组织工程皮肤的构建及其在经皮吸收中的应用
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透系数，与新生儿包皮的渗透系数相近；该共培养物代谢睾 ６９
酮的能力与新生儿包皮亦类似，认为这种体外皮肤模型可 以用于研究药物的经皮渗透特性和代谢。Ａｓｂｉｌｌ 等［１９ ］以 咖啡因、氢化可的松、他莫昔芬为模型药物研究了体外复合 皮肤替代物的渗透特性，结果表明，复合皮肤替代物比无毛 鼠皮肤及表皮替代物更适于体外药物皮肤渗透特性的研 究。徐燕丰等［２０ ］以酮洛芬及其异丙酯为模型药物研究了以 ＨａＣａＴ 构建的组织工程皮肤的渗透作用，结果表明 ＨａＣａＴ 细胞在气 － 液界面培养条件下可形成多层分化不完全的表 皮层，保留了一定的酶活性，可用于药物的经皮渗透和代谢 等研究。 ３ 展望
经皮吸收制剂的研究和开发是现代药剂学研究的重要 内容，一般以离体动物皮肤作为评价药物经皮渗透的模型， 但人体皮肤与动物皮肤毕竟相差太大。近年来，随着生命科 学、材料科学以及诸多相关学科的飞速发展，构建一种功能 和结构近乎正常人体皮肤的组织工程化皮肤已不再是梦 想，目前能够用于经皮吸收研究的组织工程化皮肤通常要 求它们具有很好的模拟天然皮肤的角质层屏障和代谢活性 的特征。 ２．１ 离体动物皮肤的应用 杨飞等［１１ ］采用 ＴＹＪ－６Ａ 型透 皮扩散实验仪，用小鼠腹部皮肤进行体外经皮渗透实验，测 得秋水仙碱醇质体的经皮渗透速率为 ６．５４ μｇ／（ｃｍ·２ ｈ）。李 宁等［１２ ］采用改进的 Ｆｒａｎｚ 扩散池，用大鼠腹部皮肤来研究 氟比洛芬微乳的透皮速率。方亮等［１３ ］以自制双室水平扩散 池和离体鼠皮进行体外渗透实验，采用 ＨＰＬＣ 法同时测定盐 酸小檗碱和黄芩苷的皮内含量。 ２．２ 组织工程皮肤的应用 ２．２．１ 表皮替代物的应用 Ｚｇｈｏｕｌ 等［１４ ］采用 Ｆｒａｎｚ 扩 散池考察羊毛脂软膏和磷酸盐缓冲液中氟芬那酸经表皮替 代物的渗透特性，缓冲液中药物的渗透速率比软膏中药物 的渗透速率高 ４０ 倍；药物经表皮替代物的渗透速率比经人 表皮的渗透速率高 ５ 倍，但不同批次表皮替代物之间的药
１９９１ 年 Ｃｏｐｐｅｒ 等［３ ］在 ＰＧＡ 两种可吸收缝线制成的网 架上接种从新生儿包皮中获取的成纤维细胞，成纤维细胞 增殖并分泌多种基质蛋白，如胶原纤维连接蛋白、细胞外基 质等，形成由成纤维细胞、细胞外基质和可降解材料构成的 人工真皮。Ｃｈｅｎ 等［４ ］在 ＰＬＡ／ＰＧＡ 共聚物和胶原材料制成的 混合网架上，接种成纤维细胞，再将其植入裸鼠后背，２ 周 后形成真皮组织，其成纤维细胞的接种效率、分布和生长状 态要明显优于单纯的 ＰＬＡ／ＰＧＡ 共聚物材料。Ｂｅｌｌ 等用醋酸 提取水溶性胶原并与成纤维细胞按一定比例混匀制成一种 薄的真皮，在此真皮上培养出复层表皮，其移植成活率较单 纯培养表皮要高，而创面收缩率明显降低。目前国外采用 较多的是以牛跟腱提纯的胶原和从鲨鱼软骨中提取的 ６－ 硫酸软骨素交联制成真皮，与医用级硅胶膜组合成 Ｉｎｔｅ－ ｇｒａ［５ ］，其移植后机体血管内皮细胞、成纤维细胞可长入真 皮内，形成具有与真皮相似三维结构的新生真皮。数周后 人工真皮完全被新生真皮结构所取代，创面获得永久覆盖。 真皮替代物的研制在某些方面弥补了表皮替代物的缺点， 为复合皮肤的体外构建提供了现实指导意义。 １．３ 复合皮肤的构建 复合皮肤替代物就是指表皮与真 皮替代物构建的接近正常皮肤结构的一种皮肤替代物。构 建完整的皮肤不仅可恢复皮肤的功能和外观，而且表皮和 真皮基质成分相互影响的机制可促进彼此的分化及创面愈 合。
