乙型肝炎病毒表面抗原试剂盒性能验证方案
乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂盒标准(doc 12页)
按订货合同规定。本产品允许使用一般交通运输工具，但须防止运输过程中的剧烈冲击、包装破损及雨雪淋湿。运输要求按订货合同规定。
8.3储存
原包装于2－30℃干燥保存，不得冷冻。自检定
（ 规范性附录）
主要原材料、工艺和半成品的技术要求
A.1主要原材料
A.1.1化学原材料
(a)胶体金溶液
采用柠檬酸三钠还原法制备。胶体金溶液外观应澄清，显酒红色。
(b)胶体金溶液标记鼠抗HBsAg单克隆抗体B
用0.1MK2CO3溶液调胶体金溶液至所需的PH，加入适当数量鼠抗HBsAg单克隆抗体B。在规定时间后高速冷冻离心，弃上清。用适当体积胶体金标记物稀释液复溶沉淀，2～8℃冰箱存放。
4） 生产批号、有效期限；
5） 产品注册号；
6） 执行标准号；
7） 贮存条件。
7.3使用说明书上应有下列内容：
1) 产品名称和包装规格；
2) 预期用途；
3) 测定原理
4） 使用方法 (其中应注明多长时间内阅读结果有效；如果是测试条，需注明放入样本内多长时间后取出)；
5) 主要组成成分；
6) 结果判定；
⑶密度270±20g/m2；
⑷吸水性能：滴加200ul蒸馏水于2cm×2cm的吸水纸表面，蒸馏水应能完全被吸收。
A.2工艺
A.2.1硝酸纤维素反应膜
(a)检测线
取适当浓度的鼠抗HBsAg单克隆抗体A,在纤维膜上制备检测线，室温干燥。
(b)质控线
取适当浓度的羊抗鼠IgG多克隆抗体制备，室温干燥。
A.2.2金标结合物反应膜
7标志、标签、使用说明书
7.1 包装盒上应有下列标志：
1） 生产单位名称、地址、联系方式；
2） 生产许可证证号；
人乙肝表面抗原（HBsAg）酶联免疫分析试剂盒使用说明书
人乙肝表面抗原（HBsAg）酶联免疫分析试剂盒使用说明书人乙肝表面抗原（HBsAg）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T5IU/L-150IU/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中乙肝表面抗原（HBsAg）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人乙肝表面抗原（HBsAg）水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乙肝表面抗原（HBsAg），再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的乙肝表面抗原（HBsAg）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人乙肝表面抗原（HBsAg）浓度。
试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（240IU/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
120IU/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液60IU/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液30IU/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液15IU/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液7.5IU/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
乙肝表面抗原酶联免疫试剂性能验证
２ ０ １ ４年卫计 委感 染性 疾病 血 清标 志物 Ａ能 力 比对 ， 本 院 乙肝 表面抗 原 符合 率为 ｉ ０ ０ ％； 对 临 界值 一２ Ｏ 、 临 界值
＋２ Ｏ 样 本 １ ０ ｄ ２ ０次 检 测 ， 一致性分别 为 ９ ５ 、 １ ０ ０ ； 在对 ０ ． ６ ８ Ｉ ｕ／ ｍＬ 乙肝 表 面 抗 原 标 准 物 质 检 测 中 ， 阳 性 率 为
ｐ ｒ ｏ ｆ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ Ａ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ ｓ ｏ ｆ Ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｈｅ ａ ｌ ｔ ｈ ａ ｎ ｄ Ｆ ａ ｍｉ ｌ ｙ Ｐ ｌ ａ ｎ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｃｏ ｍ ｍｉ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ
第３ ６ 卷第３ 期 ２ ０ １ ５ 年 ９ 月
国 外 医 学 医 学 地 理 分 册
Ｆ０ ＲＥＩ Ｇ Ｎ Ｍ ＥＤ Ｉ ＣＡＬ ＳＣＩ ＥＮ ＣＥ Ｓ ＥＣＴ １ ０ Ｎ Ｏ Ｆ Ｍ ＥＤ Ｇ Ｅ ３ ６ ＮＯ． ３ Ｓｅ ｐ． ２０ １５ ‘２ ２７ 。
力 比对结果 ， 要求符合率≥８ Ｏ ； 重复性验证采用对临界值 一２ Ｏ 、 临界值 ＋２ Ｏ 样本 进行连 续 １ ０ ｄ检测 ， 要求 一致
性≥９ ５ ： 通 过 对 临 界 值 附 近 不 同浓 度 样 本 的检 测 ， 获 得 阳性 率 ≥ ９ ５ 的 最 低 浓 度 作 为检 出限 的 确 认 标 准 。结 果
