谷物和豆类中粗蛋白质测定方法探析
粗蛋白测定方法
粗蛋白测定方法—凯式定氮法粗蛋白crude protein；crude matter（DM）食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质，及真蛋白质和含氮物（氮化物）。
换句话说，粗蛋白是食品、饲料中含氮化合物的总称，食物中以大豆的粗蛋白含量最高，肉类次之。
所以说，粗蛋白是一种既包括真蛋白又包括非蛋白的含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、尿素、硝酸盐和氨等。
然而，不同蛋白质的氨基酸组成不同，其氮含量不同，总氮量换算成蛋白质的系数也不同。
总之，粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
我们可以通过粗蛋白测定仪即凯氏定氮仪来测量粗蛋白的含量，测量步骤如：蛋白质含氮量约为16%（这已通过多次试验得出），再用凯氏法测出总氮量，再乘以就可求得粗蛋白的含量。
一、实验原理蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。
这些元素在蛋白质中含量都有一定比例关系，其中含碳50～55%、氢6～8%、氧20～23%、氮15～17%和硫～%。
此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。
由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征，而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一般恒定在15～17%，平均值为16%左右，因此在蛋白质的定量分析中，每测得1克氮就相当于克蛋白质。
所以只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以，就可以计算出样品中的蛋白质含量。
含氮有机物与浓硫酸共热，被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，氮进一步与硫酸作用生成硫酸铵。
由大分子分解成小分子的过程通常称为”消化”。
为了加速消化，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高消化液的沸点(290℃→400℃)，加入硫酸铜作为催化剂，过氧化氢作为氧化剂，以促进反应的进行。
反应(1)(2)在凯氏烧瓶内完成，反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行，其特点是将蒸汽发生器、蒸馏器及冷凝器三个部分融为一体。
由于蒸汽发生器体积小，节省能源，本仪器使用方便，效果良好。
粗蛋白测定方法
粗蛋白测定方法一凯式定氮法粗蛋白crude protein ；crude matter (DM)食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质，及真蛋白质和含氮物(氮化物)。
换句话说，粗蛋白是食品、饲料中含氮化合物的总称，食物中以大豆的粗蛋白含量最高，肉类次之。
所以说，粗蛋白是一种既包括真蛋白又包括非蛋白的含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、尿素、硝酸盐和氨等。
然而，不同蛋白质的氨基酸组成不同，其氮含量不同，总氮量换算成蛋白质的系数也不同。
总之，粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
我们可以通过粗蛋白测定仪即凯氏定氮仪来测量粗蛋白的含量，测量步骤如：蛋白质含氮量约为16% (这已通过多次试验得出)，再用凯氏法测出总氮量，再乘以就可求得粗蛋白的含量。
一、实验原理蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。
这些元素在蛋白质中含量都有一定比例关系，其中含碳50〜55%、氢6〜8%、氧20〜23%、氮15〜17% 和硫〜％。
此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。
由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征，而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一般恒定在15〜17%，平均值为16%左右，因此在蛋白质的定量分析中，每测得1克氮就相当于克蛋白质。
所以只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以，就可以计算出样品中的蛋白质含量。