2010 年第 23 卷第 5 期 Gansu Journal of TCM, 2010 Vol.23 No.5
１．３．１ 以天然真皮替代物构建的组织工程皮肤 刘德伍 等［６ ］用无血清培养人原表皮细胞，接种于经桂枝汤浸泡的 异种真皮，进行复合移植，结果表明，人表皮细胞和经桂枝 汤浸泡的异种真皮复合移植可以作为一种新的皮肤代用 品。易先锋等［７ ］采用脱细胞猪真皮基质为支架材料，其上 接种表皮细胞构建组织工程皮肤，实验表明能在体外构建 具有表皮和真皮的复合皮肤，但这种皮肤能否作为一种临 床有效皮肤还需进一步证实。 １．３．２ 以人工合成真皮替代物构建的组织工程皮肤 １９８１ 年 Ｂｅｌｌ 等将表皮膜片与新生儿包皮细胞和真皮成纤维细 胞在凝胶中生长形成的真皮相结合形成复合皮移植并获得 成功。１９９７ 年经 ＦＤＡ 批准上市的 Ａｐｌｉｇｒａｆ 是目前最成熟 的既含有表皮层又含有真皮层的组织工程复合皮，其细胞 成分均来源于新生儿包皮，采用异体成纤维细胞接种于牛 胶原凝胶中形成细胞胶原凝胶，１ 周后接种角质形成细胞， 浸没培养 ４ 天，角质化细胞融合成片，然后进行气液界面培 养 １～２ 周，即为产品 Ａｐｌｉｇｒａｆ。国内金岩等［８ ］用免疫原性 较低的胎儿皮肤作为细胞来源，牛Ⅰ型胶原为支架构建成 人组织工程 Ａｃｔｉｖｓｋｉｎ，其具有较薄的表皮层和较厚的真 皮层，是一种良好的生物活性皮肤替代物，可用来修复全层 皮肤缺损。高学军等［９ ］制备胶原凝胶作为组织工程支架材 料，在成功构建人真皮的基础上，种植表皮细胞，构建人工 复合皮肤。孙文娟等［１０ ］制备凝胶和胶原海绵两种组织工程 支架，作为真皮支架，在其上接种角朊细胞，成功构建了人 工复合皮肤。目前，组织工程复合皮肤作为一种新型的创面 覆盖物，在创造良好的愈合环境，缩短创面愈合时间上已被 广泛认可。 ２ 组织工程皮以作为一种研究局部 用药物透皮转运的模型。Ｂｏｅｌｓｍａ 等［１５ ］采用微透析技术研 究了贴片中烟酸甲酯透过离体人皮肤、重建表皮及在体人 皮肤的渗透特性。Ｚｅｌｌｍｅｒ 等［１６ ］用重建表皮研究脂质体与 皮肤的相互作用，重建表皮由人角朊细胞培养而成，气 － 液 界面培养 １ 周后产生类似于天然人表皮的角化层。脂质体 分别由磷脂酰胆碱（ＰＣ）、磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）及人角质层脂 质（ｈＳＣＬ）制成，平均粒径 ５０ｎｍ；将这些脂质体加在重建表 皮的上面，考察它们透过重建表皮的渗透速率，结果分别为 １．３８、０．５５ 和 ０．０１３ μｇ／（ｃｍ２·ｈ）。 ２．２．２ 复合皮肤替代物的应用 Ｋｕｂｏｔａ 等［１７ ］研究了倍 他米松 －１７－ 戊酸酯在活性皮肤替代物（ＬＳＥ）中的渗透与代谢 特性。ＬＳＥ 由人表皮细胞和成纤维细胞培养而成，含角质层、 活性表皮及真皮，但缺乏皮肤附属器。倍他米松 －１７－ 戊酸酯、 倍他米松 －２１－ 戊酸酯及倍他米松以硅酮压敏胶贴片形式 给药；用倍他米松时，接受介质未检测出代谢物；用倍他米 松 －２－１２ 戊酸酯时，接受介质中只检测到倍他米松，未检测 到倍他米松 －２１－ 戊酸酯；用倍他米松 －１７－ 戊酸酯时，透过 药物的大部分仍以倍他米松 －１７－ 戊酸酯形式存在，说明其 在皮肤中代谢较少，ＬＳＥ 可以作为研究皮肤渗透与代谢的 模型。Ｓｌｉｖｋａ 等［１８ ］将成纤维细胞接种于尼龙网上，生长 ４ 周，形成真皮样基质，然后将角朊细胞接种在该真皮模型 上，进行气 － 液界面共培养，形成带有角质层的分化表皮； 采用 Ｆｒａｎｚ 和水平式扩散池测定水等在此共培养物中的渗
