丙型肝炎治疗新进展_海南丙肝医院
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• HBV与HCV同时感染：发生HCC的相对危险
为82.5，而单纯HCV感染其相对危险性仅为 6.6 • 饮酒：加剧慢性丙肝过程，加速发展成肝 硬化，酒精可增加循环中HCV-RNA含量 • 卟啉病
临床表现
• HBV相关HCC发病较HCV相关HCC为年轻
• HBV相关HCC中常伴有肝硬化，而HCV相 关HCC中几乎所有病例合并肝硬化 • HBV相关HCC其癌肿常为单个，而HCVHCC则开始就为多中心
丙型肝炎的治疗
干扰素治疗
• 具有抗病毒、抗纤维化及免疫调节作用 • 抗HCV的确切机理仍不清楚 • 目前常用的有四种-干扰素，即-2a、-2b、 -nI及-C • 其他类型干扰素尚待进一步评价
-干扰素
• -2b干扰素是用人白细胞-2b基因通过重组 DNA技术产生而成 • -2a干扰素也是人白细胞基因经重组DNA技术 产生，但其基因结构与-2b只相差一个氨基酸 • -nI干扰素是人淋巴母细胞产生的9个干扰素 亚型的复合物 • -C干扰素(a-consensus interferon) 是通过 筛选各种干扰素亚型，保留其相同的氨基酸， 形成一致的分子结构，然后根据此序列合成DNA， 再进行克隆产生
• • • • 估价血清中HCV-RNA水平 反映感染机体的病毒复制率及清除率 在未治疗的慢性丙肝机体内病毒负荷相对稳定 目前有二种方法可定量HCV-RNA水平，即靶扩 增技术如定量PCR方法及信号扩增技术如支链 DNA法
HCV基因型测定
• 检测基因型方法一般分为二类 ：
⑴ 检测HCV基因的点突变的筛选试验 ⑵ 评估HCV基因更大片段的验证性试验
HCV-RNA定性试验
• 逆转录PCR • RT-PCR方法各家不一，缺乏标准化 • 有许多因素影响着PCR方法，如标本处理及储存形 式，引物设计、扩增倍数、反应条件、DNA产物的 污染、扩增后产物检测系统等 • 严格的质控、操作人员的熟练程度尤为重要 • 药盒并不能完全保证结果的可靠性
HCV-RNA定量试验
HCV的发现
70年代中期发现为非甲非乙型肝炎 l 约2/3输血后肝炎是由非甲非乙型肝炎病毒所致 l 1978黑猩猩非甲非乙型肝炎模型确定是由病毒 • 引起 l 病毒生物学分子特性与黄病毒相似，后被命名 • 为HCV
l
HCV基因结构
5’NC
3010-3033aa E2/N S1
P7
3’NC
HCV诱导的持续慢性的机理
• • • • 宿主因素，如不能诱发保护性免疫 病毒因素，如病毒变异 与HCV-RNA整和到宿主基因无关 HCV诱导的宿主细胞及体液免疫反应不能预防 及清除HCV感染
HCV准基因株(Quacispecies)
• • • • • 大多数RNA病毒在复制过程中，易出错 在同一个体内很难找到完全相同的RNA基因 基因之间关系甚密，这就是所谓准基因株 病毒准基因围绕主要基因，数量以主要基因为主 感染某一时期，各基因的分布状态代表宿主与病 毒之间的最佳状态 • 主要基因起主要地位，是由于主要基因复制率较 高之故 • 免疫靶基因不单是主要基因，而是基因的复合体
丙型肝炎与肝细胞癌
HCV相关HCC流行病学
