食用菌接种室净度的确定
食用菌接种过程中降低污染率的注意事项
食用菌接种过程中降低污染率的注意事项
接种最好在接种室或接种箱中进行。
接种室或接种箱要求封闭严密，操作方便。
料袋出锅后，趁热搬运至接种室或接种箱内。
菌种最好采用消毒液进行表面消毒。
接种室或接种箱使用前一定要进行消毒处理（接种箱、接种室可以使用不熏眼、不刺鼻的消毒液熏蒸，每立方米使用量为4-6克），注意：在熏蒸之前要把接种使用的大镊子、酒精棉球、酒精灯等用具也放进接种箱或接种室一起熏蒸消毒。
接种操作人员要将手洗净，剪短指甲，用酒精棉球擦拭手及手腕，重点是指尖和指缝。
点燃酒精灯，灼烧镊子，待镊子冷却后将菌种表面的老接种块、小菇蕾、气生菌丝扒掉后，开始接种。
如果是袋装菌种，要用酒精棉球擦拭袋口外壁，在火焰上方解开封口环及棉塞等。
接种时最好两人配合完成。
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食用菌厂房设计方案
食用菌厂房设计方案建设一个食用菌工厂化厂房，必须要采用封闭式厂房。
并且附近的环境要求：没有工业废气、畜禽养殖场、垃圾场及其他污染源。
生产水源最好使用管网的自来水。
1.1根据食用菌厂房布局可以大致分为五个区：Ⅰ区为无菌区，包括冷却室和接种室，是厂区洁净度最高的区域；Ⅱ区为培养区，对洁净度有着严格的要求；Ⅲ区为搔菌、栽培、包装区，对环境的整体要求较高；Ⅳ区为操作区，包括装瓶和灭菌区域，对环境无特殊要求；Ⅴ区为挖瓶区和原料堆场，是灰尘和杂菌较多的区域。
根据日生产量和不同品种，合理布局各区域面积，对各个区域制订不同管理要求和人员流动要求。
2.2、净化2.2.1空气净化新风由高压离心风机送入，经过初、中效过滤后，再由冷却室和接种室的高效过滤风口送入，连续循环，达到室内净化，冷却室和接种室要求达到1万级洁净度，并形成正压，防止外气倒流。
2.2.2风淋对进入冷却和接种区域的人员达到洁净要求，减少外面灰尘和杂菌随着人员进入而带入。
2.2.3层流罩在接种机的上方安装层流罩，使接种局部区域达到100级洁净度，保证接种区域充分洁净，提高接种成品率。
2.2.4自净器在冷却室和接种室安装带高效过滤器的净化设备，室内空气经自净器的高效过滤装置的连续循环，达到室内的净化。
2.3、制冷加热不同食用菌品种有各自适宜的培养温度和出菇温度，食用菌工厂化生产就是创造一个最适宜的环境条件，满足培养和出菇需要。
制冷（加热）和通风设备是食用菌工厂化生产中关键设备，投入大，对技术要求高。
目前许多企业开发了智能化控制系统，实时采集、监控培养和栽培期间参数的变化，并及时预警，为食用菌创造优化的生长条件。
2.3.1制冷负荷设计负荷计算=泄漏热+瓶子发热+机械发热+照明发热+换气负荷泄漏热=墙面面积×内外温差×导热系数瓶子发热=瓶子数量×每瓶发热量机械发热=室内冷却器发热+加湿器水温差产生热量+换气扇产生热量照明发热=灯管数量×每台单位时间发热量×开启时间换气负荷=室内容积×每小时换气次数×内外温差×热回收率同时考虑其他热损耗，制冷效率衰减等因数，在选用制冷机时，制冷机负荷=计算负荷×1.2在负荷计算中，瓶子发热和换气所产生的负荷最大；而选择保温性能好的建筑材料，减少导热系数和热回收装置的使用可有效减少负荷，同时根据不同培养阶段呼吸作用的强弱，以CO2浓度为指标，自动启动送排风装置，起到节能降耗的目的。
提高食用菌菌种质量技术措施
提高食用菌菌种质量技术措施（开化县农科所郑明海）食用菌生产是我县效益农业的主导产业，2010年全县从事食用菌生产的农户达到了5600户，栽培总量达到1.56亿袋，实现销售收入5.6亿元，农民增加收入3.7亿元。
为广大菇农提供优质可靠的生产用种，对进一步稳定和发展我县食用菌产业至关重要。
菌种是食用菌生产之源，菌种质量直接影响食用菌栽培的产量和质量。
笔者通过多年生产实践，提出以下技术措施。
1.菌种生产应按照《食用菌菌种管理办法》和《食用菌菌种生产技术规程》的要求选择生产场地，配备相应的设备。
1.1菌种场合理布局：1.1.1要远离污染源。
污染源包括：禽舍、畜厩、仓库、生活区、垃圾场、粪便场、扬尘量大的工厂等，菌种场与这些污染源的最小距离为500米以上。
1.1.2.备料、晒料、配料、装料等各带菌场所要远离冷却、接种、培养等无菌场所，这些非无菌场所应设在场下风向位置。
同时办工、出菇栽培、试验、生活等场所也应设在场下风向位置。
1.1.3.整个场区应划分非无菌区和无菌区。
无菌的各个场所要相邻，连接成群，非无菌各个场所也要靠近。
1.1.4.灭菌室、冷却室、接种室、培养室是菌种生产的核心区域，要求环境、通道、缓冲室必须处于无菌状态。
1.2.菌种生产设备:1.2.1培养基制备：试管、天平、两杯或量筒、培养基分装器具、基础设施（药品橱、玻璃器皿橱、工作台）。
1.2.2灭菌设备:手提式高压灭菌锅、立式或卧式高压灭菌锅。
1.2.3接种设备:接种室、接种超净工作台、接种工具等。
1.2.4培养设备：培养架、电热恒温、生化培养箱、空调、控温系统。
1.2.5菌种保藏设备：保藏室、电冰箱、生化培养箱、空调、制冷系统。
1.2.6原种、栽培种生产设备：室内、室外料场、晒料场、配料场、粉碎机、搅拌机、装瓶机、装袋机等。
1.2.7出菇试验场：智能出菇房、生化培养箱、空调、控温系统。
2．严把菌种生产原材料关。
原材料是菌种生产的基础，质量的优劣直接关系到生产的成败。
