如何选择合适的单、多克隆抗体及抗原

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多克隆抗体特点

多克隆抗体特点1.引言1.1 概述概述多克隆抗体是一种由多个不同B细胞克隆产生的抗体，与单克隆抗体相比，它具有更高的抗原特异性和更广泛的抗原识别能力。

多克隆抗体的制备方法相对简单，能够同时识别抗原上的多个表位，因此在科学研究和医学应用中具有重要的价值。

本文将首先介绍多克隆抗体的定义和原理，包括多克隆抗体的组成、产生过程以及克隆筛选的方法。

接着，将详细探讨多克隆抗体的制备方法，包括抗原免疫、脾细胞融合、杂交瘤筛选等步骤。

同时，还将介绍如何利用多克隆抗体对特定抗原进行鉴定和检测，以及多克隆抗体在各种实验和临床应用中的优势和局限性。

最后，本文将总结多克隆抗体的优点，包括更好的抗原识别能力、更高的敏感性和更广泛的应用范围。

同时，也将展望多克隆抗体在生物医学领域的应用前景，包括药物研发、病毒检测、免疫治疗等方面。

通过深入了解多克隆抗体的特点和应用前景，我们可以更好地理解这一技术的潜力，为生物医学研究和临床诊断提供更多的选择和可能性。

1.2 文章结构文章结构部分的内容主要是对整篇文章的结构进行介绍和概述。

在本文中，文章的结构分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分（1. 引言）用于引出本文的研究背景和意义，对多克隆抗体的特点进行概述，说明本文将要探讨的问题和目的，即本文要对多克隆抗体的特点进行详细的介绍和分析。