• HCV相关HCC主要发生在HCC发生率为中等的地区，如北 欧及日本 • 在HCC发生率较高地区，HCC仍以HBV感染为主 • 在意大利、西班牙及日本，约50-75%的HCC与HCV感染 有关 • 少数北欧国家如希腊，抗HCV阳性的HCC不到20% • 美国各地区差异很大 • 来自南佛罗里达洲一份报告，50%以上的HCC中抗HCV阳 性，许多患者为拉丁美洲人 • 来自Alaska报告，仅极少数HCC中可查到抗HCV，HCC的 主要原因仍为HBV感染 • Baltimore研究报道，约16%HCC患者抗HCV阳性，并且 大多数患者HCV-RNA阳性 • los Angelos的非亚洲的HCC患者约33%抗HCV阳性
丙肝的临床诊断
抗HCV（EIA-2）+ 确诊 PCR RIBA-2
阳性
肝穿 阴性
阴性
可疑
阳性
肝穿
排除 随访 排除
PCR
肝病严重程度的评估
• • • • 肝活检-----黄金标准 ALT水平------不能反映肝病的严重程度 血清HCV-RNA水平-----不能评价肝病的严重程度 HCV基因型----HCV-1b型与严重肝病之间无关系
ALT、HCV-RNA与肝组织学关系
• ALT异常者肯定有慢性肝病的存在，但ALT正
• • • • 常者不能保证肝组织正常 ALT水平不能预示肝病严重程度 ALT水平不能预示肝组织内汇管区浸润、淋巴 滤泡形成、胆管损伤及脂肪变性程度 HCV-RNA水平与肝组织学改变之间无相关，不 能预示肝病程度的严重性 关于血液检查各参数缺乏与肝组织相关的机理 仍不清楚 ：肝组织学改变的形成是动态因素 与静态因素综合之结果 ，而外周血参数的检 测，只反应检测当时的情况 。
HCV准基因株与宿主免疫反应
• 产生中和抗体 • 中和抗体清除病毒的能力极有限
★ ★
对所分离的病毒有作用 对准基因复合体无效
• HCV中和抗体主要作用部位在HVR1区 • HVR1基因的变化是体液免疫作用的结果 • 最近又发现E2保守区（HVR1外区域）分离到中 和抗体
丙型肝炎实验室诊断
• HCV抗体测定
HCV引起HCC的机理
• 确切机理仍不清楚 • HCV核心蛋白在体外具有某些直接致癌作用 ： ⑴能使鼠胚胎纤维母细胞转化为恶性细胞 ⑵具有抑制凋亡作用 • HCV基因型对HCC的作用不一 • HCV相关HCC的发生与肝硬化有关 • 在各种原因所致的肝硬化中，其致HCC的危险性不 一
HCV相关其他危险因素
HCV基因结构的异质性
• E1区域，又称第一高变区(Hypervariable region ,HVR1)—90nt • 有些病毒存在着第二高变区(HVR2)，即在 E2/NS1区域近3’-末端处—21nt
基因型(Genotype)
• Okamoto--1,2,3,4型
• Enomoto--PT,K1,K2a,K2b型 • Simmonods--1a,1b,2a,2b型
l HCV至少存在6个基因型
l HCV亚型已超过50个，最常见的为1a,1b,2a,2b亚型1,2,3
型及其亚型分布世界各地： 4型主要分布在非洲，是扎伊尔及埃及的主要基因型
l
l
5型是南非的主要基因型
6型及其亚型主要发现在亚洲
HCV慢性感染与体液免疫
• HCV不能诱导保护性免疫
• HCV感染后恢复期的黑猩猩不能防止8种同种 或异种HCV再感染 • HCV慢性感染的人或黑猩猩可多次发生急性丙 肝或异种HCV重叠感染
HCC发生率
• 如果60%HCV感染患者发生慢性肝炎，其 中20%患者在10年内发生肝硬化，则HCV 感染患者的12%将发生肝硬化。 • 如估计HCC每年发生的危险性为1-4%，则 20年后，约1.2-4%的HCV感染者将发生 HCC，而1.9-6.7%得慢性肝炎及9.633.5%的肝硬化患者将发生HCC。
