酶联免疫吸附试验检测梅毒抗体产生假阳性的原因分析

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虽然能对加样针进行清 洗，但 如 果 遇 到 高 滴 度 抗 体 标 本，由 于 加 样 针 洗 涤 不 够 ，可 拖 带 污 染 导 致 其 后 一 孔 甚 至 多 孔 出 现 假 阳 性 现 象［３］。 ３．２ 酶标仪使用的影响 当 反 应 板 底 部 有 气 泡 或 污 染 时，酶 标仪对反应 孔 进 行 垂 直 比 色 ，易 出 现 Ａ 值 升 高，导 致 假 阳 性 结 果的产生。 ４ 人 体 内 在 因 素 ４．１ 年龄因素 在梅毒感染过程中，ＩＢ－Ｔｅｓｔ法可 检 测 到 梅 毒 螺 旋 体 的 特 异 性 蛋 白 抗 原 抗 体 ，其 中 有 ９２×１０３ 、４７×１０３ 、４５× １０３、１７×１０３、１５×１０３、４２×１０３、３７×１０３ 等 。４７×１０３、４５× １０３、１７×１０３、１５×１０３ 蛋 白 为 梅 毒 螺 旋 体 外 膜 的 脂 蛋 白 ，具 有 较好免疫 活 性，ＴＰ－ＥＬＩＳＡ 试 剂 盒 主 要 是 选 用 以 上 的 分 子 抗 原，用基因重组表达和 ＢＯＣ－氨基固相法得到多肽抗原，为使小 分子多肽有较好的吸附 性，再 用 人 血 清 清 蛋 白 与 之 连 接，而 且 合成后的多肽一般不作提纯 ，直接作为试剂抗原使用［２］。理 论 上 ＥＬＩＳＡ 法因为采用的 位 点 少 似 乎 应 该 更 特 异，但 是 实 际 抗 原却存在着不纯的问题，而 且 使 用 了 人 血 清 清 蛋 白，增 加 意 外 假阳性抗原位点 的 可 能。 老 年 人 较 易 使 ＴＰ－ＥＬＩＳＡ 检 测 产 生 假 阳 性 的 原 因 可 能 是 由 于 年 龄 因 素 生 理 功 能 逐 步 退 化 ，容 易 出 现 免 疫 功 能 上 的 异 常 ，易 产 生 一 些 针 对 连 接 用 的 清 蛋 白 抗 体 或 一些异常蛋白质而干扰了检测的结果出现假阳性。同时老年 人是恶性肿瘤、糖尿病、肝硬化、类风湿关节炎等疾病的高发 人 群，这些疾病可使患者体内含有某些治疗性抗体、嗜异性抗 体、 自 身 抗 糖 尿 病 体、类 风 湿 因 子、甲 胎 蛋 白 等，这 些 特 殊 成 分 在 ＴＰ－ＥＬＩＳＡ 反应过程中具有一定的吸附 作 用，从 而 使 显 色 反 应 出现假阳结果。 ４．２ 疾病因素 多种恶性肿瘤、糖尿病、麻疹、红斑狼疮、类 风
（收 稿 日 期 ：２０１１－０７－１６）
酶联免疫吸附试验检测梅毒抗体产生假阳性的原因分析
张 佑 贵 （湖 北 省 咸 宁 市 中 心 医 院 ４３７１００）
【关 键 词 】 梅 毒 ； 梅 毒 抗 体 ； 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１２．０１．０８０ 文献标志码：Ｂ 文章编号：１６７２－９４５５（２０１２）０１－０１２２－０２
在试验中应尽量将室温 控 制 在 １８～２５ ℃，并 严 格 按 试 剂 盒说明书进行操作，从 冷 环 境 中 取 出 后 置 室 温 平 衡 ３０ ｍｉｎ 左 右 ，方 可 使 用 。 ３ 仪 器 因 素 ３．１ 拖带阳性 目前，全自动加样器的加样针不是一次 性 的，
检 验 医 学 与 临 床 ２０１２ 年 １ 月 第 ９ 卷 第 １ 期 Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１２，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．１
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检 验 医 学 与 临 床 ２０１２ 年 １ 月 第 ９ 卷 第 １ 期 Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１２，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．１
