口蹄疫O型液相阻断ELISA免疫抗体检测方法的应用_胡珊莲
液相阻断ELISA在口蹄疫抗体检测中的应用
试剂盒（生产批号：20200109134,抗原批号：101/24）。 1.3试验步骤 1.3.1 羊群免疫
使用口蹄疫0型灭活疫苗，按照产品使用说明规定免疫剂 量及免疫方法对该湖羊养殖家庭农场羊群接种免疫， 于 2 免 24d后采血，并进行免疫效果检测［2］。 1.3.2洗涤液准备
用蒸馏水或去离子水按1：10稀释洗涤液（如取100ml洗涤 液，需要900ml蒸馏水或去离子水稀释），充分混匀后备用。 1.3.3 样品稀释和加样
本次试验主要采取液相阻断ELISA法追踪检测郎溪某羊羊 牲畜养殖家庭农场养殖的湖羊0型口蹄疫免疫抗体滴度。通过 利用口蹄疫病毒0型抗体会与包被板上的重组抗原和抗羊二抗 酶标结合物特异性结合，以及抗羊二抗酶标结合物底物反应显 色原理反映岀待测血清中口蹄疫病毒0型抗体情况叫 为监管 基层国家强制免疫计划工作开展，保证养殖场健康发展提供坚 实数据支撑，现将检测应用报告情况汇报如下。 1 材料与方法 1.1检测才样品
本次试验共使用3块ELISA板，每板2个阴性对照孔OD 值均小于0.15, 3块ELISA板试验结果均有效。计算岀1号板 Cov值为0.168,抗体阳性孔数88个，抗体阴性孔数2个，合
格率97.7%； 2号板Cov值0.187,抗体阳性孔数86个，抗体 阴性孔数4个，合格率95.5%； 3号板Cov值0.178,抗体阳性 孔数34个，抗体阴性孔数0个，合格率100% (详见表2)遥 3讨论
揭开封板膜，甩去孔内液体。排枪注满配置好的洗涤液 （约300滋l），滞留1min后甩去遥重复洗涤3次，最后一次甩 净，在吸水纸上拍干。 1.3.5 加酶反应
除空白对照孔外，其余每孔加入酶标结合物50滋l，盖好封 板膜，37益避光恒温箱反应30min。 1.3.6 包被板洗涤
口蹄疫O 型灭活疫苗免疫成年羊与羔羊效果
口蹄疫O 型灭活疫苗免疫成年羊与羔羊效果作者：郑晓萍来源：《畜牧兽医科学》 2019年第23期郑晓萍（江苏省苏州市吴中区动物卫生监督所，苏州 215000）摘要：依照农业部拟定的口蹄疫免疫流程，有针对性追踪监测散养羊免疫后的抗体水平，进而初步探析口蹄疫O型灭活疫苗免疫接种后抗体水平增长与消退规律。
结果表明，具有一定基础免疫抗体的羔羊初次免疫后1月加强1次，在4月中O型口蹄疫的免疫抗体合格率均达到农业部设定的70%以上，取得的免疫接种效果较明显。
关键词：口蹄疫；口蹄疫O型；灭活疫苗；免疫效果中图分类号：S858.26 文献标识码：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.23.0050 引言口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的急性、热性、高传染性疾病，偶蹄动物是该病的主要发病群体，目前口蹄疫是世界动物卫生组织（OIE）A类家畜传染病“队列”中占据首位的病症，中国将其列为一类动物传染病。
FMD的表现以口腔黏膜、鼻镜、蹄部和乳房皮肤处有水平与溃烂形成为典型特征。
传染性极强、传播快速、感染率与发病率均处于较高水平等是FMD的主要特征。
FMD可能会引起偶蹄动物大量死亡，使养殖户承受较大的经济损失。
当下针对FMD尚无特效药物治疗，多采用综合防控办法控制FMD疫情，疫苗预防始终是我国主要防治手段，被列为强制免疫项目[1]。
为使畜群免疫抗体水平能在较长时间内维持在有效保护状态中，应科学设定免疫时间与频次，本文对口蹄疫O型灭活疫苗免疫情况进行对比分析，探析抗体消长规律，以更完善免疫方案。
1 材料与方法1.1 试验动物选择某乡镇2个散养户的经产羊与刚初生的羔羊为试验研究对象，严格依照农业部设定的免疫接种流程进行免疫的免疫程序，并针对免疫抗体水平进行追踪监测。
1.2 器材96孔稀释板，微型振荡器，移液枪、加样槽等。
1.3 疫苗口蹄疫O型灭活疫苗生产厂家为兰州兽医研究所。
1.4 检测采样分别监测该乡镇2个散养羊户羊只的免疫抗体，分别在成年羊和羔羊免疫后 1～4月（羔羊初次免疫后1月加强免疫1次）后进行随机抽样检查。
口蹄疫病毒3ABC单抗阻断ELISA抗体检测方法应用
平均检 出率（％）
０．３４ １．８５ ０．６９ ０．４０
３ 分析 本实验采用基于两种单克隆抗体（Ｍａｂ）的口蹄
疫病毒非结构蛋白 ３ＡＢＣ抗体阻断 ＥＬＩＳＡ方法监 测，自 ２０１６年 １１月 起 至 ２０１７年 ５月 结 束，样 品 ２０６３份，检出率平均值为 ０．８２％。根据免疫登记信 息，３ＡＢＣ阳性抗体犊牛都已经口蹄疫三价苗免疫， 结合后期临床诊断，阳性犊牛无感染口蹄疫病毒症
孔，混匀，封上封口膜，盖上板盖，室温（１８－２５℃） 性；血清样品 ＰＩ值 ＜５０％，判为阴性。
反应 ２０ｈ。
２ 实验结果
１．２．４ 洗板 用 ＰＢＳＴ稀释液连续洗涤 ５次，在吸
口蹄疫病毒 ３ＡＢＣ抗体检出率见表 １。
水纸上拍干。
表 １ 口蹄疫病毒 ３ＡＢＣ抗体检出率
２０１６年
２０１７年
区域
牧场 １ 牧场 ２ 牧场 ３ 牧场 ４
行配制 １∶２５倍稀释。
１．２．１０ 实验结果判定 １）实验成立条件：阴性对
１．２．３ 加入血样 在捕获 ３ＡＢＣ抗原酶标板每孔 照平均 ＯＤ４５０值 ＞１．０；弱阳性对照血清阻断率 ＞
中加入 ８０μＬ血清稀释液，然后依次加入 ２０μＬ阴、 ５０％，阳性对照血清阻断率 ＞７０％。２）结果判定标
