葡萄糖氧化酶酶活测定
邻联茴香胺分光光度法测定饲料添加剂中葡萄糖氧化酶活力-文档资料
邻联茴香胺分光光度法测定饲料添加剂中葡萄糖氧化酶活力1 引言葡萄糖氧化酶是一种绿色饲料添加剂，在饲料和畜牧生产中可作为抗氧化剂减缓饲料氧化变质[1]，改善动物肠道微生物平衡[2]，提高饲料利用率[3]，促进动物生长，降低中毒反应更在一定程度上替代抗菌药物和抗球虫病药物，具有广泛的应用前景。
由于葡萄糖氧化酶的高度专一性，基于不同的酶活定义而建立的检测方法主要有电化学法、测压法、凝胶电泳法、滴定法、分光光度法和傅立叶变换红外光谱法等[4]。
电化学法、测压法、凝胶电泳法存在方法操作复杂，要求严格，有很强的仪器依赖性；滴定法存在工作量大、样品需要量大、人工读数导致的测量精度低，尤其在混合型饲料添加剂的检测中不能排除酸性、碱性载体干扰的缺点。
傅立叶变换红外光谱法是较新开发的一种检测方法，优点为检测速度快，试剂用量少。
缺点为仪器要求和模型建立需要前期投入太大，限制了其使用范围。
因此寻找一种简便，快捷，灵敏的高的酶活力检测方法很有意义。
本研究采用邻联茴香胺分光光度法测定葡糖糖酶活力。
反应机理为：葡萄糖氧化酶是一种需氧脱氢酶，能催化氧化葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。
在一定的pH、温度、浓度及反应时间内通过测定产物吸光度在460nm 波长下的变化速率定量计算出酶活力。
基本反应式为：β-D-葡萄糖+H20+O2 δ-D-葡萄糖基-1，5-内酯+H2OH2O2+邻联茴香胺氧化型邻联茴香胺+2H2O1实验部分1.1仪器设备北京瑞利仪器XX公司UV-2600型紫外可见分光光度计；北京中兴伟业仪器XX公司DZKW-2型电热恒温水浴锅；赛多利斯科学仪器XX公司BSA224S型分析天平。
1.2实验试剂和材料标示含量为40GODU/g的葡萄糖氧化酶饲料添加剂；辣根过氧化物酶（上海蓝季生物）；邻联茴香胺（sigma，D9143）；磷酸二氢钠（国药试剂）；磷酸氢二钠（国药试剂）；葡萄糖（国药试剂）。
测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法
测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法周建芹 , 陈韶华 , 王剑文( 1. 苏州大学医学部药学院 , 江苏苏州215123; 2. 苏州大学医学部实验中心 , 江苏苏州215123 )摘 : 利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖溶液产生的过氧化氢浓度 , 经过标要准曲线转换得到葡萄糖氧化酶的活力。
研究了缓冲液 pH 值、水浴温度、靛蓝胭脂红用量等对葡萄糖氧化酶活力测定的影响。
结果表明 : 利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶活力时 , 缓冲液最佳 pH 值为 4、最佳水浴温度为100 ℃、靛蓝胭脂红最佳用量为 1.3 mL。
此方法的重现性较好 , 反应系统较稳定。
葡萄糖氧化酶在自然界中普遍存在 , 在食品、医药和发酵等工业生产及分析检测中用途广泛 , 是高等院校生物化学、酶学和酶工程等相关实验课程中经常选用的一种重要的模式酶。
在有氧情况下 , 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生葡萄糖酸和过氧化氢 : 葡萄糖 + O2 葡萄糖酸 + H2 O2 。
测定葡萄糖氧化酶活力常用的方法有 2 种。
一种是滴定法 , 即用碱滴定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖产生的葡萄糖酸 , 这种方法误差比较大 , 灵敏度比较低 , 尤其是葡萄糖含量比较低时。
另一种是利用葡萄糖氧化酶—辣根过氧化物酶—苯胺衍生物或染料隐性体偶联反应体系测定。
过氧化物酶在有氧存在时 , 催化葡萄糖氧化、生成的过氧化氢分解 , 分解出的氧又将苯胺衍生物或染料隐性体(如邻 - 联二茴香胺 ) 氧化变成红色或棕色物质 , 颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。
这种方法非常灵敏 , 但也存在显色物质不稳定、在 1 m in内有明显褪色、数据重复性不好等不足 , 而且因为要与辣根过氧化物酶联用 , 因此这个方法比较昂贵 , 增加了测定成本。
葡萄糖氧化酶活力测定的困难限制了其在学生实验及课外科研项目中的应用 , 因此寻找一种廉价、简便并且灵敏度高的活力测定方法很有意义。
食品酶学葡萄糖氧化酶11-精选文档
三、葡萄糖氧化酶在 食品加工中的应用
葡萄糖氧化酶在食品加工中的应用是多种多样的， 根据其作用有四个方面 ①形成过氧化氢 ②形成葡萄糖酸 ③除去葡萄糖 ④除去氧 葡萄糖氧化酶是经微生物发酵和最先进的提纯技术 纯化而得到的绿色生物食品保鲜剂，无毒无副作用。 能够除去食品中溶解氧，起到保鲜、护色、防褐变、 保护维生素C、延长食品保质期的作用。