原-----代表了多种抗原 • 敏感性及特异性有改善 • HCV血清阳转平均窗口期（window periods） 明显缩短 • 血清阳转的平均时间 EIA-２----１０周左右 EIA-1------16周 • 阳性率为95%
筛选试验——HCV抗体测定
第三代HCV抗体测定
• EIA-3含有重建核心和NS3抗原及NS5抗原
RNA病毒基因变异生物学作用
• • • • • 免疫逃避作用，导致病毒的持续感染 耐药病毒株的产生 疫苗失败 减毒活疫苗恢复致病性等 HCV-RNA基因复杂程度与相关肝病进展有密切关 系
• 准基因越复杂，干扰素疗效也越差
HCV准基因株与宿主免疫反应
宿主体液及细胞免疫压力 病毒复制出错 HCV基因变异 逃避宿主免疫系统攻击作用 HCV持续感染
丙型肝炎进展
海南中医药研究所附属琼岛医院肝病中心
概述
l HCV是非甲非乙型肝炎的主要病因 l 起病隐匿，临床表现轻微，常导致慢性肝炎。 l 全球约1.7亿人感染过HCV l 1%－2%的美国人有HCV感染 l 我国乙型肝炎仍占大多数 l HBV重叠HCV感染的临床表现及病理改变更 • 加严重
Knodell肝组织评分
• 半定量方法 ,包括4个特征 :
⑴ 汇管区周围坏死（碎屑坏死）伴有或不伴有 桥样坏死 ⑵ 肝实质细胞损伤 ⑶ 汇管区炎症 ⑷ 纤维化
• 评价肝源自文库症及纤维化的分级和分期系统 即（G0-G4）（S0-S4）
• Knodell积分常用来排除主观因素，但在实际应用 中并不能完全排除
肝活检在丙肝中的作用
• 适应症 :
(1) 持续性或间歇性ALT异常>6月 (2) 疑有其他肝病如酒精性、脂肪肝或血色 病等
• 禁忌症：
(1)凝血功能严重异常 (2)终末期肝病
• 肝活检的不利因素 : (1) 产生并发症 (2) 患者拒绝 (3) 费用
肝炎活动度的评价
• 丙肝的组织学特征 :
⑴脂肪变性 ⑵淋巴细胞浸润或淋巴滤泡形成 ⑶胆管损伤 • 非绝对，偶出现在慢乙肝或自体免疫性肝病中 • 所有报道的特征性改变有所差异
• 抗体检测用酶免疫测定法（EIA）------优点 多，方便、重复性好、成本低 • EIA-1是用HCV-NS4基因段重组抗原，命名为 C100-3--------敏感性及特异性均不理想 • 仅80%患者HCV抗体阳性 • 假阳性很高
筛选试验——HCV抗体测定
第二代HCV抗体
• EIA-2(1992)试验含有NS4、核心及NS3基因抗
• 敏感性有增加(97%) • 血清阳转时间为2-3周
HCV抗体测定的其他试验
第二代RIBA-----抗HCV补充性试验 • • • • 内含抗原与EIA-2相同 但以免疫印迹形式 结果可解释为阳性、可疑及阴性 高危人群中的抗HCV阳性标本，没有必要行补 充试验 第三代补充试验（RIBA-3）其特异性更好
肝活检的重要性
• 是评价慢性丙肝自然史 • 为治疗方案的选择提供依据 ⑴预示干扰素治疗的反应率 ⑵决定何时开始、推迟或终止治疗 ⑶如果知道HCV感染时间，肝穿刺结果则可 推知其肝病进展概率 • 有助于证实其他肝病 ，如酒精性、非酒精性脂肪 肝或血色病等以便适当治疗
丙肝治疗后肝活检
• 目前仍没有统一意见。因此，除非特别 需要（如第二次治疗开始），一般不作 常规治疗后肝穿刺