ｂ ｙ ｅ ｎｚ ｙ ｍｅ — ｌ ｉ ｎｋ ｅ ｄ ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ｓ ｏ ｒ ｂ ｅ ｎ ｔ ａ ｓ ｓ ａ ｙ
Ｗ ＡＮＧ Ｗ ｅ ｉ — ｃ ａ ｉ
乙肝表面抗原检测诊断试剂盒（胶体金法）-伊仕临床检验网[004]
![乙肝表面抗原检测诊断试剂盒（胶体金法）-伊仕临床检验网[004]](https://img.taocdn.com/s3/m/48d72cb8d0f34693daef5ef7ba0d4a7302766c1a.png)
⼄肝表⾯抗原检测诊断试剂盒（胶体⾦法）-伊仕临床检验⽹[004]胎⼉纤维连接蛋⽩（fFN）检测诊断试剂盒(胶体⾦法)使⽤说明书【产品名称】通⽤名：胎⼉纤维连接蛋⽩（fFN）检测诊断试剂盒(胶体⾦法)英⽂名：Diagnostic kit for fetal fibronectin (Colloidal Gold)【包装规格】条型：1⼈份/袋、1～100⼈份/盒卡型：1⼈份/袋、1～50⼈份/盒【预期⽤途】体外定性检测⼈宫颈阴道分泌物中的胎⼉纤维连接蛋⽩（fFN）。
在孕22～35周，宫颈阴道分泌物中出现fFN与早产有关。
早产是指以妊娠在28⾜周后⾄37⾜周前中断妊娠为主要表现的疾病。
早产是⼤多数⾮遗传性围产⼉死亡和致残的主要原因。
早产的症状有宫缩、阴道流出物变化、阴道流⾎、背痛、腹部不适、盆腔内挤压感和绞痛。
确定早产的临床诊断⽅法包括检测宫缩活动和可以估计宫颈指标的宫颈数字化检查。
作为纤维连接蛋⽩的⼀种同⼯异构体，胎⼉纤维连接蛋⽩（fFN）是⼀种复杂的糖蛋⽩，分⼦量约为500KD。
对于有早产症状和体征的孕妇，如果在24周0天和34周6天之间，fFN≥50ng/ml (1×10-7mmol/ml)，从宫颈阴道分泌物中取出标本检测之⽇开始，在7天或14天内孕妇发⽣早产的危险会增加。
对于没有早产症状和体征的孕妇，如果fFN在22周0天和30周6天之间升⾼，在34周6天之内孕妇发⽣早产的危险会增加。
本产品为胶体⾦法，采⽤双抗体夹⼼法及胶体⾦免疫层析技术原理进⾏检测。
【检验原理】胎⼉纤维连接蛋⽩（fFN）检测诊断试剂盒(胶体⾦法)采⽤双抗体夹⼼法及胶体⾦免疫层析技术原理，在聚酯纤维（或⽆纺布）上预包被⾦标记抗⼈fFN单克隆抗体A，在硝酸纤维膜检测线和质控对照线处分别包被抗⼈fFN单克隆抗体B和⽺抗⿏IgG 抗体。
检测阳性样本时，样本中的fFN与胶体⾦中的抗⼈fFN单克隆抗体A⾦标记物结合形成复合物，由于层析作⽤复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗⼈fFN单克隆抗体B结合形成“Au- fFN Ab- fFN- fFN Ab”夹⼼物，从⽽在检测线处显⽰紫红⾊条带，剩余⾦标记抗⼈fFN单克隆抗体A则于质控对照线处与⽺抗⿏IgG抗体结合，从⽽在质控线处显⽰紫红⾊条带。
HBsAg分析性能评估
乙型肝炎病毒表面抗原检测试剂（胶体金法）分析性能评估资料本试剂系采用双抗体夹心法和胶体金免疫层析法原理，在硝酸纤维素膜的检测区和控制区分别包被鼠抗-HBsAg单抗和羊抗鼠IgG，在结合垫上含胶体金标记的鼠抗-HBsAg单抗，检测时将样本加至加样区，样本通过结合垫时，溶解包被在结合垫上的胶体金标记的抗-HBsAg抗体，由于毛细效应，沿膜向上移动。
如果样本中含有HBsAg，则在检测区形成双抗体夹心复合物出现紫红色条带。
如果样本中不含有HBsAg，检测区不出现紫红色条带。
无论样本中是否含有HBsAg，胶体金标记的抗-HBsAg抗体在控制区与羊抗鼠IgG结合出现紫红色条带，表明检测结果有效。
用于体外定性检测人全血、血清或血浆中的HBsAg。
我们参考《中国生物制品规程》，对试剂成品的性能进行了系统的评估，主要涉及灵敏度、特异性、批内和批间精密度等。
检测评估所用标本源于进口标准品和临床样本。
评估所用试剂为质量合格的规格为40人份/盒的试剂三批（Lot：HBsAg20080501-1，Lot：HBsAg20080503-1，Lot：HBsAg20080505-1），规格为100人份/盒的试剂三批（Lot：HBsAg20080502-2，Lot：HBsAg20080504-2，Lot：HBsAg20080506-2）。
1.灵敏度的评估1.1 材料和方法1.1.1 检测下限标本准备取HBsAg 标准品（来自中国药品生物制品检定所），用一份正常人的阴性血清定量溶解稀释到2.5ng/mL的终浓度，作为灵敏度评估指标。
1.1.2 检测下限确定每批试剂对已准备好的检测下限标本做30次重复测定。
30次重复的阳性符合率要求大于99%，确定该批试剂的检测限度，分析不同包装规格的试剂各三批的检测限度，得到试剂的最低检测限度。
1.2 实验结果及讨论按照试剂使用操作标准程序进行检验。
重复30次。
同时每次设定1份阴性质控。
结果如下（“＋”表示阳性结果，“－”表示阴性结果）：表1-1 规格为40人份/盒的试剂的实验结果表1-2 规格为100人份/盒的试剂的实验结果根据上面的结果，我们可以看出人血清中HBsAg浓度达到2.5ng/mL的标本能够稳定的检测出阳性结果，阳性符合率合乎要求，能够满足定性的需求，并且不同规格试剂各三批的结果均如此。
乙肝表面抗原定量测定的方法学验证
乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证姓名 Z P学号 0925400072班级 09级医学检验本科二班指导老师沈富兵二〇一三年四月乙肝表面抗原定量测定的方法学验证作者：ZP（成都医学院检验医学院09级医学检验本科二班，610500）【摘要】目的用福州蓝图生物工程有限公司出品的乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒对乙肝表面抗原定量测定的方法进行验证，以判断是否能用于教学以及临床分析。