食用菌工厂设计需要特别关注的几个方面问题
食用菌工厂设计需要特别关注的几个方面问题目录1 .序言 (1)2 .生产工艺和环境参数控制是非常重要的 (1)3 .现代化的食用菌工厂需要配备现代化的设备设施 (3)4 .需要具备富水平的管理团队和现代化的管理手段 (5)5 .食用菌工厂化生产的技术和管理要求较高 (11)6 .结束语 (11)1.序百食用菌被定义为“可食用的大型真菌，常包括食药兼用和药用大型真菌。
多数为担子菌，如双胞蘑菇、香菇、草菇、牛肝菌等。
少数为子囊菌，如羊肚菌、块菌等”。
食用菌工厂化生产模式，是在按照食用菌生长环境设计的封闭式厂房中，利用温控、湿控、风控、光控设备创造人工环境，利用机械设备自动化操作高效率生产，通过现代企业管理模式组织员工有序生产，在单位空间内机械化、自动化、立体化、标准化、周年化培育的现代化农业生产方法。
在进行食用菌工厂设计时，有几个方面需要特别关注。
2.生产工艺和环境参数控制是非常重要的由于食用菌工厂化生产对技术和环境要求较高，为了提高技术稳定性和生物转化率，同时降低杂菌污染率，需要精确控制工艺流程和环境参数。
例如，培养室的温度、湿度、光照、空气流通等都需要严格控制。
(1)技术壁垒工厂化生产食用菌对于技术有较高的要求，在菌种选育、保持菌菇生长稳定性等方面均需要一定的生物技术基础和实践经验积累。
①菌种选育要求高菌种选育是食用菌生产的基础，菌种的优劣直接影响食用菌的产量和质量。
选育具有良好基因的菌种是食用菌行业的关键技术，其过程一般包括筛选菌株、自交杂交、制作培养基、小试、中试、大试等环节。
菌种培育过程环节繁杂、技术要求高，是集人才、知识、技术于一体，多学科高度综合、互相渗透的系统工程，对技术人员的专业知识、实践经验等方面都有较高要求，存在较高的技术壁垒。
②生产工艺复杂、技术精细化程度高食用菌工厂化生产是在按照食用菌自然生长环境的需求设计的封闭式厂房中，利用温控、湿控、风控、光控设备创造人工生态环境。
每一种食用菌对生长环境都有特定的要求，需要利用设施、设备创造出适合不同菌类、不同发育阶段的培育环境。
一般食用菌母种(一级种)制作
一般食用菌母种(一级种)制作母种制作的基本工艺流程为母种(由科研单位、大专院校、菌种保藏专门机构引进)一培养基制备一接种一培养检查一成品。
(一)常用培养基及配方培养基是食用菌菌种生长所需营养的基质。
培养基要具备四个条件，第一，要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质，如糖类、有机氮、矿物质等。
第二，所含养分浓度和状态要利于食用菌的吸收和利用。
如食用菌母种培养基使用葡萄糖的浓度多在2％左右，过高和过低都不利于菌丝的生长；食用菌对氮素的吸收优先吸收有机氮，因此，原种和栽培种的培养基中应添加有机氮源，如麦麸、米糠等。
第三，要有适宜的酸碱度(pH)，食用菌多数喜偏酸性，pH5.0～6.5。
第四，经过严格灭菌，保持无菌状态。
这最后一点是要通过灭菌才能达到的，然而，灭菌的高温能破坏培养基中的许多化学成分，并能降低pH。
这一点必须在配制时就考虑到。
这就要求从使用的营养型药品试剂上，要尽量选用热稳定性好的种类，配制时，灭菌前的pH要略高于使用时所需的适宜酸碱度。
一般高压蒸汽灭菌0．1～0．12兆帕30分钟，培养基的pH下降0．1～0．3。
高压灭菌切勿压力过高，时间过长，以利培养基保持良好的营养和适宜的pH。
目前食用菌母种生产上使用的都是固体培养基，以琼脂(洋菜)为凝固剂，琼脂的用量从10～24克不等，这依琼脂的质量而定，使用时用量要参考产品使用说明书。
此外，当制作相同培养基时，高温季节要较常量多用些，以利凝固，低温季节可按常量使用；较酸的培养基也要较pH较高的培养基琼脂用量多些。
1．通用培养基通用培养基有多种配方，几乎通用于各类食用菌，常用的配方如下：(1)PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基) 马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，琼脂10或20克，水1升。
(2)综合马铃薯培养基马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。
(3)马铃薯麦麸综合培养基马铃薯200克，麦麸100克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。
食用菌制种技术（二）
食用菌制种技术（二）三、接种设备接种设备，是指分离和扩大转接各级菌种的专用设备，主要有接种室、接种箱、超净工作台以及各种接种工具。
(一)接种室接种室又称无菌室，是进行菌种分离和接种的专用房间。
此室的设置不宜与灭菌室和培养室距离过远，以免在搬运过程中造成杂菌污染。
生产量较大的菌种厂，应充分注意各个工作间的位置安排，总体布局参见下图。
接种室的面积一般5m２～6m２，高2m～3m即可，过大过小都难于保证无菌状态。
接种室外面设缓冲间，面积约2m２。
门不宜对开，最好安装移动门。
接种室内的地面和墙壁要求光滑洁净，便于洗清消毒。
室内和缓冲间装紫外线灯(波长265nm，功率30W)及日光灯各一支。
接种室具有操作方便，接种量大和速度快等优点，适宜于大规模生产。
(二)接种箱缓冲室接种箱是供菌种分离，移接的专用木制箱，实际上是缩小的接种室。