• HCV抗体测定的其他试验 • 分子生物学的检测
★ 定性试验：检测血清中是否有HCV-RNA的存在 ★ 定量HCV-RNA测定：估计患者血清中HCV-RNA含量 ★ HCV-RNA基因分型：确定HCV-RNA基因性质
• 组织培养分离出的病原体对诊断非常有用
筛选试验——HCV抗体测定
第一代HCV抗体
• HCV基因型的筛选试验有 ：
(1)对HCV高度保守的5’-NC区域行限制性片段长度
多 型性分析（RFLP） (2)对HCV-5’NC区域行逆转录斑点杂交分析，又名 LIPA方法 (3)用型特异的引物对HCV核心基因巢式PCR。在临 床应用中RFLP与LIPA差异较小。 (4)病毒蛋白抗原性分型 • 评估HCV基因更大片段的验证性试验-----序列分析
341nt
C
E1
NS2
NS3
NS4A
B
NS5A
B
27.43nt
(A)nor )n
衣壳 高变区 包膜 蛋白 蛋白
疏水膜 蛋白
解旋酶 疏水 膜蛋白
RNA多聚酶
HCV基因结构模拟图
l
•
•
•
• •
3’NCR---高度变异、Poly(u)、Poly(u/c)及98个 碱基高度保守区组成 l 5’NCR--340核苷酸组成，形成一个环柄杆结 构(stem-loop) l两端中间为开放读框(ORF)--9000个核苷酸 l E1编码的糖蛋白可能不是单一蛋白，而有二 种或更多 l 3’端的ORF编码的非结构蛋白，至少包括6种 蛋白，包括蛋白酶、解旋酶、多种RNA聚合 酶及调节肽等 l 4a基因产生的调节肽具有多种功能
干扰素应用对象
• HCV抗体阳性或HCV-RNA阳性的慢性肝炎
患者 • ALT升高在正常上限的1.5倍以上 • 无严重其他并发症及精神异常 • 治疗前一年内曾行肝穿刺检查
治疗效果的标志
• ALT被认为是一种理想的反应被定义为治疗结束
为82.5，而单纯HCV感染其相对危险性仅为 6.6 • 饮酒：加剧慢性丙肝过程，加速发展成肝 硬化，酒精可增加循环中HCV-RNA含量 • 卟啉病
临床表现
• HBV相关HCC发病较HCV相关HCC为年轻
• HBV相关HCC中常伴有肝硬化，而HCV相 关HCC中几乎所有病例合并肝硬化 • HBV相关HCC其癌肿常为单个，而HCVHCC则开始就为多中心
丙型肝炎的治疗
干扰素治疗
• 具有抗病毒、抗纤维化及免疫调节作用 • 抗HCV的确切机理仍不清楚 • 目前常用的有四种-干扰素，即-2a、-2b、 -nI及-C • 其他类型干扰素尚待进一步评价
-干扰素
• -2b干扰素是用人白细胞-2b基因通过重组 DNA技术产生而成 • -2a干扰素也是人白细胞基因经重组DNA技术 产生，但其基因结构与-2b只相差一个氨基酸 • -nI干扰素是人淋巴母细胞产生的9个干扰素 亚型的复合物 • -C干扰素(a-consensus interferon) 是通过 筛选各种干扰素亚型，保留其相同的氨基酸， 形成一致的分子结构，然后根据此序列合成DNA， 再进行克隆产生
• • • • 估价血清中HCV-RNA水平 反映感染机体的病毒复制率及清除率 在未治疗的慢性丙肝机体内病毒负荷相对稳定 目前有二种方法可定量HCV-RNA水平，即靶扩 增技术如定量PCR方法及信号扩增技术如支链 DNA法
HCV基因型测定
• 检测基因型方法一般分为二类 ：
⑴ 检测HCV基因的点突变的筛选试验 ⑵ 评估HCV基因更大片段的验证性试验
HCV-RNA定性试验