含氮有机物与浓硫酸共热，被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，氮进一步与硫酸作用生成硫酸铵。
由大分子分解成小分子的过程通常称为”肖化”为了加速消化，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高消化液的沸点(290C-400C )，加入硫酸铜作为催化剂，过氧化氢作为氧化剂，以促进反应的进行。
反应(1)(2)在凯氏烧瓶内完成，反应(3) 在凯氏蒸馏装置中进行，其特点是将蒸汽发生器、蒸馏器及冷凝器三个部分融为一体。
由于蒸汽发生器体积小，节省能源，本仪器使用方便，效果良好。
大豆中蛋白质含量的测定实验报告
大豆中蛋白质含量的测定实验报告大豆是一种富含蛋白质的植物，因此对大豆中蛋白质含量的测定非常重要。
本实验旨在通过化学方法测定大豆中蛋白质的含量，并对结果进行分析和讨论。
实验材料和仪器：1. 大豆样品2. 硫酸钠溶液3. 氢氧化钠溶液4. 酸性消化液5. NaOH溶液6. 氮气吹扫装置7. 精密天平8. 恒温水浴9. 离心机10. 紫外分光光度计实验步骤：1. 准备大豆样品：将大豆磨成粉末，并将其过筛以获得均匀的颗粒大小。
2. 水解反应：取一定量的大豆样品加入酸性消化液中，放入恒温水浴中进行水解反应，使蛋白质完全水解为氨基酸。
3. 碱解反应：将水解后的溶液中加入适量的NaOH溶液，使溶液呈碱性，以便将其他干扰物质转化为不溶性沉淀。
4. 沉淀处理：将碱解后的溶液进行离心处理，将沉淀分离出来。
5. 沉淀洗涤：用硫酸钠溶液对沉淀进行洗涤，去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的沉淀放入烘箱中干燥，直至恒定质量。
7. 称重：使用精密天平称取干燥后的沉淀质量。
8. 光度计测定：将一定量的沉淀溶解于适量的NaOH溶液中，使用紫外分光光度计测定溶液的吸光度。
9. 蛋白质含量计算：根据标准曲线，计算出大豆中蛋白质的含量。
实验结果与分析：根据实验测定，我们得到了大豆样品中蛋白质的含量。
通过对标准曲线的分析，我们可以得知大豆样品中蛋白质的浓度。
从实验结果中可以看出，大豆中蛋白质的含量较高，这也符合我们对大豆富含蛋白质的认识。
在实验中，我们采用了水解和碱解的方法，这是常用的蛋白质测定方法之一。
水解反应将蛋白质水解为氨基酸，使其更容易测定；碱解反应则将其他干扰物质转化为不溶性沉淀，方便后续步骤的进行。
为了准确测定大豆中蛋白质的含量，我们进行了沉淀处理和洗涤步骤，以去除杂质。
这些步骤的目的是提高测定的准确性和精确度。
同时，干燥步骤的进行可以保证质量的恒定，进一步提高测定结果的可靠性。
通过紫外分光光度计的测定，我们可以得到溶液的吸光度，进而计算出蛋白质的浓度。
粗蛋白的测定方法原理及操作探讨
(8) 硫酸铵：分析纯，干燥；
(9) 硼酸吸收液。
3 仪器
• 实验用样品粉碎机或研钵；
• 40目（0.45 mm）分析筛；
• 分析天平； • 消化装置；
• 酸式滴定管；
• 凯氏定氮蒸馏装置。
4 操作步骤:
①磨样 ④消化 ②称样 ⑤蒸馏 ③加入催化剂和浓硫酸 ⑥滴定
4.1 磨样
确保样品均匀，颗粒细度（<1 mm）。
浓硫酸的用量与40%NaOH 溶液的关系
(1) 40%NaOH（NaOH含量≥96%，以96%计）的摩尔浓度 =（40g×96% / 40g/mol）/ 0.1L = 9.6mol/L
(2) 浓H2SO4的摩尔浓度=18.4mol/L
(3) 那么50mL 40%NaOH溶液 能与多少体积的浓硫酸反应？ NaOH主要与 （NH4）2SO4 、硫酸铜、硫酸反应，而加入的碱量是固定的（50 mL），因 此当加入的酸过多时，酸就会消耗过多的碱，从而不能使（NH4）2SO4 与碱充分反应，生成 的氨气量减少，最后不能反映出实际的含氮量 . 在消化的过程中，硫酸也会有损失， 但从主要反应中可以估算出加酸的量：不能多于 13mL
（1）绝对偏差：是指某一次测量值与平均值的差异。 （2）相对偏差 ：是指某一次测量的绝对偏差占平均值的百分比。
4.2 称样
⑴用差量法称取试样 0.5 ～ 1g（含氮量5 ～ 80mg），准确至 0.0002g，小心无损的将样本放入洗净烘干的凯氏消化管中。 ⑵加减样时要细心，不能抖动样匙。否则会引起样品的自动 分级，使加入的硬质部分多，粉末部分少，造成实验不精确。 ⑶样品放入消化管内时，尽量不要沾附管壁上，万一沾附可 用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低。
大豆粗蛋白含量的测定方法改进的探讨
大豆粗蛋白含量的测定方法改进的探讨摘要：通过不同体积吸收液对大豆中粗蛋白进行测定，分别用25毫升硼酸吸收液和5毫升硼酸吸收液进行吸收，并对结果进行分析，结果表明：硼酸吸收液采用5毫升的体积来测定大豆粗蛋白，不但不影响检测结果，还可以降低实验成本，减少环境污染。