EFAD
（氧化态）
O2
图中 G：β-D-葡萄糖， L：δ-D-葡萄糖酸内酯
（非酶水解） H2O
二、葡萄糖氧化酶活力测定
测定葡萄糖氧化酶催化的反应中氧消耗量 量压法外 氧电极法 根据反应中葡萄糖消耗的速度 葡萄糖酸和H2O2生成速度
偶联酶法
葡萄糖氧化酶的活力测定——偶联酶法 （1） 原理：在有氧存在的情况下，葡萄糖氧化 酶催化葡萄糖的氧化反应生成葡萄糖酸和过氧化 酶活测定原理： 氢，而加过氧化物酶后分解过氧化氢，分解出的 氧又将邻-联二茴香胺氧化变成棕色物质，这一 反应使溶液吸光度增大（436nm），与葡萄糖氧 化酶活性成线性关系: （2） 定义：1个葡萄糖氧化酶单位“U”相当于 30℃条件下每 min 催化氧化1μg分子的葡萄糖或 酶活力定义： 在25℃，PH7.0的条件下，每分钟 葡萄糖酸的酶定义为 1 个葡萄糖酶的活力单位。 氧化1毫摩尔葡萄糖所需的酶量为一个活力单位
防止海产品的变色、腐败、抑制微生物生长
4.除去啤酒中的氧
氧对啤酒品质有很大的的影响,主要表现在啤酒浑浊, 风味老化,口味劣变,色泽变深等等。在啤酒加工过程 中加入适量的葡萄糖氧化酶可以除去啤酒中的溶解氧 和瓶颈氧,阻止啤酒的氧化变质。防止老化味产生，保 持啤酒原有风味。 它可以使氧与啤酒中的葡萄糖生成葡萄糖酸内酯而消 耗溶解氧。葡萄糖酸内酯较稳定,没有酸味,无毒副作 用,对啤酒质量没有什么影响,而且不具有氧化能力。 葡萄糖氧化酶又具有酶的专一性,不会对啤酒中的其他 物质产生作用。因此葡萄糖氧化酶在防止啤酒老化 ,保 持啤酒风味,延长保质期有显著的效果。
葡萄糖氧化酶检测的金标准
葡萄糖氧化酶检测的金标准引言葡萄糖氧化酶是一种重要的酶，在临床诊断和生物化学研究中具有广泛的应用价值。
本文将详细探讨葡萄糖氧化酶检测的金标准，包括其定义、检测方法、应用领域和意义等方面的内容。
什么是葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶是一种催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸的酶，它是细胞内氧化磷酸化过程中不可缺少的催化剂。
它能将葡萄糖与辅酶NAD+反应，产生葡萄糖酸和还原型辅酶NADH。
葡萄糖氧化酶可以通过可以通过测定还原型辅酶NADH的生成速率来测定葡萄糖的含量。
葡萄糖氧化酶检测的方法葡萄糖氧化酶检测的方法有很多种，常用的方法包括光度法、荧光法和电化学法等。
这些方法基于葡萄糖氧化酶催化反应生成的还原型辅酶NADH的特性，通过测定还原型辅酶NADH的光学或电化学特性来间接测定葡萄糖的含量。
光度法光度法是一种常用的葡萄糖氧化酶检测方法。
它利用葡萄糖氧化酶催化反应生成的还原型辅酶NADH的吸光度变化来测定葡萄糖的含量。
通常使用紫外光谱法或可见光谱法来测定还原型辅酶NADH的吸光度，然后通过与已知浓度的标准葡萄糖溶液比较来计算未知样品中葡萄糖的含量。
荧光法荧光法是另一种常用的葡萄糖氧化酶检测方法。
它利用葡萄糖氧化酶催化反应生成的还原型辅酶NADH的荧光特性来测定葡萄糖的含量。
通过测定还原型辅酶NADH所发射的荧光强度或荧光寿命来计算葡萄糖的含量。
荧光法具有高灵敏度和高选择性的优点，常用于生物医学研究和药物检测等领域。
电化学法电化学法是葡萄糖氧化酶检测的另一种常用方法。
它利用葡萄糖氧化酶催化反应生成的还原型辅酶NADH的电化学特性来测定葡萄糖的含量。
通过将还原型辅酶NADH 在电极上氧化还原的电流变化来计算葡萄糖的含量。
电化学法具有高灵敏度和高选择性的优点，常用于生物传感器和医学诊断等领域。
葡萄糖氧化酶检测的应用领域葡萄糖氧化酶检测在临床诊断和生物化学研究中具有广泛的应用。
它可以用于血糖监测、糖尿病诊断、食品安全检测和生物传感器等领域。
测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法
测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法
周建芹;陈韶华;王剑文
【期刊名称】《实验技术与管理》
【年(卷),期】2008(025)012
【摘要】利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖溶液产生
的过氧化氢浓度,经过标准曲线转换得到葡萄糖氧化酶的活力.研究了缓冲液pH值、水浴温度、靛蓝胭脂红用量等对葡萄糖氧化酶活力测定的影响.结果表明:利用靛蓝
胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶活力时,缓冲液最佳pH值为4、最佳水浴温度为100℃、靛蓝胭脂红最佳用量为1.3 mL.此方法的重现性较好,反应系统较稳定.
