牛肉膏蛋白胨培养基配制与灭菌方法
实验五 牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌
实验五牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一实验目的：掌握培养基的配制原则与方法；熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项；二实验材料：器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。
试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等三实验原理：牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
四实验步骤：1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备（1）称量准确称取各种成分。
一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放称量纸上称量，然后连同称量纸一起放入烧杯中。
（2）溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，加热搅拌全溶后稍放冷。
（4）调pH值精密pH试纸测定其pH值，并用NaOH调至所需pH值（5）分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。
注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
（6）包扎试管扎成捆。
纸上表明培养基的名称、配制日期等。
（7）灭菌培养基用0.1Mpa高压蒸汽灭菌15~20min，五注意事项1.要严格按配方配制。
2.调pH不要过头。
3.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。
配方：牛肉膏：1.5g 蛋白胨5.0g 氯化钠2.5g水500mL 琼脂 7.5g pH 7.2。
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
各种培养基配方
146种培养基配方【1】1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼脂20g水1000mLpH 7.2～7.4121查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红（rose bengal，玫瑰红水溶液）100mL琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制： (1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。
常用培养基制备灭菌与消毒方法
消毒与灭菌
消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体 灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。
方法：
物理的方法：加热、过滤、辐射 化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破
坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗 生素等。
常用培养基制备灭菌和消毒方法
加热法：
干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌
常用培养基制备灭菌和消毒方法
常用培养基制备灭菌和消毒方法
常压蒸汽灭菌：
对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳 培养基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用 间歇灭菌方法。 煮沸灭菌法： 适用注射器和解剖器皿，时间10－15min， 超高温杀菌 135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。
常用培养基制备灭菌和消毒方法
常用培养基制备灭菌和消毒方法
湿热法 ：
原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固， 因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿 热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干 热好。
高压蒸汽灭菌法： 1、设备：高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有
所变化。 3、适用于养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，
养箱 中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃
高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的 合成培养基。其配方如下：