正文部分（2. 正文）是文章的核心部分，主要包括两个小节：多克隆抗体的定义和原理（2.1）和多克隆抗体的制备方法（2.2）。

在多克隆抗体的定义和原理中，将从理论角度对多克隆抗体的概念进行解释，并介绍多克隆抗体的产生原理。

而在多克隆抗体的制备方法一节里，则会详细介绍多克隆抗体的制备过程和方法。

结论部分（3. 结论）对文章进行总结和归纳，列举多克隆抗体的优点，并探讨了多克隆抗体在未来的应用前景。

通过本文对多克隆抗体特点的介绍和分析，可以更好地认识和理解多克隆抗体，为其在临床和科研领域的应用提供参考和指导。

综上所述，本文主要从引言、正文和结论三个部分介绍了多克隆抗体特点。

多克隆抗体的制备方法

多克隆抗体的制备方法多克隆抗体是由多个不同的免疫细胞（多克隆）产生的抗体混合物，可以识别并结合到目标生物标志物上。

多克隆抗体在科学研究、临床诊断和治疗中具有重要的应用价值。

制备多克隆抗体需要经过一系列复杂的实验流程，下面将详细介绍多克隆抗体的制备方法。

一、抗原的选择在制备多克隆抗体时，首先需要选择一个合适的抗原。

抗原通常是目标生物标志物的蛋白质或多肽片段。

选择抗原的关键因素包括其表达水平、稳定性和纯度。

抗原的选择直接影响到最终多克隆抗体的亲和力和特异性。

二、免疫小动物免疫小动物通常是用于制备多克隆抗体的主要实验动物，例如小鼠、兔子、大鼠等。

在免疫前需要确保小动物健康，并对其进行相应的预处理，如注射驱虫药物、进行适当的接种。

还需要根据具体实验要求决定预免疫、免疫计划以及免疫方案的制定。

三、免疫过程免疫过程是制备多克隆抗体的核心环节。

首先需将抗原与适当的佐剂混合，增强免疫原性，然后用于免疫小动物。

在免疫过程中需要控制免疫剂量和免疫间隔时间，以及监测动物的免疫应答情况。

免疫后还需要定期采集血清样本，监测抗体滴度的动态变化。

四、细胞融合与筛选经过一段时间的免疫后，需要从免疫动物的脾脏或骨髓中收集免疫细胞，然后与肿瘤细胞进行融合，得到杂交瘤细胞。

随后采用限稀稀释法将杂交瘤细胞进行单克隆化分，筛选出高亲和力的多克隆抗体细胞株。

五、生产与纯化经过筛选的多克隆抗体细胞株需要进行扩大培养，生产足够数量的多克隆抗体。

之后通过蛋白质纯化技术，如亲和层析、离子交换层析等手段，从细胞培养上清液中纯化出多克隆抗体。

六、性质鉴定与应用纯化后的多克隆抗体需进行性质鉴定，包括亲和力、特异性、稳定性等方面的测试。

最后经过滤菌毒处理后，多克隆抗体可应用于科学研究、临床诊断、生物药物研发等领域。

多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，需要科学合理地选择抗原、合理设计免疫方案、熟练掌握细胞融合和筛选技术，以及对多克隆抗体进行严格的生产和性质鉴定。

抗体选择

抗体选择随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。

面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。

当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。

抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。

一、抗体选择总体原则1. 关于特异性的选择特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。

（1）蛋白特异性针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。

如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。

内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。

磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。

（2）种属特异性同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。

目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。

需要参照说明书注明的可反应种属信息。

一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。

（3）实验方法特异性目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。

具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。

但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。

抗体药物筛选的一般方法

抗体药物筛选的一般方法
抗体药物筛选的一般方法包括以下步骤：
1. 选择适当的靶标：根据疾病的特征和致病机理，选择适当的靶标，如细胞表面蛋白、细胞因子及其受体等。

2. 制备抗体库：制备包括单克隆和多克隆抗体在内的抗体库，通过不同的筛选方法进行抗体筛选。

3. 筛选抗体：利用ELISA、PCR、流式细胞术等方法对抗体库进行筛选，筛选出具有高亲和力、高度特异性、低副作用等优良特性的抗体。

4. 验证抗体：在试管和体内进行抗体验证，如体内药物动力学、药物药效学、毒性测试等，以确定抗体的安全性和有效性。

5. 优化抗体：通过改变抗体结构、引入基因工程技术等方法进行抗体的优化，提高抗体的亲和力和特异性，降低免疫原性等。

6. 开发生产工艺：根据抗体的特点和用途开发相应的生产工艺，如细胞培养、蛋白纯化等。

7. 工业化生产：将筛选出的优良抗体进行工业化生产，以满足临床需求。

多克隆抗体制备的基本过程

多克隆抗体制备的基本过程
多克隆抗体制备的基本过程包括以下步骤：
1. 免疫原的选择：选择合适的免疫原，可以是蛋白质、多肽、细胞表面抗原等。

2. 免疫动物的选择：选择适合的免疫动物，常见的包括小鼠、兔子等。

3. 免疫动物的免疫：将免疫原注射到免疫动物体内，刺激其免疫系统产生特异性抗体。

4. 收集免疫动物的血清：在免疫动物免疫一段时间后，收集其血清，其中含有特异性抗体。

5. 分离特异性抗体：通过多种方法如沉淀、层析等技术，将特异性抗体从血清中分离出来。

6. 筛选特异性抗体：对分离出的抗体进行筛选，通常采用ELISA、免疫组化等方法，筛选出特异性较好的抗体。

7. 克隆特异性抗体：将特异性较好的抗体细胞与骨髓瘤细胞（如SP2/0）融合，形成杂交瘤细胞。

8. 杂交瘤细胞的筛选：通过培养基中添加抗代谢毒物质如氨甲酰青霉素（HAT），筛选出只含杂交瘤细胞的细胞。

9. 单克隆抗体的扩增：将筛选出的单克隆细胞进行培养和扩增，得到大量的单克隆抗体。

10. 纯化和鉴定：对单克隆抗体进行纯化和鉴定，确保其纯度和特异性。

11. 应用：获得的多克隆抗体可以应用于免疫组化、免疫沉淀、免疫印迹、免疫荧光等实验和应用中。

需要注意的是，多克隆抗体制备的过程可能因具体实验目的、免疫动物的选择等因素而有所差异。

以上是一般的基本步骤，具体实验过程中还需根据实际情况进行调整和优化。

抗体制备及免疫检测技术的原理和应用

抗体制备及免疫检测技术的原理和应用抗体是一种重要的生物分子，可以与抗原作用而具有极高的特异性。

由于抗体分子本身拥有极强的特异性和亲和力，因此被广泛应用于蛋白质分离、酶联免疫吸附试验、免疫荧光分析、免疫印迹、流式细胞术以及疫苗研究等诸多领域，也成为了生物分子分离、分析、诊断和治疗的重要工具。