接种箱有多种形式和规格，医药器械部门出售的接种箱，结构严密，设备完善，但价格较高。
目前多数生产者采用木材和玻璃自己加工制作成一人或双人操作箱，其样式和大小大致。
接种箱内顶部装紫外线杀菌灯和日光灯各一盏。
箱前(或箱后)的两个圆孔装上40cm长的布袖套或橡皮手套，双手由此伸入操作。
圆孔外要设有推门，不操作时随即关门。
箱体安装玻璃，木板均要注意密封，箱的内外均用油漆涂刷。
接种箱结构简单，制造容易，造价较低，移动方便，易于消毒灭菌，由于人在箱外操作，气温较高时也能维持作业，适合于专业户制作母种、原种。
(三)超净工作台超净工作台是一种局部层流(平行流)装置，能够在局部造成洁净的工作环境。
室内的风经过滤器送入风机，由风机加压送入正压箱，再经高效过滤器除尘，洁净后通过均压层，以层流状态均匀垂直向下进入操作区(或以水平层流状态通过操作区)，以保证操作区有洁净的空气环境。
由于洁净的气流是匀速平行地向着一个方向。
空气设有涡流，故任何一点灰尘或附着在灰尘上的杂菌，很难向别处扩散转移，而只能就地排除掉。
因此，洁净气流不仅可以造成无尘环境，而且也是无菌环境。
食用菌工厂化生产及环境控制技术
食用菌工厂化生产及环境控制技术食用菌工厂化生产是最具现代农业特征的产业化生产方式，其采用工业化的技术手段，在环境可控的设施条件下，组织高效率的机械化、自动化、流水化作业，实现食用菌的规模化、集约化、标准化和周年化生产，是我国食用菌产业的发展方向。
近些年来，我国食用菌工厂化生产发展十分迅速，除了发展较早的上海、北京、广东继续保持领先外，江苏、福建、山东及东北等地区也后来居上，成为食用菌工厂化生产的主要基地。
目前我国工厂化生产主要品种有金针菇、杏鲍菇和蟹味菇、双孢蘑菇、白灵菇等。
食用菌工厂化生产配套的设备生产企业发展也十分迅速，目前生产的设备包括全自动灭菌设备、整套生产流水线、液体菌种设备、空气调节设备、加湿设备、净化设备和控制系统，为食用菌工厂化发展奠定了基础。
但是国内食用菌生产设备整体上与日本、韩国还有差距，需要不断加以改进和完善。
1食用菌工厂化生产1.1工艺流程1.2操作要求1.2.1原料混合搅拌栽培主料有木屑、玉米芯、棉子壳、甘蔗渣，营养物质有米糠、麸皮、玉米粉和少量的石灰、石膏等。
在工厂化生产的配方中，营养物质所占比率比常规栽培的要高，一般要占总量30%～40%，以尽可能提高第一潮菇产量。
基本配方1：棉子壳30%，玉米芯36%，麸皮30%，玉米粉3%，碳酸钙1%，含水量64%～66%。
基本配方2：木屑33%，玉米芯30%，米糠22%，麸皮11%，玉米粉3%，碳酸钙1%，含水64%～66%。
通过搅拌使原料在最短的时间内吸取大量的水分，提高培养料自身的蓄水能力，并使物料混合均匀。
同时快速完成装瓶和灭菌，避免微生物大量繁殖致使培养料发酵酸败，改变其理化性质，影响发菌速度和产品产量。
1.2.2装瓶将混合均匀的原料均匀地装入专用塑料瓶中，并完成打孔和压盖。
目前国内使用的栽培瓶有850mL和1100mL。
金针菇大多采用1100mL大口径塑料瓶，单瓶产量已达到300g以上；1100mL塑料瓶栽培杏鲍菇，产量130～150g；850mL1100mL塑料瓶栽培蟹味菇产量分别在160g和200g 左右。
食用菌菌种检验员考核管理办法第一条为了加强对食用菌菌种检验员
食用菌菌种检验员考核管理办法第一条为了加强对食用菌菌种检验员管理，根据《中华人民共和国种子法》（以下简称《种子法》），制定本办法。
第二条本办法所称食用菌菌种检验员是指《种子法》第四十四条和第四十五条规定的种子质量检验机构（以下简称检验机构）中从事食用菌菌种质量检验工作的人员。
食用菌菌种检验员分为扦样员、室内检验员和田间检验员。
扦样员负责样品扦取，室内检验员负责净度、发芽率、水分等项目检测，田间检验员负责品种真实性和品种纯度的田间和小区种植鉴定。
第三条食用菌菌种检验员应当具备以下条件，并经省级人民政府农业行政主管部门考核合格：（一）具有农学、生化或者相近专业中等专业技术学校毕业以上文化水平；（二）从事种子检验技术工作三年以上。
第四条检验机构的食用菌菌种检验员由该机构登记或者注册所在地省级人民政府农业行政主管部门负责考核管理。
第五条申请食用菌菌种检验员资格，应当向省级人民政府农业行政主管部门（以下简称考核管理机关）提交以下材料：（一）食用菌菌种检验员资格申请表；（二）学历证明复印件；（三）受聘检验机构出具从事种子检验技术工作年限证明。
第六条考核管理机关对申请材料进行审查，符合第三条规定条件的，发给受理通知书，并通知申请者在规定时间参加考核，不符合条件的，书面通知申请者并说明理由。
第七条考核管理机关每年至少组织一次食用菌菌种检验员资格的考核工作。
第八条食用菌菌种检验员资格考核，包括专业知识和操作技能考核。
专业知识考核内容包括基础知识和专业技术知识。
基础知识包括《种子法》及有关法律、法规，种子基础知识，种子质量管理与控制知识等。
专业技术知识根据检验员类别确定：扦样员重点考核种子批的划分、扦样方法、分取方法、样品管理等；室内检验员重点考核种子检验理论知识、种子检验规程、种子质量标准等；田间检验员重点考核田间检验方法、品种特征特性、田间标准等。
专业知识考核合格后进行操作技能考核。
扦样员技能考核内容包括样品扦取和分取、扦样器和分样器的使用、样品处置等；室内检验员包括检验仪器设备的操作与使用，净度、发芽、品种纯度等质量指标的检验技术操作等；田间检验员包括品种真实性的鉴别等。