可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g， K2HPO4·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂15～ 20g，水1000mL，pH7.4～7.6。
常用培养基制备灭菌和消毒方法
也可用于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项：
1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为 “0”时方可打开。
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化
，必须原创
牛肉膏蛋白胨（Bacto-Proteose-Peptone，由蛋白质和多种水解物组成）培养基是分
离和纯化微生物的优质培养基，它可为微生物提供养分、气味和增强细胞代谢的稳定性，
有利于微生物的成长和繁殖，因此被广泛应用于细菌的鉴别、分离、纯化研究。
本实验介
绍牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化。
1、配制牛肉膏：将牛肉的去油干片以40倍的水为底料，煮沸约30min，冷却至室温
后用离心设备至0.75—1％的浊度；
2、添加蛋白质：分别将卵白袋、硝酸蛋白、胱蛋白分别以大约6:2:2的比例添加到
牛肉膏液中，再将二次离心液收集并稀释成1:200；
3、添加添加剂：用 0.1N 的 NaOH 调盐，加入 0.2 ％的 Na2CO3、1.0 ％的 K2HPO4 和 0.007 ％的 MnCl2，使液体 pH 值为7.2 ± 0.2。
二、微生物的分离与纯化：
1、微生物的分离：将牛肉膏蛋白胨作为培养介质，以碗杯离心法将培养基放在26-28℃的恒温器中培养24-48h；
2、筛选：用滤筛得到培养液粒子，将其留在高性能液相色谱仪（HPLC）上；
3、纯化：用不同浓度的氯化钾，盐酸混合溶液或二乙醇胺溶液去除悬浮粒子，再用
离子交换树脂法去除其他污染物，萃取物可用电泳分离成单体；
4、鉴定：根据抗原或抗体鉴定微生物，将其分类编号。
三、结论：
经过牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化实验，成功地实现了牛肉膏蛋
白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化。
通过该实验，我们可以进一步学习、提高分离
微生物的能力，为临床抗感染药物的研究提供有力的支持。
微生物学实验常用培养基的配制
牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化10g钠琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL 121℃灭菌20min。
2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀20g粉硝酸钾1g氯化0.5g钠磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼20g脂水1000mLpH7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红100mL（rose bengal，玫瑰红水溶液）琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
配置牛肉膏蛋白胨培养基的操作步骤
配置牛肉膏蛋白胨培养基的操作步骤
嘿，朋友们！今天咱就来讲讲怎么配置牛肉膏蛋白胨培养基，这可是个很有趣的事儿呢！
先准备好各种材料，就像厨师做菜前要把食材都备好一样。
你得有牛肉膏，这可是培养基的重要成分，就像菜里的盐，少了它可不行。
还有蛋白胨，那也是宝贝呀，能给微生物提供丰富的营养。
然后就是氯化钠，就像是给培养基加点味道。
再加上琼脂，这琼脂啊，就像是给微生物搭个小房子，让它们能舒舒服服地待着。
接下来，就是动手操作啦！把这些材料按照一定的比例放到水里，就像是调一碗特别的汤。
这可不是随便搅和搅和就行的，得仔细点，不然比例不对，培养基可就不完美啦。
然后，把这锅“汤”放到火上加热，让它们慢慢融合在一起。
看着它们咕嘟咕嘟地冒泡，你是不是觉得很有意思呀？就好像在看着一群小精灵在跳舞。
等它们都融合好了，就可以分装啦。
把这热乎乎的培养基分到一个个小瓶子或者培养皿里，可别洒出来哦，就像给小朋友分糖果一样，要公平公正。
然后把它们盖好盖子，就等着它们冷却凝固啦。
凝固后的培养基，就像是一个个小蛋糕，等待着微生物们来大快朵颐。
你想想，那些小小的微生物在上面快乐地生长，是不是很神奇？
这配置牛肉膏蛋白胨培养基呀，说难也不难，说简单也不简单。
就好像骑自行车，一开始可能会摇摇晃晃，但多练几次就熟练啦。
你只要认真去做，肯定能成功的。
而且当你看到自己配置的培养基培养出了好多微生物，那种成就感，简直没法形容！
所以呀，别害怕，大胆去尝试吧！让我们一起在微生物的世界里遨游，感受科学的魅力！。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基配方成分克/升牛肉膏10.0胨5.0酵母粉5.0盐5.0葡萄糖1.0琼脂15.0酚红0.025培养基PH值调整至7.0±0.2，于121℃高压灭菌20分钟即可。