【总页数】3页(P58-60)
【作者】周建芹;陈韶华;王剑文
【作者单位】苏州大学,医学部药学院,江苏,苏州,215123;苏州大学,医学部实验中心,江苏,苏州,215123;苏州大学,医学部药学院,江苏,苏州,215123
【正文语种】中文
【中图分类】R331
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d-葡萄糖底物uv分光光度法 酶活测定方法
葡萄糖底物UV分光光度法是一种用于测定酶活的常见方法。
本文将介绍葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及其在生物化学和生物医学研究中的应用。
一、原理1. 葡萄糖酶（也称葡萄糖氧化酶）能够催化葡萄糖与氧气在水溶液中发生氧化反应，生成葡萄糖内酯和过氧化氢。
这个氧化反应是可以通过UV分光光度法测定的。
2. 葡萄糖底物UV分光光度法的原理是通过测定在酶催化下葡萄糖与氧气反应所产生的过氧化氢的浓度变化来间接测定酶的活性。
二、步骤1. 样品处理：将待测样品中的葡萄糖与底物混合，使底物的浓度在一定范围内，以确保底物的过量不会影响酶的活性测定。
2. 加入酶液：将一定量的葡萄糖酶加入混合液中，并在一定温度下孵育一段时间，使酶与底物发生反应。
3. 反应停止：加入一种化学试剂使反应停止，同时转化过氧化氢形成一种有色产物。
4. 测定吸光度：使用紫外-可见分光光度计测定产生的有色产物的吸光度，根据标准曲线计算出反应体系中的过氧化氢的浓度。
5. 计算酶活：根据过氧化氢的浓度变化和所加的酶的蛋白质含量等数据，计算出酶的活性。
三、应用1. 生物化学研究中的应用：葡萄糖底物UV分光光度法广泛应用于酶动力学研究中，可以用来测定各种酶的活性及其对底物的亲和力。
2. 生物医学研究中的应用：在生物医学研究中，葡萄糖底物UV分光光度法可以用来研究酶与疾病的关联性，例如糖尿病患者血清中的葡萄糖酶活性与血糖水平的关系。
结论葡萄糖底物UV分光光度法是一种简单、敏感、精确的酶活测定方法，具有广泛的应用前景和重要的科研意义。
通过对葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及应用进行了解和掌握，可以更好地指导实验操作并推动生物化学和生物医学领域的研究进展。
近年来，随着生物技术的不断发展，葡萄糖底物UV分光光度法在生物医学研究中的应用越发广泛。
除了用于酶动力学研究和疾病相关性分析外，葡萄糖底物UV分光光度法还在其他领域展现出了巨大的潜力。
1. 新药研发在新药研发过程中，葡萄糖底物UV分光光度法被用于筛选潜在的药物候选化合物。
葡萄糖氧化酶（GOD）活性检测试剂盒说明书
Beijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 400-968-6088葡萄糖氧化酶（GOD）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0695规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体15 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体3 mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体1 mL×1支-20℃保存溶液的配制：1、工作液的配制：取15 mL试剂一和3 mL试剂二混匀（现配现用）；2、试剂三：融化后可分装-20℃保存。
产品说明：GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生H2O2，是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。
GOD催化葡萄糖产生H2O2，过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）（1）组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
（2）细菌、细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎（功率200w，超声3s，间隔10s，重复30次）。
8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
一种葡萄糖氧化酶酶活性的测量方法[发明专利]
![一种葡萄糖氧化酶酶活性的测量方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/ca3a29bc3c1ec5da51e2701f.png)
专利名称：一种葡萄糖氧化酶酶活性的测量方法专利类型：发明专利
发明人：洪军,耿方勇,肖保林
申请号：CN201610142392.4
申请日：20160314
公开号：CN105586388A
公开日：
20160518
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种葡萄糖氧化酶酶活性的测量方法，具体为：1）配置pH值为5.8的磷酸盐缓冲液，然后室温下依次加入辣根过氧化物酶液、葡萄糖氧化酶液、愈创木酚和葡萄糖溶液；2）采用紫外可见光分光光度计进行时间扫描，获得产物四邻甲氧基连酚的吸光值随时间的变化数据；3）根据朗伯比尔定律将四邻甲氧基连酚的吸光值换算为浓度，然后以时间为横坐标，浓度为纵坐标，在excel中作散点图，添加趋势线，趋势线斜率即为四邻甲氧基连酚的生成速率，该生成速率乘以系数4即得到葡萄糖氧化酶催化葡萄糖的反应速率，再根据酶活力单位定义进行换算即得到葡萄糖氧化酶酶活性。
该方法具有操作简便，反应现象明显，灵敏度高，重复性好等优点。
申请人：河南大学
地址：475001 河南省开封市明伦街85号
国籍：CN
代理机构：郑州联科专利事务所(普通合伙)
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酶活力测定的原理和方法
• 3、甲醛滴定法：用蛋白酶水解蛋白质生 成氨基酸。再用甲醛固定氨基酸的氨基， 用0.1N NaOH滴定生成的氨基酸的量，从 而测定酶活力。
• 4、DHT—酪蛋白法：用5-氨基四唑重氮盐将酪 蛋白中部分组氨酸和酷氨酸重氮化，得到黄色 的重氮5-氨基四唑酪蛋白（DHT-酪蛋白）。以 DHT-酪蛋白为底物，在蛋白酶作用下，水解生 成DHT-肽。二价镍离子可与DHT-蛋白及DHT-肽 形成稳定的可溶性红色螯合物，而锌离子可迅 速沉淀DHT-酪蛋白，但不沉淀DHT-肽。选用合 适浓度的锌离子和镍离子作为沉淀剂和显色剂， 利用比色法可测定蛋白酶活力。
2、偶联的连续法
• 偶联的连续法就是将指示酶直接加到待 测酶反应系统中，将其产物直接或间接 转变成一个可用光谱吸收仪检测的化合 物。连续的偶联反应必须在酶反应相同 条件（ pH ，温度等）下进行，且加入的 指示酶，以及其他各种物质不能干扰原 来的酶活力。
四、酶分析的自动化
• 所谓酶分析的自动化是指从加样，启动 反应，检测、数据记录及结果处理等整 个过程都由仪器自动操作。自动分析技
十、胰蛋白酶的活力测定