食用菌菌种质量评价体系定稿
食用菌菌种质量评价体系Quality evaluation system of edible mushroom优质菌种的标准(1)菌种的纯度要高，不能有杂菌感染。
(2)菌丝色泽要纯正，多数种类的菌丝应纯白、有光泽，原种、栽培种菌丝应连结成块，无老化变色现象，(3)菌丝要粗壮，分枝多而密，接种到培养基吃料快，生长旺盛。
(4)培养体要湿润，与试管(瓶)壁紧贴而不干缩，含水量适宜。
(5)具有该品种特有的清香味，不可有霉腐气味。
检验方法1、外观直接观察鉴定，主要是通过肉眼观察菌丝的生长情况和用鼻闻菌种的气味等方式来鉴别菌种，如生长速度快慢，菌丝颜色，气生菌丝多少，贴生菌丝分布状况等特征。
一般优良的菌种应具有种性纯，菌丝健壮，分枝浓密，生长整齐，无杂菌或老化现象，同时具有该食用菌的气味。
2、培养观察鉴定，对于分离、选育和引进的菌种，通过培养，观察菌丝体对pH值和温度等方面的适应特性。
3、液体培养鉴定，配制2％糖水溶液，经常规灭菌消毒，挑取黄豆粒大的菌块，放入100毫升上述溶液中，置于25℃、28℃温度下培养3~7天后，若液面出现气泡，产生“油皮”，发生浑浊现象，说明菌种本身有杂菌；如果菌块下沉，或迟迟才长出很薄的菌丝层，则说明菌种生活力弱；如若液面四周的菌丝生长快，且浓白呈棉絮状，则表明菌种生命力强。
4、锯木屑瓶栽鉴定和周期产量鉴定，瓶栽鉴定的做法与培育栽培的方法相似，把锯木屑培养料装得松一些，适当加大湿度，把需要鉴定的菌种接种于培养基中，做好记录，在26℃恒温下培养15天。
然后使温度降至15℃~20℃，并给予较好的散射光条件，再培育半个月左右，在瓶壁和料面上就会出现子实体原基和少量子实体。
若未发现杂菌和异常现象为优良菌种。
食用菌母种接种注意事项
食用菌母种接种注意事项1、酒精灯火焰要高：酒精灯火焰不够高时，火焰周围的无菌范围小，不利于无菌操作，也易造成接种钩灼烧灭菌不彻底，影响接种后的成品率。
影响酒精灯火焰大小的因素，一是酒精浓度，二是灯芯。
酒精浓度越高燃烧越好，最好使用95%的工业酒精。
灯芯材料太实，塞得有紧时，内吸的酒精少，火力也不旺。
所以，灯芯最好用棉花捻制，并拔出一定的长度。
2、母种试管表面和管口要灭菌彻底：作为接种物的母种试管表面并未处于无菌环境下保存。
因此，接种时要注意试管表面和管口的灭菌。
具体方法：拔下棉塞后，在酒精灯火焰上转动2-3圈，可有效地减少菌种造成的污染。
3、拔塞、取种、接种及棉塞必须在火焰上方或附近：操作母种试管和待接种的试管一旦打开棉塞，就不能离开火焰，因为只有在火焰周围很小范围内才能是绝对无菌的。
4、接种钩：接种钩要灼烧彻底，接种钩最好用较薄的材料制成，灼烧时烧至红色。
并注意接种钩灼烧的长度，灼烧长度以试管长度为度，在火焰上方反复灼烧3-4次即可。
5、接种时掉到地上的棉塞不能使用：接种时棉塞要夹于右手指间，不可放在操作台上。
一旦掉到台面上，塞之前要在火焰上过一遍再用。
掉到地上的棉塞严禁使用。
6、接种钩火焰灭菌后要冷却：不经过冷却的接种钩会烫死菌种。
冷却一般在无菌的待接种的试管上部空间进行，也可在斜面上端冷却。
7、消毒酒精要清洁：注意定期更换。
8、操作要到位：动作轻盈、敏捷、快速、准确，尽可能地减小声音。
9、接种操作后的工作：及时清理，打开门窗，排出接种时酒精燃烧放出的废气。
之后关好门窗，打开紫外线灯进行使用后的消毒，以便再次使用。
食用菌栽培技术之接种室操作规程
接种操作规程1 杂菌无处不在，接种是一个严格无菌操作的过程，是一个与杂菌作斗争的过程，所有接种操作人员都必须要竖立严格的无菌操作意识，按规程要求进行接种作业。
2 熟练的接种操作技术对接种成功率有着直接影响，所有操作人员都必须尽力提高自己的接种操作技术水平。
3 接种室开放式接种的接种量对接种成功率有着较大的影响，接种量大，菌种覆盖均匀成品率相对较高，接种人员不得贪图简便少接或接入不均。
4 接种室是一个与外界环境相对隔离的区域，人员要同进同出，尽量减少与外界空气的交换。
5 进入缓冲间后更换工作服、鞋、帽，戴口罩。
在自动净手器下喷洒酒精对双手进行消毒后，一同进入无菌操作间开始接种作业。
6 进入无菌操作间应先开启电子净机对空间进行净化作业，人员操作需在净化机无菌区域内进行。
7 使用预先配制好的消毒溶液对菌包进行外表消毒，一次性处理完毕待用。
消毒时要注意观察菌种有无污染或长势异常。
8 使用75%酒精对双手、接种工具进行擦拭消毒，接种工具擦拭后在酒精灯火焰上来回转动灼烧3~4圈，稍冷却。
9 将菌种拔除棉花塞，并刨去料面上0.5厘米左右的菌种，然后用接种勺将菌种刨碎（小麦粒大小）即打开菌包接入菌种。
菌种必须用完一袋处理一袋，每袋菌种使用完毕后接种工具和手都必须重新消毒一次。
10 每袋菌包接入菌种三勺，大约25克。
菌包接种孔必须接入菌种，如接种孔有堵塞的可用接种勺向下捅入。
接入料面的菌种一定要注意分布均匀，不均匀的可适当摇动使其均匀。
11 接种中，待接种菌包的棉花塞要用右手小指和手掌将其夹住，不得放置于操作台面上。
塞回时要在酒精灯火焰上转动一圈后塞入。
12 接好一筐种后，端上架子车前套环棉塞要侧向压倒，切忌压倒时棉花塞触碰到料面，棉花在携带杂菌，常压灭菌很难将其杀灭干净，触碰料面易引起菌包污染。