ａｔｉｎｏｃｙｒｅｓ ｏｎ ｔｙｐｅ Ｉ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ ｔｏ ｒｅｃｏｎ－ ｓｔｉｔｕｔｅ ｔｈｅ ｅｐ ｉｄｅｒｍｉｓ［Ｊ］．Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇ，２０００，６（１）：５３． ［２］ Ｗａｉｎｗ ｒｉｇｈｔ Ｄ，Ｍ ａｄｄｅｎ Ｍ，Ｌｕｔｅｒｍａｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌｅ ｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｃｅｌｌｕｌａｒ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｄｅｒｍａｌ ｍａｔ ｒｉｘ－ ｉｎｆｕｌｌ－ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｂｕｒｎ［Ｊ］．Ｊ Ｂｕｒｎ Ｃａｒｅ Ｒｅｈａｂｉｌ，１９９６，
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６８ 肤缺损创面愈合、提高创面修复质量的新途径。
１ 组织工程皮肤的构建 １．１ 表皮替代物的研究 １９７５ 年 Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ 等利用照射 处理过的 ３Ｔ３ 成纤维细胞作为滋养层，培养人表皮细胞获 得成功。１９８１ 年 Ｏ’Ｃｏｎｎｅｒ 首次应用此方法在体外培养出 适于移植的自体表皮细胞膜片，经长时间临床观察，发现表 皮细胞膜片脆性大，移植成功率低，而且抗感染能力差，移 植后表皮不耐摩擦，容易出现水疱、易收缩、易结痂收缩，与 创面结合不稳固。之后人们意识到需在膜片下增加支持物， 可以解决临床上一定厚度、柔韧性和可操作性的要求 。 Ｈｏｒｃｈ 等［１ ］将角质化细胞接种在胶原膜上，几天后细胞融 合成单层时即进行移植，与常规做法相反，表皮细胞转向创 面，表面胶原膜、角质化细胞在移植区内继续增殖，此法缩 短了创面愈合周期，也减少了角质化细胞的体外培养时间。 同时第二军医大学焦向阳等将人表皮细胞接种到生物膜 上，在体外构建了一种新的表皮替代物———表皮细胞生物 膜移植物。这些研究都为组织工程皮肤的构建奠定了基础。 １．２ 真皮替代物的研究 真皮替代物在皮肤重建过程中 具有重要作用，是在表皮替代物的研制与临床应用上发展 起来的，真皮可增加创面愈合后的皮肤弹性、柔软性及机械 耐磨性，减少瘢痕增生。真皮替代物可基本分为 ２ 大类，即 天然真皮与人工合成真皮。 １．２．１ 天然真皮替代物 天然真皮替代物具有完整的胶 原三维结构，生物相容性好，在组织成分上与自体皮肤最接 近，在皮肤重建中具有较高的应用价值。
目前表皮细胞培养和移植技术已经取得长足进步，真 皮支架的研究也有了一定进展，随着皮肤组织工程学的发 展，组织工程化皮肤已经初步应用于药剂学，但由于与传统 意义上的离体皮肤相比成本较高，还没有大规模用于实验 研究。与此同时，组织工程皮肤的临床应用还需进一步研 究，要实际解决大面积皮肤缺损创面覆盖的临床问题，仍需 生物学、工程材料学和临床多学科的携手努力。 参考文献 ［１］ Ｈｏｒｃｈ ＲＥ，Ｄｅｂｕｓ Ｍ，Ｗａｇｎｅｒ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｃｕｉｔｕｒｅｄ ｈｕｍａｎ ｋｅｒ－
2010 年第 23 卷第 5 期 Gansu Journal of TCM, 2010 Vol.23 No.5
