薄层色谱法

2.1供试品溶液的影响
• 供试品溶液纯度影响:如果供试品提取过 程中带来杂质太多,那么薄层色谱斑点很 难辨认（如图）。制备样品所用的溶剂 一般要求溶解度不宜太大，粘度不宜太 高，沸点适中。 • 供试品溶液浓度的影响:供试品溶液浓度 过浓,易产生拖尾或形成一条甚至展不上 去。解决办法是将供试品稀释。
供试品溶液纯度影响
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供试品溶液浓度影响
2.2薄层板质量的影响
• 薄层板质量对色谱质量有很大影响，如 使用不合格的预制板或手铺不均匀的自 制板，得到的谱图很难辨认（如图）。 因此，薄层板的制备一定要均匀。
2.3上样技术的影响
• 薄层色谱的点样量无论是供试品还是对 照品均不宜过大，点样量过大斑点分离 不清（如图）。
薄层色谱法
总论：薄层色谱法是层析中应用最普遍的方 法之一.它具有分析时间短、分离能力强、灵 敏度高、显色方便、所用仪器简单、操作方 便等优点。是中药的常用鉴别方法之一，而 且在中药的鉴别中应用的越来越广乏。
• 薄层层析可分为吸附薄层层析和分配 薄层层析，我们常用的是吸附薄层层 析。吸附薄层层析的原理即不同物质 在吸附剂和溶剂之间发生连续不断的 吸附、解吸附、再吸附、再解吸附。 易被吸附的物质相对移动得慢，难被 吸附的物质相对移动的快，经过一段 时间的展开，不同物质就彼此分开， 从而形成相互分离的斑点。
1 薄层色谱的规范化操作
• 1.1薄层板的制备 • 市售薄层板：临用时要活化，即110℃加热30分 钟。 • 自制薄层板：除另有规定外，取1份吸附剂和3份 水（或相应的溶剂），向一个方向研磨，研至有 些挂壁，除去表面气泡后，倒入涂布器中，移动 速度要均匀，板的厚度0.2-0.3mm,在平台上晾干 ，110℃加热30分钟进行活化。
氨蒸气饱和的影响
展开剂相差极性大出现解混现象(或分层)
展开剂予平衡的影响
2.6温度的影响
• 在相对湿度恒定的条件下，一般在较高 温度时，Rf值高；反之，Rf值低（如图 ）。如:人参在低温时（10℃以下）分离 效果好，甘草在高温时（28℃以上）分 离效果好。
2.7其他因素影响
如果喷显色剂后,整板均不显 色,那么要考虑显色剂有问题. • 如果显色后斑点在原点未动, 那么要考虑溶剂有问题.
•
2.8分离较好的色谱图
• 总之：薄层色谱是一个分离机制 复杂，而影响因素较多的过程。 因此，我们在操作过程中要注意 影响质量的因素，出现问题查找 原因，做好系统实用性试验，以 得到满意的分离效果。
1.4显色与检视
• • 喷显色剂要均匀 结果判断要准确
2 影响薄层色谱的主要因素
• 薄层色谱是一种敞开系统的色谱技术， 除材料和器材外，外界环境条件对被分 离物质的层析行为影响较大，其次由于 分析的全过程是横向的离线多步操作， 所以操作技巧也明显影响色谱质量，因 而薄层色谱是一种较难驾驭的技术。为 提高薄层色谱分离水平,需注意以下几个 影响因素.
• 1.2点样
点样时不要刺破板面。点样后将板放入干燥器中，待溶剂完全挥干后 再进行展开。
高效板 距底边距离 8-10mm 普通板 10-15mm
圆点直径 条带宽度 点间距
2mm 4-8mm 5mm
3mm 5-10mm 8mm
1.3展开
• 展开剂放入展开缸后要饱和大约30分钟，展开 剂的量应以薄层板侵入5mm为宜，展距高效板 ５－８ｃｍ，普通版８－１５ｃｍ． • 注意：展开剂配制后是否分层（温度影响） • 展开剂不要重复使用 • 薄层板的放入要迅速 • 展开时不要移动展开缸
2.4吸附剂的活性与相对湿度的影响
• 吸附剂的活性是由表面能与表面积决定的。表 面积越大，吸附力越大，活性越高。硅胶之所 以有吸附力，是由于表面有众多硅醇基，硅醇 基的活泼羟基及游离羟基与极性化合物或不饱 和化合物形成氢键所致。但硅醇基是亲水性基 团，很容易吸水形成水合硅醇基而失去活性。 因此相对湿度对其影响很大（如图）
1、2 为白芍 3、4 为赤芍 相对湿度小于30%下展开，二者不易区分， 在高湿度下80%以上展开色谱分离度提高，二者可区分开。
1-5样品 6黄连对照药材 7盐酸小糪碱，在相对 湿度低时较相对湿度较高时，分离效果好。
2.5溶剂蒸气的影响
• 薄层色谱的特点是溶剂的蒸汽在展开箱 中也参与色谱展开而形成三维的层析过 程，因此展开箱一定要饱和即预平衡。 否则影响分离效果（如图）