本文将介绍抗体制备及免疫检测技术的原理和应用。

一、抗体制备的原理抗体是由机体B细胞分泌的一类免疫球蛋白，它由两部分组成：重链和轻链。

重链和轻链各有一端为变异区和恒定区。

抗体的制备主要有两种方法：多克隆和单克隆。

多克隆抗体是指利用多个免疫细胞杂交而制得的抗体，它的产生需要一定的时间。

单克隆抗体则是利用一个免疫细胞杂交制得的抗体，它具有较高的特异性。

使用抗体制备需要对抗原进行选择，产生抗体的条件是抗原分子必须能诱导机体产生免疫反应，即具有免疫原性。

同时，抗原还必须具有一定的抗原特异性，使得诱导机体产生的抗体具有特定的亲和性。

在制备抗体过程中，还需要进行抗体亲和纯化和抗体标记等处理，以便用于各种免疫学实验和临床诊断。

二、免疫检测技术的原理免疫学检测技术的核心原理是利用抗体和抗原之间的相互作用，检测样品中特定抗原的存在与否。

在此过程中，选择合适的检测方法可以根据不同的具体要求来设定；同时，要选取合适的抗原和抗体以确保检测的准确性和敏感性。

免疫检测技术有很多种类，其中最重要的包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射性免疫检测、免疫荧光分析、免疫印迹和流式细胞术等。

酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的分析方法，可用于测定血清、唾液和尿液等生物体中特定抗体或抗原的含量。