• 逆转录PCR • RT-PCR方法各家不一，缺乏标准化 • 有许多因素影响着PCR方法，如标本处理及储存形 式，引物设计、扩增倍数、反应条件、DNA产物的 污染、扩增后产物检测系统等 • 严格的质控、操作人员的熟练程度尤为重要 • 药盒并不能完全保证结果的可靠性
HCV-RNA定量试验
HCV的发现
70年代中期发现为非甲非乙型肝炎 l 约2/3输血后肝炎是由非甲非乙型肝炎病毒所致 l 1978黑猩猩非甲非乙型肝炎模型确定是由病毒 • 引起 l 病毒生物学分子特性与黄病毒相似，后被命名 • 为HCV
l
HCV基因结构
5’NC
3010-3033aa E2/N S1
P7
3’NC
HCV诱导的持续慢性的机理
• • • • 宿主因素，如不能诱发保护性免疫 病毒因素，如病毒变异 与HCV-RNA整和到宿主基因无关 HCV诱导的宿主细胞及体液免疫反应不能预防 及清除HCV感染
HCV准基因株(Quacispecies)
• • • • • 大多数RNA病毒在复制过程中，易出错 在同一个体内很难找到完全相同的RNA基因 基因之间关系甚密，这就是所谓准基因株 病毒准基因围绕主要基因，数量以主要基因为主 感染某一时期，各基因的分布状态代表宿主与病 毒之间的最佳状态 • 主要基因起主要地位，是由于主要基因复制率较 高之故 • 免疫靶基因不单是主要基因，而是基因的复合体
丙型肝炎与肝细胞癌
HCV相关HCC流行病学
• HCV相关HCC主要发生在HCC发生率为中等的地区，如北 欧及日本 • 在HCC发生率较高地区，HCC仍以HBV感染为主 • 在意大利、西班牙及日本，约50-75%的HCC与HCV感染 有关 • 少数北欧国家如希腊，抗HCV阳性的HCC不到20% • 美国各地区差异很大 • 来自南佛罗里达洲一份报告，50%以上的HCC中抗HCV阳 性，许多患者为拉丁美洲人 • 来自Alaska报告，仅极少数HCC中可查到抗HCV，HCC的 主要原因仍为HBV感染 • Baltimore研究报道，约16%HCC患者抗HCV阳性，并且 大多数患者HCV-RNA阳性 • los Angelos的非亚洲的HCC患者约33%抗HCV阳性
丙肝的临床诊断
抗HCV（EIA-2）+ 确诊 PCR RIBA-2
阳性
肝穿 阴性
阴性
可疑
阳性
肝穿
排除 随访 排除
PCR
肝病严重程度的评估
• • • • 肝活检-----黄金标准 ALT水平------不能反映肝病的严重程度 血清HCV-RNA水平-----不能评价肝病的严重程度 HCV基因型----HCV-1b型与严重肝病之间无关系
ALT、HCV-RNA与肝组织学关系
• ALT异常者肯定有慢性肝病的存在，但ALT正
• • • • 常者不能保证肝组织正常 ALT水平不能预示肝病严重程度 ALT水平不能预示肝组织内汇管区浸润、淋巴 滤泡形成、胆管损伤及脂肪变性程度 HCV-RNA水平与肝组织学改变之间无相关，不 能预示肝病程度的严重性 关于血液检查各参数缺乏与肝组织相关的机理 仍不清楚 ：肝组织学改变的形成是动态因素 与静态因素综合之结果 ，而外周血参数的检 测，只反应检测当时的情况 。
HCV准基因株与宿主免疫反应
• 产生中和抗体 • 中和抗体清除病毒的能力极有限
★ ★
对所分离的病毒有作用 对准基因复合体无效
• HCV中和抗体主要作用部位在HVR1区 • HVR1基因的变化是体液免疫作用的结果 • 最近又发现E2保守区（HVR1外区域）分离到中 和抗体