• 测定时，取底物溶液3.0mL，加盐酸 （0.001mol/L）0.2mL混匀，作为空白。取供 试品溶液0.2mL与底物溶液（预热至25±0.5℃） 3.0mL，立即计时并摇匀，使比色池内的温度 保持在25±0.5℃，在253nm波长处，每隔30s 读吸收度，共5min。以吸收度为纵坐标，时间 为横坐标作图，取在3min内成直线部分的吸收 度计算分析。
• 1、福林—酚法：蛋白酶催化蛋白质水解 生成氨基酸。其中含酚基的氨基酸(酪氨 酸、色氨酸等)与福林—酚试剂反应，生
成蓝色复合物。蓝色深浅与含酚氨基酸
的量成正比，从而测定其活力。
葡萄糖氧化酶检测方法-backup
B I O F N O R N O O N葡萄糖氧化酶检测方法1.1 酶活力1.1.1 原理葡萄糖和氧反应，在葡萄糖氧化酶的作用下，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化氢酶的作用下，生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。
1.1.2 试剂和溶液特殊说明，所用的试剂均为分析纯，水均符合GB/T 6682中规定的三级水。
1.1.2.1 磷酸盐缓冲溶液，pH 为6.0。
称取二水磷酸二氢钠16.61g 和十二水磷酸氢二钠35.82g ，溶于无二氧化碳的水中，稀释至1000mL 。
1.1.2.2 邻联茴香胺甲醇缓冲溶液。
称取邻联茴香胺1g 加入100ml 甲醇中搅拌溶解备用。
临用时现配，取0.1ml 加入到上述缓冲溶液12mL 中混匀。
1.1.2.3 葡萄糖水溶液，浓度为180g/L 。
称取葡萄糖18g ，加水溶解，定容至100ml 。
1.1.2.4 辣根过氧化物酶液,浓度为0.033%。
称取辣根过氧化物酶（HRP ，美国Ameresco 公司）10mg ，溶于30ml 蒸馏水。
1.1.3 仪器与设备a) 分析天平：感量0.0001 g 。
b) pH 计：精确至0.01。
c) 磁力搅拌器：附加热功能。
d) 电磁振荡器。
e) 离心机：4000 r/min 。
f) 恒温水浴锅：温度控制范围在30—60℃之间，精度为0.1℃。
g) 秒表：每小时误差不超过5s 。
h) 可见分光光度计：能检测350—800nm 的吸光度范围。
i) 移液器：精度为1uL 。
1.1.4 实验方法1.1.4.1 反应用酶液的制备固态产品用万分级天平称取样品1g （精确至0.0001g ），用磷酸盐缓冲溶液（2.7.2.1）定容至100mL 。
磁力搅拌30min ，上离心机6000r/min,离心5 min 。
取上清液，再用磷酸盐缓冲溶液（2.7.2.1）做适当稀释。
液态产品用移液枪吸取1.00mL ，用磷酸盐缓冲溶液（2.7.2.1）做适当稀释。
氧化酶法测定葡萄糖的原理
氧化酶法测定葡萄糖的原理一、引言在生化分析中，准确测定物质的含量是非常重要的，而葡萄糖作为一种常见的单糖，其测定方法也备受关注。
本文将介绍一种常用的方法——氧化酶法，该方法以氧化酶作为催化剂，将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并通过测定葡萄糖酸的含量来间接测定葡萄糖的浓度。
二、原理1. 葡萄糖的氧化反应氧化酶可以催化葡萄糖与待定电子受体（如辅酶NAD+）之间的氧化反应，生成相应的葡萄糖酸和还原型辅酶NADH。
该反应的化学方程式如下：葡萄糖+ NAD+ + H2O → 葡萄糖酸 + NADH + H+这个氧化反应是一个底物与辅酶之间的双电子转移反应。
2. 氧化酶的作用氧化酶作为催化剂可以显著加速上述葡萄糖的氧化反应，降低反应的活化能，提高反应速率。
同时，氧化酶本身不参与反应，因此可以被反复使用。
3. 检测葡萄糖酸含量利用化学分析方法，可以测定葡萄糖酸的含量，进而间接推算出葡萄糖的浓度。
常用的方法包括光度法、电化学法等。
三、方法步骤1. 准备样品将待测样品中的葡萄糖转化为葡萄糖酸，通常需要进行酸水解、酶水解等预处理步骤，以使葡萄糖完全转化为葡萄糖酸。
2. 添加试剂向样品中加入适量的辅酶NAD+和氧化酶，使其与葡萄糖酸反应生成NADH。
3. 反应控制根据实验要求，可以控制反应的温度、 pH 值等条件，以提高反应效率和准确性。
4. 测定吸光度利用光度法或其他适用的方法，测定反应体系中产生的NADH的吸光度，通过标准曲线或计算公式，推算出样品中葡萄糖的浓度。
四、应用与优势氧化酶法测定葡萄糖的原理基于酶的催化作用，具有以下优势：1. 高灵敏度：由于酶的催化作用，可以极大地提高反应速率，使测定结果更加灵敏。
2. 高选择性：氧化酶对葡萄糖的催化作用非常特异，能够准确测定葡萄糖的浓度。
3. 容量小：只需少量的酶即可进行检测，可以大大减少实验所需的试剂量。
4. 适用范围广：氧化酶法不仅可以用于葡萄糖的测定，还可以应用于其他单糖的测定，具有广泛的应用前景。
葡萄糖氧化酶酶活定义
葡萄糖氧化酶酶活定义葡萄糖氧化酶（glucose oxidase）是一种重要的酶类，它在生物体内起着关键的催化作用。
葡萄糖氧化酶酶活是指该酶在特定条件下催化葡萄糖氧化反应的能力。
本文将介绍葡萄糖氧化酶的酶活定义以及其在生物学和工业领域的应用。
一、葡萄糖氧化酶酶活的定义葡萄糖氧化酶酶活是指在一定的温度、pH值和底物浓度条件下，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化反应的速率。
酶活的高低可以通过测定单位时间内产生的产物量或底物消耗量来评估。
葡萄糖氧化酶酶活的测定方法多种多样，常用的方法包括比色法、电化学法和荧光法等。
二、葡萄糖氧化酶的生物学意义葡萄糖氧化酶在生物体内广泛存在，特别是在真菌和细菌中较为常见。
它能催化葡萄糖的氧化反应，将葡萄糖转化为葡萄糖酸，并释放出氧气。
这个反应对于生物体的能量代谢非常重要，能够提供细胞所需的能量。
三、葡萄糖氧化酶在工业领域的应用由于葡萄糖氧化酶具有高效催化葡萄糖氧化反应的能力，因此在工业领域有着广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：1. 食品工业：葡萄糖氧化酶可以用于食品加工中，例如面包、饼干和啤酒等的生产过程中。
它能够将葡萄糖转化为葡萄糖酸，起到增酸、防腐和改善口感的作用。
2. 医药工业：葡萄糖氧化酶可以用于医药领域的生产过程中。
例如，它可以用于制备葡萄糖酸盐，作为药物的原料或辅料。
3. 生物传感器：葡萄糖氧化酶可以用于生物传感器的制备中。
通过将葡萄糖氧化酶固定在传感器表面，可以实现对葡萄糖浓度的快速检测，广泛应用于血糖监测和生物医学研究领域。
4. 环境保护：葡萄糖氧化酶可以用于环境监测和废水处理中。
它能够催化有机物的氧化反应，将有机废物转化为无害的产物，起到净化环境的作用。
葡萄糖氧化酶酶活是指葡萄糖氧化酶在特定条件下催化葡萄糖氧化反应的能力。
葡萄糖氧化酶在生物学和工业领域有着广泛的应用，包括食品工业、医药工业、生物传感器和环境保护等领域。
随着科学技术的不断发展，葡萄糖氧化酶的应用前景将更加广阔。
利用生物传感分析仪快速测定葡萄糖氧化酶的酶活
