牛肉膏蛋白胨培养基配制与灭菌方法
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7
安全操作与标准操作
8
1 微生物吃什么？
（一）微生物培养基的制备 （二）微生物的消毒灭菌 （三）认识微生物培养所需的仪器设备
9
（一）微生物培养基的制备
培养基：是人工配制的、适合微生物生长繁殖或 产生代谢产物的营养物质。 满足微生物生长发育的水分、C，N，生长因子， P，S，Na，Ca等 适宜的酸碱度、一定的缓冲能力、一定的氧化还 原电位，合适的渗透压
10
Baidu Nhomakorabea
根据物理状态划分
培养基分 液体、半固体和固体 3种 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌扩 大培养； 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细 菌
11
培养基的配制原则
1.选择适宜的营养物质 实验室中常用：
不同微生物所需培养基各不同
牛肉膏蛋白胨培养基
细菌
高氏一号
放线菌
麦芽汁培养基
酵母菌
察氏培养基
霉菌
12
2.营养物质的浓度及配比合适 3.控制pH条件 细菌和放线菌：pH7.0~7.5 酵母菌和霉菌：pH4.5~6.0 4.控制氧化还原电位 5.原料来源的选择 尽量利用廉价且易获得的原料作为培养基成分
13
6.灭菌处理 避免杂菌污染，要对所用器械及工作场所进行消 毒与灭菌 培养基一般采取高压蒸汽灭菌，一般培养基 0.1MPa，121.3℃ 15~30min
30
7.微量移液器的使用
31
今天的工作：
1.固体物品的灭菌 2.配制培养基并进行灭菌 3.学习倒平板 4.学习斜面培养基制作 5.超净台的准备 6.划线接种 7.灭菌效果检查
32
开始实验
1.固体物品： 1）平皿（6只/组） 2）试管与棉塞/塑料封口（6只/组）的包扎 3）灭菌蓝色、黄色和白色枪头 将以上物品放入灭菌锅中进行灭菌121℃ 20min
16
（一）干热灭菌法 1.火焰灭菌法 2.热空气灭菌法 140~160℃2~3h
17
（二）湿热灭菌法 1.高压蒸汽灭菌法 121℃ 20~30min 2.常压蒸汽灭菌法 3.常压间歇灭菌法
18
（三）过滤除菌 薄膜滤菌器0.22μm和0.45μm
19
（四）紫外线杀菌 240~280nm波段紫外线杀菌力较强 多以253.7nm作为紫外线杀菌波长 特点：穿透力弱 超净工作台：
14
（二）微生物的消毒灭菌
灭菌指利用物理和化学的方法杀灭或除去物料及 设备中一切生命物质的过程。 消毒是指用物理或化学的方法杀死物料、容器、 器具内外的病原微生物，一般只能杀死营养细胞 而不能杀死芽孢。 消毒不一定能达到灭菌的要求，而灭菌则可达到 消毒的目的 无菌
15
消毒灭菌方法：
（一）干热灭菌法 （二）湿热灭菌法 （三）过滤除菌 （四）紫外线杀菌 （五）药物杀菌
38
请大家查询LB培养基配方 每组配置LB液体培养基50mL于锥形瓶中，包扎 好瓶口（纱布+牛皮纸/报纸）后灭菌 请大家先写出1L的配方，然后再写出50mL的配 方
39
1.固体物品的灭菌
√
2.配制培养基并进行灭菌 √
牛肉膏蛋白胨培养基的配 制和灭菌方法
1
一、复习 二、实验：配培养基与灭菌 三、斜面的划线培养 四、倒平板的操作 五、平板划线培养
2
一、复习
3
4
《微生物培养与检验》主要课程内容
1.微生物营养需求 2.微生物形态 3.微生物纯化、分离 4.微生物培养、筛选与保存 5.微生物检验
5
课程内容
1
微生物吃什么？
20
（五）药物杀菌 1.酒精 2.新洁尔灭
21
（三）认识微生物培养所需的仪器设备
1.培养平板
22
2.试管与棉塞
23
3.接种环，涂布棒
24
4.高温高压蒸汽灭菌锅
25
p42 高压蒸汽灭菌
请回顾灭菌锅的操作方法
26
1）用之前检查水位及水质。若水质不好，需换水 2）放置灭菌物品，勿过满；瓶子灭菌，瓶盖拧松 3）盖上锅盖，相对的两个螺帽一起拧 4）启动加热，同时打开放气阀；检查安全阀是否关上。 调整温度时间121℃ 15min。 5）待排气阀冒出大量热气并持续约2~5min后排尽冷空 气后，再将其关闭； 6）灭菌结束，待压力下降至0，可打开放气阀，之后开 盖。注意防止烫伤 7）固体物品可进行干燥；液体物品冷却后拧紧。尽量 避免二次污染。
pH 7.4-7.6，加水至1 000mL；若需分装，需先融化，摇
匀后分
于121℃高压灭菌15~20min备用
用途：普通细菌常用的培养基
35
请大家配制：