13 接种操作要力求快速敏捷，尽量减少开袋后菌包在空间的暴露时间。
14 接种时如发现有菌种被污染的要将菌种袋拧紧密封，单独放置，并重新对手和工具进行严格的消毒。
微生物菌种纯度检测技术规程
微生物菌种纯度检测技术规程第一篇：微生物菌种纯度检测技术规程微生物菌种纯度检测技术规程范围本规程规定了古菌、细菌、真菌、病毒（种）纯度检测的程序和方法。
本规程适用于从事微生物菌种资源保藏及研究的机构、大学、企业、个人等。
术语、定义下列术语和定义适用于本规程2.1纯度检测 purity check指通过适当的方法检测菌种是否为纯培养物。
2.2纯培养pure culture由单个细胞的后代组成的培养物，即单细胞培养物或无性繁殖系。
通常是由挑取单个菌落或利用单胞分离技术，移种繁殖获得。
菌种的纯度检测3.1 古菌和细菌的纯度检测3.1.1 菌落形态在特定的培养基上，将待检测培养物稀释涂布或平板划线，适宜培养后，同一平板上的单菌落的大小、形状、颜色、质地、光泽等是否相似；对于两种或以上形态的出发菌株，应再分别挑取单菌落划线或稀释涂布培养，检测是否重复出现相同特征。
3.1.2 细胞形态对数生长期的培养物革兰氏染色反应应呈现一致性；细胞形状、大小、荚膜等特征应相似3.1.3 芽孢大小、位置、形状宜检测样品是否形成芽孢，对形成芽孢的菌种，其芽孢大小、位置、形状应相似。
3.2 放线菌菌种纯度检测3.2.1 菌落形态在特定的培养基上，将待检测培养物稀释涂布或平板划线,挑取单菌落，适宜培养后，在同一平板上单菌落形状、大小、表面状况、质地、光泽、颜色等应相似。
如怀疑为细菌污染，则30℃液体培养24小时，培养液不应浑浊，如浑浊则视为细菌污染。
3.2.2 培养特征分别接种三种以上培养基，在三种以上培养基上的培养特征应想同，包括气生菌丝、基内菌丝、可溶性色素的颜色等。
3.2.3 孢子丝及孢囊在特定的培养基、培养温度及培养时间等条件下，孢子着生方式、孢子丝形态及其颜色或孢囊着生位置（气丝或基丝）、孢囊的形状，大小应呈现出一致性。
3.3 酵母菌种纯度检测3.3.1 菌落形态应对菌落形态相似性进行检测。
在特定的培养基上，通过对待检测菌株进行稀释或划线涂布平板获取单菌落，一定的培养条件下，比较同一平板内，菌落的大小、形状、颜色、隆起、表面状况、质地、光泽等应一致。
食用菌接种室洁净度的确定
食用菌接种室洁净度的确定（固体菌种金针菇）关于食用菌接种室洁净级别的标准大多数认为以应不超过10000级为宜即直径90mm皿—0.5H—30min<=3个，洁净级别高，空间杂菌数量少，肯定能提高接种的成功率，但相应的投资成本和管理维护成本也会上升，而在实际生产中却很少有人能做到达一万级的洁净度（接种箱可达到，除外），本人根据通过对开放式接种室洁净度进行近200次的检测和对接种后污染情况的调查表明：以接种污染率最高不超过2%为设计标准，接种室洁净度级别根据实际需要确定在10万级至30万级较为适宜。
当然，接种室的洁净级别能达到一万级那是更好了，但适不适宜作为行业标准，还需根据行业发展水平和实际需要而定。
一万级接种室需要根据洁净室的设计理念和标准进行设计、施工、管理、维护保养，还应配备相应的管理人员和设备维护人员，不是现有小工厂随随便便就可以搞好的，重要的是相对于30万级的接种室一万级接种室建设管理维护的成本消耗所带来的成品率提高效益远高于其增加的投资成本。
通过检测表明，在对接种室进行规范消毒后很容易达到一万级，但我们需要的环境无菌度是在接种过程能保持这种级别状态，即使工作人员进行非常规范的更换无菌工作服、风淋后进入接种室，其洁净状态也将在短短几分种之内急剧恶化（在无净化设备对室内空气进行处理的情况下），一万级状态在5分钟之后将变为十万级，10分钟即可达30万级，随着作业时间的延长空间杂菌数还将增加。
即使在室内有一定净化设备的条件下，要想一直保持十万级也将非常困难。
曾检测过工作人员进入接种室后工作30分钟在不开净化设备时的洁净度，每个培养皿平均菌落数达12个/5min以上，已远超过中国1998G MP规定的最低标准，无级了，但即使在这样的条件下接种至二小时，最后的接种污染率却也仅在0.5%左右。
2食用菌接种室无菌操作及管理细则
2⾷⽤菌接种室⽆菌操作及管理细则⾷⽤菌接种室⽆菌操作及管理细则为规范接操作,提⾼接种成活率，特制定此细则,本细则适⽤于接种室接种操作⼈员,菌种室及相关⼈员参照执⾏。
1、接种室接种操作⼈员应有强的⽆菌操作意识,任何不规范或⽆意识的操作及⾏为都有可能给接种带来污染隐患，因此所有接种室操作及⾏为都应此细则为标准执⾏,细则之外的操作及⾏为经咨询主管⼈员并经同意后⽅可⽤于接种作业,同时我们将根据实际情况对本细则进⾏补充和完善。
2、接种室、缓冲间的消毒接种室为⾼度⽆菌区，每天接种前2．５~３⼩时时段必须对接种室进⾏较为严格的消毒处理，消毒之前所有接种所需物件、菌种等必须⼀次性准备到位。
2．１菌种消毒挑选好的菌种在接种室开始消毒之前应对菌袋表⾯进⾏药浴消毒,消毒所⽤药品为0．1％⾼锰酸钾溶液，消毒时将菌袋浸⼊溶液中,并⽤抹布进⾏擦试，袋壁、袋颈、袋⼝及棉塞露于空⽓中的部位都应擦到,将擦洗完毕的菌种马上放到接种室即可以进⾏接种室的空间消毒作业。
2.２接种消毒⽅法接种室消毒时臭氧机开机时间为2⼩时,同时点3⼤包菇保⼀号辅导清毒;缓冲间5⼩包菇⼀号进⾏薰蒸。
接种室消毒开始时间为每天早上的5:00~5:１5,下午为1１:１５~1１:30,接种时间上午不晚于8：10,下午不晚于14:1０。