利用生物传感分析仪快速测定葡萄糖氧化酶的酶活周清华;王卫军;钱伟;魏胜华【摘要】建立了采用生物传感分析仪快速测定葡萄糖氧化酶酶活的新方法.通过外加过氧化氢酶去除酶反应液中的过氧化氢,排除了其对测定的干扰;酶活测定的最佳条件:取质量浓度为15 mg/mL的葡萄糖氧化酶稀释液0.5 mL加入5 mL质量浓度为3 mg/mL的葡萄糖溶液中,在36℃ 的水浴中反应10 min,然后加入过氧化氢酶去除H2 O2.在此条件下同一批样品测定8次,其RSD为1.14％,与液相色谱法测定的结果相比较,相对误差为1.65％,较其他几种方法更为快捷、精确.【期刊名称】《安徽工程大学学报》【年(卷),期】2017(032)005【总页数】5页(P1-4,50)【关键词】生物传感分析仪;葡萄糖氧化酶;酶活;测定【作者】周清华;王卫军;钱伟;魏胜华【作者单位】安徽工程大学生物与化学工程学院 ,安徽芜湖 241000;安徽工程大学生物与化学工程学院 ,安徽芜湖 241000;安徽工程大学生物与化学工程学院 ,安徽芜湖 241000;安徽工程大学生物与化学工程学院 ,安徽芜湖 241000;安徽工程大学微生物发酵安徽省工程研究中心 ,安徽芜湖 241000【正文语种】中文【中图分类】Q554+.2葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,E.C.1.1.3.4,简称GOD)能够在有氧的条件下专一性地催化β-D-葡萄糖生成过氧化氢和葡萄糖酸，该酶广泛地分布于动物、植物和微生物体内，在生物体的新陈代谢过程中起着重要的作用．微生物因其具有生长繁殖速度快、来源广以及易培养等特点成为葡萄糖氧化酶的主要来源[1]．GOD应用于食品、饲料、医药等行业中，起到去除葡萄糖、脱氧、杀菌等作用[2-3]．在生物催化领域，联合使用GOD与CAT(过氧化氢酶)是目前生物法制备葡萄糖酸最高效的方法[4]．在酶的生产和应用方面，酶活的检测是首先要解决的问题．建立一种快速、简便、灵敏和准确的检测方法是提高生产水平的前提．目前，葡萄糖氧化酶酶活的测定方法主要有直接的Underbofler滴定法[5]、间接的靛蓝胭脂红退色法[6]和Keston 法[7]等．这些方法有的误差较大，灵敏度低；有的测定时间长，成本较高且操作复杂，难以测定大批样品．生物传感分析仪是酶反应在仪器分析领域的典型应用，该仪器的关键设备是电极复合传感器，其工作原理是利用设备自带的固定化酶膜，通过酶反应放出H2O2，随后H2O2失去电子生成H2O，铂电极获得电子产生电流信号，这种电流信号的强度与H2O2的浓度成比例，而H2O2浓度与底物浓度成线性比例关系．通过比较被测物和标准样品产生的H2O2量，就可计算出被测样品中底物的含量．通过更换不同的固定化酶膜，可以测定葡萄糖、谷氨酸、乙醇和乳酸等化合物．采用生物传感分析仪测定样品具有快速、准确、使用方便和可以大批测定的优点，在一定条件下可以实现在线的检测，因此在检测方面应用较广[8]．采用生物传感分析仪测定GOD的酶活时，由于GOD在转化葡萄糖的过程中会产生H2O2，因此需要去除H2O2的干扰，研究利用过氧化氢酶CAT去除酶反应液中的H2O2，并优化酶活测定反应条件，最后将其与其他几种测定方法进行了对比．目前还未发现关于采用生物传感分析仪在酶活分析中应用的报道，研究不仅提供了一种新的测定GOD酶活的方法，还大大拓宽了生物传感分析仪的用途．1.1 试剂与仪器GOD和CAT(郑州中成化工有限公司)；其它试剂购自国药集团上海试剂公司，均为分析纯；SBA-40D生物传感分析仪(山东省科学院生物研究所)；Beckman Allegra 64R离心机；AS1201型高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司)．1.2 实验方法GOD酶液的制备.准确称取3 gGOD固体粉末，充分溶解于20 mL的pH=5.0的0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液中，4 ℃下10 000 r/min离心10 min，然后取上清液置于冰箱冷藏保存备用，使用时适当稀释．生物传感分析仪测定GOD酶活.取GOD酶液0.5 mL，加入5 mL的3 mg/mL的葡萄糖溶液，在36 ℃的水浴中振荡反应10 min后煮沸灭酶终止反应，冷却到室温后，加入0.4 mL的CAT，在30 ℃下反应10 min，然后加热煮沸，4 ℃下10 000 r/min离心10 min后准确吸取上清液20 μL，注射入生化分析仪，测得葡萄糖的含量，计算与初始葡萄糖浓度对比得到所消耗的葡萄糖的含量．酶活计算按照国际单位所定义的每分钟转化1 μmol葡萄糖所需的单位酶量为1个酶活单位．滴定法测定GOD酶活.取GOD酶液1.0 mL，加入质量浓度为3 mg/mL的葡萄糖溶液25 mL，置于36 ℃的水浴中振荡反应60 min，此后依次加入20 mL的0.1 mol/L的NaOH溶液使得反应终止，用0.1 mol/L的盐酸滴定剩余的NaOH，通过记录消耗的盐酸的含量推算出所产生的葡萄糖酸的含量，从而最终计算出酶活．靛蓝胭脂红退色法测定酶活.取GOD酶液1.0 mL，加入质量浓度为3 mg/mL的葡萄糖溶液5 mL，在36 ℃的水浴中振荡反应10 min后终止反应，得到酶反应液．在25 mL的具塞比色管中，分别加入pH 4.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液3.0 mL 和1.3 mL的靛红溶液，再加入1 mL的上述酶反应液，于沸水浴中加热13 min 后，取出冰水浴冷却5 min，终止反应，在615 nm波长下测定吸光度值．每分钟转化葡萄糖反应产生1 μmolH2O2所需的酶量定义为1个酶活单位．Keston法测定酶活.配置质量浓度为0.66 mg/mL邻联茴香胺溶，吸取1.0 mL，用pH=5.0的0.05 mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液稀释到100 mL，在比色杯中分别加入2.4 mL邻联茴香胺溶液、0.5 mL的1 mg/mL的葡萄糖溶液和0.1 mL质量浓度为0.1 mg/mL的HRP(辣根过氧化物酶)溶液，摇匀，于35 ℃的水浴中振荡反应5 min后加入0.1 mL的葡萄糖标准溶液或样品，快速混匀并立即置于分光光度计中在500 nm下记录不同时间的吸光度值，将吸光度值对时间作图，求得酶活．葡萄糖酸的测定.采用HPLC测定，分析柱为C18反向色谱柱，测定的条件为：柱温30 ℃，洗脱剂为甲醇：水(V∶V)=5∶95，NaH2PO4 3.2×10-3 mmol/L，磷酸调节pH值到2.7，流速为1 mL/min，检测波长为254 nm．2.1 CAT去除酶反应液中的H2O2生物传感分析仪的工作原理在于自身所带有的固定在膜上的GOD氧化葡萄糖时产生H2O2，H2O2失去电子产生电流，通过间接测定H2O2的量而得到葡萄糖的含量．由于在测定GOD的酶活时，反应液中产生了H2O2，这样在仪器上会显示葡萄糖的含量偏大，会对测定产生误差，因此，在测定葡萄糖的含量时，其体系中不能有H2O2.在测定酶活之前，首先要去除酶反应液中的H2O2，这一点有别于使用生化分析仪测定其它样品中葡萄糖的含量．去除H2O2最有效的方法是采用CAT去除，该酶是催化过氧化氢分解成氧和水的专一性的酶，相比较化学催化剂，其反应条件温和，对环境没有污染．最为关键的一点是CAT催化效率极高，在一定的条件下，1 mol铁离子每分钟可催化10-5 mol的H2O2分解；在相同的条件下，1 mol的CAT在1 min可以催化105 mol的H2O2分解，催化效率是铁离子的1 010倍[9]．考察了在酶反应液中添加CAT的量以及反应时间对葡萄糖测定的影响．CAT的加入量和反应时间对于分析仪测定葡萄糖含量的影响分别如图1、图2所示.当葡萄糖的测定曲线趋于平稳时，说明此时酶反应液中所产生的过氧化氢已经被去除，采用过氧化氢试剂盒测定，也证实其中的过氧化氢检测不到．