布拉氏酵母菌对溃疡性结肠炎炎性细胞因子影响

布拉氏酵母菌对溃疡性结肠炎炎性细胞因子影响【摘要】目的：探讨布拉氏酵母菌对溃疡性结肠炎细胞因子影响。方法：采用乙酸大鼠结肠炎模型，观察灌肠后大鼠每日腹泻、血便及体重变化，结肠大体及光镜下结肠黏膜tnf-α、nf-κb、

il-10的表达。结果：中高剂量组表现为饮食量和体重增加，无血便，低剂量组有2只大鼠少量血便，体重不增加。联合用药可有效降低结肠黏膜tnf-α、nf-κb，并提高il-10的表达，联合用药比单独用药效果更佳。结论：布拉氏酵母菌通过改变炎性细胞因子治疗溃疡性结肠炎，中等剂量效果明显，联合用药效果更佳。

【关健词】布拉氏酵母菌；溃疡性结肠炎；细胞因子

【中图分类号】r57 【文献编识码】a 【文章编号】1004-7484（2013）03-0160-02

近年来药物联合益生菌治疗溃疡性结肠炎（uc）取得较好效果。为明确益生菌与细胞因子在uc发病中的关系，我们采用乙酸大鼠结肠炎模型，应用不同剂量布拉氏酵母菌治疗，观察大鼠结肠黏膜组织学和细胞因子（tnf-α、nf-κb及il-10）的变化，寻找其最佳治疗剂量，同时进一步阐明布拉氏酵母菌的治疗作用机制

一、材料与方法

1.实验动物：雄性sd大鼠42只，体重（215±8）g，购自新乡医学院实验动物中心。

2.主要试剂和药物：布拉氏酵母菌（法国百科达制药厂，

0.25g/袋，每袋含有5×109 cfu布拉酵母菌活菌）治疗。柳氮磺

胺吡啶（sasp）系山西省三九同达药业公司。nf-κb试剂盒，santa cruz工程公司提供。tnf-α试剂盒，北京中山生物技术公司提供。il-10试剂盒，武汉博士德生物工程公司提供。

3.实验设计：大鼠均分为7组，分别为对照组、模型组、布拉氏酵母菌高剂量组（5×109cfu），中剂量组（2.5×109cfu），低剂量组（1.25×109cfu），sasp组（52.5 mg/200 g体重）及联合用药组（sasp 52.5mg/200 g体重+布拉氏酵母菌2.5×109cfu）。动物模型：对照组大鼠以2 ml生理盐水经导管导入结肠，余六组大鼠以8%乙酸2 ml经导管导入结肠造模，3 d后，对照组和模型组大鼠每天给2 ml生理盐水灌胃，余各组给予不同剂量的布拉氏酵母散或sasp溶液灌胃每天1次，其中联合用药组上午8时以52.5 mg/200 g体重sasp溶液、下午4时以2.5×109cfu剂量布拉氏酵母散。10 d后将各组大鼠用2%戊巴比妥0.2 ml/100 g体重腹腔注射麻醉，腹正中切口，各组均取部分结肠，肉眼和光镜下观察结肠黏膜。

4.免疫组化染色：单克隆抗体tnf-α、il-10、nf-κb，一抗稀释浓度分别为1∶100、1∶100、1∶150，采用sp法检测。以正常血清代替一抗作阴性对照。

5.观察指标：①灌肠后大鼠每日腹泻、血便及体重变化情况，并记录大鼠的一般情况；②结肠大体病理并行结肠黏膜光镜下观察；③结肠黏膜中tnf-α、nf-κb、il-10的表达。

6.计数标准：采用图像分析技术，随机选择5个视野，取光镜

下每平方毫米（10×40）中的平均阳性细胞数，以均数±标准差表示。

7.统计方法：所得数据用sas 8.0软件处理，计量资料多组间比较行方差分析，各组间两两比较行lsd检验。

二、结果

1.模型组大鼠的结果：模型组大鼠在灌肠后的1～3 d内出现不同程度的血性腹泻、少动、饮食量减少、体重下降；病变结肠水肿，肠壁增厚，红斑和溃疡。镜下见黏膜隐窝脓肿、杯状细胞消失，固有层中性粒细胞、淋巴细胞浸润。对照组大鼠则反应灵活、饮食量正常、体重增加；结肠黏膜无病理变化；模型组大鼠结肠黏膜tnf-α、nf-κb高于正常对照组，il-10低于正常对照组，差异均有统计学意义（p<0.05，0.01），见表1。

2.布拉氏酵母菌的作用：一般情况：中高剂量组表现为饮食量和体重增加，无血便，低剂量组有2只大鼠仍有少量血便，体重增加不明显。结肠黏膜大体结果：模型组大鼠结肠黏膜充血水肿，有多个溃疡。低剂量组有2只尚有少许溃疡未完全愈合，其余4只可见溃疡愈合的痕迹。中高剂量布拉氏酵母菌组可见溃疡愈合痕迹。病理切片：模型组有溃疡形成，肠黏膜上皮细胞坏死脱落，杯状细胞减少，黏膜下淋巴细胞增生并有淋巴滤泡形成，有少量中性粒细胞浸润。低剂量组结肠黏膜上皮有糜烂，黏膜下淋巴细胞增生。中高剂量组结肠无溃疡，黏膜固有层内有少量淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞浸润、个别腺腔有灶性上皮坏死。细胞因子表达：不同

剂量均可降低肠黏膜tnf-α、nf-κb，提高il-10，但均未达到正常对照组水平，见表1。中剂量能在一定程度上起到治疗作用，且在病理上达到溃疡愈合，因此认为中剂量为治疗uc的最佳剂量。

3.联合用药的作用：sasp组大鼠稀便、血便、体重、一般情况及肉眼和光镜下病理表现与中剂量布拉氏酵母菌组表现相似，而联合用药组大鼠一般情况改善尤为明显，仅见黏膜上皮内灶性淋巴细胞浸润；三组均可有效降低结肠黏膜tnf-α、nf-κb，并提高il-10的表达，联合用药比单独用药效果更佳。

讨论

随着微生态学的发展，肠道菌群在uc的发生发展中日益受到重视[1]。布拉氏酵母菌作为微生态调节剂，通过释放多胺类物质改善生态菌落平衡，调节肠道屏障功能和通透性[2]，有利于宿主肠道健康。对肠道内的双歧杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌以及消化性链球菌等有益健康的厌氧菌有促进生长作用。

文献报道，uc患者肠组织中il-10 mrna表达减少，治疗后增加。陈垦等[3]发现uc活动组tnf-α水平明显比治愈组和正常对照组升高。rogler等[4]证实了uc患者肠黏膜巨噬细胞和上皮细胞nf-κb表达比正常对照明显增强，且其表达与炎症程度正相关。本实验结果显示，模型组大鼠的症状、结肠大体、镜下病理表现以及结肠黏膜tnf-α、nf-κb、il-10的表达均与人类uc变化相似，与上述多数文献报道结果一致。

近年人们开始应用布拉氏酵母菌，试图通过调整肠道菌群达到