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·文 献 综 述 ·
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组织工程皮肤的构建及其在经皮吸收中的应用
刘晓丽，王丽峰，王 阳△ 天津中医药大学中药学院，天津 ３００１９３
摘 要 查阅了近 20 年来的文献，就组织工程皮肤的构建及其在经皮吸收中的应用进行了综述，提出体外培 养细胞构建组织工程皮肤成为促进皮肤缺损创面愈合、提高创面修复质量的新途径。
关键词 组织工程；皮肤，人工；细胞培养技术；皮肤吸收 中图分类号：R9- 39 文献标识码：A 文章编号：1004- 6852( 2010) 05- 0068- 03
皮肤作为人体最大的组织，是与外界环境接触的屏障， 具有保护、分泌、代谢和感觉等重要功能。当外界损伤或疾 病等原因造成皮肤缺损时，其危害可以是轻微的，也可以是 致命的。近年来随着经皮吸收制剂的研究和发展，组织工程 皮肤的构建及其在经皮吸收中的应用成为研究的热点。人 们通常采用动物（鼠、猪等）皮肤或人尸体皮肤在体外进行 渗透和代谢研究，但它们与健康人皮肤的结构、生理等存在 较大差异，而体外培养细胞构建组织工程皮肤成为促进皮
天然真皮替代物应用最多的是脱细胞真皮。脱细胞真
皮是将经酶消化、高渗盐浸泡处理的异体（种）皮，去除表皮 层和真皮内的细胞成分，保留完整的胶原纤维及基底膜等 细胞外间质成分。脱细胞真皮具有低抗原性、诱导成纤维细 胞长入、引导表皮细胞生长，不容易被降解，抗感染能力强 的特性。代表产品有美国 Ｌｉｆｅｃｅｌｌ 开发的 Ａｌｌｏｄｅｒｍ［２ ］。研 究结果表明，来源于猪皮的异种无细胞真皮可能具有更广 泛的应用前景。 １．２．２ 人工合成真皮替代物 人工真皮系采用各种材料 制成的真皮基质，与天然替代物相比其组成成分及胶联物 质可改变，以增加对胶原酶的耐受性，且可大量生产，长期 贮存。人工真皮的开发亦成为皮肤组织学中的热点。
酮的能力与新生儿包皮亦类似，认为这种体外皮肤模型可 以用于研究药物的经皮渗透特性和代谢。Ａｓｂｉｌｌ 等［１９ ］以 咖啡因、氢化可的松、他莫昔芬为模型药物研究了体外复合 皮肤替代物的渗透特性，结果表明，复合皮肤替代物比无毛 鼠皮肤及表皮替代物更适于体外药物皮肤渗透特性的研 究。徐燕丰等［２０ ］以酮洛芬及其异丙酯为模型药物研究了以 ＨａＣａＴ 构建的组织工程皮肤的渗透作用，结果表明 ＨａＣａＴ 细胞在气 － 液界面培养条件下可形成多层分化不完全的表 皮层，保留了一定的酶活性，可用于药物的经皮渗透和代谢 等研究。 ３ 展望
经皮吸收制剂的研究和开发是现代药剂学研究的重要 内容，一般以离体动物皮肤作为评价药物经皮渗透的模型， 但人体皮肤与动物皮肤毕竟相差太大。近年来，随着生命科 学、材料科学以及诸多相关学科的飞速发展，构建一种功能 和结构近乎正常人体皮肤的组织工程化皮肤已不再是梦 想，目前能够用于经皮吸收研究的组织工程化皮肤通常要 求它们具有很好的模拟天然皮肤的角质层屏障和代谢活性 的特征。 ２．１ 离体动物皮肤的应用 杨飞等［１１ ］采用 ＴＹＪ－６Ａ 型透 皮扩散实验仪，用小鼠腹部皮肤进行体外经皮渗透实验，测 得秋水仙碱醇质体的经皮渗透速率为 ６．５４ μｇ／（ｃｍ·２ ｈ）。李 宁等［１２ ］采用改进的 Ｆｒａｎｚ 扩散池，用大鼠腹部皮肤来研究 氟比洛芬微乳的透皮速率。方亮等［１３ ］以自制双室水平扩散 池和离体鼠皮进行体外渗透实验，采用 ＨＰＬＣ 法同时测定盐 酸小檗碱和黄芩苷的皮内含量。 ２．２ 组织工程皮肤的应用 ２．２．１ 表皮替代物的应用 Ｚｇｈｏｕｌ 等［１４ ］采用 Ｆｒａｎｚ 扩 散池考察羊毛脂软膏和磷酸盐缓冲液中氟芬那酸经表皮替 代物的渗透特性，缓冲液中药物的渗透速率比软膏中药物 的渗透速率高 ４０ 倍；药物经表皮替代物的渗透速率比经人 表皮的渗透速率高 ５ 倍，但不同批次表皮替代物之间的药