关键词：吸收液粗蛋白凯氏定氮法不同体积改进Abstract: the crude protein in soybean was determined by different volumes of absorbent, 25 mL of boric acid absorbent and 5 ml of boric acid absorbent were usedto absorb the crude protein, and the results were analyzed. The results showed thatthe boric acid absorbent used 5 ml of volume to determine the crude protein in soybean. Not only does it not affect the test results, it can also reduce the experimental cost and reduce environmental pollution.Key words: different volume improvement of absorption fluid crude protein kaiji nitrogen method按照国标方法GB/T14489.2-2008《粮油检验植物油料粗蛋白质的测定》，硼酸吸收液的体积是25mL，蒸馏液体积达到100mL为宜，不单到滴定时摇晃不方便，而且试剂量较大，成本高。
而本方法采用吸收液为5mL，不仅滴定时摇晃方便，还能不影响测定结果，节约实验成本。
试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法
试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法玉米是我国的主要粮食作物之一，其中蛋白质是人体所需的营养元素之一。
因此，玉米中蛋白质含量的测定方法十分重要，为食品加工、养殖等领域提供基础数据。
本文将从光度法、Kjeldahl法、氨基酸分析法等角度，对玉米中蛋白质含量的技术方法进行探讨。
一、光度法光度法是测定玉米中蛋白质含量的一种常用方法。
该方法的原理是：利用巯基染料（如二甲基二硫仿蓝）与蛋白质中的主链氨基酸（如赖氨酸）之间的化学反应来测定蛋白质含量。
该方法具有灵敏度高、操作简单、结果稳定等优点，但仅适用于测定粗蛋白质含量。
该方法的操作步骤为：首先将代表性样品与含有巯基染料的缓冲液溶液混合，然后经过一段时间的反应后，加入酸溶液使反应结束。
最后用分光光度计对样品进行测定。
二、Kjeldahl法Kjeldahl法是一种针对蛋白质测定的标准方法。
该方法的原理是：将样品中的蛋白质水解成氨基酸，并将氨基酸中的氮转化成铵盐。
然后，将样品经过蒸发、加热、蒸馏等处理后，用酸和碱使样品中的铵盐转化成氨气，并通过滴定测定样品中氮的含量，从而计算出样品中蛋白质的含量。
该方法需要长时间的水解反应，所以耗时较长，但该方法测定的蛋白质含量精确度高，适用于不同类型玉米中蛋白质含量的测定。
三、氨基酸分析法氨基酸分析法是一种直接测定样品中氨基酸含量的方法。
其原理是：根据氨基酸的不同性质，在特定条件下，通过分离、检测和分析，直接测定氨基酸的含量。
与Kjeldahl法相比，氨基酸分析法不需要蛋白质的完全水解，因此快速、准确、技术难度较小。
该方法的操作步骤为：将样品中的蛋白质水解成氨基酸，用离子交换色谱法或高效液相色谱法进行分离和检测，最后用相关系数计算出样品中蛋白质含量。
该方法不仅可以测定粗蛋白质含量，还可以测定不同氨基酸的含量，从而更加深入地了解样品的营养成分。
综上所述，玉米中蛋白质含量的测定可以采用多种方法，包括光度法、Kjeldahl法和氨基酸分析法等。
大豆蛋白质含量的测定
大豆蛋白质含量的测定实验方案1 原理试样在催化剂存在下用硫酸消解,反应产物用碱中和后蒸馏。
释放出的氨被硼酸溶液吸收,吸收液用硫酸溶液滴定,测定氮含量并计算粗蛋白质含量。
2试剂除参考物质外,只使用经确认无氮的分析纯试剂,试验用水为蒸馏水或去离子水或同等纯度水.警告:2.4、2.8、2.ll和 2.12中提到的试剂应谨慎使用。
2.1 硫酸钾 (K2SO4)。
2.2 五水硫酸铜 (CuSO4·5H20)。
2.3 二氧化钛 (TiO2)。
2.4 硫酸(H2SO4):c(H2SO4)=18mol/L,ρ20(H2SO4)=1.84g/mL。
2.5 石蜡油。
2.6 N-乙酰苯胺 (C8H9NO):熔点114℃,氮含量10.36g/100g。
2.7 色氨酸(C11H12N22):熔点282℃,氮含量13.72g/100g。
2.8 五氧化二磷(P205 )。
2.9 硼酸:水溶液 ,ρ20(H3BO3)=40g/L,或所使用仪器推荐的浓度。
2.10 指示剂:按照所使用仪器的推荐,加入一定体积的溶液A(2.10.1）和溶液B(2.10.2 )(例如:5体积溶液A和1体积溶液B)。