弱阳性、阳性对照血清各平行 ２孔、血清样品各一 准：血清样品 ＰＩ值≥５０％，判为非结构蛋白抗体阳
４８
浙江畜牧兽医
２０１８年第 ２期
口蹄疫病毒 ３ＡＢＣ单抗阻断 ＥＬＩＳＡ抗体检测方法应用
根据新型口蹄疫疫苗生产工艺，用灭活疫苗免 １．２．５ 加酶标单克隆抗体 用血清稀释液 １∶１００
疫的动物不会产生病毒非结构蛋白 ３ＡＢＣ抗体。因 比例稀释酶标单克隆抗体，每孔加入 １００μＬ，封口
口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA试验的测量不确定度评估
82
２０１８ 年第 ３５ 卷第 ４ 期
ELISA 试验的测量不确定度进行研究，希望能探 索一种较为合理的 ELISA 检测结果不确定度评估 模式，并为兽医实验室开展相关工作提供借鉴。 1 材料和方法 1.1 样品
口蹄疫病毒 O 型抗体阳性、阴性血清：中国 农业科学院兰州兽医研究所提供。 1.2 试剂
应用液相阻断 ELISA 技术，检测牛、羊或猪 等偶蹄动物血清中口蹄疫病毒 O 型抗体。 2 结果与分析 2.1 数学模型
根据中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫 病毒 O 型抗体液相阻断 ELISA 检测试剂盒说明书 提供的检测结果计算及判定方法，建立数学模型：
定与表示》，并于 2012 年最新修订 [2]。近年《陆生动物诊断试验和疫苗 手册》[3] 中也对测量不确定度提出了要求。
ELISA 具有快速、灵敏和高通量等特点，且 无需昂贵仪器，是目前基层兽医检测部门应用的 主要方法。本文对口蹄疫病毒 O 型抗体液相阻断
口蹄疫病毒 O 型抗体
液相阻断 ELISA 试验的测量不确定度评估
杜 鹃 （北京市动物疫病预防控制中心，北京 102629）
摘 要：为探索一种较为合理的兽医实验室ELISA试验的测量不确定度评估模式，应用液相阻断ELISA试验方 法，对口蹄疫O型抗体进行检测，依据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059.1—2012），分析试验的不确定 来源并评定各分量的标准不确定度、合成标准不确定度和扩展不确定度。结果显示：最终cutoff临界值与样品判 定浓度的OD450 mm值的比值为1.390，U=0.221（k=2）；测量不确定度的加入提升了测量结果的可信度，并有效 降低了假阳性、假阴性出现的风险；分析不确定度各分量对测量结果的相对贡献，可以找出影响检测质量的主 要因素，从而有利于实验室的质量控制和检测质量的提高。 关键词：口蹄疫病毒O型；液相阻断ELISA；测量不确定度 中图分类号：S852.4 文献标识码：A 文章编号：1005-944X（2018）04-0082-06 DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2018.04.021
液相阻断ELISA在口蹄疫病毒抗体水平检测中的应用
Ａｐ ｌ ａ ｉ ｎ ｏ ｉ ｕ ｄ ｐ ａ ｅ ｂ ｏ ｋ ｎ ｐ ｉ ｔｏ ｆｌ ｉ — ｈ ｓ ｌ ｃ ｉ ｇ ＥＬＩ Ａ ｎ ｔ ｅ ｄ ｔ ｃ ｉ ｎ ｏ ｃ ｑ Ｓ ｉ ｈ ｅ ｅ ｔ ｆ ｏ
刘 俊 林 ， 祁淑 芸 马 军 武 崔 燕 ， ，
（ ．甘肃 农业 大 学 动 物 医学 院 ， 肃 兰州 ７ ０ ７ ；２ １ 甘 ３ ０ ０ ．中 国农 业 科 学 院 兰 州 兽 医 研 究 所 ， 国家 家 畜 疫 病病 原 生 物学 重 点 实 验 室 ， 农业 部畜 禽 病 毒 学 重 点 实 验 室 ， 国家 口蹄 疫参 考 实 验 室 。 肃 兰 州 ７ ０ ４ ） 甘 ３０ ６
３ Ｂ － Ｅ ＩＡ 对 液 相 阻 断 Ｅ ＩＡ 方 法 所 选 的部 分 阴 性血 清进 行 了 验证 试 验 ． 果 显 示 ： 用 Ａ ｉ Ｉ 和 ０ 型 液 Ａ Ｃ Ｉ ＬＳ － ＬＳ 结 利 ｓ －型 ａ 相 阻 断 Ｅ ＩＡ 方 法 筛选 的 阴 性动 物 ， 免 疫 和 攻 毒 后 ， 清 抗 体 水 平 显 著 升 高 ， 明 该 法 可 完 全 用 于 口蹄 疫 阴 性 ＬＳ 在 血 表 动 物 筛 选 及 口蹄 疫 病 毒 抗 体 水 平 的 检 测 ．
维普资讯
２０ 年 ６
大
学
学
报
第 ４３卷
双 月 刊
第 ３期 １ ￣２ ８ ０
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＧＡＮＳ ＡＧＲＩ Ｕ ＣＵＬ ＴＵＲＡＬ Ｕ ＮＩ ＶＥＲＳ ＴＹ Ｉ
简述口蹄疫免疫抗体监测的方法及意义
一、检测方法特异性抗体检测在疫病诊断、传染病流行病学调查及评价疫苗免疫效果评价具有重要的参考意义。
现阶段，抗体检测的方法较多，除传统的沉淀反应，凝集试验，补体结合试验外，标记免疫测定已成为主要的免疫抗体测定技术(如酶联免疫测定、放射免疫测定、荧光免疫测定、发光免疫测定等)，而酶联免疫测定是目前应用最为广泛的方法之一。
1.中和抗体中和抗体是当病原微生物侵入机体时产生的相应的抗体。
病原微生物入侵细胞时需要依赖病原体自身表达的特定分子与细胞上的受体结合，才能感染细胞，并进一步扩增。
