[整理]Agilent1200 高效液相色谱仪工作站学习总结

Agilent1200 高效液相色谱仪工作站学习总结开首语本人在2008年本人在2008年1月8日至1月11日参加广州日至1 11日参加广州安捷伦科技有限公司的1200高效液相色谱仪安捷伦科技有限公司的1200高效液相色谱仪化学工作站的学习培训，几天学习培训，使我对1200液相色谱仪的硬件及软件有了更全

我对1200液相色谱仪的硬件及软件有了更全面的了解和更多的认识，现在做个总结向大家介绍如下。

硬件篇安捷伦高效液相色谱仪1200由几部分组成，脱气机，泵、进样器、柱温箱和检测器。安捷伦1200HPLC系统采用积木式堆积结构，方便用户按照自己的需要配置不同的的系统，整个系统的流路自上而下设计、连接，减小了系统的死体积和延迟体积。

Agilent 1200HPLC系统堆叠方式

脱气机安捷伦1200系列在线脱气机有，微量真空脱气机G1379B、标准真空脱气机G1322A。原理基本相同，就是使用半透膜管路，允许气体分子通过，液体分子无法通过。A型用的是微渗管，B型用的是滤膜。流路A型是左进右出，而 B型为下进上出，本科室使用的为A

型G1322A。使用真空脱气机可以降低噪声，保证保留时间的重现性，与He脱气相比，更方便，更节省费用。

真空脱气机脱气原理

泵安捷伦1200系列泵有：单元泵：G1310A、四元泵：G1311A、二元泵：G1312A、二元泵SL型：G1212B。单独一个泵腔泵腔无法满足溶剂传输系统的要泵腔求：连续性、稳定性都不符合标准，现在新购仪器中已很少考虑。

单元泵，按溶剂的传输系统有两种，一种是并联柱塞泵，另一种是串连柱塞泵。并联柱塞泵由于两个泵的相位不同，可以补偿流量脉冲，但由于单向阀的数量增多，所以容易造成泄漏，增加了维护使用的难度。串连柱塞泵左泵腔的活塞运动速度为右泵腔活塞的2倍，因此，相同时间内，左泵提供的流量为右泵的两倍，左泵提供的溶剂一半直接供给系统，另一半被右泵吸入，稍后供给液相系统，减少了单向阀的用量，可以使用压缩因子补偿。

四元泵，其实就是比单元泵多了四元比例阀。由单元泵可以升级到四元泵，除了要加上四元比例阀外，还要更换主板。需要注意的是，当使用盐溶液和有机溶剂时，建议将盐溶液接到四元比例阀下面的通道上，有机溶剂接到上面的通道上。如果经常使用盐溶液，建议定期用水冲洗所有的通道以去除阀口上可能出现的盐沉淀。

四元泵的工作原理

二元泵，有两个泵头，特点是高压混合，无需脱气；对于有强紫外吸收的流动相，使用静态混合器可以降低基线噪声；可以选择溶剂切换阀自动进行溶剂切换；对于高盐流动相，可选择泵头密封垫清洗

装置。所以脱气机不是标准配置，但增加真空脱气机，流量范围可以从 0.5～5ml/min扩展至0.05～5ml/min；加入静态混合器，使流动相混合更加均匀；如果配置

溶剂切换阀，则两个泵头可分别控制两种溶剂，类似四元比例阀，但并不完全一样，只能同时混合两种溶剂，不可实现四种溶剂的同时使用。二元泵为高压泵，为后混合式，精度更高，而且由于为高压混合，产生的气泡也更少，所以价格也比四元泵贵得多。四元泵为低压泵，流速稳定性相对较差，低压混合容易产生气泡，在实验中常会遇到这样的问题，多元

混合中出现流动相不稳定的现象，特别是流动相配比较低的如小于1%，其多元混合效果难以达到我们的要求，造成保留时间漂移，甚至得不到我们预期的色谱峰。明白四元泵的低压混合的道理，实际操作中我们发现问题时，有助于我们对原因的分析。必要时泵可以拆御，更换密封垫及滤芯。对容易出故障部位及处理方法，比如宝石活塞杆是不能超声的部件，泵头密封垫要成对更换，实验室中至少应备有一付号泵头密封室中至少应备有一付4号泵头密封室中至少应备有一付垫，部件号为：5663-6589（用于反相色谱）；部件号为：（用于反相色谱）； 0905-1420（用于正相色谱）。同时实验室应备（用于正相色谱）。同时实验室应备）。过滤芯，有5-10个P TFE过滤芯，以备日常所需。判断方个过滤芯以备日常所需。法为，打开冲洗阀，以水为溶剂，法为，打开冲洗阀，以水为溶剂，流速 5m

l/min，系统压力大于10bar就应更换过滤白，系统压力大于就应更换过滤白头了。头了。

二元泵的工作原理

进样器，安捷伦1200系列进样器有：标准自动进样器G1329A、高性能进样器G1367A、高性能进样器SL型G1367B、手动进样器G13 28B。自动进样器的特殊功能，洗针功能可以把样品残留降低到最小限度；多次吸液用于进样量大于100μl的情况；程序进样可以非常灵活

地执行用户的进样程序要求，如多种样品自动混合，自动进样等高级功能的自由设置，但是，由于进样针的扩散，所以进样量越小，受到扩散的影响也越大，所以自动混合的准确度还是难以达到容量瓶的混合方式。这在做标准由线时得注意的问题，如为定量则不推荐小样量的混合方式。程序进样方式设置如下图：

第一步：设置进样第一步：器

第二步：第二步：使用进样器程序（U）

第三步：更多信息（功能项）第三步：更多信息（功能项）

对于手动进样器，必须了解六通阀的工作原理，应特别注意的是进样量少于定量环的50%或大于定量环的3-5倍量是比较准确的，不过，大家用自动进样器已经习惯了，如果再用回手动进样器会不会有

些郁闷？会不会有一种坐惯了宝马又要回到踩单车的感觉？柱温箱，使用安捷伦柱温箱可以保证柱的稳定性，从而保证了保留时间的重现性。恒定的柱温特别是日温差大的时候更为必要。

检测器，安捷伦1200系列检测器有，可变波长检测器G1314B、二极管阵列检测器 G1315B、二极管阵列检测器SL型G1315C、示差折光检测器G1362A、荧光检测器G1321A。本所用的是VWD的G1314B型，D AD型及FLD的就不多说了。对VWD型检测器应了解它的工作原理，氘灯的使用维护及更换。需要注意的是，使用中不要频繁的开关氘灯，否则影响氘灯的寿命。

可以利用诊断方式来检测氘灯的能量，当然，发现氘灯能量降低时不要马上得出氘灯应该更换的结论，这也许是流通池脏或有气泡造成的能量降低，所以必须用诊断方式检测流通池。诊断结果大于0.6说明流通池很干净，小于0.2则说明流通池该清洗了。更换氘灯后要在诊断日志中填写更换氘灯，这样氘灯的使用时数便从零开始。

这里还有一点得注意的是流通池的后压力非常重要，一定要使用适当出口连接管，出口管线要使用专用废液管为系统提供适当的后压，不得私自将废液管截短，以防气泡进入流通池。但如果压力过高，流通池的石英窗片可能破裂。在这里我要说的是，对安捷伦1200高效液相色谱仪正确的操作方法和定期的维护保养的是很重要的。