注1:有可能准各使用的硼酸溶液中含有指示剂（2.9+2.10）。
注2:溶液A和溶液B的比例可根据仪器进行调整。
也可以使用pH电极进行电位滴定，PH电极需要每天校准。
5.10.1溶液A:200mg溴甲酚绿（C21H14Br4O5S）溶于体积分数为95%的乙醇（C2H5OH），配制成100mL溶液。
5.10.2溶液B:200mg甲基红（C15H15N3O2）溶于体积分数为95%的乙醇（C2H5OH）,配制成100mL溶液。
5.11 氢氧化钠水溶液（NaOH）:质量分数33%或40%，含氮量少于或等于0.001%。
也可以使用含氮量少于或等于0.001%的工业级氢氧化钠。
5.12 硫酸:标准滴定溶液，c（H2SO4）=0.05mol/L因为硫酸在连接管中不产生气泡，所以推荐用硫酸代替盐酸。
试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法
试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法玉米是世界上重要的粮食作物之一，其含有丰富的营养成分，其中蛋白质含量是其中一个重要的指标。
蛋白质是人体生命活动所必需的重要营养素，对于人体健康有着重要的作用。
准确测定玉米中蛋白质含量对于农业生产和食品加工都具有重要意义。
本文将试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法。
一、酶解-比色法酶解-比色法是一种常用的测定玉米中蛋白质含量的方法。
该方法通过将玉米样品用酶解液处理，使得蛋白质水解成氨基酸；接着使用分光光度计对氨基酸进行比色分析，通过比色分析得出蛋白质含量。
具体操作步骤如下：将玉米样品加入酶解液中，在一定的温度和pH条件下进行酶解反应；然后，使用五氧化二磷酸将酶解后的物质浓缩，使得蛋白质水解成氨基酸；通过比色法测定氨基酸的含量，然后根据已知的原理计算出样品中蛋白质的含量。
这种方法的优点是操作简单，结果准确可靠。
该方法不需要专门的昂贵设备，成本较低，因此在实际生产中具有较大的应用价值。
二、红外光谱法红外光谱法是一种先进的测定玉米中蛋白质含量的方法。
该方法利用红外光谱仪测定样品中蛋白质的特征红外吸收峰，从而得出样品中蛋白质的含量。
具体操作步骤如下：将玉米样品制成透明薄片或者粉碎成粉末状；然后，将样品放入红外光谱仪进行测试，记录样品的红外光谱图谱；通过分析样品的红外吸收峰，计算出样品中蛋白质的含量。
这种方法的优点是不需要进行样品的预处理，测试速度快，结果准确可靠。
红外光谱法可以对多种成分进行同时测定，具有较好的多元测定能力。
三、 Kjeldahl法Kjeldahl法是一种经典的测定玉米中蛋白质含量的方法。
该方法通过将玉米样品进行加热浓硫酸消解，使得样品中的蛋白质转化为氨基氮，然后使用碱液进行蒸馏，最终通过滴定法确定氨基氮的含量，从而计算出样品中蛋白质的含量。
Kjeldahl法是一种准确可靠的蛋白质含量测定方法，被广泛用于食品、农产品等领域。
其优点是结果准确可靠，同时可以对样品中的氨基氮进行测定，具有较好的灵敏度和多元测定能力。
粗蛋白的测定方法
粗蛋白的测定方法
粗蛋白的测定可以使用以下几种方法：
1. Kjeldahl法：将样品中的蛋白质分解为氨基酸，然后用酸溶液将氨基酸转化为氨，再用碱滴定氨生成的酸，通过计算氨的含量来测定粗蛋白含量。
2. 比色法：利用蛋白质与某些特定试剂反应产生色素，通过测量产生的色素的吸光度来测定粗蛋白含量。
常用的试剂有布鲁斯试剂、费氏试剂等。
3. 紫外吸收法：通过测量蛋白质在特定波长下的紫外吸光度来测定粗蛋白含量。
蛋白质在280 nm处有吸光峰，可以利用这个波长进行测定。
4. 生物传感器法：利用特殊的生物传感器，如免疫传感器或酶传感器，通过与蛋白质特异性结合或酶催化反应来测定粗蛋白含量。
这种方法具有高灵敏度和高选择性。
需要注意的是，不同的测定方法适用于不同类型的样品和需要测定的蛋白质组分，选择合适的方法根据实际情况进行。
饲料中粗蛋白测定的方法
算成蛋 白质的平均系数。滴定使用 的盐酸标准溶液
浓硫酸 ，加入 ６滴 ６ ０ ％高氯酸 ，以电阻丝消煮 ２ 分 钟， 冷却后再加入 ４ 滴６ ０ ％高氯酸 ， 反复消煮 ５次 ， 后３ 次高氯酸加入量依次为 ３ 滴、 ２ 滴、 １ 滴。溶液颜 色逐渐变浅 ， 直至无色透明。定容至 １ ０ ０毫升 。向 Ｂ
剂法 这两 种 常用 方法 ， 供 参考 。
塞 ，再 加 １ ０毫 升浓 度 为 ４ ０ ％的氢 氧 化钠 水 溶液 ， 小
心提起玻璃塞使之流人反应室 ， 将玻璃塞塞好 ， 且在
人口 处加水密封 ， 防止漏气。蒸馏 ４ 分钟降下锥形瓶 使冷凝管末端离开吸收液面 ， 再蒸馏 １ 分钟 ， 用蒸馏 水冲洗冷凝管末端 ， 洗液均流入锥形瓶内， 然后停止 蒸馏 。对两组样品及空 白分别重复此操作。 蒸馏步骤的检验 。精确称取 ０ ． ２ 克硫酸铵 ， 代替