ELISA原理是利用酶标记的抗体或抗原，检测样品中特定抗体或抗原的存在。

放射性免疫检测则是采用放射性标记的抗体分子，通过测定放射性计数来检测样品中的抗原分子。

这种方法的优点是高灵敏度和准确性，但不适用于现场检测。

免疫荧光分析是利用荧光标记的抗体与荧光标记的抗原相互作用，检测样品中特定的抗原或抗体。

单克隆抗体制备步骤及注意事项

单克隆抗体制备步骤及注意事项单克隆抗体（Monoclonal antibody，mAb）是指由单一B细胞克隆分离得到的抗体，其具有高特异性和高亲和力。

制备单克隆抗体的方法主要有杂交瘤技术和重组DNA技术。

以下是单克隆抗体制备的步骤及注意事项。

步骤一：抗原免疫1.选择合适的抗原：根据需要检测的分子或细胞表面标志物，选择合适的抗原。

2.免疫动物：常用的动物有小鼠、兔子等。

选择适合的动物后，根据抗原的种类和免疫动物对该抗原的敏感性，设计免疫方案。

3.免疫计划：免疫计划包括免疫剂量、免疫途径和免疫次数等。

通常先进行原位免疫，然后再以单体或混合抗原进行体内免疫。

步骤二：细胞融合1.收集脾细胞：在最佳时期，解剖免疫动物，取出脾脏。

2.细胞培养：将收集的脾细胞在无菌条件下分散成单个细胞，并在培养基中培养，以供细胞融合使用。

3.准备骨髓瘤细胞：选择合适的骨髓瘤细胞，例如NS0或SP2/0等。

将其培养至对数生长期。

4.细胞融合：在抗原刺激下，将脾细胞与骨髓瘤细胞以一定比例混合，用聚乙烯醇或其他化合物促进细胞融合。

步骤三：细胞筛选与扩展1. HT增重培养：用含有hprt缺陷的培养基筛选融合细胞，以选择杂交瘤细胞。

2. Limited Dilution扩展：以一细胞一孔的方式将杂交瘤细胞进行有限稀释，使其实现单克隆化。

3.细胞培养：将单克隆细胞株移植到培养瓶中，进行培养和扩增。

步骤四：单克隆抗体鉴定1.酶联免疫吸附试验（ELISA）：用ELISA方法筛选单克隆细胞株，检测其抗原特异性。

2.免疫组织化学检测：将单克隆抗体应用于细胞和组织切片，检测其在特定细胞或组织中的反应。

3.流式细胞术：通过流式细胞仪检测单克隆抗体与特定细胞表面标志物的结合情况。

步骤五：单克隆抗体生产与纯化1.细胞培养：将单克隆细胞株培养扩增至一定程度。

2.抗体收集：将培养上清液进行抗体收集。

3.纯化与浓缩：利用亲和层析、离子交换、凝胶过滤等技术，对抗体进行纯化和浓缩。

多克隆抗体的制备过程及原理

多克隆抗体的制备过程及原理
多克隆抗体是一种由多个不同的B细胞克隆所产生的抗体，能够识别并结合多个抗原表位。

其制备过程主要包括以下几个步骤：
1. 免疫原的选择：选择目标抗原，可以是蛋白质、多肽、细胞表面蛋白等。

2. 免疫动物的选择：根据抗原的物种来源，选择合适的免疫动物，如小鼠、兔子、山羊等。

3. 免疫动物的免疫：将免疫原注射到免疫动物体内，激发免疫反应。

通常采用多次免疫，间隔一定时间进行。

4. 细胞融合：从免疫动物体内提取免疫细胞，通常采用脾细胞或骨髓细胞。

与骨髓或脾细胞进行融合，得到杂交瘤细胞。

5. 杂交瘤细胞筛选：采用筛选培养基，筛选出杂交瘤细胞，一般是通过对杂交瘤细胞进行限稀稀释培养，进行单克隆细胞的筛选。

6. 克隆抗体的生产：将单克隆细胞进行扩增，并进行细胞培养，使其产生大量的抗体。

多克隆抗体制备的原理是利用免疫动物的免疫系统产生多个克隆的抗体。

当免疫
原进入免疫动物体内时，会激发免疫细胞产生对应的免疫反应，形成多个不同的克隆细胞。

这些克隆细胞会产生具有不同的抗体结构的抗体分子。

通过细胞融合和杂交瘤筛选的步骤，可以筛选出产生目标抗原特异性抗体的单克隆细胞，并进行大规模生产。

这样就获得了能够结合多个抗原表位的多克隆抗体。

免疫组化抗体选择

免疫组化抗体选择免疫组化是一种广泛应用于生物医学研究的技术，可以利用特异性抗体对组织或细胞中的分子进行定位和分析。

在实际操作中，选择合适的抗体是至关重要的，因为抗体选择的正确性决定了实验结果的准确性和可信度。

本文将对免疫组化抗体选择的相关内容进行介绍。

一、抗体来源在抗体选择中，首先要确定抗体的来源。

常见的抗体来源有动物、人类和单克隆抗体等。

1.动物抗体：常用的动物抗体包括兔、小鼠、大鼠、绵羊、猪等。

其中，小鼠和兔的抗体较为常用。

小鼠抗体制备相对容易，价格较便宜，但存在交叉反应和不同克隆间的差异等问题；兔抗体的特异性较高，但价格相对较高，且易产生非特异性的背景信号。

2.人类抗体：人类抗体的来源可以是人体免疫细胞库、人类B淋巴细胞杂交瘤等。

人类抗体具有高度的特异性和亲和性，且不存在动物来源抗体引起的交叉反应等问题，但价格较高。

3.单克隆抗体：单克隆抗体是指来自同一种克隆细胞的抗体。

与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有更高的特异性和更好的重复性，但价格较高，且制备过程复杂。