中和抗体是B淋巴细胞产生的某些抗体，中和抗体的作用机制是改变病毒表面构型，阻止病毒吸附于易感细胞，使病毒不能穿入胞内进行增殖；病毒与中和抗体形成的免疫复合物，易被巨噬细胞吞噬清除；有包膜的病毒表面抗原与中和抗体结合后，激活补体，可导致病毒的溶解。
病毒中和试验是世界动物卫生组织推荐的标准方法，抗体与口蹄疫病毒特异性中和作用使病毒失丧失感染力，需要培养病毒敏感细胞；所需的病毒必须为活病毒，具有感染性。
2、结构蛋白抗体在原则上来说，只要是异己蛋白质进入机体，就会被免疫系统识别，然后产生相应抗体。
灭活疫苗的本质是一种抗原，只不过它通过改造已经没有了病毒的毒性。
当疫苗注入到机体之后，由于病毒抗原含有多种不同的蛋白，因此机体会产生不同的抗体。
然而，并非所有的结构抗体都有抗病毒的作用。
中华人民共和国农业农村部规定的口蹄疫免疫抗体评价的方法分别为液相阻断E L I S A抗体检测试验、正向间接血凝试验、V P1结构蛋白抗体检测试验。
2.1液相阻断ELISA抗体检测试验（国际贸易指定法）我国目前采取以免疫为主的综合防控措施进行口蹄疫防控，免疫抗体检测是衡量疫苗免疫效果的重要指标。
目前,国际粮农组织（FAO）和世界动物卫生组织推荐液相阻断ELISA来对口蹄疫免疫效果进行评价。
硏究表明口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测技术具有良好的敏感性、快速诊断性和可重复性,与攻毒保护有很好的相关性,现被广泛应用于口蹄疫免疫抗体水平的监测。
口蹄疫O型液相阻断ELISA免疫抗体检测方法的应用
关键词 ： 液相阻断 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ ； Ｏ型１ ２ Ｉ 蹄疫； 抗体检测； 奶牛
ｓ ｅ ｒ ｏ ｔ ｙ ｐ ｉ ｎ ｇ Ｈ ａ ｅ ｍ ｏ ｐ ｈ ｉ ｌ ｕ ｓ ｐ ａ ｒ ａ ｓ ｕ ｉ ｓ ［ Ｊ ］ ．Ｊ Ｃ ｌ ｉ ｎ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ ，
２ ０ ０ ３ ， ４ １ （ ２ ） ： ８ ８ ０～８ ８ ２ ．
［ ３ ］蔡旭旺 ， 刘 正飞． 副猪嗜血杆 菌 的分 离培养 和血清学 鉴
学报 ： 自然 科 学 版 ， ２ ０ ０ ９， ３ ５ （ ５ ） ： ５ １ ７—５ ２ ０ ．
本试 验 通 过 对疑 似 发 病猪 场 采 集 患猪 病 料 ， 并 进行 病原 菌 分 离 鉴 定 、 动物试验 ， 鉴 定 为 副 猪 嗜 血 杆菌 。 通过 药敏试 验 ， 确诊 分离 菌对 庆大 霉素 、 环丙 沙 星、 氧氟 沙星 、 诺 氟 沙 星 和 头孢 哌酮 高 敏 ， 复 方 新 诺
发病 报 告 。该 病 可分 为 Ｏ 、 Ａ、 Ｃ、 南 非 Ｉ型 、 南 非
收稿 日期 ： ２ ０ １ ４ — １ １ － ２ １
０
Ⅱ型 、 南 Ⅲ型 和 亚 洲 Ｉ型 等 ７个 血 清 型 ， 其 中以 Ｏ 型和 Ａ型分 布最 广 ， 危害 最大 。
本 试 验应 用 液 相 阻 断 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检 测 方 法 跟 踪 检
［ ４ ］高丰 ， 罗毅 ， 成军 ， 等． 副猪 嗜血杆菌 感染 的诊 断与 防治
口蹄疫病毒O型抗体检测注意事项及结果分析
健康养殖·诊疗畜牧业环境 2021.0286摘 要：口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、热性传染性疫病，此病常发生于偶蹄动物，被世界卫生组织列为传染病，又被我国列为一类动物疫病。
文章主要介绍口蹄疫阻断ELISA 抗体检测实验步骤和注意事项，为洛南县生畜养殖场或户的免疫抗体水平做好分析，为口蹄疫抗体监测工作提供依据和参考。
关键词：口蹄疫病毒；O型抗体检测；注意事项；结果分析1 样品来源该实验样品来自于全县16个镇，随机抽取生猪养殖场20个，每场采集血清样品15份；零散养殖户随机抽取16户，每户采集血清样品5份，共计380份。
2 实验仪器量筒、烧杯、离心管架、超纯水机、电热恒温箱、洗板机、酶标分析仪、移液枪头、单道移液器、多道移液器、离心管、一次性洗液皿、一次性吸水纸。
3 洗涤液配制用量筒取900ml蒸溜水或去离子水与100ml洗涤液混合（洗涤液是浓缩洗液，需要稀释），充分混匀即为工作浓度洗涤液。
4 具体实验步骤4.1 实验前的准备工作将阻断ELISA抗体检测试剂盒和待检血清从冷藏和冷冻箱中取出，将待检血清竖行排列于离心管架上，并做好编码，等试剂和血清样品温度恢复到室温20℃～25℃，在进行实验。
4.2 操作步骤4.2.1 加样（1）预先取出包被板，取出样品稀释液，在每孔加入样品稀释液50 µl。
（2）再用10 µl的移液器添加50µl待检样品。
（3）在包被板最后加入50µl阴性和阳性对照品各2孔，盖膜，避光在37℃反应60min。
4.2.2 洗板60min时间到取包被板，揭掉封板膜，倒掉孔内液体，用预先配制好的洗涤液洗涤3次，每次停留1min；最后一次倒干净后，用吸水纸将包被板内液体拍干。
4.2.3 检测（1）在包被板中加酶标结合物（1号液）100µl，盖膜，避光在37℃反应60min。
60min时间到后取出包被板，揭膜，倒掉孔内液体，用预先配制好的洗涤液洗涤3次，每次停留1min；最后一次倒干净后，用吸水纸将包被板内液体拍干。