１９９１ 年 Ｃｏｐｐｅｒ 等［３ ］在 ＰＧＡ 两种可吸收缝线制成的网 架上接种从新生儿包皮中获取的成纤维细胞，成纤维细胞 增殖并分泌多种基质蛋白，如胶原纤维连接蛋白、细胞外基 质等，形成由成纤维细胞、细胞外基质和可降解材料构成的 人工真皮。Ｃｈｅｎ 等［４ ］在 ＰＬＡ／ＰＧＡ 共聚物和胶原材料制成的 混合网架上，接种成纤维细胞，再将其植入裸鼠后背，２ 周 后形成真皮组织，其成纤维细胞的接种效率、分布和生长状 态要明显优于单纯的 ＰＬＡ／ＰＧＡ 共聚物材料。Ｂｅｌｌ 等用醋酸 提取水溶性胶原并与成纤维细胞按一定比例混匀制成一种 薄的真皮，在此真皮上培养出复层表皮，其移植成活率较单 纯培养表皮要高，而创面收缩率明显降低。目前国外采用 较多的是以牛跟腱提纯的胶原和从鲨鱼软骨中提取的 ６－ 硫酸软骨素交联制成真皮，与医用级硅胶膜组合成 Ｉｎｔｅ－ ｇｒａ［５ ］，其移植后机体血管内皮细胞、成纤维细胞可长入真 皮内，形成具有与真皮相似三维结构的新生真皮。数周后 人工真皮完全被新生真皮结构所取代，创面获得永久覆盖。 真皮替代物的研制在某些方面弥补了表皮替代物的缺点， 为复合皮肤的体外构建提供了现实指导意义。 １．３ 复合皮肤的构建 复合皮肤替代物就是指表皮与真 皮替代物构建的接近正常皮肤结构的一种皮肤替代物。构 建完整的皮肤不仅可恢复皮肤的功能和外观，而且表皮和 真皮基质成分相互影响的机制可促进彼此的分化及创面愈 合。
2010 年第 23 卷第 5 期 Gansu Journal of TCM, 2010 Vol.23 No.5
１．３．１ 以天然真皮替代物构建的组织工程皮肤 刘德伍 等［６ ］用无血清培养人原表皮细胞，接种于经桂枝汤浸泡的 异种真皮，进行复合移植，结果表明，人表皮细胞和经桂枝 汤浸泡的异种真皮复合移植可以作为一种新的皮肤代用 品。易先锋等［７ ］采用脱细胞猪真皮基质为支架材料，其上 接种表皮细胞构建组织工程皮肤，实验表明能在体外构建 具有表皮和真皮的复合皮肤，但这种皮肤能否作为一种临 床有效皮肤还需进一步证实。 １．３．２ 以人工合成真皮替代物构建的组织工程皮肤 １９８１ 年 Ｂｅｌｌ 等将表皮膜片与新生儿包皮细胞和真皮成纤维细 胞在凝胶中生长形成的真皮相结合形成复合皮移植并获得 成功。１９９７ 年经 ＦＤＡ 批准上市的 Ａｐｌｉｇｒａｆ 是目前最成熟 的既含有表皮层又含有真皮层的组织工程复合皮，其细胞 成分均来源于新生儿包皮，采用异体成纤维细胞接种于牛 胶原凝胶中形成细胞胶原凝胶，１ 周后接种角质形成细胞， 浸没培养 ４ 天，角质化细胞融合成片，然后进行气液界面培 养 １～２ 周，即为产品 Ａｐｌｉｇｒａｆ。国内金岩等［８ ］用免疫原性 较低的胎儿皮肤作为细胞来源，牛Ⅰ型胶原为支架构建成 人组织工程 Ａｃｔｉｖｓｋｉｎ，其具有较薄的表皮层和较厚的真 皮层，是一种良好的生物活性皮肤替代物，可用来修复全层 皮肤缺损。高学军等［９ ］制备胶原凝胶作为组织工程支架材 料，在成功构建人真皮的基础上，种植表皮细胞，构建人工 复合皮肤。孙文娟等［１０ ］制备凝胶和胶原海绵两种组织工程 支架，作为真皮支架，在其上接种角朊细胞，成功构建了人 工复合皮肤。目前，组织工程复合皮肤作为一种新型的创面 覆盖物，在创造良好的愈合环境，缩短创面愈合时间上已被 广泛认可。 ２ 组织工程皮以作为一种研究局部 用药物透皮转运的模型。Ｂｏｅｌｓｍａ 等［１５ ］采用微透析技术研 究了贴片中烟酸甲酯透过离体人皮肤、重建表皮及在体人 皮肤的渗透特性。Ｚｅｌｌｍｅｒ 等［１６ ］用重建表皮研究脂质体与 皮肤的相互作用，重建表皮由人角朊细胞培养而成，气 － 液 界面培养 １ 周后产生类似于天然人表皮的角化层。脂质体 分别由磷脂酰胆碱（ＰＣ）、磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）及人角质层脂 质（ｈＳＣＬ）制成，平均粒径 ５０ｎｍ；将这些脂质体加在重建表 皮的上面，考察它们透过重建表皮的渗透速率，结果分别为 １．３８、０．５５ 和 ０．０１３ μｇ／（ｃｍ２·ｈ）。 ２．２．２ 复合皮肤替代物的应用 Ｋｕｂｏｔａ 等［１７ ］研究了倍 他米松 －１７－ 戊酸酯在活性皮肤替代物（ＬＳＥ）中的渗透与代谢 特性。ＬＳＥ 由人表皮细胞和成纤维细胞培养而成，含角质层、 活性表皮及真皮，但缺乏皮肤附属器。倍他米松 －１７－ 戊酸酯、 倍他米松 －２１－ 戊酸酯及倍他米松以硅酮压敏胶贴片形式 给药；用倍他米松时，接受介质未检测出代谢物；用倍他米 松 －２－１２ 戊酸酯时，接受介质中只检测到倍他米松，未检测 到倍他米松 －２１－ 戊酸酯；用倍他米松 －１７－ 戊酸酯时，透过 药物的大部分仍以倍他米松 －１７－ 戊酸酯形式存在，说明其 在皮肤中代谢较少，ＬＳＥ 可以作为研究皮肤渗透与代谢的 模型。Ｓｌｉｖｋａ 等［１８ ］将成纤维细胞接种于尼龙网上，生长 ４ 周，形成真皮样基质，然后将角朊细胞接种在该真皮模型 上，进行气 － 液界面共培养，形成带有角质层的分化表皮； 采用 Ｆｒａｎｚ 和水平式扩散池测定水等在此共培养物中的渗
ａｔｉｎｏｃｙｒｅｓ ｏｎ ｔｙｐｅ Ｉ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ ｔｏ ｒｅｃｏｎ－ ｓｔｉｔｕｔｅ ｔｈｅ ｅｐ ｉｄｅｒｍｉｓ［Ｊ］．Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇ，２０００，６（１）：５３． ［２］ Ｗａｉｎｗ ｒｉｇｈｔ Ｄ，Ｍ ａｄｄｅｎ Ｍ，Ｌｕｔｅｒｍａｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌｅ ｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｃｅｌｌｕｌａｒ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｄｅｒｍａｌ ｍａｔ ｒｉｘ－ ｉｎｆｕｌｌ－ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｂｕｒｎ［Ｊ］．Ｊ Ｂｕｒｎ Ｃａｒｅ Ｒｅｈａｂｉｌ，１９９６，
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６８ 肤缺损创面愈合、提高创面修复质量的新途径。