方法运用ELLISA法定量测定乙肝表面抗原，应用试剂盒HBsAg标准从浓度为8ng/ml的2倍稀释的6个浓度梯度，根据OD值绘制标准曲线再计算相对回收率和板内和板间精密度，通过资料数据综合分析。
结果HBsAg线性较好，其准确度、精密度、LOD值均在正常范内。
结论ELISA法定量检测HBsAg能较准确、快速地反映体内乙肝病毒复制情况，可以用于教学以及临床分析。
【关键词】乙肝表面抗原方法学验证标准曲线精密度ELLISA病毒性肝炎中乙型肝炎的危害较大，我国是病毒性乙型肝炎的高发流行区，普通人群的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染率接近60％，约占世界HBV携带者的1/3。
乙型肝炎病毒的病原体不仅具有传染性，还可能导致发展成肝硬化，甚至肝癌，所以乙型肝炎病毒的早期、准确、定量检测对乙型肝炎临床诊断、疗效观察及预防具有重要的意义。
酶免分析法HBV—EIA是HBV抗原和抗体最常用的检测技术，其方法简便、价廉，适合一般实验室推广，其中酶联免疫吸附技术(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)目前应用最为广泛，它常用聚苯乙烯为固相载体，使其与待测标本中的相应抗体或抗原结合，然后加酶标记的抗原或抗体，再加底物显色，最后根据色泽深浅来推算待测抗原或抗体的含量。
此方法特异性高，有效测定范围可达到20500 ng/ml，且酶免疫法有标记的试剂比较稳定并且无放射线危害等优点。
乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证
输入标准品各浓度值, 以双对数法制备标准曲 线, 获取各孔的浓度值, 打印标准曲线图和 计算结果。
整理课件ppt
8
Absorbance(OD)
2.5 2
1.5 1
0.5 0 1
y = 0.4204Ln(x) + 0.09 R2 = 0.999
公司。
整理课件ppt
4
3 溶液配制 0.01M pH7.4的PBS缓冲液：
称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4 和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用 HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水 定容至1L即可。 质控品：
用PBS缓冲液将标准品配制成6.3、1.5ng/ml 三个质控品，每质控品1ml。
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5
试验方法
1 标准曲线各浓度的配制 用PBS缓冲液将标准品配制成8、4、2、1、
0.5.0.25.0.125.0.0625ng/ml。
整理课件ppt
6
2 测定方法 设计标准品、质控品及空白分配方案；
取出试剂盒中已包被酶标板，取出板条， 按需要重新配制；
在相应孔中加入系列标准品、质控品及空
108.825 88.945 101.505 113.06 103.46 112.79 111.48 117.39 118.28 120.52 129.34 93.9 88.38 102.46 整理9课8件.5p6pt
平均回收率 RR(%)
103.159
116.092
102.528
SD(%) 9.15
整理课件ppt
3
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（胶体金法）使用说明书【产品名称】通用名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（胶体金法）英语名称：Diagnostic Kit for Hepatitis B Surface Antigen (Colloidal Gold)【包装规格】100人份/盒【预期用途】本试纸条用于全血、血清、血浆类标本的HBsAg定性检测，适用于无偿献血人员的HBsAg现场检测。
【检验原理】乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（胶体金法）采用金标免疫层析双抗体夹心技术，检测全血、血清或血浆中的HBsAg。
先在玻璃纤维上预包被金标记的抗HBs单抗，然后在硝酸纤维膜的检测线和质控线位置上分别包被抗HBs多杭（检测线）和抗鼠lgG（对照线）。
当进行检测时，样品垫只允许血清或血浆通过，可阻止血细胞的渗透。
若为阳性标本，标本中HBsAg可与金标记的抗HBs单抗结合形成复合物，此复合物由于层析作用沿纸条向前移动，则与检测线上预包被的抗HBs多抗结合形成“金标记HBs单抗-HBsAg-HBs多抗”复合物而凝聚显色。
若样品中没有HBsAg或HBsAg的含量低于检测限时，则不形成复合物而不显色。
【主要组成成份】1、HBsAg胶体金法试纸条（含硝酸纤纤素膜：包被有抗HBsAg 抗体和抗鼠lgG；金反应垫：含标记抗HBsAg抗体的胶体金）25条×4桶2、样品稀释液（磷酸盐缓冲液）4.0ml/瓶×2瓶3、说明书1份4、毛细管100支5、毛细管吸头2个6、记录纸10张【储存条件及有效期】4～30℃避光干燥储存，有效期12个月【样本要求】全血、血清或血浆【检验方法】1、将密封桶打开，取出所需数量的试纸条后，立即关好密封桶。
2、将试纸条放在水平工作台上平置并做好样本标记。
3、用毛细管吸取40μl新鲜待检全血标本（血清或血浆则80μl）滴于试纸条的样品垫上，立即在样本垫上滴加1滴（40～50μl）样品稀释液（血清或血浆标本则无须滴加样品稀释液）。
