉴定方法的研究与应用有助于提高水稻品质，推动农业生产和食品加工的发展，对于解决粮食安全和提升生产效率具有重要意义。
【关键词】水稻清蛋白、电泳鉴定方法、应用前景、农业生产、食品加工、意义、发展方向1. 引言1.1 水稻清蛋白电泳鉴定方法及应用水稻清蛋白是水稻种子中的主要蛋白质成分，对水稻的生长发育和产量具有重要影响。
水稻清蛋白电泳鉴定方法是一种用来分析水稻种子中清蛋白的技术手段，可以帮助科研人员了解水稻品种的蛋白质组成及其差异。
通过对水稻清蛋白的电泳鉴定，可以揭示水稻种子中蛋白质的种类和含量，为选择优质水稻品种和提高水稻产量提供科学依据。
水稻清蛋白电泳鉴定方法主要包括蛋白样品的制备、电泳条件的优化和蛋白质条带的分析。
在制备水稻清蛋白样品时，需要先将水稻种子磨粉并提取蛋白质，然后进行电泳分离。
优化电泳条件是确保清晰分离水稻清蛋白的关键步骤，这包括电泳缓冲液的配制、电泳槽的选取等。
利用电泳图谱分析水稻清蛋白条带的数量、大小和浓度，从而对水稻蛋白质进行定量和定性研究。
水稻清蛋白电泳鉴定方法在农业生产和食品加工中具有广阔的应用前景。
在农业生产方面，该方法可以用于评价水稻品种的蛋白质质量，筛选出高蛋白水稻品种，提高水稻的产量和质量。
在食品加工方面，水稻清蛋白可以被应用于制作各种高蛋白食品，如蛋白棒、蛋白粉等，为人们提供更多选择。
水稻清蛋白电泳鉴定方法为水稻科研和生产提供了重要的技术支持，具有重要的应用意义。
利用种子蛋白SDS-PAGE电泳谱带鉴定菜豆品种真实性与纯度的研究
性 和 种 子 纯 度 是 可行 的 。
关键词 ： 菜豆 ； Ｓ Ｄ Ｓ － Ｐ Ａ Ｇ Ｅ； 真实性 ； 纯度 中图分类号 ： Ｓ ６ ４ ３ ． １ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ １ －０ ０ ０ ９ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ７ －０ ０ ９ １ －０ ５
育提供科学依据和技术支持 。
１ 材 料与方 法
１ ． １ 试验材料
供试 的 １ ７ 份菜豆材料 见表 １ ， 均 由吉林农业大学园
艺学 院蔬菜教研室种子库提供 ； １ ７ 个菜豆品种分为 ２ ０ １ １ 年和 ２ ０ １ ２ 年采收 的菜豆种子 ， 其来源为原种的获得 。
１ ． ２ 试 验 方 法
别取在 ４ ２ ℃下烘干 ３ ６ ｈ的干种子 １ 粒， 去种皮 ， 将去种
不 同的谱带口 ， 其谱 带较稳定 ， 且 均匀性 较好 ， 多态性较
高 。利用 Ｓ Ｄ Ｓ － Ｐ Ａ Ｇ Ｅ蛋 白质 电泳方 法鉴定 作物 真 实性 和纯度 ， 已在辣椒 Ｌ 】 、 水 稻ｌ ＿ １ 引、 啤酒大 麦口 中获得 成功 ， 但在菜豆 中的应 用研 究 尚鲜 见报 道 。该研 究通 过对 不 同采收年限且种子形态相似 的 １ ７个菜豆 品种 的贮藏 蛋
摘
要： 以 不 同采 收 年 限 的 １ ７个 菜 豆 品 种 的 种 子 为 试 材 ， 采用 ｓ Ｄ Ｓ — Ｐ Ａ ＧＥ 电 泳 方 法 获 得 菜
豆种子贮藏蛋 白的 电泳图谱 ， 比较分析其真 实性 ； 同时研 究种子蛋 白 Ｓ Ｄ Ｓ － Ｐ Ａ Ｇ Ｅ技 术鉴定菜豆品
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收稿日期:2005209228。
基金项目:南京现代农业科技园核心区建设(2004农资101)。
作者简介:刘春(1978～),男,在读硕士,从事作物品质改良和加工利用研究。
通讯作者:麻浩,E 2mail:Lq 2ncsi@njau .edu .cn利用S DS 2P AGE 鉴定水稻品种(组合)的真实性和纯度刘春 王红玲 崔竹梅 郝小燕 高文瑞 麻浩(南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室 南京农业大学种子检测中心 南京 210095)摘要:利用本实验室完善后的S DS 2P AGE,分析了8个水稻品种(组合)的贮藏蛋白,结果表明,品种(组合)间贮藏蛋白带谱表现出明显的多态性;并在实际检验工作中,运用水稻品种(组合)贮藏蛋白S DS 2P AGE 带谱的多态性,进行了种子的真实性或纯度鉴定。
