分子生物学检验完整版

1病原生物基因组在医学上有何应用？详见书P3

a菌种鉴定b确定病毒感染和病毒载量c病毒分析d细菌耐药监测和分子流行病学调查

2什么是原癌基因，原癌基因有什么特性，原癌基因可以分为哪些种类以及原癌基因常见的激活机制有哪些？

原癌基因是指人类或其他动物细胞(以及致癌病毒)固有的一类基因，能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称。

特性：进化上高度保守，负责调控正常细胞生命活动，可以转化为癌基因。

功能分类：生长因子，生长因子受体，信号转导蛋白，核调节蛋白，细胞周期调节蛋白，抑制凋亡蛋白激活机制：插入激活，基因重排，基因点突变，基因扩增，基因转录改变

3试述Down综合征（21三体综合征）的主要临床特征及核型。

临床特征：生长发育障碍，智力低。呆滞面容，又称伸舌样痴呆。40%患者有先天性心脏畸形。肌张力低，50%患者有贯通手，男患者无生育能力，女患者少数有生育能力，遗传风险高。

核型：92.5%患者游离型：核型为47，XX(XY),+21

2.5%患者为嵌合型：46，XX(XY)/47，XX(XY),+21

5%患者为易位型：46，XX(XY),-14，+t(14q21q)

4简述淋球菌感染的主要传统实验室诊断方法及其主要特点，对比分析分子生物学方法的优势

1直接涂片染镜检：敏感度和特异性差，不能用于确诊。

2分离培养法：诊断NG感染的金标准，但是其对标本和培养及营养要求高，培养周期长，出报告慢，难以满足临床要求。

3免疫学法：分泌物标本中的非特异性反应严重以及抗体法间的稳定性和条件限制，推广受限。

分子生物学的优点：敏感，特异，可直接从了临床标本中检出含量很低的病原菌，适应于快速检测

5、在单基因遗传病的分子生物学检验中，点突变检测常用方法有哪些？

1异源双链分析法（HA）2突变体富集PCR法3变性梯度凝胶电泳法4化学切割错配法5等位基因特异性寡核苷酸分析法6DNA芯片技术7连接酶链反应8等位基因特异性扩增法9RNA酶A切割法10染色体原位杂交11荧光原位杂交技术

6、简述白假丝酵母菌的分子生物学检验方法

白假丝酵母菌分子生物学检验主要包括白假丝酵母菌特异性核酸（DNA RNA）的检测、基因分型和耐药基因分析等。

1PCR技术：选择高度特异性的天冬氨酸蛋白酶基因设计引物

PCR—斑点杂交技术：正向杂交和反向杂交，后者可一次检测多种真菌

DNA指纹技术：RFLPRAPD电泳核型分析

AP—PCR技术：定义方法简便，快速，特别适合临床应用

DNA序列分析：可测定rDNA序列也适用于基因突变引起的耐药

基因芯片技术：适用于病原体的耐药研究

7、F VIII基因倒位导致血友病A，DMD基因外显子缺失导致与杜氏肌营养不良，珠蛋白基因突变导致与珠蛋白合成障碍性贫血。

（第11章，P197，P203，P207。窝觉得大家把题目读三遍就可以了）

答：F VIII基因倒位是导致的血友病A的主要原因（占50%）其它基因突变，如点突变，缺失，插入也会导致血友病A。

同理DMD基因外显子缺失是迪谢内肌营养不良（杜氏肌营养不良）发生的主要原因（60%-70%）。

珠蛋白合成障碍性贫血有六种，主要的两种是α珠蛋白生成障碍性贫血和β珠蛋白生成障碍性贫血，基因突变是主要发病原因。

8、基因多态性有哪些的临床应用？（P4）

答：1、基因定位和遗传病相关性分析；2、疾病诊断和遗传咨询；

3、多基因病的研究；

4、器官移植配型和个体识别

9.第一代测序技术特点。（p83）

答：优点：高读长，准确率一次性达标率高，能很好处理重复序列和多聚序列，易小型化。

缺点：通量低，单个样本制备成本相对较高，难以做大量的平行测序,小规模进行。

10. 慢粒融合基因。急性早幼粒融合基因。

答案：（一）慢粒融合基因（p229）

BCR-ABL融合基因：BCR-ABL为t（9；22）(q34;q11)染色体易位所产生的融合基因，可见于25%-40%的成人ALL和4%-6%的儿童ALL，更是CML的重要分子基础（95%），Ph1染色体异常即为t(9；22（q34;q11）易位。

(二)急性早幼粒融合基因（p230）（10-529）

PML-RARa融合基因：多数急性早幼粒细胞白血病（APL）有染色体t(15;17)(q22；q21)的易位，位于15q22的早幼力粒细胞白血病(PML)基因的17q21的维A酸受体a(RARa)基因融合成PML/RARa。98%的AML-M3亚型发生该融合基因。

11华法林用药监测常用何种基因多态性，它有何特点。

P264 监测CYP2C9基因多态性，其特点为：CYP2C9约占CYP450总量的20%，参与约12%临床药物的代谢，尤其与磺酰脲类降糖药甲糖宁的代谢特异性有关。（不肯定，参照P262）

12在细胞增殖周期中，染色体的形态最典型和清晰的阶段。

P243 （填空题）有丝分裂中期

13单基因遗传病间接诊断是在家系中进行？

P192 （填空题）连锁分析和关联分析

14染色体异常？原癌基因、核酸分子标志物、病毒感染的完整性检出策略、线粒体基因突变性糖尿病、PCR-RFLP、AP-PCR技术、抑癌基因、准病毒株、核型分析、连锁染色体异常：在受到环境，物理，化学，生物，自身遗传和母亲年龄等因素影响，导致人体染色体数目和结构的异常改变。

原癌基因：是指人类或其他动物细胞固有的一类基因，能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称。

核酸分子标志物：是分子生物学检验的主要内容，包括基因突变，DNA多态性，基因组DNA片段，RNA和循环核酸等多种形式。

病毒感染的完整性检出策略：通过分子生物学检验技术对病毒的存在与否作出明确的判断，同时能够诊断出带菌者和潜在性感染者，并能对病毒进行拷贝数测定，基因分型检测及亚型和耐药性鉴定。

线粒体基因突变性糖尿病：（p240）tRNAleu(UUR)A3243G是国际上唯一公认的线粒体糖尿病致病突变，是国内外报道的最多，发病率较高的单基因糖尿病突变位点。（课本上找不到）

PCR--PFLP:：是对PCR产物作限制性片段的长度多态性分析，是根据PCR产物突变序列是否位于限制性内切酶的酶切位点内设计的。