二、抗原选择抗体的特异性是由其结合的抗原决定的，因此选择合适的抗原对于获得特异性抗体是至关重要的。

1.天然蛋白：天然蛋白是最常见的抗原形式之一。

其中，重组蛋白是一种受欢迎的选择，因为其可以通过工程技术来优化其受体结合性能。

2.肽段：肽段也是常用的抗原，其具有较低的价格和良好的重复性。

通常，选择相应的肽段以覆盖目标蛋白质中的所需区域，从而提高抗原的特异性。

3.人工合成分子：人工合成分子可以通过选择特定的化合物或糖类等，以获得与目标分子不同的抗原。

这种抗原的优点在于其纯度高、具有良好的重复性以及可控性高。

三、特异性测试在选择抗体之前，需要进行一系列的测试来确定其特异性和亲和力。

1. Western Blot: Western blot是一种常见的蛋白质检测方法，可以用于检测抗体对蛋白质的特异性，同时检测蛋白质是否纯化以及蛋白质的大小。

在选择抗体时，可以将其与不同表达蛋白质的细胞系一起进行Western blot测试，以确定其特异性。

免疫组化染色常见问题及解释

一、为达到免疫组织化学技术的要求，组织固定越新鲜越好。

在免疫组化最后结果的判断时，常可见到均匀一片的似非特异性染色的现象，经多方研究认为，它是一种假性非特异性的染色。

因为肿瘤组织中含有的抗原较易发生扩散弥散，肿瘤细胞无限制的生长和生长过速，导致肿瘤中间部分组织血液供给困难，造成缺血坏死，坏死细胞中的抗原由于机体的作用，可以被均匀地散布于细胞与细胞间的间质，这是抗原发生弥散的一种方式。

另一种抗原弥散的方式就是，由于组织没有及时的固定所引起的。

离体的组织不及时固定，组织就会自溶，抗原就会扩散，这是一非常普通的常识，但要做好却是极不容易。

标本从外科切除到浸入固定液需要经过一段时间，在这段时间里，有的抗原就可以发生扩散。

虽然已浸入了固定液，但标本较大，固定液的量又不足，当然由于固定液的渗透需要时间，当渗入到组织之中时，中间的细胞已发生了变化，抗原也随着发生扩散，这种现象在产酶多的器官是比较明显的，如胃癌，当切除后标本较大，虽然在手术室期间已放入了固定液，但固定液要透过肌层达到胃粘膜面起码需要几个小时的时间，当固定液发挥作用时，组织已经发生变化。

因此，这了达到免疫组织化学染色的要求，对于离体的组织尽量快的进行固定，有条件的应将其剖开，早取材，早固定。

二、组织脱水必须彻底干净组织块取材不能太大过厚，才能较好地完成脱水的过程。

如果取材太厚，在较短的时间内脱水不完全，将可引起一系列的问题，比如浸蜡不彻底，切片不好完成，切不完整。

由于先天不足，导致后来切片染色的脱落，造成染色的失败，或者由此反复操作，造成年人力物力的浪费，造成病理报告的延期发出等。

因此，对取材的要求是除了要求要有艺术性外，即平整、外观好看，还要求适中。

三、切片必须完整、均匀、平展、无邹折应用于免疫组织化学染色的切片，对切片的质量要求较高，切片必须完整，平展、无汽泡，无邹折，这样有利在染色时的冲洗，有利于切片的牢固附贴。

如果切片不平展，免疫组化染色后，可出现染色不均匀的现象，颜色深浅不一，不平。

如何选择抗体

1.我该定制单抗还是多抗？首先应该考虑的就是定制的抗体是应用于什么实验，需要的量是多少？对于科研用户来说1. 抗体常常应用于WesternBlotting、IP等实验中，对于抗体的特异性有一定的要求，但并不是特别的强调2. 往往在研究很多新的蛋白时，并不确定新蛋白是否很重要，是否会是将来很长一段时间的研究重点，所以抗体用量也不大所以针对科研用户，在定制新的蛋白的抗体时，我们强烈建议首先制备多抗用于实验，当得到了理想的实验结果并需要长期的使用该抗体时再考虑制备单抗。