关键词 水稻 S DS 2P AGE 品种鉴定 真实性 纯度I dentifying Trueness and purity of the Varieties of Rice(O ryza sativa L .)by S DS 2P AGE MethodL i u Chun,W ang Hongli n g,Cu i Zhu m e i ,Hao X i a oyan,Gao W enru i ,M a Hao(1.Nati onal key lab .of cr op genetics and ger mp las m innovati on,Nanjing Agr .University,Nanjing,210095;2.Seed testing center of Nanjing Agr .university,Nanjing,210095)Abstract:The st orage p r oteins of 8rice varieties were analyzed by modified S DS 2P AGE method,the resulted indicated that the st orage p r otein bands appeared t o be poly mor phic a mong the varieties .I n p ractical testing,these poly mor phic p r otein bands had been used t o identify the trueness or purity of the rice cultivars by authors .Key words R ice S DS 2P AGE Varietal identificati on Trueness Purity种子是农业生产中最基本的生产资料,是农业再生产的关键因素。
种子质量的高低直接影响农作物产量和农产品的质量,而种子纯度是种子质量控制中最棘手的问题。
水稻是我国的第一大粮食作物,播种面积大、种子销售利润高[1]。
品种真实性和种子纯度是种子批质量的最重要组成部分。
为了控制种子批的质量、保护育种者和农民的权益,必须在种子流通过程中对种子进行品种真实性和纯度鉴定。
对水稻品种真实性和纯度鉴定有种子形态鉴定法[2]、化学鉴定法[3]、幼苗鉴定法[4]和田间小区种植鉴定[5,6]等,但这些方法存在准确性较差、应用范围窄和所需时间长、成本高以及易受环境因素影响等缺点。
同工酶多态性分析也曾用于水稻品种的鉴定[7],但在遗传关系比较近似的品种间难于找到较大的多态性,而且该法也存在结果不稳定的缺陷。
作物贮藏蛋白质电泳技术是目前种子纯度检验中广泛适用的方法,其中蛋白质十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(S DS 2P AGE )已被认为是一种简便、快速、可靠和成本较低的品种真实性和纯度鉴定方法。
水稻种子贮藏蛋白质提取容易,无需低温,需时较短,再加上不同品种因遗传组成不同,其种子贮藏蛋白质在种类、数量、大小及结构等方面也不同,可通过电泳形成不同的蛋白质谱带,从而鉴别品种的真实性和纯度[8]。
本研究的目的是利用本实验室完善的S DS 2P AGE 技术,探讨该方法对鉴定水稻种子的真实性和纯度的适合性,以期为水稻种子的实验室鉴定提供一种简便有效的方法。
1 材料和方法1.1 材料丰两优1号、特优559、II 优084、金优63、协优63、粤优938、II 优501、两优培九。
1.2 真实性和纯度鉴定检测种子数量依据I ST A 《Electr ophoresis Handbook 》中的4.statistical evaluati on of electr ophoresis testing ・32・(1992)[9]的规定,每品种随机抽取400粒种子采用S DS 2P AGE 进行纯度鉴定。
1.3 S DS 2P AGE [10,11]1.3.1 水稻贮藏蛋白质的提取:单粒稻米研磨成粉末,按1.0mg 粉加5μl 的样品提取液(0.05mol/L Tris 2HCl (pH 8.0),含0.01mol /L 22巯基乙醇)比例加提取液进行提取,室温下过夜,离心(10000×g,20m in,4℃),取上清液得蛋白提取液。
1.3.2 提取液蛋白质浓度的测定:以牛血清蛋白为标准,用B radf ord 法测定[12]。
1.3.3 电泳样品的准备:取30μl 蛋白提取液,根据B radf ord 法测定的浓度,加样品缓冲液(0.1mol/L Tris 2HCl,含1%S DS,0.01mol/L 22巯基乙醇,0.1g/L 溴酚蓝,150g/L 蔗糖,5mol/L 脲pH 8.0)将蛋白提取液均稀释至蛋白浓度1μg/μl 。
点样前涡旋混匀。
1.3.4 电泳贮液的配制:(1)丙烯酰胺单体贮液:29.10g 丙烯酰胺+0.90g N 、N ′2甲叉双丙烯酰胺加水定容至100m l,用棕色瓶4℃保存。