测定 饲料 中粗蛋 白含量一般使用凯 氏定氮法 ， 其原理是 在催化剂作用下 ， 用硫酸破坏有机物 ， 使 含 氮物转化 成硫酸铵 ， 再加入强碱进行蒸馏使氨逸出 ， 用硼酸 吸收后 ， 再用酸滴定 ， 测出氮含量 ， 从而计算 出粗蛋 白含量 。通 过对 ２ ０ １ ２年产 的一 份 玉米样 品的 检验 ，来 比较分析高氯酸 一 硫酸消化法和混合催 化
试 样 ，按 蒸馏 步 骤进 行 操 作 ，测 得 硫酸 铵 含 氮量 为 ２ １ ． １ ９±０ ． ２ ％， 否 则应 检查 加 碱 、 蒸 馏 和滴 定各 步骤 是 否 正确 。蒸馏 后 的 吸收 液 立 即用 ０ ． ０ ｌ 摩尔 ／ 升盐 酸 标 准溶 液滴 定 ， 溶 液 由蓝绿 色 变成灰 红 色为终 点 。
为， Ａ１组 ０ ． ５ ０ ０ ８克 ， Ａ ２组 ０ ． ５ ０ ０ ２克 ， Ａ ３组 ０ ． ５ ０ ０ ６
试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法
试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法玉米是世界四大粮食作物之一，也是人类重要的食用和经济作物之一，而玉米中蛋白质含量的测定对于玉米的优质育种和加工利用具有重要意义。
玉米中蛋白质含量测定的技术方法有多种，本文将从传统方法到现代方法进行探讨，并对比它们的优缺点，以期对玉米中蛋白质含量的测定方法有一个较为全面的了解。
一、传统方法：考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法是一种比较传统的蛋白质含量测定方法，其原理是将样品中的蛋白质与考马斯亮蓝形成复合物，然后用特定波长下的光吸收率来测定复合物的浓度。
这种方法操作简单，使用范围广泛，但其对样品的选择性不够高，容易受其他物质的干扰，而且需要大量有机溶剂，不符合现代绿色环保的要求。
二、生物学方法：凝胶电泳法凝胶电泳法是一种生物学方法，其原理是根据蛋白质在凝胶电泳中的迁移速率和大小分子间的差异，来对蛋白质进行分离和测定。
这种方法能够对蛋白质进行定性和定量分析，但操作复杂，需要较长时间，且对实验者的技术要求较高。
三、色谱法：高效液相色谱法高效液相色谱法是一种利用高效液相色谱仪进行分析的方法，其原理是利用样品中蛋白质与色谱柱填料相互作用不同，从而使蛋白质分离，并通过检测器进行定量分析。
这种方法具有分析速度快、选择性好、准确度高等优点，但仪器价格昂贵，维护成本高，不适合一般实验室的使用。
四、光谱法：红外光谱法不同的方法各有优缺点，具体选择何种方法还需根据实际情况来综合考虑。
在实际应用中，可以根据实验目的、仪器设备和实验操作水平等因素来选择合适的方法。
随着科学技术的不断进步，蛋白质含量测定的方法也在不断更新和完善，相信未来会有更多更加精准和便捷的方法出现，为玉米中蛋白质含量的测定提供更多选择。
谷物和豆类中粗蛋白质测定方法探析
谷物和豆类中粗蛋白质测定方法探析【摘要】国家标准GB/T5511—2008规定，谷物和豆类中粗蛋白质含量测定方法为凯氏定氮法。
该方法适用范围广泛，测定结果准确，重现性好，但因其称样量大，消化时间长，蒸馏前需要定容稀释，操作复杂费时，试剂消耗大，给测定带来一定麻烦甚至是误差。
就如何缩短消化时间，方便、快捷、准确地获得最佳测定结果，本人在称样量、所加试剂的浓度以及吸收液的酸碱度方面进行了大胆的尝试与探析。
【关键词】谷物和豆类中粗蛋白质；测定方法1.方法原理蛋白质是含氮的有机化合物，样品与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，以硫酸或盐酸标准滴定液滴定，根据酸的消耗量乘以蛋白质换算系数，即为蛋白质含量。
2.试剂与仪器2.1浓硫酸混合液在100ml水中缓慢加入浓硫酸200ml，冷却后加入30%过氧化氢300ml，混合均匀。
2.2混合催化剂硫酸铜10g，硫酸钾100g，硒粉0.2g，在研钵中研细过孔径0.45mm（40目筛），混匀备用。
2.3混合指示剂2份甲基红乙醇溶液（称取0.1g甲基红置于研钵中加入少许95%乙醇，研磨溶解后，加入75ml95%乙醇）与1份次甲基蓝乙醇溶液（0.1g次甲基蓝溶于80ml95%乙醇中）临用时混合。
2.4 20g/l硼酸溶液称取20g硼酸溶于1000ml水中。
2.5饱和氢氧化钠溶液2.6 0.01mol/l盐酸标准溶液2.7仪器凯氏定氮蒸馏装置。
3.操作步骤3.1消化称取0.050g左右（全部通过40目筛的）固体试样，移入50ml或100ml定氮瓶中，加入1g混合催化剂，再加入3ml浓硫酸混合液，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，以45度角斜支于有石棉网的电炉上。