乙肝快速测定实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景乙型肝炎（Hepatitis B）是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的传染病，主要通过血液、体液等途径传播。
HBV感染是全球范围内公共卫生的重要问题，尤其是在我国，乙型肝炎的感染率较高。
因此，早期诊断和检测HBV感染对于预防和控制乙型肝炎具有重要意义。
随着医疗技术的不断发展，快速检测方法在临床应用中越来越广泛。
本实验旨在通过乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的快速测定，评估其检测性能，为临床诊断提供参考。
二、实验目的1. 评估乙型肝炎表面抗原快速测定试剂盒的检测性能。
2. 了解HBsAg检测在临床诊断中的应用价值。
三、实验材料1. 乙型肝炎表面抗原快速测定试剂盒（胶体金法）2. 血清样本（HBsAg阳性、HBsAg阴性）3. 仪器：恒温箱、离心机、微量移液器、加样器等四、实验方法1. 样本处理：将血清样本按照试剂盒说明书进行稀释，混匀。
2. 加样：按照试剂盒说明书，将稀释后的血清样本分别加入测试卡和对照卡。
3. 阅读结果：等待反应时间后，观察测试卡和对照卡的颜色变化，判断结果。
五、实验结果1. 阳性对照：对照卡显示红色条带，说明测试卡和试剂均无问题。
2. 阴性对照：对照卡显示红色条带，测试卡无红色条带，说明血清样本为HBsAg阴性。
3. 阳性样本：对照卡显示红色条带，测试卡显示红色条带，说明血清样本为HBsAg阳性。
4. 阴性样本：对照卡显示红色条带，测试卡无红色条带，说明血清样本为HBsAg 阴性。
六、实验讨论1. 本实验采用胶体金法进行HBsAg快速测定，该方法具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强等优点，适用于临床快速诊断。
2. 实验结果表明，该试剂盒对HBsAg的检测灵敏度和特异性均较高，可满足临床诊断需求。
3. 与传统检测方法相比，乙型肝炎表面抗原快速测定具有以下优势：- 操作简便：无需专业知识和设备，易于在基层医疗机构推广。
- 检测快速：可在短时间内获得检测结果，有利于及时采取防治措施。
乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证
乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证摘要目的：对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行方法学验证，以判断是否能用于临床样本分析。
方法：ELISA法定量分析，应用试剂盒HBsAg标准品从浓度为8ng/ml做2倍稀释的6个浓度梯度做标准曲线，以6，3，1.5ng/ml 3个浓度梯度5复孔做准确度，精密度和检测限等方法学验证。
结果：标准曲线R2=0.997，准确度97.07%，1.5ng/ml的RSD为16.78%，不满足ng/ml级水平的RSD一般应<15%的要求，检测限LOD为0.172ng/ml，低浓度样品（<1.5ng/ml）的检测在准确性和精密度方面都低于高浓度样品，不适合低浓度样品的检测。
结论：该HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒不能用于临床标本的分析。
关键词：乙肝表面抗原 ELISA 定量分析方法学验证前言乙肝病毒感染是我国最常见的感染性疾病之一，而乙型肝炎血清标志物是检测乙肝病毒感染最主要的病原标志。
随着免疫学技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平乙肝病毒得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义[1]。
ELISA法具有较高灵敏度、特异性强、重复性好、可进行定量和半定量测定等优点，可以在酶免疫分析仪上做批量检测。
目前临床上多倾向于做定量分析，若想知道检验结果是否可靠，实验室则必须对所用试剂盒进行方法学验证，本实验对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行准确度，精密度和检测限等方法学验证，现报告如下。
1. 材料与方法1.1 试剂盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。
1.2 仪器酶标仪：Bio-Rad 680 ；洗板机：Bio-Rad 1575；超纯水系统：Millipore Elix ；电热恒温培养箱(DNP-9052)上海精宏实验设备有限公司；振荡器（苏州管械，KJ-201A）；移液器；Tip头；EP管。
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)Yixingganyan Bingdu Biaomian Kangyuan Zhenduanshijihe(Meilianmianyifa)Diagnostic Kit for Hepatitis B Surface Antigen (ELISA)本品系用乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）包被的微孔板和酶标记抗-HBs及其他试剂制成，应用双抗体夹心酶联免疫法原理检测人血清或血浆中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）。
1 基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的要求。