是由于自主神经功能失 调，小 肠 运 动 能 力 下 降，造 成 肠 菌 群 失 调，肛门括约肌功能 下 降，小 肠 黏 膜 吸 收 功 能 下 降 所 致。 也 有 学 者 认 为 由 于 糖 尿 病 患 者 机 体 糖 代 谢 的 紊 乱 ，致 使 机 体 免 疫 功 能下降，易导致胃肠 功 能 紊 乱，出 现 顽 固 性 腹 泻。 糖 尿 病 性 腹 泻属中医学“泄 泻 ”范 畴，中 医 认 为 糖 尿 病 初 期 病 机 是 阴 虚 燥 热，因此治疗上多采用 苦 寒 降 火 的 药 物 进 行 治 疗，日 久 则 损 伤 脾胃之功能，脾气受损，加之进食生冷油腻、情绪波动及寒邪 外 袭等，更进一步损伤 脾 胃，致 使 脾 胃 气 虚 或 虚 寒，脾 失 健 运，聚 而生湿，湿浊下泻，脾 病 及 肾，肾 关 不 固，肾 阳 衰 微，命 火 不 足， 不能温运脾土，脾失健运，则出现腹泻，甚则五更泻，正如《景 岳 全书·泄泻》篇指出“泄泻之本，无不由于脾胃”，“肾为胃 关，开 窍于二阴，所以二便 之 开 闭，皆 肾 脏 所 主，今 肾 中 阳 气 不 足，则 命 门 火 衰 ，… … 阴 气 极 盛 之 时 ，则 令 人 洞 泄 不 止 也 ”。 ３ 辨 证 治 疗
糖尿病性腹泻，临床 上 多 用 收 敛 药 治 疗，但 此 类 药 物 服 后 多易导致便秘，便秘后 用 通 便 药 治 疗 易 引 起 腹 泻，故 临 床 治 疗 颇为棘手。服西药可 乐 宁 易 发 生 嗜 睡、头 晕 恶 心、食 欲 不 振 等 不良反应［１］；用易蒙停、复方苯乙哌啶疗效也不甚满意 。
湿 关 节 炎、丙 型 肝 炎、肺 结 核、妊 娠 等 可 使 体 内 含 有 治 疗 性 抗 体、自身抗体、类风湿因子、甲胎蛋白等。这些特殊成分在反 应 过 程 中 有 一 定 的 吸 附 作 用 ，产 生 显 色 而 造 成 假 阳 性 。 ５ 方 法 学 因 素
梅毒血清学反应假阳性可分为技术性假阳性反应和生物 学假阳性反应，前者主要 是 由 于 标 本 保 存 不 当 （如 被 细 菌 污 染 或溶血）、检测仪器、方 法 学 或 实 验 室 操 作 不 规 范 所 造 成 的［４］， 一般经过重复试验即可排除。而生物学假阳性反应主要是由 于机体的生理状态发生改变（如年龄变老）和某些疾病造成 的， 即便通过重复试验也是无法避免。由此可见年龄与疾病因素 是造成老年人梅毒抗体易发生假阳性的重要原因。在梅毒抗 体检测过程中，了解出 现 假 阳 性 的 影 响 因 素，对 于 减 少 工 作 中 差错事故的发生有着极其重要的意义。
酶 会 产 生 非 特 异 性 干 扰 ，从 而 造 成 假 阳 性 结 果 。 １．３ 标本处理不当 标 本 抗 ห้องสมุดไป่ตู้ 不 完 全 或 未 抗 凝 即 离 心 分 离 ， 容易 析 出 纤 维 蛋 白，使 洗 板 时 清 洗 不 干 净，而 造 成 Ａ 偏 高，使 本为阴性的标本出现假阳性结果。此外，标本弄错也可造成 假 阳性。 １．４ 标本保存不当 在５ｄ内检测的标本可以 放 置 于 ４ ℃ 保 存，超过一周测定的标本需低温冷冻保存。反复冻融使抗体 效 价 降 低 ，若 抗 体 的 血 清 需 要 保 存 多 次 检 测 ，宜 分 装 冻 存 。 １．５ 操作不当 洗涤过程要严格按照仪器操作规程进 行。 不 能有溢出现象；洗涤时间不能过短；次数不能过少；洗完后板 子 要 扣 干 净 。 否 则 ，易 造 成 假 阳 性 结 果 。 １．６ 封膜板的影响 试 验 中 应 该 封 膜 板 而 没 有 封 膜 板，水 分 蒸发后浓度升高可能使结果出现假阳性。 ２ 试 验 温 度 因 素
党参，加马齿苋、白头翁、黄连；腹痛者，加白芍；腹胀满者，加 厚 朴、木香；阳虚者，加干姜、附子、肉桂、补骨脂；水肿者，加 泽 泻、 车 前 子 、滑 石 等 。 ４ 典 型 病 例