丙型肝炎实验室诊断
• HCV抗体测定
HCV引起HCC的机理
• 确切机理仍不清楚 • HCV核心蛋白在体外具有某些直接致癌作用 ： ⑴能使鼠胚胎纤维母细胞转化为恶性细胞 ⑵具有抑制凋亡作用 • HCV基因型对HCC的作用不一 • HCV相关HCC的发生与肝硬化有关 • 在各种原因所致的肝硬化中，其致HCC的危险性不 一
HCV相关其他危险因素
HCV基因结构的异质性
• E1区域，又称第一高变区(Hypervariable region ,HVR1)—90nt • 有些病毒存在着第二高变区(HVR2)，即在 E2/NS1区域近3’-末端处—21nt
基因型(Genotype)
• Okamoto--1,2,3,4型
• Enomoto--PT,K1,K2a,K2b型 • Simmonods--1a,1b,2a,2b型
l HCV至少存在6个基因型
l HCV亚型已超过50个，最常见的为1a,1b,2a,2b亚型1,2,3
型及其亚型分布世界各地： 4型主要分布在非洲，是扎伊尔及埃及的主要基因型
l
l
5型是南非的主要基因型
6型及其亚型主要发现在亚洲
HCV慢性感染与体液免疫
• HCV不能诱导保护性免疫
• HCV感染后恢复期的黑猩猩不能防止8种同种 或异种HCV再感染 • HCV慢性感染的人或黑猩猩可多次发生急性丙 肝或异种HCV重叠感染
HCC发生率
• 如果60%HCV感染患者发生慢性肝炎，其 中20%患者在10年内发生肝硬化，则HCV 感染患者的12%将发生肝硬化。 • 如估计HCC每年发生的危险性为1-4%，则 20年后，约1.2-4%的HCV感染者将发生 HCC，而1.9-6.7%得慢性肝炎及9.633.5%的肝硬化患者将发生HCC。
原-----代表了多种抗原 • 敏感性及特异性有改善 • HCV血清阳转平均窗口期（window periods） 明显缩短 • 血清阳转的平均时间 EIA-２----１０周左右 EIA-1------16周 • 阳性率为95%
筛选试验——HCV抗体测定
第三代HCV抗体测定
• EIA-3含有重建核心和NS3抗原及NS5抗原
RNA病毒基因变异生物学作用
• • • • • 免疫逃避作用，导致病毒的持续感染 耐药病毒株的产生 疫苗失败 减毒活疫苗恢复致病性等 HCV-RNA基因复杂程度与相关肝病进展有密切关 系
• 准基因越复杂，干扰素疗效也越差
HCV准基因株与宿主免疫反应
宿主体液及细胞免疫压力 病毒复制出错 HCV基因变异 逃避宿主免疫系统攻击作用 HCV持续感染
丙型肝炎进展
海南中医药研究所附属琼岛医院肝病中心
概述
l HCV是非甲非乙型肝炎的主要病因 l 起病隐匿，临床表现轻微，常导致慢性肝炎。 l 全球约1.7亿人感染过HCV l 1%－2%的美国人有HCV感染 l 我国乙型肝炎仍占大多数 l HBV重叠HCV感染的临床表现及病理改变更 • 加严重
Knodell肝组织评分
• 半定量方法 ,包括4个特征 :
⑴ 汇管区周围坏死（碎屑坏死）伴有或不伴有 桥样坏死 ⑵ 肝实质细胞损伤 ⑶ 汇管区炎症 ⑷ 纤维化
• 评价肝源自文库症及纤维化的分级和分期系统 即（G0-G4）（S0-S4）
• Knodell积分常用来排除主观因素，但在实际应用 中并不能完全排除
肝活检在丙肝中的作用
• 适应症 :
(1) 持续性或间歇性ALT异常>6月 (2) 疑有其他肝病如酒精性、脂肪肝或血色 病等