小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止，烟雾变白后，加强火力，保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热10min，取下放冷备用。
同时做试剂空白试验。
粮食中蛋白质测定方法的探讨
以硫酸标准溶液（ ０ １ ｌ 或 ． ／ ｍｏ Ｌ盐酸标准溶液） 用 １ （ ０ ｍＬ 分度值为 ００ ） ．５ ｍＬ 微量滴定管滴定至酒 红色为终点。同时作试剂空白试验。 ３４ 计算 ． ｘ（ 湿基） 一 ￣ｌ Ｏ Ｏ￣ Ａ
Ａ
在以往的标准 中， 对此项没有做明确的规定 ， 新 标准要求对消化过程和蒸馏过程进行检查。
ＮＨ （ Ｈ２Ｏ ２Ｃ ） Ｈ＋２ Ｓ ， Ｈ２Ｏ ＋２ ０ 十 Ｈ Ｏ Ｓ ２ ＋３ ２
Ｎ ３ ＋Ｃ ２ Ｈ 十 ０ 十
２ １ 蒸馏过程 的检查 在进行其它检查之前 ， ． 应先 检查蒸馏系统的回收率 。具体用移液管移取 １ Ｌ ０ｍ
７ ， １ 大麦 、 小米 、 燕麦 、 麦为 ５ ８ ， 稞 ． ３ 芝麻 、 日 向
葵 为 ５ ３ ； ．０ Ｍ一
４
样 品 的质 量 ， 。 ｇ
氨酸作 回收试 验 ， 并使 回收率大于或等于 ９ ． ， ９８ 以此遴选 出合格 的消化单元 。
３ 舅 方 法
问 题 探 讨
进人定氮瓶颈 ， 很难消化 ， 造成试样 的相对损失 ， 是
不 可 避免 。
４ １５ 如在 消化 过程 中不 易得 到澄 清溶 液时 ， ．． 可将
定氮瓶取下放冷后 ， 缓缓加人 ３ 过氧化氢 ５ｍ ， ０ Ｌ 促进消化 ， 但不要加人过氯酸 ， 以免生成氮的氧化物
溶液 ５ Ｌ及 １ 滴混合指示液 ； ０ｍ Ｏ 通过漏斗加入 ７ Ｏ ８ Ｌ４ 氢氧化钠溶液 ， ０ ｍ Ｏ 并振摇定氮瓶 ， 至容物 转为深蓝色或产尘褐色沉淀 ， 再加入 １０ｍ ０ Ｌ水 ， 夹
一
２ ＮＨ。 Ｈ２ Ｏ ＋ Ｓ ４一
如何准确测定饲料中的粗蛋白质含量
６ 质 控 实验
国家 标 准规 定 称 取 试 样 ０ ． ５ — １ ｇ ，浓 缩 饲 料 可
凯 氏定 氮 的质 控 实 验是 测 定 分 析 纯 硫 酸 铵 的
称取０ ． ５ ＋ － ０ ． ０ ５ ｇ ，配合饲料可称取 ０ ． ７ ＋ － ０ ． ０ ５ ｇ ，这样 能 保证 滴定 时消 耗盐 酸标 准 溶液 的体积 较 为一
作 简 单 ，但 过 程 比较 复杂 ，如果 不 注 意 细 节 ，往 往会 导致 结果 准 确度 不高 。
１ 采样 及 制备
盐 酸 标 准 滴 定 溶 液 的浓 度 直 接 影 响 结 果 的准 确 度 ，配 制 和 标 定 一 定 要 严 格 按 照 Ｇ Ｂ ／ Ｔ ６ ０ １ 的规
国 家标 准 规 定 用 消 煮 炉 或 电 炉 ，建 议 选 择 带
程 序 升 温 的 凯 氏专 用 消 煮 炉 ， 能 保 证 升 温 均 匀 ，
重 复性好 ，准确度高。 国家标准规定使用 五水硫 酸铜 和无水硫酸钾 ，消煮液容易结 晶 ，建议使用 商 品化硫 酸钾 和硒粉 ，产品为 片状 ，使 用方便 ，
试样采集必须 具有代表性 ，这是 准确测定饲
料 粗 蛋 白质 的基 础 。样 品 制备 也 很 关 键 ，粉 碎 后 要 能全 部通 过 ４ ０目分样 筛并 立 即放入 密 封容 器 。
试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法
试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法玉米是世界上重要的粮食及饲料作物之一，其中蛋白质是玉米营养成分之一。
玉米蛋白质含量的准确测定对于研究和评价玉米品种的优良性能、优化玉米加工和利用具有重要意义。
本文将试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法，旨在为相关研究提供参考。
一、总蛋白含量测定法玉米中蛋白质的含量通常通过测定其总蛋白质含量来间接推算得到。
总蛋白含量测定法的原理是利用样品中蛋白质与比色剂的复合效应，在一定波长下测定样品的光密度，据此计算样品中总蛋白质的含量。
目前较为传统且常用的方法有：低里氏法、NaOH浸液法、凯氏试剂法、布拉德福德法等。
其中，布拉德福德法具有测定精度高、操作简单、耗时短等优点，广泛应用于食品和动物饲料等领域。
二、蛋白电泳法蛋白电泳法是测定玉米中蛋白质含量的重要方法之一。
其原理是利用蛋白质在电场中负电性质的特点，将样品置于凝胶中进行电泳分离。
电泳过程中，小分子量的蛋白质会被移动到凝胶较远处，大分子量的蛋白质则近凝胶中心。
根据在凝胶电泳过程中所得到的分离图谱，可对玉米中不同蛋白质分子量的分布情况进行分析和测定。
三、核磁共振法核磁共振法是一种用于分析化学结构的现代科学手段，常常用于蛋白质和酶的结构研究。
该方法利用核磁共振现象，进行样品的分析测定。
在蛋白质分子中，氢元素通常用来进行核磁共振分析。