当然，如果您对该抗体的特异性要求特别高（多抗的特异性已无法满足实验要求，比如应用于流式细胞术等）时，还是应该定制单抗对于工业用户来说1. 抗体往往应用于检测定量实验或者功能性实验，对于抗体的特异性要求非常之高2. 目标蛋白基本上都是已知的确定有相当商业开发价值的，而且产品一旦形成，用量会非常大所以针对工业用户，基本上可以直接定制单抗2.我该选多肽还是蛋白作为抗原呢？需要根据抗体应用于什么实验，以及您所能获得的材料来决定1. 实验过程中蛋白处于天然状态，这时使用的抗体识别的一般是蛋白的构象表位和线性表位；这样的实验主要有CO-IP、FACS、Neutralizing/Blocking以及Elisa法检测天然蛋白等2. 实验过程中蛋白处于变性或半变性状态，这时大部分的构象表位已被破坏，抗体识别的一般都是线性表位；这样的实验主要有：Western、IHC/ICC/IF等以多肽作为抗原制备的抗体，识别的是线性表位，在使用时蛋白处于变性或半变性状态下，结果可以令人满意；但不能够保证识别天然蛋白以蛋白作为抗原制备的抗体，识别蛋白的线性和构象表位，基本上所有的实验都可以应用，所以，用蛋白作为抗原应是首选，但是在多肽抗原已可满足实验要求而且得到蛋白有一定难度的情况下，以多肽作为抗原制备抗体更加合适。

3、什么情况应该考虑用设计多肽做抗原？答：如果氨基酸序列已知，但是由于基因克隆或表达等原因得不到抗原蛋白，或者仅需要得到针对抗原蛋白某几个特定表位的抗体，就可以采用多肽合成的方式得到抗原。

一抗的选择要点和技巧是什么？

一抗的选择要点和技巧是什么？
1.单克隆和多克隆抗体的选择
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。

单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。

另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。

在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。

2.应用范围的选择
有的一抗只能用于 WB ( Western blotting）或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至表明石蜡切片或冰冻切片。

3.种属反应性的选择
这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。

4.种属来源
一般兔来源的多是多克隆；而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。

根据此来源来选择相应的二抗。

5.生产厂家的选择
如 santa Cruz 公司抗体一般 1 ml，价格 2100 元左右；而 chem icon 公司一抗一般100 μl，价格 2800 元左右。

这两个厂家的同一种抗体，它的实际效价稳定是不同的，我一般用后者抗体做免疫组化效果较好，而前者做 WB 效果还可以。

抗体的选择和保存指南

抗体的选择和保存指南展开全文当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。

一、怎样选择适合你实验需要的抗体？1. 一抗选择要点（1）确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、亚型等信息。

（2）确定你的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，还是FACS。

一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证过适用于何种实验的类型，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种实验验证，请根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的抗体。

（3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat。

一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种实验，请根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。

（4）样本蛋白的结构性质。

了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性，蛋白空间构象的改变，会影响抗体的免疫亲和反应。

（5）单多克隆抗体的选择。

市面上的抗体还是以多克隆抗体为主，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。

2. 二抗选择要点（1）种属来源。

主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。

（2）标记物的选择。

有HRP、Biotin、荧光素等标记物。

一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗，以与后面的SP结合反应，而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。

二、抗体的稳定性1. 抗体的稳定性是自然界长期进化的结果。

免疫组化(IHC)经验

免疫组化经验总（好假哟）一、石蜡切片和冰冻切片的比较？1.要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是我向一老师请教得出的结论。

因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。

2.冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。

缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。

当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。

3.石蜡切片的优点是可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在 -80℃的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的切片，为了防止 RNA 降解，保存一贯很重要。

由于石蜡切片可以切到 4 μm 左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。

二、一抗的选择要点和技巧是什么？1.单克隆和多克隆抗体的选择。

由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。

单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。

另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。

2.应用范围的选择。

有的一抗只能用于 WB （ Western blotting）或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至表明石蜡切片或冰冻切片。