(2)浓缩胶缓冲贮液(1.0mol/L Tris 2HCl,pH 6.80):12.10g Tris 溶于80m l 水,用4N HCl 调pH 至6.80,定容至100m l,4℃保存。
(3)分离胶缓冲贮液(1.5mol/L Tris 2HCl,pH 8.80):18.15g Tris 溶于80m l 水,用4N HCl 调pH 至8.80,定容至100m l,4℃保存。
(4)10%S DS:10g S DS 加水定容至100m l 。
(5)10%过硫酸铵(AP ):0.1g 过硫酸铵加1.0m l 水。
(6)10%TE ME D:0.1m l TE ME D 加0.9m l 水。
1.3.5 分离胶配制:本实验采用12%的分离胶:12m l 30%的丙烯酰胺单体贮液,7.5m l 分离胶贮液,300μl S DS,10.2m l 纯水,300μl AP,120μl TE MED 。
1.3.6 浓缩胶的配制:本实验采用5%的浓缩胶:2m l 30%的丙烯酰胺单体贮液,3m l 浓缩胶贮液,120μl S DS,6.8μl 纯水,50μl AP,50μl TE ME D 。
1.3.7 电泳:采用不连续垂直板状凝胶电泳,点样量6μl,恒流电泳,样品在浓缩胶时电流40mA ,进入分离胶后电流80mA 。
1.3.8 染色与脱色:凝胶用0.225%的考马斯亮蓝R 2250(纯水∶无水乙醇∶冰醋酸=50∶43∶7)染色30m in,然后在脱色液(纯水∶无水乙醇∶冰醋酸=17∶2∶1)中脱色。
1.4 扫描与分析电泳凝胶用B i o 2Rad 公司的Versa Dco 3000凝胶扫描系统扫描,扫描图谱用Quantity 2one 软件分析。
图1 8个水稻品种的S DS 2P AGE 图谱 图2 II 优084真种子和假种子 注:1:丰两优1号,2:特优559,3:II 优084,4:金优63, 的S DS 2P AGE 图谱5:协优63,6:粤优938,7:II 优501,8:两优培九。
注:1、3、5为真种子,2、4、6为假种子。
2 结果与分析2.1 品种多态性 利用本实验完善的S DS 2P AGE,对8个水稻品种(组合)的贮藏蛋白进行电泳分析,其谱带如图1所示。
从图中可以看出8个水稻品种(组合)贮藏蛋白质谱带数变化范围在13～25条间,不同品种(组合)间蛋白质谱带表现出明显的多态性。
图1右侧为两优培九电泳图谱的扫描曲线,每一个扫描峰表示一条蛋白质条带。
以d 峰(带)为分界线,在其上部,丰两优1号(泳道1)、特优559(泳道2)、金优63(泳道4)和两优培九(泳道8)4个品种(组合)分别有1～4条蛋白质带;其余品种(组合)则没有蛋白条带。
在d 峰(带)之下,各品种(组合)间蛋白条带数目差异也很大。
除了谱带数目、位置上的差异外,8个水稻品种(组合)在谱带宽窄和谱带颜色深浅等方面也有非常明显的差异。
据此,可将8个品种(组合)完全区分开。
2.2 品种真实性和纯度鉴定种子真实性是指一批种子所属品种,种或属与文件(品种证书、标签等)是否相同;品种纯度是品种在特征特性方面典型一致的程度,从每个品种S DS 2P AGE 图谱上的谱带数目、谱带位置(Rf 值)、谱带宽窄、谱带颜色深浅・42・等方面可以鉴定种子的真实性并检测出异种子,从而计算出纯度。
在种子鉴定业务中,笔者经常碰到以次充好、以假乱真的种子假冒现象。
图2为II 优084真种子和市售假冒种子贮藏蛋白的S DS 2P AGE 对照图谱。
从图谱中可看出,假冒种子与真种子下部的贮藏蛋白带型基本相似,但在最上部带谱中明显少了两条带。
结果表明:虽然从外观上难以将该假冒种子与II 优084真种子区别开(这可能是以与II 优084亲缘关系相近的材料仿冒),但通过两者的电泳图谱,可以明显将其区分开。
笔者也常常会接到种子经营者要求对水稻品种(组合)进行纯度鉴定的业务,曾采用S DS 2P AGE 对丰两优1号、特优559、II 优084、金优63、协优63、粤优938、II 优501和两优培九等8个水稻品种(组合)进行过纯度鉴定。
图3为两优培九部分种子贮藏蛋白的S DS 2P AGE 图谱。
从图谱可看出大多数泳道谱带整齐一致(如1、2、3、4、5、6、8、9等),表现为典型的两优培九贮藏蛋白谱带;而7、15等泳道谱带则与两优培九的典型谱带有较大的差异,因而可鉴定为异种子。
8个水稻品种(组合)的纯度经S DS 2P AGE 分析后,计算出的纯度列于表1。
依据G B /T 3543.521995农作物种子检验规程中真实性和品种纯度鉴定的规定:杂交水稻品种纯度达99%为合格,并且在样本为400时,容许误差为0.8%[1]。