因此，在使用生物传感分析仪测定样品之前，样品中需要加入0.4 mL的CAT，在30 ℃下反应10 min，达到去除酶反应液中的H2O2的目的．2.2 酶活测定反应条件的建立在已有的文献报道中，在GOD酶活测定时，其反应条件的描述都有不同，即使是同一种方法，反应的条件也有所不同，并且生物传感分析仪分析葡萄糖的浓度范围是0～1 mg/mL，因此需要根据酶活的定义及仪器本身的特点，设定酶反应的最适条件，才能反应酶的基本性质和准确测定出酶的活力．(1)底物浓度对酶活测定的影响.酶活测定的实质是测定反应的初速率，因此底物的浓度必须满足酶反应的需要，且要保证底物在过量的情况下对反应没有抑制作用．将0.5 mL酶液加至5 mL葡萄糖溶液，葡萄糖质量浓度从1 mg/mL到5mg/mL，pH值为5.5，反应温度35 ℃．结果如图3所示.由图3可知，底物质量浓度为3 mg/mL时，酶活值达到最大并趋于平稳．在实验中，由于酶活在正常的范围之内，所以测定的剩余的葡萄糖的含量在分析仪的读数范围之中．(2)反应温度对酶活测定的影响.温度是影响酶促反应的重要因素之一．在适宜温度范围内，酶才能进行催化反应；在最适的温度条件下，酶的催化反应速度才能达到最快．考察了不同反应温度对酶活测定的影响，在其它条件不变的情况下，反应温度从30 ℃到40 ℃，实验结果如图4所示.由图4可以看出，酶活测定最适反应温度是36 ℃，在此条件下GOD催化反应的初速度达到最大，从而体现在酶活测定上其酶活值达到最大．(3)pH值对酶活测定的影响.在酶催化反应时，pH发生改变，酶蛋白分子和底物分子中基团的解离状态也会随之改变，从而影响酶分子的空间构象以及酶与底物的结合能力和催化能力，进而对酶的活力产生影响．考察了从4到6.5之间不同的pH 值对酶活测定的影响，实验结果如图5所示.由图5可知，最适pH为5.0．2.3 应用按照以上所获得的条件，对所购买的GOD进行了测定，同一批样品测定8次，实验结果如表1所示.由表1可知，8次测定的RSD为1.14%，说明该方法精密度良好．同时，为了考察该方法的稳定性，按照1.2所示的实验方法，分别在0 h、1h、2 h、3 h、4 h、5 h检测样品的酶活，其酶活值分别为54.8、54.6、55.0、55.3、55.2和55.9，其RSD为1.5%，说明供测试的样品在5 h内基本保持稳定．2.4 对比实验为了考察本方法的准确性，将之与滴定法、靛蓝胭脂红退色法和Keston法做对比实验.因为在所有的检测方法中，液相色谱法最为精确，所以以高效液相色谱测定产物中的葡萄糖酸的含量推算出的酶活作为标准.每个样品检测3次，取平均值，不同测定方法的检测结果如表2所示．以HPLC法测定的酶活为54.3 U/g，由表2可以看出，采用生物传感分析仪测定的酶活为55.2 U/g，与HPLC法测定酶活的相对误差为1.65%，是这几种方法中误差最小的．同时，该方法具有简便、快速、一次性可以大量测量的优点．通过检测葡萄糖含量的减少建立起GOD酶活的检测方法．利用外加过氧化氢酶CAT去除酶反应液中的H2O2，排除了其对测定的干扰.通过反应条件的优化，建立了最适酶活测定条件．利用该方法可以准确、快速和大批量地测定GOD的酶活．如果采用不同的酶膜就可以测定不同的物质，相应地也可以测定谷氨酸脱氢酶、乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶等酶的活力．研究不仅提供了一种新的测定GOD酶活的方法，还大大拓宽了生物传感分析仪的用途．【相关文献】[1] M V Sukhacheva,M E Davydova,A I Netrusov.Production of Penicillium Funiculosum 433 Glucose Oxidase and its Properties[J].Applied Biochemistry andMicrobiology,2004,40(1): 25-29.[2] D G Hatzinikolaou,O C Hansen,B J Macris,et al.A New Glucose Oxidase from Aspergillus Niger:Characterization and Regulation Studies of Enzyme and Gene[J].Applied Microbiology and Biotechnology,1996,46(4):371-381.[3] 郝杰清,王帅坤,师慧,等.重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶的纯化和性质[J].食品科学,2013,34(9):159-163.[4] S Crognale,M Petruccioli,M Fenice,et al.Fed-batch Gluconic Acid Production from Penicillium Variabile P16 Under Different Feeding Strategies[J].Enzyme and Microbial Technology,2008,42(5):445-449.[5] L A Underkofler.Properties and Applications of the Fungal Enzyme GlucoseOxidase[J].Enzyme Chemistry,1957(2):486-490.[6] 周建芹,陈韶华,王剑文.测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法[J].实验技术与管理,2008,25(12):58-60.[7] F M Bautista,J M Campelo,A Garcia,et al.Properties of a Glucose Oxidase Covalently Immobilized on Amorphous ALPO4 Support[J].Journal of Molecular CatalysisB:Enzymatic,2001,11(4):567-577.[8] 李宪民,丁芳,樊伟丽,等.生物传感分析仪测定葡萄糖和L-乳酸的影响因素研究[J].食品工业科技,2009，30(2):289-291.[9] 郭勇.酶工程:第四版[M].北京:科学出版社, 2016.。
实验血糖测定葡萄糖氧化酶法
实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法）【目的】体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。
【临床意义】葡萄糖的正确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。
平时在查找这些病症的来由时，还将各种耐量试验和控制试验与葡萄糖测定一同进行。
葡萄糖含量增高见于：糖尿病、葡萄糖摄入过分、柯兴氏综合症、脑血管不测。
葡萄糖含量减少见于：胰岛瘤、胰岛素过分、先天性碳水化合物代谢阻挡。
【原理】样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，将还原性 4- 氨基安替比林与酚偶联缩合成可被分光光度计测定的醌类化合物。