2 制造2.1 专用原材料2.1.1 抗-HBs可使用HBsAg多克隆抗体或单克隆抗体，抗体的活性、纯度应符合要求。
2.1.2 辣根过氧化物酶（或其他适宜标记的酶）辣根过氧化物酶的RZ值应不低于3.0，其他酶的纯度应符合相应的要求。
2.1.3 阳性对照用血清或血浆HBsAg检测为阳性的人血清或血浆。
2.1.4 阴性对照用血清或血浆HBsAg检测为阴性的人血清或血浆。
2.1.5 微孔板CV（%）应不高于10%。
2.2 制备程序2.2.1 纯化包被抗体采用盐析法、离子交换层析法纯化，亦可采用其他适宜的纯化方法。
抗体纯度用非还原性SDS-PAGE或其他方法测定，纯化后抗体的活性、纯度应符合要求，于低温下保存。
2.2.2 酶标记抗体的制备抗体纯化及鉴定方法同2.2.1项，采用常规过碘酸钠-乙二醇法或其他适宜方法进行辣根过氧化物酶或其他酶标记，酶标记后抗体的活性、纯度应符合要求，加入适当保护剂于低温下保存。
2.2.3 包被抗体浓度和酶标记抗体浓度的选定采用方阵滴定法选择最佳包被抗体浓度和酶标记抗体的工作浓度。
2.2.4 包被抗体板的制备采用最佳包被浓度的抗体包被微孔板孔，经封闭、干燥和密封等处理后，保存于2～8℃。
对包被板须抽样检定，应符合3.1.1～3.1.4项和3.1.7项要求。
乙型肝炎表面抗原胶体金免疫层析法血清快速测定的性能评估
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汇报人：XX
目录
01
乙型肝炎表面抗原 胶体金免疫层析法
介绍
03 性 能 评 估 实 验 设 计
02 性 能 评 估 指 标 04 性 能 评 估 结 果
05 性 能 评 估 结 论
Part One
乙型肝炎表面抗原 胶体金免疫层析法
介绍
原理及特点
原理：利用胶体金标记技术，将乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的单克隆抗体结合到胶体金颗粒上，制成 检测试剂。当待测样本中存在HBsAg时，与胶体金颗粒上的抗体发生特异性结合，形成可见的红色反应 线，通过肉眼观察或仪器检测进行定性或半定量分析。
内
不同仪器间结 果的差异：在 可接受范围内
不同批号间结 果的差异：在 可接受范围内
Part Five
性能评估结论
结论总结
准确性：与标准方法相比，胶体金免疫层析法具有较高的准确性 灵敏度：胶体金免疫层析法的灵敏度较高，能够检测低浓度的乙型肝炎表面抗原 特异性：该方法对其他肝炎病毒的交叉反应较低，表现出较好的特异性 操作简便：胶体金免疫层析法操作简便，可快速得出结果，适合临床应用
汇报人：XX
Part Two
性能评估指标
准确性
符合率：实际检的比例
假阴性率：实际 为阳性而误判为 阴性的比例
精密度：重复检 测同一标本所得 结果的变异系数
灵敏度
定义：指检测试剂能够检测出目标物质的最低浓度或量
影响因素：目标物质性质、检测方法、实验条件等
数据分析
实验数据收集：确保数据的准确性和完整性 数据分析方法：选择合适的方法进行数据分析 数据解读：根据数据分析结果解读实验结果 实验结论：根据数据分析结果得出实验结论
乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒
乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒（酶联免疫法）【检验原理】本试剂采用双抗原夹心酶联免疫吸附实验原理。
在微孔条上预包被乙肝表面抗原（HBsAg），加入待测样品及酶标抗原（HBsAg-HRP）试剂进行温育。
样品中的HBsAb与包被抗原和酶标抗原形成“包被抗原-抗体-酶标抗原”复合物。
洗板后加入显色剂（TMB），复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物，终止反应后为黄色。
若样品中午乙型肝炎表面抗体时，不显色。
【检验方法】1.配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20稀释。
2.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）。
3.加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各50ul。
4.加霉：每孔加入酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻震荡混匀。
5.温育：用封板膜封板后，置于37℃温育30分钟。
6.洗涤：小心揭掉封板莫，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。
7.显色：每孔加入显色剂A、B液各50ul，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
8.测定：每孔加终止液50ul，轻轻震荡混匀，10分钟内测定结果。
没定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450nm/600-650nm检测），用空白孔调零后测定各孔A值。
【注意事项】1.本品禁用于体外检测，操作应按说明书严格进行。
封板莫不能重复使用，不同批号的酶标板，酶标试剂和阴阳性对照不可混用，不能与其他厂家实际混用。
2.避免在有挥发性物及次氯酸类消毒剂（如84消毒液）的环境下操作。
3.使用前请将试剂平衡至室温（平衡30分钟），实验请将试剂轻轻震荡混匀，使用后立即放回2-8℃。
未用完的微孔板条与干燥剂一起用封装袋密封2-8℃保存。
过期试剂请勿使用。
4.加液时必须用加样器加样，并经常校对加样器的准确性。