臭氧机关时间将由时控开关⾃动控制，消毒⼈员不再进⼊缓种间⼿动关闭。
3、接种前准备接种室、缓冲间均采⽤统进统出⽅式，严禁分批及⽆序进出，进⼊前所有操作⼈员必须将个⼈事情处理好,⼀旦进⼊直⾄接种完毕中途不得出⼊，进⼊缓种间后必须更换⼯作服、戴⼯作帽、穿专⽤鞋,换好后蘸取消毒液将双⼿洗净，然后同时进⼊接种室开始接种作业，进⼊缓冲间和接种室均应注意随⼿把门关好不留空隙。
4、接种操作进⼊接种间先⽤75%酒精把⼿、接种铲、剪⼑及⼯作台⾯、垫板擦拭⼀遍并将接种铲、剪⼑在酒精灯⽕焰上进⾏灼烧,然后可进⾏以下操作。
4.1将菌种袋棉花塞、套环拔掉⽤灼烧后的接种铲将料上表⾯0.5ｃm左右的菌种刨掉弃之不⽤,所弃之菌种集中剩放于⼩桶内，做好后将菌袋倒置，并将袋⼝上折放于塑料筐内,注意袋⼝的密封,菌种不可暴露于空⽓中。
羊肚菌栽培之超净工作台的使用
羊肚菌栽培之超净工作台的使用超净工作台在羊肚菌行业的使用比其他食用菌品种的利用率要高很多，这与长期的技术传承和认知有关，传统的接种设备有：接种箱、接种罩、接种帐，当然也有现代化的流水线层流罩接种（从作用原理讲，层流罩接种和超净工作台是一样的，仅在操作界面和空间存在着不同），以及少量的离子风接种等等。
超净工作台的工作原理是在特定的空间内，空间外的空气（脏空气）在风机的作用下通过多层空气过滤实现洁净无菌的目的（洁净空气），正常的超净工作台可达100级净化水平，即每立方空间的微生物最大允许浮游菌数量是5个，放一个9cm的平皿在百级洁净空间，每小时容许的落在平皿上的菌落数量是1个。
在洁净级别上属于最高级别（请注意：百级是最高级别，千级万级不如百级洁净度高）。
超净工作台的种类形状很多，从风向走势分：垂直风和水平风两种，即风是从上到下垂直吹下来的还是从前到后迎着工作人员面扑面而来的风向；从超净工作台可同时容纳使用的人数来分可分为单人、双人，单人单面、单人双面、双人单面和双人双面，通常情况最多可4-6人同时操作。
超净工作台的价格从一两千到七八千上万不等。
在羊肚菌或食用菌生产中，以垂直风双人双面为主。
售价通常在三千多到上万左右。
超净工作台在羊肚菌原种、栽培种制作过程中是非常方便和实惠的。
下面以羊肚菌栽培种生产为例进行实例解说：1）将超净台内部用75%的酒精棉球进行擦拭干净，将接种所需的各种用具：酒精灯、打火机、接种铲等接种用具摆放在超净台内；拉下玻璃门，打开紫外灯，紫外照射20-30分钟；紫外灯打开后人员需离开紫外照射范围；2）关闭紫外灯，拉开玻璃门，打开风机最高风速吹风10分钟，同时将所用原种摆放在超净台内部侧面；吹风10分钟后，调制风速中档，打开白灯，接种人员依次坐在超净台两边，开始进行接种准备工作；3）接种人员带无菌手套，用75%的酒精棉球将接种用具接种铲、不锈钢盆等擦拭干净后在酒精灯上过火消杀；将原种瓶口用75%酒精棉球擦拭消杀；用接种铲将原种勾出置于不锈钢盆内；触碰过其他物品的手需用酒精棉球再次擦拭消杀；4）两人一组开始接种，一人将待接种栽培种拿入超净台下，打开盖子，一人将菌种按入菌种袋，开盖子的工人立马将盖子盖上，之后将袋子拿出超净台放回篮子，如此往复；注意事项：工作轻盈快捷，接种所用用具及双手除必须外，减少触碰其他物品的可能，每操作2小时，停工30分钟，期间清洁台面及杂物，重新消杀各种用具。
食用菌菌种标准使用指南
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母种生长速度检测方法
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二、检测内容
栽培种质量要求： • 菌丝生长速度：
在适宜培养基上，在适温（23±2℃）下，长满容器40d50d。
• 栽培性状（无），与母种不同，和原种相同
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么么么么方面
• Sds绝对是假的
么么么么方面
• Sds绝对是假的
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三、抽样
• 质检部门的抽样应具有代表性； • 母种按品种、培养条件、接种时间分批编号；
• 高温抑制线 （高温圈） • high-temperatured line • 食用菌菌种在培养过程中受高温和通气不足的不
良影响，培养物出现的圈状发黄、发暗或菌丝变 稀弱的现象。
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一、术语和定义
• 生物学效率 biological efficiency
– 单位数量培养料的风干物质所培养产生出的子 实体或菌丝体质量（鲜重），常用百分数表示。 如风干料100千克产生了新鲜子实体50千克， 即为生物学效率50％。
5.5菌落边缘 肉眼观察菌落边缘是否整齐。
5.6杂菌菌落 用放大镜观察菌丝体颜色和外观形态，根据颜色和形态
是否有差异判定是否有杂菌菌落。
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母种感官检验（四）
5.7虫（螨）体 用放大镜观察培养物上有无虫（螨）体。
6.斜面背面外观
根据培养基是否与试管相脱离判断是否干缩； 在充足的光线下，对着光源方向，观察颜色是否 均匀，有无色素和暗斑。