【器材】紫外分光光度计，恒温水浴箱，移液器（枪），枪头，试管【药品】葡萄糖测定试剂盒，试剂盒主要成分与浓度：试剂主要成分实验浓度R1葡萄糖氧化酶（ GOD）≥ 13000U/L过氧化物酶（ POD）≥ 900U/LR2磷酸缓冲液（）100mmol/L酚11mmol/L4- 氨基安替吡啉L葡萄糖标准液L(100mg/dl)【样本】新鲜无溶血血清。
【步骤】将10ml R1与90ml R2混杂均匀，即为工作液。
空白管校准管样品管工作液ml ml ml蒸馏水ml————校准液——ml——样品————ml 分别混杂均匀， 37℃水浴 10～15分钟（防备太阳光直射），用波长505nm、比色杯光径，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。
【计算】【参照值】血清 / 血浆：— mmol/L (70 —110 mg/dl) 。
此范围仅供参照，各实验室须建立本室的参照值范围。
【参照文件】1．全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三， 1997，P616.2．Trinder P. Ann Clin Biochem，1969，6: 24-27.血糖测定实验所需器材：1.紫外分光光度计（比色杯光径），2.恒温水浴箱（能调温度的， 37℃），3.移液器（枪）（规格 6 个， 20μl 6 个），枪头各 100个4.试管 50支， 6个试管架5.烧杯 100ml一个， 50ml（或 25ml） 6个6.记号笔 6支7.蒸馏水 1瓶。
一种检测葡萄糖氧化酶活力的新方法
一种检测葡萄糖氧化酶活力的新方法任婷月;周万里;张利群;毕春元;李敬龙【摘要】采用SBA-40C型生物传感分析仪建立了一种葡萄糖氧化酶活力的快速测定方法.利用生物传感分析仪检测葡萄糖质量浓度的工作原理,葡萄糖氧化酶专一性地与β-D-葡萄糖反应,产生的过氧化氢在过氧化氢电极表面上发生电子转移,内置电子元件将电信号转变为数字信号,用已知活性单位的葡萄糖氧化酶作为测定标准定标后,即可在仪器上直接测出待测样品的葡萄糖氧化酶活性单位.结果表明:利用生物传感分析仪测定葡萄糖氧化酶活力时,缓冲液最佳pH为6.5,测定时间20 s,操作周期小于60 s,连续10次测定RSD值为0.63％,0 ～ 100 U/mL的范围内线性良好,r=0.999 1.该方法专一性高、简便、快速、准确、重复性好,适用于样品数目较多的葡萄糖氧化酶活力的快速测定.%The purpose of our work was to establish a method for determination of glucose oxidase activity using SBA-40C biosensor analyzer.This novel method was based on the working principle of the SBA-40C biosensor analyzer to detect the contents of glucose.That is,glucose oxidase specifically reacted withβ-D-glucose and produced hydrogen peroxide,then electron transfer occurred on the surface of Peroxide hydrogen electrode,after that the built-in electronic components turned electrical signals into digital signals.A known unit of glucose oxidase was used as measurement standard,the glucose oxidase activity of the tested sample can be detected on the SBA-40C biosensor analyzer directly.Results showed that optimum reaction pH was 6.5,measurement time was 20s,and the operation period was less than 60 s.The RSD value of 10 consecutive was 0.63％,and 0 ～ 100 U/mL was within the scope oflinear good,r =0.9991.The method is special,simple,rapid,accurate,and reproducible,which was suitable for determination of glucose oxidase activity with numerous samples.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2015(041)001【总页数】4页(P212-215)【关键词】葡萄糖氧化酶;生物传感分析仪;过氧化氢电极【作者】任婷月;周万里;张利群;毕春元;李敬龙【作者单位】齐鲁工业大学生物工程学院,山东济南,250353;山东省科学院生物研究所山东省生物传感器重点实验室,山东济南,250014;山东省科学院生物研究所山东省生物传感器重点实验室,山东济南,250014;山东省科学院生物研究所山东省生物传感器重点实验室,山东济南,250014;齐鲁工业大学生物工程学院,山东济南,250353【正文语种】中文葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)是一种氧化还原酶，在O2充足条件下，它能够快速专一地催化β-D-葡萄糖为β-D-葡萄糖酸和 H2O2［1］。
葡萄糖氧化酶活性测定Determination-of-Glucose-oxidase-Activity
Determination of Glucose oxidase Activity1PrincipleUnder the effect of glucose oxidase,glucose and oxygen responses are generated by glucose acid and hydrogen peroxide.Under the effect of hydrogen peroxide enzyme, hydrogen peroxide and colorless prototype o-Dianisidine responses are generated by water and red oxidation o-Dianisidine.2Reagents and SolutionsIn addition to special instructions,the reagents used for the analysis of pure,water are in line with the provisions of the three levels of water in GB/T6682.（1）Phosphate buffer solution,pH6.0Take16.61g NaH2PO4·2H2Oand35.82g Na2HPO4·12H2O,dissolved in water without CO2,dilution to1000mL.