两种口蹄疫O型、A型抗体检测试剂盒检测猪口蹄疫抗体的应用研究
摘要：为研究两种口蹄疫抗体检测试剂盒的应用适用性，对50份血清分别用口蹄疫液相阻断ELISA 检测试剂盒和固相竞争ELISA 检测试剂盒进行了检测，并比较了两种试剂盒的阳性检出率、特异性、稳定性及检测值与中和抗体的线性关系。
结果表明，两种试剂盒在应用方面各有优劣，口蹄疫固相竞争ELISA 检测试剂盒具有操作简便、耗时短、成本低的优点，更适用于基层兽医实验室进行口蹄疫抗体定性检测；口蹄疫液相阻断ELISA 检测试剂盒可测定血清中的具体抗体效价值，更适用于口蹄疫抗体定量检测。
关键词：口蹄疫O 型、A 型抗体；液相阻断ELISA ；固相竞争ELISA ；检测试剂盒两种口蹄疫O 型、A 型抗体检测试剂盒检测猪口蹄疫抗体的应用研究刘利芳，杨思宇，李撒（郑州中农快检科技有限公司郑州451164）doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2023.11.049收稿日期：2023-02-16口蹄疫是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus ，FMDV ）引起的人畜共患传染病，是畜间发生于牛、羊、猪等偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。
该病传播迅速，流行面广，成年动物多取良性经过，幼龄动物多因心肌受损而死亡率较高。
本病广泛流行于世界各地，由于本病使动物及其产品流通和国际贸易受到限制，造成了巨大的经济损失，世界动物卫生组织将口蹄疫列为动物A 类传染病，我国《中华人民共和国动物防疫法》将其列为一类疫病[1]。
目前在我国，疫苗免疫是最主要手段。
酶联免疫吸附试验因在口蹄疫检测中具有敏感、特异、稳定、安全、快速、简单易于操作等特点而备受青睐。
本研究利用两种口蹄疫ELISA 检测试剂盒对血清进行检测，研究不同试剂盒的应用情况，以期选择更简便准确的方法用于大规模检测，以便做好口蹄疫防治工作，也有利于试剂盒的不断改进。
1材料与方法1.1材料1.1.1血清样品1）四份已知中和抗体效价的猪口蹄疫O 型血清，编号N 为9号、10号、11号、17号。
口蹄疫O 型抗体ELISA 检测血清稀释方法优化比较
资金项目：山东省农科院农业科技创新工程项目“畜禽重要疫病防控关键技术（CXGC2016B14）”；山东省现代农业产业技术体系生猪创新团队项目（SDAIT-08-17）。
作者简介：李玲（1983—），女，助理研究员,硕士，研究方向为畜禽疫病防控与生物制品研发。
*通讯作者口蹄疫O型抗体ELISA检测血清稀释方法优化比较李玲1,魏凤2,郝胜楠3,吕素芳2,李峰2*（1.山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600;2.山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州;3.东营市河口区畜牧业发展服务中心山东东营257200）试验选择液相阻断ELISA检测试剂盒，对20份血清样品检测口蹄疫O型抗体。
试验比较了1:8起始稀释8个梯度，1:16起始稀释4个梯度，1:32起始稀释4个梯度，1:64起始稀释4个梯度4种方法抗体效价测定结果，其阳性率分别为70%、65%、70%、70%，组间差异不显著。
提出了针对不同检测需求，合理选择血清稀释方法的建议，有助于指导临床应用。
蹄疫；O型抗体；血清；稀释方法口蹄疫（FMD）具有传染性强、传播速度快、感染动物种类多等特点[1]，世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。
我国制定实施了“国家口蹄疫防治计划”（2016—2020年），对O型口蹄疫，采取分阶段、分区域控制策略[2]。
2020年国家动物疫病强制免疫计划，要求口蹄疫的群体免疫密度应常年保持在90%以上,免疫抗体合格率全年保持在70%以上[3]。
此外，农业农村部明确对跨省调运乳用种用动物需依据“口蹄疫防治技术规范”等开展口蹄疫抗体检测[4]。
因此，牛、羊、猪口蹄疫抗体检测已成为基层常规检测项目，其中以液相阻断ELISA方法应用较多，李小明等[5]研究表明该方法灵敏性和特异性高，重复性好，结果判定科学且不受检验人员主观性影响。
我们在该方法检测口蹄疫O型抗体时，选择不同的血清稀释方法，并就其结果差异性进行了比较，旨在根据检测对象与检测目的，选择合适的血清稀释方法，实现提高检测效率、节约实验室资源的目的。
动物疫病防治员(高级)模拟试题(附参考答案)
动物疫病防治员(高级)模拟试题（附参考答案）一、单选题（共80题，每题1分，共80分）1、犬中暑采用的针灸穴位为A、耳尖、尾尖、肺俞、大椎B、耳尖、尾尖、水沟、大椎C、后海、后三里、尾根、百会、脾俞D、后海、后三里、百会、大椎正确答案：B2、氟尼新葡甲胺的药理作用不包括（）A、镇痛B、抗炎C、解热D、镇静正确答案：D3、临床试验完成后，新兽药研制者向国务院兽医行政管理部门提出新兽药注册申请时，应当提交该新兽药的样品和（）等资料：A、名称、主要成分、理化性质；B、研制方法、生产工艺、质量标准和检测方法C、药理和毒理试验结果、临床试验报告和稳定性试验报告D、以上三项正确答案：D4、人畜共患病疫情处置要做到“（）”。