3.种属反应性的选择。

这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。

4.种属来源，一般兔来源的多是多克隆；而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。

多克隆抗体制备流程_概述及解释说明

多克隆抗体制备流程概述及解释说明1. 引言1.1 概述多克隆抗体制备是一种重要的生物学技术，用于生成大量具有特异性的抗体来识别和结合特定的抗原分子。

这项技术已经广泛应用于医学、生物学和生物工程等领域，对于疾病的诊断、治疗以及基因工程药物研发都起着关键性作用。

1.2 文章结构本文将对多克隆抗体制备流程进行全面概述和解释说明。

首先在引言部分，我们将对文章的整体内容进行简单介绍，并阐明本篇文章的结构。

1.3 目的本文旨在提供一个清晰而详细地描述多克隆抗体制备流程的指南，使读者能够了解到该过程中各个步骤的目标与实施方法。

同时，我们还将涵盖实验操作中需要注意的事项以及可能出现的常见问题及其解决方案，帮助读者更好地开展多克隆抗体制备相关实验工作。

以上是“1. 引言”部分内容，下面将进入“2. 多克隆抗体制备流程概述”的撰写。

2. 多克隆抗体制备流程概述:2.1 抗原选择:在多克隆抗体制备过程中，首先需要选择合适的抗原。

抗原应具备以下特点：足够纯净、增强免疫原性、易于制备和保存，以及与目标分子高度特异性结合。

2.2 免疫动物选择与免疫原制备:在多克隆抗体的制备中，通常以小鼠作为主要的免疫动物。

小鼠免疫系统响应强且易于操作。

然而，在某些情况下，也可选用其他动物如大鼠、兔子等进行免疫。

针对所选抗原，需要将其与适当的佐剂混合以增强其免疫原性，比如与完全佐剂(Freund's adjuvant)或不完全佐剂(完全佐剂的无菌油乳化液形式)混合。

这有助于激发有效的抗体产生。

2.3 免疫程序与方案设计:在完成对抗原和佐剂的混合后，接下来是根据制备目标和实验需求设计合理的免疫程序和方案。

通常包括首次免疫、增强免疫和最后的终次免疫。

在首次免疫后，需要根据抗体滴度等因素评估免疫反应情况，并判断是否需要进行增强免疫。

增强免疫有助于提高抗体产量和质量。

为了更好地激发和筛选出理想的抗体阳性杂交瘤细胞株，还需要在合适的时间点采集血液样本进行检测，评估抗原特异性IgG水平。

多克隆抗体制备免疫小鼠

多克隆抗体制备免疫小鼠多克隆抗体制备免疫小鼠是一种常用的制备多克隆抗体的方法。

下面是具体的步骤：1. 选择抗原：首先需要确定所需要制备抗体的抗原。

抗原可以是蛋白质、多肽、多糖等。

2. 免疫小鼠：将所选抗原注射到小鼠体内，以诱导其产生特异性抗体。

通常，抗原会和佐剂（如完全弗氏佐剂）混合，以增强免疫响应。

3. 免疫程序：将抗原注射到小鼠体内，通常分为初次免疫和加强免疫两个阶段。

初次免疫后，会进行一定的间隔时间（通常是2-4周）再次注射抗原，以增强免疫效果。

4. 细胞融合：在小鼠免疫后，从其脾脏中采集免疫细胞（通常是脾细胞），与骨髓瘤细胞（如SP2/0或NS1等）进行细胞融合。

5. 筛选和培养：将融合细胞进行稀释后，接种到培养基中，以培养成杂交瘤细胞。

培养基中通常会添加相应的选择剂，以选择出杂交瘤细胞。

6. 克隆筛选：将培养出的杂交瘤细胞进行单克隆化，即分离成单个克隆细胞。

这可以通过稀释法或细胞限 dilution法来进行。

7. 抗体鉴定：对筛选出的单克隆细胞进行抗体鉴定，通常采用酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫组化技术来检测抗体的特异性和亲和力。

