饲料中粗脂肪的测定(精)

饲料中粗脂肪的测定
一、实验目的
通过饲料样品中粗脂肪的测定，掌握各类饲料样品中粗脂肪的测定原理和方法。

二、适用范围
本方法适用于油籽和油籽残渣以外的动物饲料。

为了本方法的测定效果，将动物饲料分为A、B两类；B类产品提取前需水解。

B类包括：①纯动物性饲料，包括乳制品；②脂肪不经预先水解不能提取的纯植物性饲料，如谷蛋白、酵母、大豆及马铃薯蛋白以及加热处理的饲料；③含有一定数量加工产品的配合饲料，其脂肪含量至少有20％来自这些加工产品。

A类：B类以外的动物饲料。

三、方法原理
1、脂肪含量较高的样品（至少20 g/kg）预先用石油醚提取。

2、B类样品用盐酸加热水解，水解溶液冷却、过滤，洗涤残渣并干燥后用石油醚提取，蒸馏、干燥除去溶剂，残渣称量。

3、A类样品用石油醚提取，通过蒸馏和干燥除去溶剂，残渣称量。

四、试剂
本标准所用试剂未注明要求时，均指分析纯试剂。

（1）水至少应为GB/T 6682规定的3级。

（2）硫酸钠无水。

（3）石油醚主要由具有6个碳原子的碳氢化合物组成，沸点范围为40～60℃。

溴值应低于1，挥发残渣应小于20mg/L。

也可使用挥发残渣低于20mg/L 的工业乙烷。

（4）金刚砂或玻璃细珠。

（5）丙酮。

（6）盐酸c（HCl）＝3mol/L
（7）滤器辅料例如硅藻土，在盐酸[c（HCl）＝6mol/L]中消煮30min，用水洗至中性，然后在130℃下干燥。

五、仪器设备
（1）提取套管，无脂肪和油，用乙醚洗涤。

（2）索氏提取器，虹吸容积约100mL，或用其他循环提取器。

（3）加热装置有温度控制装置，不作为火源。

（4）干燥箱温度能保持在（103+2）℃。

（5）电热真空箱温度能保持在（80+2）℃，并减压至13.3kPa以下，配有引入干燥空气的装置，或内盛干燥剂，例如氧化钙。

（6）干燥器内装有效的干燥剂。

六、分析步骤
试样的制备：选取有代表性的试样，用四分法将试样缩减至500g，粉碎至40目，再用四分法缩减至200g，于密封容器中保存。

1、分析步骤的选择
如果试样不易粉碎，或因脂肪含量高（超过200g/kg）而不易获得均质的缩减的试样，按步骤2处理。

否则，按步骤3处理。

2、预先提取
（1）称取至少20 g制备的试样（m0），准确至1 mg，与10g无水硫酸钠混合，转移至一提取套管并用一小块脱脂棉覆盖。

将一些金刚砂转移至一干燥烧瓶，如果随后将对脂肪定性，则使用玻璃细珠取代金刚砂。

将烧瓶与提取器连接，收集石油醚提取物。

将套管置于提取器中，用石油醚提取2h。

如果使用索氏提取器，则调节加热装置使每小时至少循环10次；如果使用一个相当设备，则控制流速每秒至少5滴（约10mL/min）。

用500mL石油醚稀释烧瓶中的石油醚提取物，充分混合。

对一个盛有金刚砂或玻璃细珠的干燥烧瓶进行称量（m1），准确至lmg，吸取50mL石油醚溶液移人此烧瓶中。

（2）蒸馏除去溶剂，直至烧瓶中几无溶剂，加2mL丙酮至烧瓶中，转动烧瓶并在加热装置上缓慢加温以除去丙酮，吹去痕量丙酮。

残渣在103℃干燥箱内干燥（10+0.1）min，在干燥器中冷却，称量（m2），准确至0.1mg。

也可采取：蒸馏除去溶剂，烧瓶中残渣在80℃电热真空箱中干燥1.5h，在干燥器中冷却，称量（m2），准确至0.1mg。

（3）取出套管中提取的残渣在空气中干燥，除去残余的溶剂，干燥残渣称量（m3），准确至0.1mg。

将残渣粉碎成1mm大小的颗粒，按步骤3处理。

3、试料
称取5g左右（m4）制备的试样，准确至1mg。

对B类样品按步骤4处理。

对A类样品，将试料移至提取套管并用一小块脱脂棉覆盖，按步骤5处理。

4、水解
将试料转移至一个400mL烧杯或—个300mL锥形瓶中，加100 ml盐酸和金刚砂，用表面皿覆盖，或将锥形瓶与回流冷凝器连接，在火焰上或电热板上加热混合物至微沸，保持lh，每10min旋转摇动一次，防止产物附着于容器壁上。