A、早B、快C、严D、以上都是正确答案：D5、药液场地消毒，一般每平方米面积用量为（）毫升。
A、1000B、1500C、500D、2000正确答案：A6、炭疽杆菌为革兰氏（）性大杆菌。
B、厌氧C、阳D、需氧正确答案：C7、对所有猪实施猪瘟强制免疫(有特殊用途除外)，免疫抗体合格率达到（）以上。
A、60%B、70%C、80%D、90%正确答案：B8、下列哪项不属于PH7.4的等渗磷酸盐缓冲液（PBS）配制材料。
（）A、氯化钠B、磷酸二氢钾C、氯化钾D、柠檬酸钠正确答案：D9、畜禽标识制度应当坚持统一规划、( )的原则。
A、分类指导B、分步实施C、稳步推进D、以上三项正确答案：D10、《病死动物无害化处理技术规范》规定规模养殖场应配备无害化处理设施设备，建立（）制度。
A、灭菌B、净化C、无害化处理D、消毒正确答案：C11、牛宿草不转（瘤胃积食）治疗以（）为主，配合中药行气消胀。
A、血针B、水针D、电针正确答案：D12、动物肉尸所有运载工具在装前卸后必须彻底（）。
A、水洗B、净化C、清洗D、消毒正确答案：D13、下列变化中只涉及物理变化的是（ )。
A、蜡烛燃烧B、用偏二甲阱作燃料发射火箭C、干冰升华D、用达菲治疗H1N1流感正确答案：C14、被称为“百病之长”的邪气是（）。
口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测两种实验方法结果对比
异 性 、 稳 定 性 的优 点 ，并 且 检 测 结 果 精 确 ，实 验 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ板 ， ５ ０便 捷 ，是 现 在 口蹄 疫 抗 体跟 踪 监 测 首选 的 实 板 ３～ ５次 ，甩 干 ，加 口蹄 疫 ０型豚 鼠抗 体 工 作
验 方 法 。
液 ，５ ０虬 ／孔 ，封 板 ３ ７℃温 育 ３ ０ ｍ ｉ ｎ 。⑥ 洗 板
本 次 试 验 用 兰 州 兽 医 研 究 所 生 产 的 口蹄 疫 ０ ３～ ５次 ，甩 干 ，加 兔 抗 豚 鼠 Ｉ ｇ Ｇ — Ｈ Ｒ Ｐ工 作 液 ， 型液相 阻断 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ抗 体 检 测 试 剂 盒 进 行 口蹄 疫 ０ ５ ０儿 ／孔 ，封 板 ３ ７℃ 温 育 ３ ０ ｍ ｉ ｎ 。⑦ 洗 板 ３～ ５ 型 抗 体 检 测 ，试 验 方 法 是 对 同 一 批 猪 血 清 样 品 分 次 ， 加 入 底 物 Ａ与 底 物 Ｂ等 量 混 合 后 的 混 合
同情 况 下 使 用 不 同 实验 方 法 的建 议 。
① 在 稀 释 板 上 稀 释 样 品血 清 及 阴 阳 性 对 照 血 清 ， ５ ０儿 ／孔 。② 在 样 品血 清 和 阴 阳性 对 照 血 清 中加 入抗原 ，５ ０儿 ／孔 。 ③ 封 板 ， 振 荡 ， 将 稀 释 板
３ ７℃温 育 ９ ０ ｍ ｉ ｎ。④ 将 血 清 抗 原 混 合 转 移 到 口
别 进 行 ４℃ 静 置 过 夜 和 ３ ７℃ 温 育 ９ ０ ｍ ｉ ｎ ，并 且 液 ，５ ０儿 ／孔 ，避 光 反 应 １ ０ ｍ ｉ ｎ 。⑧ 加 入 终 止 液 ， 其 他 检 测 步 骤 相 同情 况 下 进 行 结 果 对 比 。试 验 结 ５ ０ Ｌ ／孑 Ｌ ，读 取 Ｄ ４ ９ ２ ｎ ｍ 。 果 讨 论 两 种 实 验 方 法 得 出 的检 测 结 果 差 异 和 对 不 ｉ ． ３ ． ２第 二 组 实 验 （ ３ ７℃温 育 ９ ０ ｍ ｉ ｎ ）步 骤 ：
国家口蹄疫参考实验室诊断检疫技术简介
国家口蹄疫参考实验室诊断检疫技术简介（一）现有诊断检疫技术（试剂盒）本实验室经过多年的研究和实践，建立了病毒分离、补体结合试验（CFT）病毒中和试验（VNT）、血清中和试验等诊断方法，并形成了一套完善的诊断程序，符合国际通用的操作标准。
同时发展了O型口蹄疫正向间接血凝诊断法，口蹄疫和猪水泡病反向间接血凝诊断法，琼脂扩散试验，以及口蹄疫VIA诊断和RT-PCR诊断试剂盒，满足口蹄疫样品的诊断和定型。
近年来，本实验室根据科学技术发展，结合国际组织推荐的口蹄疫诊断检疫技术，研制出了多种试剂盒和检测方法。
1、O型口蹄疫液相阻断ELISA诊断试剂盒液相阻断ELISA是国际兽疫局（OIE）推荐的检测口蹄疫病毒抗体的标准方法。
用分离于我国的口蹄疫O型毒株研制出液相阻断ELISA试剂盒，用于测定牛、猪、羊血清中针对O型口蹄疫病毒结构蛋白的抗体。
本试剂盒主要用途，一是对进出口动物口蹄疫病毒抗体监测；二是监测口蹄疫疫苗免疫抗体，以评价动物群体抗感染能力。
2、口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒（3ABC-I-ELISA）区分口蹄疫感染和免疫动物是国际活畜进出口贸易的必检项目，也是OIE 判定疫情国家和非疫情国家的依据。
本试剂盒适用于活畜进出口调运、疫区净化检疫和群体无症状感染评价，检测活畜血清中口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体，以区分感染和免疫动物。
本试剂盒可测出牛感染后长达480天（16个月）的感染抗体，其多项技术指标已超过国外同类产品。