加入不同样品或不同试剂组分时，应更换加样器吸头和加样槽，以及出现交叉污染。
5.洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。
乙型肝炎病毒表面抗原试剂盒性能验证方案
乙型肝炎病毒表面抗原试剂盒性能验证方案报告人：时间：批准人：时间：宿迁市中医院检验科目录一、系统信息二、验证目的三、检测原理四、验证过程五、验证结果六、验证结论七、参考文献八、附件一、系统信息●项目名称：乙型肝炎病毒表面抗原（酶联免疫法）●设备名称及型号：AutoBio phomo酶标仪/Anthos fluido洗扳机●试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）批号：201610402 有效期：20171024 厂商：上海科华生物工程股份有限公司●质控品名称：康彻思坦HBsAg质控品 0.2IU/ml批号：201611007 有效期：20181121 厂商：北京康彻思坦生物技术有限公司二、验证目的验证HBsAg检测性能是否满足临床要求。
三、检测原理采用抗－HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗－HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗－HBs结合并与抗－HBs-HRP结合形成抗－HBs-HBsAg-抗－HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
四、验证过程4.1 批内精密度选择康彻思坦HBsAg 0.2IU/ml浓度质控品，在一批检测内，重复检测10次（孔），计算所得S/CO值的均值和SD，计算批内CV%。
判断结论：批内精密度变异CV%应≤15%。
4.2 检测结果符合率4.2.1 按要求选择样品进行验证选取至少40例样本，结果为阴性和阳性的样品各20例，按常规样本检测程序进行检测，结果按下列公式进行计算，得到阴/阳结果符合率：敏感性：被测试剂盒测定真阳性数/(真阳性数+假阴性数)*100%特异性：被测试剂盒测定真阴性数/（真阴性数+假阳性数）*100%符合率：被测试剂盒测定（真阳性数+真阴性数）/（真阳性数+假阴性数+真阴性数+假阳性数）*100%4.2.2 结果判断：敏感性=100%；特异性=100%；符合率=100%4.3 检出限验证4.3.1 选取一个已知浓度的定值质控，按原倍、1:1 、1:2 、1:3、1：4、1：5……等稀释倍数进行稀释，将稀释后的系列样本按常规样本的检测程序进行检测，寻求S/CO最接近1但大于1的稀释度。
乙肝表面抗原确证实验作业指导书
· 对于7.0≤COI≤30的有反应性标本
100μl标本+100μl证实试剂
100μl标本+100μl对照试剂 或·
对于COI>30的有反应性标本，标本先用Elecsys通用稀释液作1：20稀释。
100μl稀释的标本+100μl证实试剂
100μl稀释的标本+100μl对照试剂
平行测定PreciControl HBs Ag 2,以便对操作进行核对：
180μl PreciControl HBs Ag 2+20μl证实试剂
180μl PreciControl HBs Ag2+20μl对照试剂
充分混匀，将以上几种反应物15－25度温育30-60分钟或 2－8度温育过夜。
ElecsysHBsAg测定：将预处理标本置于仪器的标本区，记录标识数据。按ElecsysHBsAg试剂操作说明书进行检测。
2.标本要求
Elecsys HBsAg试验重复呈现有反应性的人血清或血浆标本。标本采集和准备与Elecsys HBsAg试验相同。
3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
采用罗氏原装配套试剂。
试剂：
瓶1：证实试剂（黑盖），2瓶，1.3ml。抗HBsAg>200IU/l，人血清。含
防腐剂。
瓶2：对照试剂（白盖），2瓶，1.3ml。人血清,抗HBsAg<3IU/l。含防
· 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
· 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去。电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。
2020版药典乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒
2020版药典乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）Yixing Ganyan Bingdu Biaomian Kangyuan Zhenduan Shijihe（Meilianmianyifa）Diagnostic Kit for Hepatitis B Virus Surface Antigen（ELISA）本品系用乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）包被的微孔板和酶标记抗-HBs及其他试剂制成，应用双抗体夹心酶联免疫法原理检测人血清或血浆中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）。
1 基本要求生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2 制造2.1 专用原材料2.1.1 抗-HBs可使用HBsAg多克隆抗体或单克隆抗体，抗体的活性、纯度应符合要求。
2.1.2 辣根过氧化物酶（或其他适宜标记的酶）辣根过氧化物酶的RZ值应不低于3.0，其他标记用酶应符合相应的要求。