下面解释每个成分的作用和影响：1.牛肉膏：提供氮源、维生素和矿物质，为微生物提供生长所需的营养物质。
3.酵母粉：富含维生素B群和其他营养物质，能够促进微生物的生长。
4.盐：提供微量元素，维持细胞内渗透平衡。
5.葡萄糖：提供微生物的碳源和能量，促进微生物的繁殖。
6.琼脂：用于凝固培养基，使其固化，提供坚固的基质，方便微生物生长。
7.酚红：作为指示剂，用于检测培养基的酸碱度，在碱性条件下呈现红色。
配方中的每个成分都起到了重要的作用，为微生物的生长提供了必要的营养物质。
同时，配方还可以根据需要进行适当的改动和调整，以满足特定微生物的生长需求。
在制备培养基时，需要注意的事项有：1.每个成分的浓度：每个成分的浓度都对微生物的生长产生影响，需要严格按照配方中的比例加入。
2.PH值调整：PH值对微生物的生长也有影响，需要根据具体的需求和微生物的要求进行调整。
3.培养基的制备和高压灭菌：制备培养基时，要注意加热和溶解的过程，确保所有成分充分溶解。
高压灭菌可以杀灭培养基中的细菌和其他微生物，保证培养基的无菌状态。
总结起来，牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的培养基，通过提供丰富的营养物质，可以有效地支持微生物的生长和繁殖。
配方中的每个成分都具有重要的功能和作用，制备时需要注意每个成分的浓度和PH值的调整。
此外，高压灭菌可以保证培养基的无菌状态。
通过合理的制备和使用，牛肉膏蛋白胨培养基可以为微生物学实验和研究提供坚实的基础。
牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌讲义
实验一牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一、目的要求1．明确培养基的配制原理。
2．通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
3．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。
4．学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl 提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl5g 琼脂15—20g 水1000mlpH7.4—7.6三、器材牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH，1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5.5—9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很容易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
牛肉膏蛋白胨培养基
1、实验原理
牛肉膏蛋白胨培养基是细菌学研究最常用的天然培养基。
在配方中不加琼脂时称之为肉汤培养基。
加入琼脂配制的固体培养基一般用于细菌的分离、培养和测数等。
2、培养基配方
牛肉膏5.0g、蛋白胨10.0g、NaC1 5.0g、琼脂20.0g、自来水1000 mL、pH7.0。
3、操作步骤
⑴在100 mL小烧杯中称取牛肉膏5.0g、蛋白胨10.0g，加50 mL自来水，置电炉搅拌加热至牛肉膏、蛋白胨完全溶解。
⑵向小铝锅中加入500 mL自来水，将溶解的牛肉膏、蛋白胨倒入铝锅中并用自来水洗2～3次。
加入5.0gNaC1，在电炉上边加热边搅拌。
⑶加入洗净的琼脂条，继续搅拌，加热至琼脂完全熔化，补足水量至1000 mL。
⑷用玻棒沾少许液体，用pH试纸测定pH值。
用NaOH或HC1调至pH7.0。
⑸分装漏斗分装于10mm×180mm试管中，塞好棉塞，装入小铁丝筐，然后用旧报纸将棉塞部分包好。
★是否可以搁置几天后进行灭菌？
⑹高压蒸汽灭菌，121℃灭菌30min。
⑺灭菌后摆放斜面。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基配方
配方：
1.牛肉膏粉：10克
2.蛋白胨：10克
3.氯化钠：5克
4.水：1000毫升
制备过程：
1.将牛肉膏粉、蛋白胨和氯化钠加入烧杯中。
2.加入适量的水，充分搅拌，直到完全溶解。
3.将溶液转移到一个大容量瓶中。
4.加入适量的水，使总体积达到1000毫升。
5.用盖子或气密塞封闭瓶口，避免细菌的污染。
6.将培养基在121摄氏度的高压灭菌器中高压灭菌20分钟。
7.灭菌后，将培养基冷却至室温，并存储在4摄氏度的冰箱中。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种富含营养物质的培养基，适用于广泛的细菌种类。
牛肉膏提供了蛋白质、胆碱和其他有机物质，支持细菌的生长。
蛋白胨是由动物和植物的蛋白质消化得到的营养物质，富含氨基酸，可提供能量和生长因子。
氯化钠提供细菌所需的离子平衡。
制备好的牛肉膏蛋白胨培养基可用于分离和培养广谱细菌。
在培养细菌时，可以向培养基中添加其他适当的抗生素或指示剂来选择特定的细菌
菌种。
此外，还可以向培养基中添加其他营养物质，如血清、糖类、氨基酸等，以增强培养基的适用性，满足特定细菌的生长需求。