3、口蹄疫多重RT-PCR诊断试剂盒（FMD Multi RT-PCR）本试剂盒适用于病料诊断、反刍活畜和肉品等畜产品染毒检测，特异性扩增病料、O/P液和肉品中的口蹄疫病毒基因片段，确认样品供体是否染毒。
本试剂盒含有三对引物，可扩增多个口蹄疫病毒基因片段，至少适用于口蹄疫O型、A 型和AsiaⅠ型的三个血清型的检测，可查出0.07LD50的病毒量。
4、口蹄疫原位杂交检测法原位杂交是借助核酸分子杂交的方法，在显微镜水平检测和定位特异的核酸片段。
O型口蹄疫病毒单域抗体的筛选和鉴定及其在口蹄疫检测中的应用中期报告
O型口蹄疫病毒单域抗体的筛选和鉴定及其在口蹄
疫检测中的应用中期报告
口蹄疫是一种高传染性的病毒性疾病，对于畜牧业造成了严重的损失。
传统的检测方法包括病毒分离、血清学检测和分子生物学检测等，但存在着检测时间长、复杂度高等问题。
因此，寻找一种简便、快速、高效、经济的口蹄疫病毒检测方法成为了研究的热点。
本研究的目的是筛选和鉴定能够专一结合O型口蹄疫病毒的单域抗体，并探讨其在口蹄疫检测中的应用。
首先，我们从一个人源化嵌合单克隆抗体库中筛选出能够高亲和结合O型口蹄疫病毒的单克隆抗体。
随后对这些单克隆抗体进行鉴定，确定了一种能够高效结合O型口蹄疫病毒的单域抗体，并命名为VT31。
为了检测VT31的特异性和灵敏度，我们使用酶联免疫吸附测定(ELISA)对不同类型的口蹄疫病毒进行了检测，结果显示VT31仅对O型口蹄疫病毒有高效结合能力，并且检测灵敏度高，可以检测到ng/mL级别的病毒。
为了探讨VT31在实际应用中的效果，我们从临床病例中选取若干病毒阳性的血清样本进行检测试验，结果与传统的血清学检测方法相比，VT31的检测时间更短、操作更简单、结果更加准确和可靠。
综上，本研究成功筛选并鉴定出了针对O型口蹄疫病毒的单域抗体VT31，并探讨了其在口蹄疫检测中的应用。
这项研究为口蹄疫的快速检测提供了一个新的思路和方法。
高级动物疫病防治员模考试题+答案
高级动物疫病防治员模考试题+答案1、下列行为中( )属于不道德行为。
A、夫妻恩爱B、尊老爱幼C、孝敬父母D、辱骂邻居答案：D2、结核杆菌是一种纤细的（）杆菌。
A、中B、弱C、小D、大答案：C3、关于生物安全实验室良好内务行为，其中错误的是（ )。
A、禁止在工作场所存放可能导致阻碍和绊倒危险的大量一次性实验材料B、所有用于处理污染性材料的设备和工作表面在每次工作结束、有任何漏出或发生了其它污染时应使用适当的试剂清洁和消毒C、对漏出的样本、化学品、放射性核素、培养物或其它材料应在风险评估后清除并对涉及区域去污染清除时应使用经核准的安全预防措施、安全方法和个人防护装备D、保持了良好内务行为后，可不必制定发生事故或漏出导致生物、化学品或放射性核素污染时，设备保养或修理之前对每件设备去污染、净化和消毒的专用规程答案：D4、动物在接种疫苗后，少数家畜因品种、年龄、机体差异，出现站立不安、卧地不起、呼吸困难、（）、肌肉震颤、瘤胃鼓气、口角流涎、倒地抽搐、鼻腔出血、孕畜流产、部分严重者甚至出现局部脓肿、坏死等症状。
A、可视粘膜黄染B、淋巴结肿大C、可视粘膜充血或水肿D、可视粘膜发绀答案：C5、脏器抹片要作姬姆萨染色，可用（）固定。
A、甲醛B、甲醇答案：B6、动物专用的解热镇痛抗炎药是( )A、氨基比林B、安乃近C、氟尼新葡甲胺D、阿司匹林答案：C7、成年牛发生骨软症时，主要是（）。
A、磷缺乏B、钙缺乏C、维生素D缺乏D、以上均不对答案：B8、病理剖检内部检查不包括（）A、皮下B、被毛C、口腔D、内部器官答案：B9、下列哪一个不是犬的躯干穴位？A、大椎B、百会C、天门D、命门答案：C10、真胃左方变位的诊断要点，描述错误的有（）。
A、叩诊呈钢管音B、触诊呈液体振荡音C、穿刺液PH值＞8D、产后2～4周答案：C11、仔猪副伤寒活疫苗为（）海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
C、红色D、蓝色答案：D12、（）仅适用于肠道线虫卵的检查。
牛口蹄疫O型抗体(FMD-O-Ab)酶联免疫分析(ELISA)
牛口蹄疫O型抗体（FMD-O-Ab）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60ng/L，40ng/L，20ng/L，10ng/L，5ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
口蹄疫诊断技术--液相阻断ELISA试验在操作中的注意事项
口蹄疫诊断技术--液相阻断ELISA试验在操作中的注意事项冯妹玲
【期刊名称】《中国动物保健》
【年(卷),期】2013(15)12
【摘要】液相阻断ELISA实验最大的优点是使用灭活抗原，因而无需担忧散毒，也摆脱了对细胞培养和实验动物的依赖，用以检测动物接种疫苗后血清中抗体的分泌水平，具有快速、灵敏、准确等优点，此方法克服了病毒中和试验无法在临床检测中推广的缺点，适合于大批样品的血清学调查，
【总页数】1页(P36-36)
【作者】冯妹玲
【作者单位】广阳区动物疫病预防控制中心河北廊坊065000
【正文语种】中文