2.1.3 阳性对照用血清或血浆HBsAg检测为阳性的人血清或血浆。
2.1.4 阴性对照用血清或血浆HBsAg检测为阴性的人血清或血浆。
2.1.5 微孔板CV（%）应不高于10%。
2.2 制备程序2.2.1 包被抗体的纯化采用盐析法、离子交换色谱法纯化，亦可釆用其他适宜的纯化方法。
抗体纯度用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法或其他方法测定，纯化后抗体的活性、纯度应符合要求，于低温下保存。
2.2.2 酶标记抗体的制备抗体纯化及鉴定方法同2.2.1项，釆用常规过碘酸钠-乙二醇法或其他适宜方法进行辣根过氧化物酶或其他酶标记，酶标记抗体的活性、纯度应符合要求，加入适当保护剂后于低温下保存。
2.2.3 包被抗体浓度和酶标记抗体浓度的选定采用方阵滴定法选择最佳包被抗体浓度和酶标记抗体的工作浓度。
2.2.4 包被抗体板的制备采用最佳包被浓度的抗体包被微孔板孔，经封闭、干燥和密封等处理后，于2～8℃保存。
对包被板须抽样检定，应符合3.1.1～3.1.4项和3.1.7项要求。
最新乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒2(1)
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒2(1)乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（胶体金法）［包装］铝箔袋单人份包装或简装25人份包装．［样本收集］取静脉血１－２ｍｌ于干净容器中分离血清或血浆样本，如不及测定可置4冰箱贮存，超过3天应加入0.1％的硫柳汞防腐，测试前注意复温［使用方法］１、待测样本，检测试纸或其他检测用材料等均在室温平衡取出试纸。
不可使用冻干血清。
２、将测试纸有箭头的一端插入检测样本中，约10秒钟后取出平放，满10分钟观察显示结果。
测试纸插入检样本深度不可超过标志线。
３、弱阳性样本和阴性样本满25分钟判读结果。
［结果判定］阳性：在检测线位置及对照位置各出现一条红色反应线。
阴性：仅在对照线位置出现一条红色反应线。
无效：测试纸无红色反应线出现。
或仅在检测线位置出现一条红色反应线。
表明实验失败或检测试纸失效。
［注意事项］１、测试纸从冰箱取出后，应先充份复温在打开包装。
开启请尽快使用。
筒装注意取出试纸后及时扣严筒盖，谨防受潮，切勿冰冻。
２、样本视为传染品，注意安全操作。
３、铝箔袋或塑料筒内有干燥剂，不可内服。
４、本测试纸在30分钟后的显示结果无临床意义。
人类免疫缺陷病毒（HIV1/2）抗体诊断试剂盒（胶体金法）使用说明书［名称］通用名：人类免疫缺陷病毒（HIV1/2）抗体［原理］本品采用胶体金法免疫层析技术，在玻璃纤维膜上预包被金记HIVgp160和ｇｐ36抗原，在硝酸纤维膜检测线和质控线上分别包被HIVgp41、ｇｐ36混合抗原和抗HIVgp41抗体，当检测进行时，样品中HIV抗体可与金标记HIV 抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿试纸条向前移动。
若样品中含有可被检测的HIV抗体，遇与检测线预包的HIV抗原结合形成“金标记HIV抗原－HIV抗体－HIV包被抗原”复合物而凝聚显色；若样品中没有HIV抗体或HIV 抗体的含量低于检测限时，则不形成复合物而不显色。
本试纸条适用于无偿献血员的现场检测。
采用标准血清盘对HBsAg、抗-HCV、梅毒试剂盒质量验证
关键词：标准血清盘ＨＢｓＡｇ抗—ＨＣＶ梅毒试剂盒质量验证 目前乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒等相关疾病的传播是输血行业所控制的最重要指标。如何控制 血站购进每一批血液检测试剂盒在使刚前的质量验证至关重要。我站于２００７年６月引进了国家标准 血清盘的新技术，采用了新的检测方法对我们所购进的每批ＨＢｓＡｇ、抗—ＨＣＶ、梅毒免疫试剂盒的 质量验证。 １．材料与方法 １．１试剂及生产厂家 １．１．１血清盘：由国家生物制品检定所提供的国家标准血清盘。
．８９．
３．４我站于２００７年６月开始使用中国生物制品检定所生产的ＨＢｓＡｇ、抗—ＨＣＶ、梅毒三种血清 盘，对我站所购进的ＨＢｓＡｇ、抗—ＨＣＶ、梅毒三种试剂盒共４６批进行质量验证，合格４４批，其中 有２批不符合质量验证标准，退回厂家。 ４．小结： 对血站购进的每一批试剂盒在使用前的质量验证直接影响到血液的质量，血清盘技术的引进及 应用有助于血站对试剂盒在使用前的质量控制，为血液检测提供了更加安全的保障，便于我们在实 际工作中把好血液质量关，使安全有效的血液制品应用于临床。
．９０．
采用标准血清， 田纳， 许斌， 庞淑芬 黑龙江省血液中心
本文链接：/Conference_7638797.aspx
１．１．２
ＨＢｓＡｇ试剂：英科厦门新创；