总结：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基，它以富含营养的牛肉膏和蛋白胨为基础，提供了细菌所需的能量、氨基酸和生长因子。
配方简单，制备过程相对简单，适用于广泛的细菌菌种的培养。
根据具体的实验需求，可以对配方进行适当的修改和补充，以提高培养基的适用性和选择性。
牛肉膏蛋白胨培养基的配制与灭菌
目录
• 牛肉膏蛋白胨培养基的简介 • 牛肉膏蛋白胨培养基的配制 • 牛肉膏蛋白胨培养基的灭菌 • 牛肉膏蛋白胨培养基的应用 • 总结与展望
01
牛肉膏蛋白胨培养基的简介
定义与用途
定义
牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用 的基础培养基，以牛肉膏和蛋白 胨为主要成分。
用途
常用于培养细菌，如大肠杆菌、 沙门氏菌等。
组成成分
牛肉膏
提供细菌生长所需的碳源、氮源、维生素和矿物质。
蛋白胨
提供细菌生长所需的氮源和维生素。
氯化钠
维持培养基渗透压，调节细菌生长环境。
琼脂
凝固培养基，形成固体培养基。
培养基的理化性质
pH值
适宜细菌生长的pH值为7.2-7.4。
渗透压
适当的渗透压有利于细菌的生长和繁殖。
营养成分
牛肉膏和蛋白胨提供了丰富的营养成分，满足细 菌生长所需。
加入琼脂粉
将溶解好的琼脂粉加入上 述溶液中，继续加热并搅
拌至完全溶解。
01
02
03
04
05
称量试剂
按照配方比例称取适量的节pH值
使用酸或碱调节培养基的 pH值至7.2-7.4。
灭菌处理
将配制好的培养基分装到 灭菌的培养皿或试管中，
进行高压蒸汽灭菌。
注意事项
避免交叉污染
在配制过程中，要避免培养基与 其他物品接触，以免交叉污染。
储存与使用
配制好的培养基应储存于干燥、 阴凉处，避免阳光直射；在使用 前应检查培养基是否有杂菌污染 。
01
严格控制pH值
pH值对细菌的生长有重要影响 ，应确保培养基的pH值在合适 的范围内。
简述牛肉膏蛋白胨培养基制备的基本流程
简述牛肉膏蛋白胨培养基制备的基本流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌
牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌一、实验目的：1、学习并掌握培养基配制的原理，掌握配制牛肉膏蛋白胨培养基的方法和步骤。
2、学习并了解高压蒸汽灭菌的原理和操作技术。
二、实验原理：（一）微生物分离与纯化1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
三、实验仪器和试剂1、仪器：分析天平；锥形瓶；移液管；高温电炉；容量瓶；烧杯；无菌培养皿；pH试纸；胶头滴管；玻璃试管；酒精灯；高压蒸气锅；玻璃棒；2、试剂：牛肉膏；蛋白胨； NaCl ；琼脂；蒸馏水；四、实验步骤：（一）分离纯化制备试验菌种的菌悬液1、培养基的配置配置牛肉膏蛋白胨的液体培养基，待培养基冷却后进行分装。
将分装完毕后的培养基进行高压蒸汽灭菌；①称量：按试验用微生物培养基配方，逐一称取各种药品放入烧杯中。
液体培养基配方：②溶解：将去蒸馏水加入到上述烧杯中使各种成分溶解，难溶的物质，例如蛋白胨、加热促进其溶解，待全部溶解后，加水补足加热蒸发的水量。
制备固体培养基，加热融化琼脂时要不断的搅拌，避免琼脂糊底烧焦。
③调节pH值；初配好的培养基往往不能符合所需要的pH值，故需用pH试纸检测，并以一定浓度的盐酸溶液和氢氧化钠溶液调节培养基溶液pH值至7—8。
④分装：将调节好pH值的培养基分装于十支试管和两个锥形瓶中(注意防止培养基沾污管口或瓶口，避免浸湿橡皮塞塞引起杂菌污染)。
分装液体培养基时，每支试管装的量为试管高度的1/3～1/2，锥形瓶中各加入250—300ml培养基。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基配方Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌（荤食），因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、NaCl 5g、琼脂 15—20g、水 1000ml、pH 7．4—7．6（—）三、器材牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（ pH 5．5—9．0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。
培养基的制作实验报告
一、实验目的1. 掌握培养基的配制原理和方法。
2. 了解培养基在微生物培养中的应用。
3. 熟悉灭菌和消毒的方法及注意事项。
二、实验原理培养基是微生物生长繁殖所必需的营养物质混合物。
根据微生物种类和实验目的，培养基的配方和种类有所不同。
本实验以牛肉膏蛋白胨培养基为例，介绍培养基的配制、灭菌和消毒方法。
三、实验材料与试剂1. 材料：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、pH试纸等。
2. 试剂：1M HCl、1M NaOH、无菌水等。
四、实验步骤1. 培养基配制（1）称取牛肉膏10g、蛋白胨10g、氯化钠5g，加入1000ml蒸馏水；（2）加入琼脂15g，搅拌均匀；（3）将混合液煮沸，溶解琼脂；（4）用pH试纸检测培养基pH值，调节至7.0-7.2；（5）将培养基冷却至50-60℃，过滤去除杂质；（6）分装至灭菌试管中，每管10ml。