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2015年第1期浙江畜牧兽医欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍欍表3副猪嗜血杆菌西药药敏试验结果药物耐药中敏高敏抑菌圈直径环丙沙星1516－202126氧氟沙星1011－151632头孢哌酮1516－202136复方新诺明1011－151611林可霉素1415－20210诺氟沙星1516－181924青霉素1920－27280链霉素1112－14150庆大霉素1213－141521Hps 血清型较多，目前报道有15种，不同菌株对同一种抗生素的敏感性存在很大差异，临床治疗应结合分离菌株的药敏试验结果，科学用药。
3小结与讨论本试验通过对疑似发病猪场采集患猪病料，并进行病原菌分离鉴定、动物试验，鉴定为副猪嗜血杆菌。
通过药敏试验，确诊分离菌对庆大霉素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星和头孢哌酮高敏，复方新诺明中敏，青霉素、链霉素、林可霉素耐药；对金银花及其组成的复方敏感，且复方作用效果优于单方［9］。
副猪嗜血杆菌病临床治疗上中药建议使用金银花及其组成复方，西药建议使用庆大霉素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星和头孢哌酮。
参考文献［1］Oliveira S ，Blackall P J ，Pijoan C．Characterization of thedi －versity of Haemophilus parasuisfield isolates by use of sero －typing and genotyping ［J ］．Am J Vet Ｒes ，2003，64（4）：435－442．［2］Del Ｒio M L ，Gutierrez C B ，Ｒodriguez Ferri E F．Value ofin －direct hemagglutination and coagglutination tests for serotyping Haemophilus parasuis ［J ］．J Clin Microbiol ，2003，41（2）：880－882．［3］蔡旭旺，刘正飞．副猪嗜血杆菌的分离培养和血清学鉴定［J ］．华中农业大学学报，2005（2）：55－58．［4］高丰，罗毅，成军，等．副猪嗜血杆菌感染的诊断与防治［J ］．动物医学进展，2002，23（6）：101－102．［5］朱小宁，余兴龙，李润成，等．副猪嗜血杆菌的分离与鉴定及其16S rＲNA 生物信息学分析［J ］．湖南农业大学学报：自然科学版，2009，35（5）：517－520．［6］易顺华，陈进喜，蒋碧桂．副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验［J ］．动物医学进展，2009，30（9）：41－44．［7］冼琼珍，黄耿森，王淑敏，等，副猪嗜血杆菌的分离鉴定［J ］．中国兽医杂志：2006：42（3）：27－28．［8］尹秀凤，王艳，姜平，等．副猪嗜血杆菌PCＲ检测方法的建立与应用［J ］．中国兽医学报，2007，27（2）：180－183．［9］华升，梅书棋，曾德芳．副猪嗜血杆菌病研究进展［J ］．动物医学进展，2006，27（11）：7－10．收稿日期：2014-11-21口蹄疫O 型液相阻断ELISA 免疫抗体检测方法的应用胡珊莲（上海市闸北区光明荷斯坦牧业有限公司，上海闸北200436）摘要：应用液相阻断ELISA 试验方法检测上海光明荷斯坦牧业有限公司牧场牛群经口蹄疫O 型灭活疫苗免疫的奶牛血清样品2412份。
经检测，2412份样品中规模奶牛场牛群免疫抗体滴度≤1ʒ64样品42份，抗体滴度≥1ʒ128样品2370份，抗体保护率为98%。
关键词：液相阻断ELISA ；O 型口蹄疫；抗体检测；奶牛中图分类号：S858．23文献标识码：A 文章编号：1005－7307（2015）01－0003－003口蹄疫属我国农业部公布的一类动物疫病，是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，以牛，猪最易感，羊、骆驼、象等均有发病报告。
该病可分为O 、A 、C 、南非Ⅰ型、南非Ⅱ型、南Ⅲ型和亚洲Ⅰ型等7个血清型，其中以O型和A 型分布最广，危害最大。
本试验应用液相阻断ELISA 检测方法跟踪检测上海光明荷斯坦牧业有限公司下属牧场O 型口蹄疫疫苗免疫抗体滴度水平，以利及时指导下属牧3浙江畜牧兽医2015年第1期场O型口蹄疫防疫工作，为牧场健康发展提供有效保障。
现将检测应用情况报告如下。
1材料与方法1．1检测样品上海光明荷斯坦牧业有限公司下属牧场牛群经口蹄疫O型灭活疫苗（JYBL-2014-5-21）免疫的奶牛血清样品2412份。
1．2实验器材酶标仪、37ħ恒温温箱；5．0 50．0μL移液器、50．0 200．0μL移液器及50．0 300．0μL12道移液器；配套移液枪尖，移液槽；吸水纸；96孔平底酶标板；96孔U形底聚丙烯微量抗原抗体反应板；检测试剂盒系采用中国农科院兰州兽医研究所口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒。
1．3实验步骤1．3．1牛群免疫应用口蹄疫O型灭活疫苗按照产品说明书规定免疫剂量及免疫方法对公司下属牧场牛群接种免疫，于2免21d后采血进行免疫效果检测。
1．3．2试剂准备包被缓冲液（pH9．6）、磷酸盐－吐温缓冲液（PBST）、PBST稀释液、底物溶液按试剂盒说明书进行配制。