１ 组织工程皮肤的构建 １．１ 表皮替代物的研究 １９７５ 年 Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ 等利用照射 处理过的 ３Ｔ３ 成纤维细胞作为滋养层，培养人表皮细胞获 得成功。１９８１ 年 Ｏ’Ｃｏｎｎｅｒ 首次应用此方法在体外培养出 适于移植的自体表皮细胞膜片，经长时间临床观察，发现表 皮细胞膜片脆性大，移植成功率低，而且抗感染能力差，移 植后表皮不耐摩擦，容易出现水疱、易收缩、易结痂收缩，与 创面结合不稳固。之后人们意识到需在膜片下增加支持物， 可以解决临床上一定厚度、柔韧性和可操作性的要求 。 Ｈｏｒｃｈ 等［１ ］将角质化细胞接种在胶原膜上，几天后细胞融 合成单层时即进行移植，与常规做法相反，表皮细胞转向创 面，表面胶原膜、角质化细胞在移植区内继续增殖，此法缩 短了创面愈合周期，也减少了角质化细胞的体外培养时间。 同时第二军医大学焦向阳等将人表皮细胞接种到生物膜 上，在体外构建了一种新的表皮替代物———表皮细胞生物 膜移植物。这些研究都为组织工程皮肤的构建奠定了基础。 １．２ 真皮替代物的研究 真皮替代物在皮肤重建过程中 具有重要作用，是在表皮替代物的研制与临床应用上发展 起来的，真皮可增加创面愈合后的皮肤弹性、柔软性及机械 耐磨性，减少瘢痕增生。真皮替代物可基本分为 ２ 大类，即 天然真皮与人工合成真皮。 １．２．１ 天然真皮替代物 天然真皮替代物具有完整的胶 原三维结构，生物相容性好，在组织成分上与自体皮肤最接 近，在皮肤重建中具有较高的应用价值。
目前表皮细胞培养和移植技术已经取得长足进步，真 皮支架的研究也有了一定进展，随着皮肤组织工程学的发 展，组织工程化皮肤已经初步应用于药剂学，但由于与传统 意义上的离体皮肤相比成本较高，还没有大规模用于实验 研究。与此同时，组织工程皮肤的临床应用还需进一步研 究，要实际解决大面积皮肤缺损创面覆盖的临床问题，仍需 生物学、工程材料学和临床多学科的携手努力。 参考文献 ［１］ Ｈｏｒｃｈ ＲＥ，Ｄｅｂｕｓ Ｍ，Ｗａｇｎｅｒ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｃｕｉｔｕｒｅｄ ｈｕｍａｎ ｋｅｒ－
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组织工程皮肤的构建及其在经皮吸收中的应用
刘晓丽，王丽峰，王 阳△ 天津中医药大学中药学院，天津 ３００１９３
摘 要 查阅了近 20 年来的文献，就组织工程皮肤的构建及其在经皮吸收中的应用进行了综述，提出体外培 养细胞构建组织工程皮肤成为促进皮肤缺损创面愈合、提高创面修复质量的新途径。
关键词 组织工程；皮肤，人工；细胞培养技术；皮肤吸收 中图分类号：R9- 39 文献标识码：A 文章编号：1004- 6852( 2010) 05- 0068- 03
皮肤作为人体最大的组织，是与外界环境接触的屏障， 具有保护、分泌、代谢和感觉等重要功能。当外界损伤或疾 病等原因造成皮肤缺损时，其危害可以是轻微的，也可以是 致命的。近年来随着经皮吸收制剂的研究和发展，组织工程 皮肤的构建及其在经皮吸收中的应用成为研究的热点。人 们通常采用动物（鼠、猪等）皮肤或人尸体皮肤在体外进行 渗透和代谢研究，但它们与健康人皮肤的结构、生理等存在 较大差异，而体外培养细胞构建组织工程皮肤成为促进皮
天然真皮替代物应用最多的是脱细胞真皮。脱细胞真
皮是将经酶消化、高渗盐浸泡处理的异体（种）皮，去除表皮 层和真皮内的细胞成分，保留完整的胶原纤维及基底膜等 细胞外间质成分。脱细胞真皮具有低抗原性、诱导成纤维细 胞长入、引导表皮细胞生长，不容易被降解，抗感染能力强 的特性。代表产品有美国 Ｌｉｆｅｃｅｌｌ 开发的 Ａｌｌｏｄｅｒｍ［２ ］。研 究结果表明，来源于猪皮的异种无细胞真皮可能具有更广 泛的应用前景。 １．２．２ 人工合成真皮替代物 人工真皮系采用各种材料 制成的真皮基质，与天然替代物相比其组成成分及胶联物 质可改变，以增加对胶原酶的耐受性，且可大量生产，长期 贮存。人工真皮的开发亦成为皮肤组织学中的热点。