7.气味
在无菌条件下打开棉塞（或无棉塑料盖），闻 试管内气味是否正常。
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食用菌接种室洁净度的确定（固体菌种金针菇）关于食用菌接种室洁净级别的标准大多数认为以应不超过10000级为宜即直径90mrrn—— 30min<=3个，洁净级别高，空间杂菌数量少，肯定能提高接种的成功率，但相应的投资成本和管理维护成本也会上升，而在实际生产中却很少有人能做到达一万级的洁净度（接种箱可达到，除外），本人根据通过对开放式接种室洁净度进行近200次的检测和对接种后污染情况的调查表明：以接种污染率最高不超过2%为设计标准，接种室洁净度级别根据实际需要确定在10万级至30万级较为适宜。
\ 当然，接种室的洁净级别能达到一万级那是更好了，但适不适宜作为行业标准，还需根据行业发展水平和实际需要而定。
一万级接种室需要根据洁净室的设计理念和标准进行设计、施工、管理、维护保养，还应配备相应的管理人员和设备维护人员，不是现有小工厂随随便便就可以搞好的，重要的是相对于30万级的接种室一万级接种室建设管理维护的成本消耗所带来的成品率提高效益远高于其增加的投资成本。
通过检测表明，在对接种室进行规范消毒后很容易达到一万级，但我们需要的环境无菌度是在接种过程能保持这种级别状态，即使工作人员进行非常规范的更换无菌工作服、风淋后进入接种室，其洁净状态也将在短短几分种之内急剧恶化（在无净化设备对室内空气进行处理的情况下），一万级状态在5分钟之后将变为十万级，10分钟即可达30万级，随着作业时间的延长空间杂菌数还将增加。
即使在室内有一定净化设备的条件下，要想一直保持十万级也将非常困难。
曾检测过工作人员进入接种室后工作30分钟在不开净化设备时的洁净度，每个培养皿平均菌落数达12个/5min以上，已远超过中国1998GM规定的最低标准，无级了，但即使在这样的条件下接种至二小时，最后的接种污染率却也仅在％左右。
食用菌接种室的设计一般参照微生物实验室的标准，但物种的抗性和生产特性毕竟不完全相同，食用菌需要的是纯培养，但并不一定代表需要我们接入的菌物或培养基自身一点杂菌没有，真正能做到这样毕竟好，但在实际生产中却很难做到都这样，因此我们可把标准降一降，只要能保持正常生产，在成品能得到保证的情况下以实际需要出发来制定标准，来指导生产，不需要一味的去求好，求高。
是的，也许在这样的低环境条件下接种菌包被带入了杂菌，但这不代表我们的菌包就污染了，不能用了，需知任何菌物都有其一定的抗性，且杂菌也并不是落地就生根，造成危害，它也需要在适合它生长的条件下才能生长发育，。
其实在生产中有很多这样的例子，比如毛木耳、平菇的开放式接种，普通的接种账随便熏熏就接种它们的接种成品率也很高，而那样的条件恐怕得达到一千万级了吧。
所以我认为一般的袋式金针菇生产的接种室洁净度能达到三十万级就可满足要求（小于等于15个/皿*30min）。
第二章食用菌接种室设计的环境参数1, 净化级别：30万级，以菌落计平均在10〜15个/皿*小时（所有菌落并非都是食用菌有害菌，比如金黄色葡萄球菌直径〜微米，一部分可以通过微米高效过滤器，也可在平皿上形成菌落，但它不能在普通食用菌培养基造成危害，即杂菌对生存环境也具有选择性，所以具有针对性的控制食用菌危害菌才更具有现实意义）2, 类别：食用菌洁净室3, 气流状态：乱流洁净室，整体气流以不均匀速度呈不平行流动，伴有回流或涡流。
4, 换气次数：5〜8次/小时，总换气数=总风量*出风效率/接种室体积。
5, 静压差：与相邻环境的空气压力差值，不低于5帕，即接种室压力大于缓冲间，缓冲间大于外界。
6, 温度：16〜20度7, 湿度：小于90%8, 照度：一般照明，70〜150IX9, 布局（人净路线）：辅助区（贮物间，更衣室）一一＞接种室外走道一一＞人身净化（缓冲间，更换无菌工作服，人手消毒）一一＞接种室10, 建筑要求：（六面光）材料：表面光滑，耐磨，绝热，不吸湿、透湿，易加工，表面不易附尘土，易去尘，便宜。
地面：耐磨，耐侵蚀，易清扫，可采用水磨石，涂料，瓷砖等）墙面：不易脏，易清洁，表面光洁，耐冲击，可采用瓷砖，彩钢板，防霉涂料，树脂漆，装配式洁净室壁板等吊顶：为减少投资和方便维护普通接种室可不必吊顶，施工可参考墙面。
注意：食用菌接种室所使用材料一定要注意防水，因为接种室相对湿度一般较大，且经常需要用水擦洗和用消毒水冲洗，以防不不防材料的受潮变形或被侵蚀，需要使用石膏是一定要使用防水石膏，且不得作为罩面材料。
11, 造价（仅供参考）以办公楼作对照元/平方米办公楼500一万级（生物洁净室）：2200十万级（生物洁净室）：1900层流室（骨髓移植）：4500〜780030万级（食用菌接种室）：小于1200第三章设备配置1, 外置式空气过滤器必备9000元/台，定做，作用：对外界新风进行过滤后送入接种室，对室内含杂菌较多的空气进行稀释和补充接种室内氧气。
性能参数：风量：1000〜1500立方每小时过滤效率：（小于等于微米）%三级过滤（粗、中、高效过滤器），过滤后空气通过PV（管道通入接种室，室内根据接种台分布情况，将出风口安置于正对接种操作部位，，使吹出的新风直吹或覆盖接种外，保持局部的高洁净度，出风口可采用散流器或自制出风口（在PVC寸头上进行均匀打孔），关于出风口吊装位置可以有垂直和水平两种安装方法（垂直即出风口吹出的风向与接种台平面垂直，水平相反），我个人认为水平出风要更好些，因为人在接种时，人手、棉塞、菌种、袋口都在上风位，垂直吹出的风易将其上粘附的杂菌直接吹入菌包内，如是水平流则可减少许多，但在净化远端却更易形成涡流（针对整筐接种）。
