葡萄糖含量的测定

？用还原糖含量—果糖含量=葡萄糖含量？（硕士论文：赵树堂李果实发育过程中糖_酸_Vc 及矿质元素含量变化.nh）

葡萄糖含量的测定：

1实验仪器：分光光度计，恒温水浴锅，电子天平，烘箱，刻度离心管，带塞试管，漏斗。2实验试剂：10mol/L的硫酸，酶制剂【10mg邻联茴香胺—HCl（注意有毒性），10mg辣根过氧化物酶和0.1ml葡萄糖氧化酶（1000U/ml，溶于0.1mol/L醋酸缓冲液,pH 5.5），加水至100ml】，200μg/ml 葡萄糖标准液【去无水葡萄糖（80℃烘至衡重）20mg，用80%乙醇配置成100ml，放入冰箱中保存，使用前1h取出回升至室温】。

3实验材料：植物样品

4实验步骤：

（1）植物提取液的制备：在110℃烘箱烘15min，然后调制70℃过夜。干叶片磨碎后，秤取50mg样品倒入10ml刻度离心管内加入4ml 80%乙醇，至于80℃水浴中不断

搅拌40min ，离心，收集上清液，其残渣加2ml 80%乙醇重复提2次，合并上清

液。在上清液中加入10mg活性炭，80℃脱色30min，80%乙醇定容至10ml，过滤

后去滤液测定。

（2）绘制标准曲线：先将葡萄糖标准液用80%乙醇稀释成0、15、30、50、75、100、150、200μg/ml不同浓度的溶液。取25m m×200mm大试管8支，分别加入4ml酶

制剂，一起放在30℃水浴中，带管中酶液温度上升达到平衡，各加入2ml不同质

量浓度葡萄糖标准液，摇匀，保温5min（注意掌握时间），再各加入8ml 10mol/L

的硫酸停止反应，当温度于是问平衡后，测定460nm处OD值，以0浓度管调零。

测定OD值，绘制标准曲线。

（3）测定：以植物提取液代替葡萄糖标准液，按上述步骤进行葡萄糖含量的测定，读取OD值，从标准曲线得到提取液中的葡萄糖含量，然后在进行计算样品中的葡萄

糖含量。

注：10mol/L的硫酸制备

0.1mol/L醋酸缓冲液,pH 5.5的制备

制备液A：0.2mol/L醋酸（冰醋酸11.55ml稀释至1000ml）

制备液B：0.2mol/L醋酸钠（C2H3O2Na 16.4g或C2H3O2Na·3H2O 27.2g配成1000ml）

醋酸钠相对分子质量：82.03