8. 抗体生产：经过抗体鉴定后，将选出的单克隆细胞培养扩大，并进行大规模的培养和抗体生产。

多克隆抗体制备免疫小鼠的主要优点是可以获得多种不同的抗体，具有较高的灵敏性和多样性。

然而，由于免疫小鼠需要一定的时间来产生抗体，需要一定的动物资源和成本支出，而且制备的抗体可能存在一定的批次变异。

因此，每个实验室需要根据自己的需求和实际情况来选择适合自己的抗体制备方法。

筛选单克隆抗体的方法

筛选单克隆抗体的方法
单克隆抗体是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的重要
工具。

然而，如何从众多的抗体中筛选出具有高亲和力和特异性的单克隆抗体一直是一个具有挑战性的问题。

下面介绍几种主要的筛选单克隆抗体的方法。

1. 杂交瘤技术
杂交瘤技术是制备单克隆抗体最常用的方法。

它包括四个主要步骤：免疫动物、细胞融合、筛选和克隆化。

该方法的优点是可以制备高亲和力和特异性较好的单克隆抗体，但其缺点是制备周期长、成本高，且适用范围受到制备抗原的限制。

2. phage display技术
phage display技术是一种通过噬菌体展示抗原表位以筛选单克隆抗体的方法。

在该方法中，抗体基因库被插入到噬菌体表面的蛋白质中，然后通过筛选可以筛选出具有高亲和力和特异性的单克隆抗体。

该方法的优点是速度快、成本低，且可以制备一系列不同抗原的单克隆抗体。

但其缺点是筛选的抗体可能存在亲和力较低或特异性较差的情况。

3. 单细胞PCR技术
单细胞PCR技术是一种通过单个B细胞进行PCR扩增和测序以制备单克隆抗体的方法。

该方法的优点是可以制备高亲和力和特异性较好的单克隆抗体，且可以避免杂交瘤技术中的克隆化步骤，但其缺点是制备周期长、成本高。

总体而言，筛选单克隆抗体的方法有多种，不同方法各有优缺点，选择合适的方法需要根据具体的实验要求进行评估。

单克隆抗体制备的详细步骤

单克隆抗体制备的详细步骤1.抗原选择：首先，需要选择目标抗原，该抗原可以是蛋白质、多肽或糖等。

抗原的选择应基于其与研究对象或疾病的相关性。

3.免疫动物选择：选择适合的免疫动物进行免疫。

一般常见的选择包括小鼠、大鼠、兔子等。

选择免疫动物的主要考虑因素是抗原的大小、复杂性和保守性。

4.免疫程序：将免疫原与免疫佐剂混合，并注射到免疫动物体内。

免疫的数量和时间应根据具体情况进行优化，以产生充分的免疫应答。

5.细胞融合：在免疫过程完成后，从免疫动物中收集免疫细胞，如脾细胞或骨髓细胞。

然后与髓样细胞瘤（如骨髓瘤细胞线（SP2/0）或骨髓瘤细胞线（NS0）等）融合。

这些瘤细胞是与免疫细胞无限增殖的细胞系。

6.细胞选择：将融合细胞分装到多孔板上，并添加抗生素来抑制非融合细胞的生长。

通常使用杂交瘤选择培养基来选择单个细胞。

7.筛选抗体：通过酶联免疫吸附试验（ELISA）或流式细胞术等方法，筛选和鉴定产生的杂交瘤细胞，以确定其分泌的单克隆抗体。

8.单克隆抗体的扩增：分离和扩增产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。

这可以通过种植细胞到体外培养中进行，或者通过移植至小鼠腹腔来提高抗体产量。

9.抗体纯化：从培养上清液或小鼠腹水中纯化单克隆抗体。

纯化方法可以包括蛋白质A/G亲和层析或亲和层析柱。

10.抗体验证：进行抗体验证以确认其特异性和亲和力。

常用方法包括免疫印迹分析、免疫组织化学分析、免疫荧光染色等。

11.抗体保存：最后，将抗体储存于适当的条件下，以确保其长期保存和稳定性。

总结：单克隆抗体制备涉及到抗原选择、免疫原制备、免疫程序、细胞融合、细胞选择、筛选抗体、单克隆抗体的扩增、抗体纯化、抗体验证和抗体保存等步骤。

这些步骤通常需要耗费时间和精力，但通过精心设计和优化，可以获得高质量和高特异性的单克隆抗体，从而在研究和临床应用中发挥重要作用。

免疫组化方法总结

免疫组化方法总结原文地址：免疫组化方法总结（转载）作者：医者忍者1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。

如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。

就拿温度来说，可以有4度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。

2、免疫组化最大的优势是定位和定性。

相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。

尤其对于有些因子的转位研究十分有用。

3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。

免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。

4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。

阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。

前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。

5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。

如今发SCI论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。

当然也不能做假阳性或假阴性结果。

6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。

我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。