2. 灭菌（1）将装有培养基的试管放入高压蒸汽灭菌锅中；（2）关闭锅盖，加热至压力达到0.1MPa，维持15-20分钟；（3）待压力降至0时，打开锅盖，取出灭菌试管。
3. 消毒（1）将灭菌后的试管置于超净工作台；（2）用无菌镊子取出试管，放入无菌培养皿中；（3）用酒精灯对试管进行消毒；（4）将培养皿放入培养箱中，待培养基凝固。
五、实验结果与分析1. 培养基配制：按照实验步骤，成功配制了牛肉膏蛋白胨培养基。
2. 灭菌：高压蒸汽灭菌法能够有效杀死培养基中的微生物，保证培养基的无菌状态。
3. 消毒：酒精灯消毒可以进一步降低培养基的污染风险。
六、实验讨论1. 在培养基配制过程中，应注意控制pH值，以保证微生物的正常生长。
2. 灭菌和消毒是保证培养基无菌的关键环节，应严格按照操作规程进行。
3. 实验过程中，应注重无菌操作，避免外界微生物的污染。
七、实验结论通过本次实验，掌握了培养基的配制、灭菌和消毒方法，为微生物培养提供了基础条件。
在实验过程中，应严格遵守无菌操作规程，确保实验结果的准确性。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基.它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl.其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用.固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌（荤食)，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖.牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂15—20g、水1000ml、pH 7．4-7．6(7.0-8。
0)三、器材牛肉膏，蛋白胨, NaCl，琼脂；1mol/L NaOH，1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒,玻棒,培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸( pH 5．5—9．0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。
最后补足所失的水分。
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（一）干热灭菌法 1.火焰灭菌法 2.热空气灭菌法 140~160℃2~3h
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（二）湿热灭菌法 1.高压蒸汽灭菌法 121℃ 20~30min 2.常压蒸汽灭菌法 3.常压间歇灭菌法
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（三）过滤除菌 薄膜滤菌器0.22μm和0.45μm
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（四）紫外线杀菌 240~280nm波段紫外线杀菌力较强 多以253.7nm作为紫外线杀菌波长 特点：穿透力弱 超净工作台：
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2.培养基：
培养基分 液体、半固体和固体 3种 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌扩 大培养； 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细 菌
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（1）固体培养基配置
牛肉膏蛋白胨培养基
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
琼脂 15-20g
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（五）药物杀菌 1.酒精 2.新洁尔灭
21
（三）认识微生物培养所需的仪器设备
1.培养平板
22
2.试管与棉塞
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3.接种环，涂布棒
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4.高温高压蒸汽灭菌锅
25
p42 高压蒸汽灭菌
请回顾灭菌锅的操作方法
26
1）用之前检查水位及水质。若水质不好，需换水 2）放置灭菌物品，勿过满；瓶子灭菌，瓶盖拧松 3）盖上锅盖，相对的两个螺帽一起拧 4）启动加热，同时打开放气阀；检查安全阀是否关上。 调整温度时间121℃ 15min。 5）待排气阀冒出大量热气并持续约2~5min后排尽冷空 气后，再将其关闭； 6）灭菌结束，待压力下降至0，可打开放气阀，之后开 盖。注意防止烫伤 7）固体物品可进行干燥；液体物品冷却后拧紧。尽量 避免二次污染。
38