在环境温度下冷却，加一定量的滤器辅料，防止过滤时脂肪丢失，在布氏漏斗中通过湿润的无脂的双层滤纸抽吸过滤，残渣用冷水洗涤至中性。

注：如果在滤液表面出现油或脂，则可能得出错误结果，—种可能的解决办法是减少测定试料或提高酸的浓度重复进行水解。

小心取出滤器并将含有残渣的双层滤纸放入一个提取套管中，在80℃电热真空箱中于真空条件下干燥60min，从电热真空箱中取出套管并用一小块脱脂棉覆盖。

5、提取
（1）将一些金刚砂转移至一干燥烧瓶，称量（m5），准确至1mg。

如果随后将要对脂肪定性，则使用玻璃细珠取代金刚砂。

将烧瓶与提取器连接，收集石油醚提取物。

将套管置于提取器中，用石油醚提取6h。

如果使用索氏提取器，则调节加
热装置使每小时至少循环10次，如果使用一个相当设备，则控制回流速度每秒至少5滴（约10 mL/min ）。

（2）蒸馏除去溶剂，直至烧瓶中几无溶剂，加2mL 丙酮至烧瓶中，转动烧瓶并在加热装置上缓慢加温以除去丙酮，吹去痕量丙酮。

残渣在103℃干燥箱内干燥（10±0.1）min ，在干燥器中冷却，称量（m6），准确至0.1mg 。

也可采取：
蒸馏除去溶剂，烧瓶中残渣在80℃电热真空箱中干燥1.5h ，在干燥器中冷却，称量（m6），准确至0.1mg 。

七、计算
1、预先提取测定法 试样的脂肪含量W1，按下式计算，以g/kg 表示： ()()f m m m m m m m m W ⨯⎥⎦⎤⎢⎣⎡⨯+=034560121--10
式中，m 0为在步骤2中称取的试样质量，g ；m 1为在步骤2中装有金刚砂的烧瓶的质量，g ；m 2为在步骤2中带有金刚砂的烧瓶和干燥的石油醚提取物残渣的质量，g ；m 3为在步骤2中获得的干燥提取残渣的质量，g ；m 4为试料[步骤3]的质量，g ；m 5为在步骤5中使用的盛有金刚砂的烧瓶的质量，g ；m 6为在步骤5中盛有金刚砂的烧瓶和获得的干燥石油醚提取残渣的质量，g ；f 为校正因子单位，g/kg （f ＝1000g/kg ）。

结果表示准确至lg/kg 。

2、无预先提取的测定法 试样的脂肪含量W2按下式计算，以g/kg 表示： ()
f m m m W ⨯=4562-
式中变量符号意义同上。

结果表示准确至lg/kg 。

八、重复性
用同一方法对相同的实验材料，在同一实验室内，由同一操作人员使用同一台设备，在短时间内获得的两个独立的测定结果之间的绝对差值，超过表7-7中列出的重复性限r 的情况不大于5%。

表7-7 测定结果的重复性限（r ）和再现性限（R ）
样品 r （g/kg ） R （g/kg ）
A 类（不需水解）
2.5 7.7a B 类（需要水解） 5.0 12.0b
A 椰子粉除外。

B 鱼粉和肉粉除外。

九、注意事项
（1）乙醚易挥发，易燃、易爆，整个操作过程注意安全，特别是烘干含有醚的样品时，开始要打开烘箱门防止醚积累过多发生爆炸。

整个操作过程室内不能有明火。

（2）样品必须烘干，醚应无水状态，否则，影响测定和准确性。

（3）烘干时防止脂肪氧化而不溶于醚中，最好在惰性气体条件下烘干。

（4）整个操作过程应戴橡胶或白纱手套进行。

（5）估计样本中含脂肪20%以上时浸提时间需16h ；5%～20%需12h ；5%以下时需8h 。

十、其他说明
说明1：索氏测定脂肪法与饲料中其它概略营养成分测定法同样，准确度亦不够高。

植物种子的乙醚提取物中真脂肪有86%，青饲料的乙醚提取物中真脂肪量极少，大部分为叶绿素。

说明2：鲜肉类（猪肉、鸡肉、鱼肉等）中脂肪测定前须先烘去肉中水分。

具体方法如下：称取磨碎鲜肉样约10 g 放在铺有少量石棉的滤纸筒或滤纸上，用小棒混匀，将滤纸筒或滤纸移入瓷盘或铝匣中，在100-102℃烘箱内烘6小时（烘去鲜肉中水分），取出瓷盘或铝匣，冷却后，用棉线包扎滤纸包，以下步骤按照饲料中脂肪测定法进行。

说明3：估计样本中所含脂肪在20%以上时，浸提时间需16小时；5-20%时，需12小时，5%以下时则需8小时。

说明4：样本中粗脂肪量亦可根据样本滤纸包经乙醚提取前后的失重来计算。

方法如下：
100%样本重（g）
重（g）样本滤纸包乙醚提取后-重（g）样本滤纸包乙醚提取前量样本中粗脂肪含⨯= 样本滤纸包经乙醚提取后放入一个干净的已知重的称重瓶中，在100-105℃
烘箱烘1-2小时，在干燥器中冷却，称重，直至恒重。

经乙醚提取后的滤纸包在称重时容易吸收空气中水分，影响包重，因此操作宜迅速。