通过分析氢原子在磁场中的运动轨迹，可以得到蛋白质的化学结构信息。
因此，核磁共振法可以作为测定玉米中蛋白质含量的一种新方法，但该方法需要高精确的仪器设备和技术支持，成本较高。
综上，总蛋白含量测定法、蛋白电泳法和核磁共振法是测定玉米中蛋白质含量的常用技术方法。
对于不同的研究需求和实验条件，可以选择不同的技术方法进行蛋白质含量分析。
值得注意的是，无论采用哪种方法，制备样品和选取适当的比较标准很重要，这是确保实验结果准确可靠的基础。
试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法
试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法玉米是世界上主要的粮食作物之一，也是一种重要的饲料作物。
玉米种子中含有丰富的营养物质，其中蛋白质是其重要的营养成分之一。
对玉米中蛋白质含量进行准确测定，对于玉米品种改良、饲料配制和粮食加工具有重要意义。
在农业科学研究中，有关玉米中蛋白质含量的测定方法，一直备受关注。
本文将对玉米中蛋白质含量测定的技术方法进行试论。
一、传统方法1. 凝固沉淀法凝固沉淀法是一种传统的测定蛋白质含量的方法，其基本原理是利用酸性或碱性条件下，使蛋白质发生凝固沉淀。
然后通过称量沉淀后的蛋白质来计算蛋白含量。
这种方法简单易行，但存在着测定结果误差大、精度低的缺点。
2. 减少性差光光度法减少性差光光度法是利用酮酸和梗菜碱酸的双重还原作用，对玉米中的蛋白质进行定量测定。
这种方法需要使用特殊的试剂和设备，且操作复杂，对实验人员要求较高，成本较高。
3. 胶束法胶束法是利用蛋白质在阴离子表面活性剂存在下形成复合物的原理，通过在反应物溶液的表面张力发生变化来测定蛋白质的含量。
这种方法测定结果准确，但由于其操作复杂，对仪器设备要求高，需要专业知识和技能，因此不适合大规模的应用。
二、现代方法1. 红外光谱法红外光谱法是一种便捷、高效的蛋白质含量测定方法。
它利用物质对红外光的吸收、散射和透射的特性来分析物质的组成和结构。
通过对玉米样品进行红外光谱扫描，再通过数据处理和分析，可以准确测定玉米中的蛋白质含量。
这种方法操作简便，而且能够快速获得准确的结果，因此在实际应用中得到了广泛的推广。
2. 氨基酸分析法氨基酸分析法是一种通过对玉米中的氨基酸进行分析，再根据氨基酸含量推算出蛋白质含量的方法。
利用氨基酸自动分析仪对玉米样品中的氨基酸含量进行测定，通过计算得出玉米中蛋白质的含量。
这种方法不仅能够测定蛋白质的总量，还可以分析出其中各种氨基酸的含量，为玉米品种改良和饲料配制提供了更加详细的信息。
质谱法是利用质谱仪对玉米样品进行分析，通过检测其中蛋白质的特有质谱峰，来准确测定其中蛋白质的含量。
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谷物和豆类中粗蛋白质测定方法探析
【摘要】国家标准GB/T5511—2008规定，谷物和豆类中粗蛋白质含量测定方法为凯氏定氮法。
该方法适用范围广泛，测定结果准确，重现性好，但因其称样量大，消化时间长，蒸馏前需要定容稀释，操作复杂费时，试剂消耗大，给测定带来一定麻烦甚至是误差。
就如何缩短消化时间，方便、快捷、准确地获得最佳测定结果，本人在称样量、所加试剂的浓度以及吸收液的酸碱度方面进行了大胆的尝试与探析。
【关键词】谷物和豆类中粗蛋白质；测定方法
1.方法原理
蛋白质是含氮的有机化合物，样品与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，以硫酸或盐酸标准滴定液滴定，根据酸的消耗量乘以蛋白质换算系数，即为蛋白质含量。
2.试剂与仪器
2.1浓硫酸混合液
在100ml水中缓慢加入浓硫酸200ml，冷却后加入30%过氧化氢300ml，混合均匀。
2.2混合催化剂
硫酸铜10g，硫酸钾100g，硒粉0.2g，在研钵中研细过孔径0.45mm（40目筛），混匀备用。
2.3混合指示剂
2份甲基红乙醇溶液（称取0.1g甲基红置于研钵中加入少许95%乙醇，研磨溶解后，加入75ml95%乙醇）与1份次甲基蓝乙醇溶液（0.1g次甲基蓝溶于80ml95%乙醇中）临用时混合。
2.4 20g/l硼酸溶液
称取20g硼酸溶于1000ml水中。
2.5饱和氢氧化钠溶液
2.6 0.01mol/l盐酸标准溶液
2.7仪器
凯氏定氮蒸馏装置。
3.操作步骤
3.1消化
称取0.050g左右（全部通过40目筛的）固体试样，移入50ml或100ml定氮瓶中，加入1g混合催化剂，再加入3ml浓硫酸混合液，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，以45度角斜支于有石棉网的电炉上。
小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止，烟雾变白后，加强火力，保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热10min，取下放冷备用。