患者，男，６８ 岁。确 诊 糖 尿 病 １３ 年，因 血 糖 控 制 不 佳 而 入 院治疗。入院 后，经 中 西 医 结 合 治 疗 ，血 糖 得 到 了 有 效 控 制 。 住院期间，时有腹泻，２～３ｄ 后 自 行 缓 解。 近 日 因 进 食 肉 类 过 多，腹泻加重，每日２０ 余 次，呈 水 样 便，无 腹 痛 及 里 急 后 重，伴 有肢体乏软，纳呆食 少，大 便 常 规 检 查 及 培 养，均 未 见 异 常，舌 质淡红，苔白微腻，脉 沉 细 微 滑，重 按 则 弱。 证 属 脾 气 虚 弱，兼 有 湿 邪 阻 滞 。 治 以 健 脾 益 气 ，佐 以 燥 湿 止 泻 ，拟 基 本 方 加 减 ：生 黄 芪３０ｇ、党 参２０ｇ、茯 苓２０ｇ、焦 白 术１５ｇ、苍 术１０ｇ、苡 仁３０ ｇ、炒山药１５ｇ、炒扁豆３０ｇ、赤石脂３０ｇ、黄 连 ６ｇ、葛 根 ３０ｇ、 吴茱萸６ｇ、陈 皮 １２ｇ、炙 甘 草 ６ｇ，水 煎 服，每 日 ３ 次，每 天 １ 剂，饭前３０ｍｉｎ服。服１剂后，大便开始 成 形，次 数 明 显 减 少， 连 服 ５ 剂 后 大 便 转 正 常 。 随 访 １ 个 月 ，未 见 复 发 。
梅 毒 是 由 苍 白 螺 旋 体 所 引 起 的 一 种 慢 性 性 传 播 疾 病 ，有 较 强 的 传 染 性 和 复 杂 的 病 程 ，其 传 染 的 途 径 除 性 接 触 与 垂 直 传 播 外，输血和注射药品（吸毒）等方式也是传播的主要途径。近 年 来我国发病率呈明显上升趋势，梅毒发病率的增长速度为８ 种 法定报告性病之首［１］。因此选择特异性、敏感性高的实验室 检 测方法有助于梅毒的诊治。血清学检测是诊断梅毒的重要依 据之一，它在梅毒的 诊 断、治 疗 及 研 究 方 面 均 有 重 要 意 义。 目 前检测梅毒螺旋体感染的血清学方法主要是酶联免疫吸附试 验（ＥＬＩＳＡ），对梅毒抗体ＩｇＧ、ＩｇＭ 都 有 很 好 的 检 测 能 力［２］，因 其价格低廉、操作方便、灵敏度高、特异性强而被广泛使用。 然 而 试 验 的 假 阳 性 又 是 引 起 误 诊 和 医 疗 纠 纷 的 主 要 因 素 ，为 了 避 免 假 阳 性 的 产 生 ，现 将 假 阳 性 的 因 素 进 行 分 析 ，总 结 如 下 。 １ 技 术 性 因 素 １．１ 标本溶血 溶血时细胞内液中的各种活性酶及具有酶 活 性 的 物 质 可 与 底 物 非 特 异 性 结 合 ；溶 血 后 反 应 孔 非 特 异 性 吸 附 血 红 蛋 白 ，洗 涤 时 不 易 洗 去 ，催 化 底 物 产 生 一 定 程 度 的 显 色 ，使 本底吸光度（Ａ）值升高［３］，使假阳性率增加 。 １．２ 标本细菌污染 血 清 标 本 宜 在 新 鲜 时 检 测，应 避 免 细 菌 污染。细菌污染时，一些菌体内可能含有内源性辣根过氧化 物
参考文献
［１］ 谢明智．中药抗糖 尿 病 的 药 理 作 用 ［Ｊ］．中 国 中 西 医 结 合 杂 志 ，２００１，２１（４）：３１８．
［２］ 张瑞彬．参苓白 术 散 合 可 乐 宁 治 疗 糖 尿 病 腹 泻 临 床 观 察 ［Ｊ］．河 北 中 医 ，２００３，２５（９）：６８２－６８３．
［３］ 张月玲，王洪 珍．七 味 白 术 散 加 味 治 疗 糖 尿 病 腹 泻 ３６ 例 ［Ｊ］．山 东 中 医 杂 志 ，２００８，２７（５）：３０６－３０７．
因 此 ，中 医 辨 证 施 治 ，常 可 获 得 满 意 疗 效 。 据 作 者 统 计 ，约 ９０％的糖尿病性腹泻 者 属 脾 气 虚 弱 或 脾 肾 阳 虚 之 证 。 故 立 健 脾益气、收敛止泻法治之。基本方药：生黄芪、党参、薏苡 仁、茯 苓、焦白术、炒山药、葛根、吴茱萸、陈皮、炙甘草。方中生 黄 芪、 党参、薏苡仁、茯苓、焦白术、炒山药补气健脾，而葛根可升脾 胃 之阳气，是改善纳差 的 良 药，配 以 吴 茱 萸 温 脾 散 寒，陈 皮 调 中、 燥湿、行气，炙甘草调中和胃，调和诸药，相互配伍，起到健脾 益 气，收敛止泻之功。据 资 料 记 载，白 术、山 药、葛 根 又 有 降 血 糖 的作 用 。 ［２－３］ 若 湿 盛 者 ，酌 加 苍 术 、藿 香 、佩 兰 ；热 盛 者 ，去 生 芪 、
参考文献
［１］ 梁慕 明．上 海 市 宝 山 区 １９９４－２００３ 年 梅 毒 流 行 病 学 分 析 ［Ｊ］．职 业 与 健 康 ，２００５，２１（１）：６８－７０．