请大家查询LB培养基配方 每组配置LB液体培养基50mL于锥形瓶中，包扎 好瓶口（纱布+牛皮纸/报纸）后灭菌 请大家先写出1L的配方，然后再写出50mL的配 方
39
1.固体物品的灭菌
√
2.配制培养基并进行灭菌 √
7
安全操作与标准操作
8
1 微生物吃什么？
（一）微生物培养基的制备 （二）微生物的消毒灭菌 （三）认识微生物培养所需的仪器设备
9
（一）微生物培养基的制备
培养基：是人工配制的、适合微生物生长繁殖或 产生代谢产物的营养物质。 满足微生物生长发育的水分、C，N，生长因子， P，S，Na，Ca等 适宜的酸碱度、一定的缓冲能力、一定的氧化还 原电位，合适的渗透压
10
根据物理状态划分
培养基分 液体、半固体和固体 3种 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌扩 大培养； 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细 菌
11
培养基的配制原则
1.选择适宜的营养物质 实验室中常用：
不同微生物所需培养基各不同
牛肉膏蛋白胨培养基
牛肉膏蛋白胨培养基的配 制和灭菌方法
1
一、复习 二、实验：配培养基与灭菌 三、斜面的划线培养 四、倒平板的操作 五、平板划线培养
2
一、复习
3
4
《微生物培养与检验》主要课程内容
1.微生物营养需求 2.微生物形态 3.微生物纯化、分离 4.微生物培养、筛选与保存 5.微生物检验
5
课程内容
1
微生物吃什么？
27
5.鼓风干燥箱
28
6.超净工作台
29
每次使用前，先用75%酒精（或新洁尔灭）擦洗 台面，并提前用紫外线灭菌灯照射15~30min处 理净化工作区内积存的微生物；关闭灭菌灯后应 启动风机使之运转2min后再进行培养操作；工 作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流 流型不受干扰；使用完毕应及时清理工作台面上 的物品并用酒精擦拭台面使之始终保持洁净。
2 微生物长的什么样？
3 如何得到微生物？
4 如何保存微生物？
5 我很爱吃熟食（猪头肉），但是听说 熟食微生物超标，这是怎么检测的？
6
LOGO
规则：
1.上课不迟到：第1、5节课，提 前10min到教室 2.下课前，自己的实验物品归类， 该清洗的清洗，该收拾的收拾 3.值日生负责擦黑板、扫地、擦 桌；为大家做好服务工作 4.上课时间请不要玩手机
细菌
高氏一号
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
放线菌
麦芽汁培养基
酵母菌
察氏培养基
霉菌
12
2.营养物质的浓度及配比合适 3.控制pH条件 细菌和放线菌：pH7.0~7.5 酵母菌和霉菌：pH4.5~6.0 4.控制氧化还原电位 5.原料来源的选择 尽量利用廉价且易获得的原料作为培养基成分
13
6.灭菌处理 避免杂菌污染，要对所用器械及工作场所进行消 毒与灭菌 培养基一般采取高压蒸汽灭菌，一般培养基 0.1MPa，121.3℃ 15~30min
30
7.微量移液器的使用
31
今天的工作：
1.固体物品的灭菌 2.配制培养基并进行灭菌 3.学习倒平板 4.学习斜面培养基制作 5.超净台的准备 6.划线接种 7.灭菌效果检查
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开始实验
1.固体物品： 1）平皿（6只/组） 2）试管与棉塞/塑料封口（6只/组）的包扎 3）灭菌蓝色、黄色和白色枪头 将以上物品放入灭菌锅中进行灭菌121℃ 20min
pH 7.4-7.6，加水至1 000mL；若需分装，需先融化，摇
匀后分
于121℃高压灭菌15~20min备用
用途：普通细菌常用的培养基
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请大家配制：
请大家查看“营养琼脂”的成分与配制说明，每组 配置牛肉膏蛋白胨固体培养基150mL于锥形瓶 中 请大家先写出1L的配方，然后再写出150mL的 配方
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配制完毕，将配制好的培养基装入锥形瓶内， 瓶口塞上棉塞，用牛皮纸/报纸包扎瓶口，标 注好组别，进行高温高压蒸汽灭菌
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（2）液体培养基
为固体培养基中不含琼脂 牛肉膏蛋白胨培养液
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
pH 7.4-7.6，加水至1 000mL 于121℃高压灭菌15~20min备用 用途：普通细菌常用的培养基
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（二）微生物的消毒灭菌
灭菌指利用物理和化学的方法杀灭或除去物料及 设备中一切生命物质的过程。 消毒是指用物理或化学的方法杀死物料、容器、 器具内外的病原微生物，一般只能杀死营养细胞 而不能杀死芽孢。 消毒不一定能达到灭菌的要求，而灭菌则可达到 消毒的目的 无菌
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消毒灭菌方法：
（一）干热灭菌法 （二）湿热灭菌法 （三）过滤除菌 （四）紫外线杀菌 （五）药物杀菌