同时做试剂空白试验。
3.2蒸馏
连接好定氮蒸馏装置，于水蒸气发生瓶内装水至2/3处，加数粒玻璃珠，加甲基红次甲基蓝指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水至沸腾，反应室清洗干净后，即放缓加热至反应室内的残液不倒吸为宜，向接收瓶内加入10ml硼酸溶液及1-2滴混合指示液，并使冷凝管下端插入吸收瓶液面下，将定氮瓶中消化液用蒸馏水少量多次冲冼，使之全部干净地转移至反应室中，清洗进样口管路，塞紧棒状玻塞，加水封严。
加热，待反应室内有热气进入，立即打开碱液管活塞加入饱和氢氧化钠至溶液呈现深褐色，停止加入，拧紧活塞，开始蒸馏。
待吸收瓶中溶液出现绿色记时5min，到时后将接收瓶放低，继续蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管下部。
3.3滴定
取下接收瓶，以硫酸或盐酸标准滴定液滴定至淡紫色（灰红色）为终点，同时做试剂空白试验。
3.4计算
试样中蛋白质含量按下式计算：
X=（V1-V0）×C×0.0140×F×100/m×（1-M）
式中： X——试样中蛋白质含量，单位为g/100g或g/100ml；
V1、V0——试样、空白液消耗标准滴定液的体积，单位为ml；
C——硫酸或盐酸标准滴定液浓度，单位为mol/L；
0.0140——1.0ml硫酸或盐酸标准滴定液相当的氮的质量，
单位为克；
m——试样质量或体积，单位为克或毫升；
F——氮换算为蛋白质的系数；
M——试样水分%
4.试验方法探析
（1）称取的试样量由标准中规定的0.2-0.3g改为0.050g左右，可将消化时间由原来的2-3h缩短为40min，由于样品量减少还可免去消化液稀释定容带来的麻烦与误差。
不同称样量测试结果比对
不同称样量空白加标回收率测试比对
上述测试结果表明，对粗蛋白质含量较高的样品减小称样量，无论对结果的准确性还是重现性都无任何影响。
这样既节省时间，提高工作效率，又降低了实验成本，降低了对环境的污染。
（2）氢氧化钠由400g/l改为饱和溶液。
因为在蒸馏过程中，消化液中的硫酸铵若没有足够的碱来中和，很难使氨彻底分离出来，甚至导致整个测定失败。
氢氧化钠在本方法中的作用有两个方面，一是中和样品消化液中剩余的酸，二是为氨的有效分离提供一个碱性环境。
所以我们在尽量不增加反应室内液体体积的前提下，采取加入饱和氢氧化钠来保证氨的有效分离，彻底放出，得到可靠、准确的测定结果。
（下转第184页）
（上接第75页）（3）将20g/l的硼酸吸收液PH值调整为5.4左右。
因甲基红和次甲基蓝混合指示剂的PH变色范围为5.4，只有当酸碱反应的等当点，落在指示剂PH值变色点范围内，所得的测定结果才愈准确，多次实践证明也只有当硼酸的PH值在5.4左右时，空白值才能出现正常，既消耗标液体积在0.2-0.4ml，同时空白加标回收率才能达到理想的效果，否则，将出现空白值为零，空白加标回收率偏高或偏低现象，测定结果准确性差。
5.注解与注意事项
（1）称量好的样品要用长条状蜡光纸一次送入凯氏烧瓶底部，切勿沾附瓶颈部，如有少量沾附可用少量蒸馏水冲入底部。
（2）消化时，要在通风橱中进行，采用长颈园底凯氏烧瓶以45度角斜支于
电炉上，瓶口置一小漏斗，增加酸液回流，加速消化。
（3）消化过程中，样品中有机质如淀粉分解转化为糖类，高温下变黑，并产生泡沫，这时要先小火，勿使黑色物质上升到凯氏烧瓶颈部，待消化液泡沫消失，均匀沸腾后，再加大火力，直至消化液黄色完全消失呈淡蓝色透明为止。
（4）消化时应注意旋转凯氏烧瓶，将附在瓶壁上的碳粒冲下，使之彻底消化。
若样品不易消化至澄清透明，可将凯氏烧瓶中溶液冷却，加入数滴过氧化氢后，再继续加热消化至完全。
（5）如样品含脂肪较多时，可适当增加硫酸量，因硫酸量少时，过多的硫酸钾会与硫酸生成硫酸氢钾而不与氨作用，导致氨损失，使结果偏低。
（6）蒸馏时，蒸汽发生要均匀、充足，蒸馏中途不得停火断气，否则发生倒吸，加碱时动作要快，防止氨损失，并注意不能使碱液污染冷凝管及接收瓶，如发现碱污染，应立即停止蒸馏，待清洗干净后再蒸馏。
（7）蒸馏前冷凝管出口就要浸入吸收液中，防止氨挥发损失。
蒸馏结束后，应先将吸收液离开冷凝管口，以免发生倒吸，再蒸馏1min。
（8）蒸馏过程中硼酸吸收液的温度不应超过40℃，否则氨吸收减弱，造成检测结果偏低。
必要时可把接收瓶置于冷水浴中。
（9）蒸馏是否完全，可用精密PH试纸测试冷凝管口的冷凝液加以确定。
（10）当采用甲基红与次甲基蓝混合指示剂时，滴定终点应为淡紫色（灰红色）而且要控制样品与空白终点颜色的一致性。
（11）消化液若不能很快蒸馏，应保存消化液，蒸馏前再加水。
【参考文献】
[1]国家标准《食品卫生检验方法理化部分（二）》.
[2]辽宁省粮食局编著.粮油质量检验手册.。