１．１．３抗．ＨＣＶ试Ｎ－北京万泰； １．１．４梅毒试剂：北京万泰 １．２方法 １．２．１乙型肝炎病毒表面抗原国家参考品系用无菌方法采集阴性和阳性血清或血浆，经国内外多 家试剂厂家反复核验确证的—套标准晶，其中有阴性参考品２０份、阳性参考品３份、灵敏度参考品 ９份（ａｄｒ亚型、ａｄｗ亚型、ａｙ亚型）、精密性参考品１份。 １．２．２抗．ＨＣＶ标准品是从全国供血员和肝炎病人中选出，经国内外几十家抗．ＨＣＶ ＥＩＡ词、剂筛 选，ＰＣＲ等方法确证并经过国家有关单位复核一套标准品，其中有阳性参考品３０份、阴性参考品 ３０份、灵敏度参考品４份（ＬＩ、Ｌ２、Ｌ３、ＩＡ）、精密度参考品１份。 １．２．３梅毒螺旋体参考品系用梅毒病人及非梅毒病人血浆制备而成的一套参考品，其中有阳性参 考品１０份、阴性参考品２０份、灵敏度参考品由３份（ＬＩ．Ｌ３）梅毒阳性血浆样品和ｌ份阴性血浆样 品组成（Ｌ４），精密性参考品由ｌ份中等偏弱阳性血浆组成。 ２．判断标准 ２．１乙型肝炎病毒表面抗原试剂盒判定标准：阴性、阳性参考品符合率均应达到１００％，灵敏度 符合最低检出量，精密度ＣＶ值Ｓ１５％。 ２．２抗．ＨＣＶ标准品试剂盒判定标准：阴性、阳性参考品符合率应达到芝２９／３０，灵敏度符合最低 检出量，精密度ＣＶ值＜１５％。 ２．３梅毒螺旋体试剂盒判定标准：阴性、阳性参考品符合率应达到１００％，灵敏度符合最低检出 量，精密度ＣＶ值＜１５％。 ３．讨论 ３．１我们采用的国家标准血清盘对购进的每一批免疫试剂盒进行验证，有效地控制了试剂盒在 使用前的质量监测。血清盘是由国家生物制品检定所提供的，本品是由国家最高法定检定部门生产 的标准品。验证方法可行，灵敏度高，特异性好。 ３．２新方法的应用有效地控制了试剂盒在购进储存和运输过程中的质量，保证了试剂盒的安全 使用。 ３．３此项技术的应用是国内最先进的方法，目前在同行业中处于领先水平，在省内独创。
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乙型肝炎病毒表面抗原试剂盒性能验证方案
报告人：时间：
批准人：时间：
宿迁市中医院检验科
目录
一、系统信息
二、验证目的
三、检测原理
四、验证过程
五、验证结果
六、验证结论
七、参考文献
八、附件
一、系统信息
●项目名称：乙型肝炎病毒表面抗原（酶联免疫法）
●设备名称及型号：AutoBio phomo酶标仪/Anthos fluido洗扳机
●试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）
批号：201610402 有效期：20171024 厂商：上海科华生物工程股份有限公司●质控品名称：康彻思坦HBsAg质控品 0.2IU/ml
批号：201611007 有效期：20181121 厂商：北京康彻思坦生物技术有限公司二、验证目的
验证HBsAg检测性能是否满足临床要求。
三、检测原理
采用抗－HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗－HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗－HBs结合并与抗－HBs-HRP结合形成抗－HBs-HBsAg-抗－HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
四、验证过程
4.1 批内精密度
选择康彻思坦HBsAg 0.2IU/ml浓度质控品，在一批检测内，重复检测10次（孔），计算所得S/CO值的均值和SD，计算批内CV%。
判断结论：批内精密度变异CV%应≤15%。
4.2 检测结果符合率
4.2.1 按要求选择样品进行验证
选取至少40例样本，结果为阴性和阳性的样品各20例，按常规样本检测程序进行检测，结果按下列公式进行计算，得到阴/阳结果符合率：
敏感性：被测试剂盒测定真阳性数/(真阳性数+假阴性数)*100%
特异性：被测试剂盒测定真阴性数/（真阴性数+假阳性数）*100%
符合率：被测试剂盒测定（真阳性数+真阴性数）/（真阳性数+假阴性数+真阴性数+假阳性数）*100%
4.2.2 结果判断：敏感性=100%；特异性=100%；符合率=100%
4.3 检出限验证
4.3.1 选取一个已知浓度的定值质控，按原倍、1:1 、1:2 、1:3、1：4、1：5……等稀
释倍数进行稀释，将稀释后的系列样本按常规样本的检测程序进行检测，寻求S/CO最接近1但大于1的稀释度。
如果稀释样本S/CO结果大于1，则继续增加稀释倍数做检测。
将S/CO结果接近1的稀释度的样本作20次重复测试，如果95%以上的结果都大于1，则可将该稀释度对应样本的浓度当做检出限浓度。
4.3.2、根据上述系列样本中结果为阳性时最大稀释倍数计算其检出限，具体公式如下：检出限=原始样本浓度/结果为阳性时的最大稀释倍数
五、验证结果
六、验证结论
本室HBsAg检测项目精密度、敏感性、特异性、符合率、检出限均可接受，符合临床需求。
七、参考文献
CNAS-CL39：《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验领域的应用说明》。
八、附件
1、HBsAg定性项目性能验证记录
2、实验原始数据
HBsAg定性项目性能验证记录
检验科免疫组-感染检测依据CNAS-CL39：《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验领域的应用说明》对医学实验室检测系统性能评价的相关要求，对HBsAg 定性项目的性能评价主要从以下几个方面进行：精密度、敏感性、特异性、符合率、检出限等。
具体结果如下：
1 精密度
精密度，以康彻思坦0.2IU/ml质控品进行评价，在一个批次内连续检测10次。
计算其均值、标准差及变异系数，以不超过15%为判断依据。
精密度验证试验数据记录表
2 敏感性
敏感性以用雅培化学发光确认的20份阳性样品进行评价，记录其结果，以阳性结果的百分比作为评价标准。
3 特异性
特异性以用雅培化学发光确认的20份阴性样品进行评价，记录其结果，以阴性结果的百分比作为评价标准。
4符合率
符合率：被测试剂盒测定（真阳性数+真阴性数）/（真阳性数+假阴性数+真阴性数+假阳性数）*100%=100%
符合率验证结果：■满足要求□不满足要求
5检出限
材料：康彻思坦0.2IU/ml HBsAg质控品。
结果：拟以1:1作为目标稀释度，以此稀释度样本做20次重复性检测，所得S/CO 值均大于1。
根据稀释度计算其浓度为0.1IU/ml，故将此浓度作为检出限浓度。
数据：
1:1稀释度重复20次S/COV结果如下：。