• 禁忌症：
(1)凝血功能严重异常 (2)终末期肝病
• 肝活检的不利因素 : (1) 产生并发症 (2) 患者拒绝 (3) 费用
肝炎活动度的评价
• 丙肝的组织学特征 :
⑴脂肪变性 ⑵淋巴细胞浸润或淋巴滤泡形成 ⑶胆管损伤 • 非绝对，偶出现在慢乙肝或自体免疫性肝病中 • 所有报道的特征性改变有所差异
• 抗体检测用酶免疫测定法（EIA）------优点 多，方便、重复性好、成本低 • EIA-1是用HCV-NS4基因段重组抗原，命名为 C100-3--------敏感性及特异性均不理想 • 仅80%患者HCV抗体阳性 • 假阳性很高
筛选试验——HCV抗体测定
第二代HCV抗体
• EIA-2(1992)试验含有NS4、核心及NS3基因抗
• 敏感性有增加(97%) • 血清阳转时间为2-3周
HCV抗体测定的其他试验
第二代RIBA-----抗HCV补充性试验 • • • • 内含抗原与EIA-2相同 但以免疫印迹形式 结果可解释为阳性、可疑及阴性 高危人群中的抗HCV阳性标本，没有必要行补 充试验 第三代补充试验（RIBA-3）其特异性更好
肝活检的重要性
• 是评价慢性丙肝自然史 • 为治疗方案的选择提供依据 ⑴预示干扰素治疗的反应率 ⑵决定何时开始、推迟或终止治疗 ⑶如果知道HCV感染时间，肝穿刺结果则可 推知其肝病进展概率 • 有助于证实其他肝病 ，如酒精性、非酒精性脂肪 肝或血色病等以便适当治疗
丙肝治疗后肝活检
• 目前仍没有统一意见。因此，除非特别 需要（如第二次治疗开始），一般不作 常规治疗后肝穿刺
• HCV抗体测定的其他试验 • 分子生物学的检测
★ 定性试验：检测血清中是否有HCV-RNA的存在 ★ 定量HCV-RNA测定：估计患者血清中HCV-RNA含量 ★ HCV-RNA基因分型：确定HCV-RNA基因性质
• 组织培养分离出的病原体对诊断非常有用
筛选试验——HCV抗体测定
第一代HCV抗体
• HCV基因型的筛选试验有 ：
(1)对HCV高度保守的5’-NC区域行限制性片段长度
多 型性分析（RFLP） (2)对HCV-5’NC区域行逆转录斑点杂交分析，又名 LIPA方法 (3)用型特异的引物对HCV核心基因巢式PCR。在临 床应用中RFLP与LIPA差异较小。 (4)病毒蛋白抗原性分型 • 评估HCV基因更大片段的验证性试验-----序列分析
341nt
C
E1
NS2
NS3
NS4A
B
NS5A
B
27.43nt
(A)nor )n
衣壳 高变区 包膜 蛋白 蛋白
疏水膜 蛋白
解旋酶 疏水 膜蛋白
RNA多聚酶
HCV基因结构模拟图
l
•
•
•
• •
3’NCR---高度变异、Poly(u)、Poly(u/c)及98个 碱基高度保守区组成 l 5’NCR--340核苷酸组成，形成一个环柄杆结 构(stem-loop) l两端中间为开放读框(ORF)--9000个核苷酸 l E1编码的糖蛋白可能不是单一蛋白，而有二 种或更多 l 3’端的ORF编码的非结构蛋白，至少包括6种 蛋白，包括蛋白酶、解旋酶、多种RNA聚合 酶及调节肽等 l 4a基因产生的调节肽具有多种功能
干扰素应用对象
• HCV抗体阳性或HCV-RNA阳性的慢性肝炎
患者 • ALT升高在正常上限的1.5倍以上 • 无严重其他并发症及精神异常 • 治疗前一年内曾行肝穿刺检查
治疗效果的标志
• ALT被认为是一种理想的反应被定义为治疗结束