配置空间：100~150立方阻力：小于250帕2, 臭氧机必备参考价（10〜12克每小时）2500〜3000元每台自制价1500元。
（需选购电源、发生片最好是防潮型的，箱体，冷却风扇等要高级的话还要时间继电器或时控开关，二极管等等)臭气灭菌的好处就不作多说了，自己去百度，就灭菌的实际效果而言，我认为要远远强于目前所用的含氯及其它的化学药剂(烟雾剂时代即将成为历史)，重要的是它效果的确不错，使用方便，快速，分解快，对人体危害小，且不污染环境，可谓高效，廉价又环保。
接种室必备。
用于对接种室的带包空间消毒。
臭氧发生量的选择：根据净化级别和空间大小而定百级：20ppm一万级：15ppm十万级：10ppm三十万级：7ppm(1ppm=m3臭氧需求量按以下公式自己计算：W= C*V/ (1-S)W需要的臭氧量克/小时C:需要的臭氧浓度毫克每立方V:接种室体积立方米S:臭气工作一小时后的自然衰减率，取建议按百级标准定购，反正增加不了多少投资，且臭氧机的发生量会随着工作时间的延长减少，买个保险，放心。
3, 自净器选配参考价800~1500元每台对接种室内空气进行循环过滤，滤除室内空气中的杂菌粒子，也可根据需要装配成垂直或水平流的局部净化设备。
技术参数：1, 净化效率：大于等于%，针对微米尘粒而言2, 功率：300~600W3, 电源：220V4, 风量：800~1500立方米每小时误差20%5, 风速：~米每秒6, 滤材：（高效）超细玻璃纤维7, 过滤级数：二级，粗效，高效（或亚高效）两级过滤选配台数1, 根据接种室大小选择。
例设计接种室为50平方，层高3米，要求每小能进行不少于10次的循环过滤，选用风量为1000立方每小时风量的自净器，则需自净器台数为：50*3*10/ （1000* ）=,即至少需要两台自净器。
2, 根据操作台数量选择即每个操作台配置自净器一台，使经过滤后的空气覆盖接种区域，局部洁净度不高于一万级。
4, 电子净化机选配参考价4000元每台，原理：第一段为电离段，使微粒带电，第二段为集尘段，使带电微粒沉积在电极板上。
在电离段，放电线上加有8100V的直流正电压，与接地电极之间形成具有很强电位差的不均匀电场。
放电线周围产生电晕放电，使流过的空气电离，产生大量正离子和电子。
电子移向放电线，正离子则附着在空气中的微粒上，使中性微粒带正电，然后注向集尘段。
在集尘段，正、负电极板交替排列。
电极板之间有均匀电场。
当带正电荷的微粒进入电场后，受库仑力的作用，改变流向，流向并附着在负极板上。
电子式集尘器可以过滤掉10 口m以下的大部分颗粒，具有空气阻力低、积尘后阻力变化小且集尘范围广。
电子式集尘器过滤效率取决于电场强度、尘粒大小、气流速度等因素。
1、电子式集尘器由电离丝（区）和集尘板（区）组成。
电离丝通电产生电晕放电现象（正电压），空气经过电离区时被电离。
2、集尘区由多组平行的高电压极板和接地极板组成，空气中被电离的颗粒经过集尘区时，大部分被接地极板吸附。
杂菌被电离后吸附，通过高压进行杀死，主要特点是效率高，阻力小。
选配方法同自净器。
5, 制冷系统必备参考价不详为避免空气的过于流动给接种造成污染，接种室制冷系统宜采用排管式蒸发器进行自然对流冷却。
当然在能保证接种室内洁净度在一万级或十万级的情况下，普通的风冷式蒸发器也可，同时也可采用洁净室专用的洁净空调机组（较贵）。
建议采用排管式蒸发器，方案如下：1, 土法：采用地下水作冷却介质，使用无缝钢管或暖气片作冷却蒸发器，投资省，但控温有限。
2, 如采用氨制冷，可用无缝钢管制作成排管蒸发器通入液氨。
效果好，制冷快，可利用已有设备。
|丿3, 如采用其它压缩机组制冷的，将风冷式蒸发器改为排管式蒸发器。
工质充注量相应增加，其它改动请教专业人员。
不管采用哪种方案都必须做好防水工作，可在蒸发器下安装接水盘，具体不述。
6, 无菌工作服选配参考价60元每套三十万级接种室的宜选用分体式或大褂式无菌工作服，也可配用连体式，但穿作等较为麻烦。
无菌工作服要求能阻留人体脱落物，质地应光滑，不产生静电，不脱落纤维和颗粒物。
材质一般采用：超细涤纶长丝+ 导电纤维。
7, 净手器选配参考价400元每台。
手部消毒。
8, 干手器选配参考价100元每台。
烘干手用。
9, 其它略，门的设计。
建议使用移动拉门。
、\ 接种操作规程1杂菌无处不在，接种是一个严格无菌操作的过程，是一个与杂菌作斗争的过程，所有接种操作人员都必须要竖立严格的无菌操作意识，按规程要求进行接种作业。
2熟练的接种操作技术对接种成功率有着直接影响，所有操作人员都必须尽力提高自己的接种操作技术水平。
3接种室开放式接种的接种量对接种成功率有着较大的影响，接种量大，菌种覆盖均匀成品率相对较高，接种人员不得贪图简便少接或接入不均。
4接种室是一个与外界环境相对隔离的区域，人员要同进同出，尽量减少与外界空气的交换。
5进入缓冲间后更换工作服、鞋、帽，戴口罩。
在自动净手器下喷洒酒精对双手进行消毒后，一同进入无菌操作间开始接种作业。
6进入无菌操作间应先开启电子净机对空间进行净化作业，人员操作需在净化机无菌区域内进行。