（2）o-Dianisidine l methanol buffer solutionTake1g o-Dianisidine into100ml methanol solution and agitation dissolution.Now with the current,take0.1ml o-Dianisidine l methanol buffer solution into12ml phosphate buffer solution and mix them uniformity.（3）Glucose solution,180g/LTake18g glucose;add water to dissolve and constant volume to100ml.（4）Horseradish Peroxidase(HRP)solution,0.0033%Take10mg HRP and add30ml water to dissolve it.3Apparatus and equipment（1）Analytical balance:The amount of sense is0.0001g（2）pH meter:accurate to0.01（3）Magnetic stirrer:heating function（4）Electromagnetic oscillator（5）Centrifuge:4000r/min（6）Thermostatic bath:temperature control range between30℃and60℃,the accuracy is0.1℃.（7）Stopwatch：The error per hour is no more than5s.（8）Visible light spectrophotometer:Detection of the absorbance range of350-800nm（9）Transferpettor：1μL4Experimental methods（1）Preparation of enzyme liquidSolid products：Dissolution of1g sample with phosphate buffer solution was100mL.Solution was magnetic stirring30min and centrifugal5min with6000r/min.Thesupernatant was diluted with phosphate buffer solution.Liquid product:1ml sample was diluted with phosphate buffer solution.Note:the diluted sample measured enzyme solution of△A value in0.15-0.65.（2）Determination procedureTake two clean tubes,in order to add the following reagents.Blank SampleA.2.5ml o-Dianisidine l methanol buffer solution A.2.5ml o-Dianisidine l methanol buffer solutionB.0.3ml Glucose solution B.0.3ml Glucose solutionC.0.1ml HRP solution C.0.1ml HRP solutionD.Mixing solution,constant temperature water bath at30C5min D.Mixing solution,constant temperature water bath at30C5minE.0.1ml water,mix E.0.1ml sample,mixF.460nm,zero F.460nm,Read value A0,3min afterreading the value A1,△A=A1-A0 Each sample should be taken for analysis of two parallel samples;the difference of absorbance value is not more than0.02as effective parallel value.（3）CalculationThe enzyme activity of glucose oxidase was expressed by X;unit is U/g or U/ml.A1——Arithmetic mean value of light absorption after reaction of parallel sample A0——Arithmetic mean value of light absorption before reaction of parallel sampleN—Dilution multiple of sample11.3—Extinction coefficientt—Sample and substrate reaction time，min0.1—Sample volume，mlm—Sample weight，gThe results are expressed as integers.。
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葡萄糖氧化酶酶活测定
1 酶活单位与定义
pH6.0、30℃的条件下，每分钟能把 1.0μmol 的β-D-葡萄糖氧化成 D-葡萄糖酸和 H2O2 的酶量为一个单位。
2 测定原理
葡萄糖和氧反应，在葡萄糖氧化酶的作用下，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下，生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。
3 试剂和溶液
3.1 磷酸盐缓冲液（pH6.0）
称取 16.61g 磷酸二氢钠（ NaH2PO4·2H2O ）和 35.82g 磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），溶于无 CO2 的水中，稀释到 1000ml。
3.2 邻联茴香胺甲醇缓冲液
1g 邻联茴香胺加在 100ml 甲醇中搅拌溶解备用。
临用时现配，取 0.1ml 加入到上述缓冲液 12ml 中混匀。
3.3 180g/l 葡萄糖水溶液
18g 葡萄糖加适量水溶解，并定容至 100ml。
3.4 0.03%辣根过氧化物酶液
称取辣根过氧化物酶（HRP,美国 Ameresco 公司）10mg，溶于 30ml 蒸馏水。
4 仪器设备
721-分光光度计、恒温水浴、秒表
5 分析步骤
5.1 待测酶样品的处理将待测酶样做适当稀释后进行试验，使得测定△A 值在 0.25～0.4。
5.2 测定
2 支干净试管，按顺序分别加入以下试剂
6 结果表示与计算
X=[△A÷（11.3×t×0.1）] ×n
t—测定时间，min
0.1—样品体积，ml
11.3—消光系数
n—稀释倍数
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