1．3．3包被pH9．6包被缓冲液稀释口蹄疫O型病毒兔抗血清至工作浓度（1ʒ1000），混合均匀，酶标板上每孔加入50μL，振荡，封板室温过夜，使抗体在pH9．6条件下吸附于酶标板上。
1．3．4抗原抗体反应（对照血清及待检血清）以96孔U型微量血凝板检测，以20份样品为例，需板2块，血清以倍比稀释法进行（注：空白孔为无样品加入）。
A．加PBST稀释。
A1—A10加入150μL PBST 稀释液，B1—B10，C1—C10，D1—D10，E1—E10各加入50μL PBST稀释液。
H1加入150μL PBST稀释液，H2—H10各加入50μL PBST稀释液，A12—B12各加50μL PBST稀释液。
B．加血清稀释。
在A1中加入50μL待检血清样品，混匀后取50μL加入B1，再混匀后取50μL 加入C1连续2倍稀释（从A11ʒ4倍开始稀释到E1 1ʒ64倍，A1—A10共10个样品），直至加到E1混匀，再从E1中吸取50μL弃去。
阳性血清取50μL 加入H1，混匀后取50μL加入到H2，直至加入到H10混匀，再从H10中吸取50μL弃去（从H11ʒ4倍开始稀释到H101ʒ2048倍）。
阴性血清取50μL 加入A12，混匀后取50μL加入B12，混匀后取50μL弃去。
C．加病毒抗原。
口蹄疫O型病毒抗原用PBST 稀释液稀释到工作浓度（1ʒ12，即1份病毒抗原加11份PBST），96孔U型微量血凝板中待检样品血清及阴阳性血清每孔加50μL，加入等量工作浓度的病毒抗原后，血清稀释度加倍。
E12—H12四个对照孔各加100μL稀释至工作浓度的病毒抗原。
振荡，盖膜封板，2 8ħ过夜（详见图1）。
A B C D E F G H1234567891011 121ʒ81ʒ81ʒ81ʒ81ʒ81ʒ81ʒ81ʒ81ʒ81ʒ8－1ʒ4 1ʒ161ʒ161ʒ161ʒ161ʒ161ʒ161ʒ161ʒ161ʒ161ʒ161ʒ8 1ʒ321ʒ321ʒ321ʒ321ʒ321ʒ321ʒ321ʒ321ʒ321ʒ321ʒ641ʒ641ʒ641ʒ641ʒ641ʒ641ʒ641ʒ641ʒ641ʒ641ʒ1281ʒ1281ʒ1281ʒ1281ʒ1281ʒ1281ʒ1281ʒ1281ʒ1281ʒ128+1ʒ81ʒ161ʒ321ʒ641ʒ1281ʒ2561ʒ5121ʒ10241ʒ2048病毒抗原对照图196孔U型微量血凝板10份血清加入工作浓度病毒抗原后的浓度表1．3．5洗酶标板及抗原抗体转移先将2块抗原抗体反应板从4ħ中取出室温放置，用PBST稀释液连续洗酶标板4次，吸水纸上甩干，再将抗原抗体混合物从反应板上按次序转移至酶标板上的对应孔，每孔加50μL，封板，37ħ温育60min（详见图2）。
1．3．6洗酶标板及加豚鼠抗血清用PBST稀释液连续洗酶标板4次，吸水纸上甩干，用豚鼠抗血清稀释液将口蹄疫O型病毒豚鼠抗血清稀释至工作浓度（1ʒ1000），每孔加50μL，封板，37ħ温育60min。
42015年第1期浙江畜牧兽医A B C D E F G H123456789101112 S11ʒ16S2S3S4S5S6S7S8S9S10+1ʒ16－1ʒ4 S11ʒ321ʒ32－1ʒ8 S11ʒ641ʒ64空白S41ʒ1281ʒ128空白S111ʒ16S12S13S14S15S16S17S18S19S201ʒ256S111ʒ321ʒ512S111ʒ641ʒ1024S111ʒ1281ʒ2048病毒抗原对照图296孔酶标板检测20份样品布局图1．3．7洗酶标板及加辣根过氧化物酶用PBST 稀释液连续洗酶标板4次，吸水纸上甩干，用PBST 稀释液将兔抗豚鼠IgG—辣根过氧化物酶结合物稀释至工作浓度（1ʒ500），每孔加50μL，封板，37ħ温育60min。
1．3．8洗酶标板及加底物溶液用PBST稀释液连续洗酶标板4次，吸水纸上甩干，加50μL底物溶液（底物溶液每1mL加10μL3%双氧水），封板，37ħ温育15min。
1．3．9加终止液15min后，每孔加50μL终止液终止反应，在酶标仪上读取D492nm值。
1．4实验结果判定1．4．1实验认可标准每板设4孔病毒抗原对照，病毒抗原对照不加任何血清，直接用PBST稀释至使用浓度，与血清/病毒抗原复合物同步加入ELISA板孔，50．0μL/孔，病毒抗原对照D492nm值应在1．5ʃ0．5范围内。
阳性对照抗体效价应在（1ʒ1024）ʃ1滴度内，阴性对照血清抗体效价应＜1ʒ8。
病毒抗原对照平均D492nm值50．00%计算（临界值），抗原对照4孔，弃去最高和最低D492nm OD值，计算剩余2孔的平均D492nm值，除2，即50．00%对照值。
该值即为临界值，表示阻断50．00%反应的对照D492nm值。
1．4．2结果判定标准以病毒抗原对照平均D492 nm值的50．00%为临界值，被检血清稀释孔D492 nm值＞临界值的孔为阴性孔，≤临界值的孔为阳性孔，阳性孔的D492nm值=临界值时所对应的稀释度为该份血清的抗体滴度。
2结果与分析2．1病毒抗原对照D492nm值2412份检测血清样品，共采用121个ELISA板，484个病毒抗原对照D492nm值在1．1 2．0范围内。
2．2阴、阳性对照血清抗体效价121个牛群检测血清样品ELISA板临界值均在对应板阳性对照血清1ʒ1024ʃ1滴度的D492nm值内，121个阴性对照血清样品1ʒ8处滴度的D492nm值均≥相应板的临界值相。