请大家查看“营养琼脂”的成分与配制说明，每组 配置牛肉膏蛋白胨固体培养基150mL于锥形瓶 中 请大家先写出1L的配方，然后再写出150mL的 配方
33
2.培养基：
培养基分 液体、半固体和固体 3种 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌扩 大培养； 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细 菌
34
（1）固体培养基配置
牛肉膏蛋白胨培养基
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
琼脂 15-20g
36
配制完毕，将配制好的培养基装入锥形瓶内， 瓶口塞上棉塞，用牛皮纸/报纸包扎瓶口，标 注好组别，进行高温高压蒸汽灭菌
37
（2）液体培养基
为固体培养基中不含琼脂 牛肉膏蛋白胨培养液
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
pH 7.4-7.6，加水至1 000mL 于121℃高压灭菌15~20min备用 用途：普通细菌常用的培养基
2 微生物长的什么样？
3 如何得到微生物？
4 如何保存微生物？
5 我很爱吃熟食（猪头肉），但是听说 熟食微生物超标，这是怎么检测的？
6
LOGO
规则：
1.上课不迟到：第1、5节课，提 前10min到教室 2.下课前，自己的实验物品归类， 该清洗的清洗，该收拾的收拾 3.值日生负责擦黑板、扫地、擦 桌；为大家做好服务工作 4.上课时间请不要玩手机
27
5.鼓风干燥箱
28
6.超净工作台
29
每次使用前，先用75%酒精（或新洁尔灭）擦洗 台面，并提前用紫外线灭菌灯照射15~30min处 理净化工作区内积存的微生物；关闭灭菌灯后应 启动风机使之运转2min后再进行培养操作；工 作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流 流型不受干扰；使用完毕应及时清理工作台面上 的物品并用酒精擦拭台面使之始终保持洁净。
安全操作与标准操作
8
1 微生物吃什么？
（一）微生物培养基的制备 （二）微生物的消毒灭菌 （三）认识微生物培养所需的仪器设备
9
（一）微生物培养基的制备
培养基：是人工配制的、适合微生物生长繁殖或 产生代谢产物的营养物质。 满足微生物生长发育的水分、C，N，生长因子， P，S，Na，Ca等 适宜的酸碱度、一定的缓冲能力、一定的氧化还 原电位，合适的渗透压
10
Baidu Nhomakorabea
根据物理状态划分
培养基分 液体、半固体和固体 3种 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌扩 大培养； 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细 菌
11
培养基的配制原则
1.选择适宜的营养物质 实验室中常用：
不同微生物所需培养基各不同
牛肉膏蛋白胨培养基
细菌
高氏一号
放线菌
麦芽汁培养基
酵母菌
察氏培养基
霉菌
12
2.营养物质的浓度及配比合适 3.控制pH条件 细菌和放线菌：pH7.0~7.5 酵母菌和霉菌：pH4.5~6.0 4.控制氧化还原电位 5.原料来源的选择 尽量利用廉价且易获得的原料作为培养基成分
13
6.灭菌处理 避免杂菌污染，要对所用器械及工作场所进行消 毒与灭菌 培养基一般采取高压蒸汽灭菌，一般培养基 0.1MPa，121.3℃ 15~30min
30
7.微量移液器的使用
31
今天的工作：
1.固体物品的灭菌 2.配制培养基并进行灭菌 3.学习倒平板 4.学习斜面培养基制作 5.超净台的准备 6.划线接种 7.灭菌效果检查
32
开始实验
1.固体物品： 1）平皿（6只/组） 2）试管与棉塞/塑料封口（6只/组）的包扎 3）灭菌蓝色、黄色和白色枪头 将以上物品放入灭菌锅中进行灭菌121℃ 20min
16
（一）干热灭菌法 1.火焰灭菌法 2.热空气灭菌法 140~160℃2~3h
17
（二）湿热灭菌法 1.高压蒸汽灭菌法 121℃ 20~30min 2.常压蒸汽灭菌法 3.常压间歇灭菌法
18
（三）过滤除菌 薄膜滤菌器0.22μm和0.45μm
19
（四）紫外线杀菌 240~280nm波段紫外线杀菌力较强 多以253.7nm作为紫外线杀菌波长 特点：穿透力弱 超净工作台：
14
（二）微生物的消毒灭菌
灭菌指利用物理和化学的方法杀灭或除去物料及 设备中一切生命物质的过程。 消毒是指用物理或化学的方法杀死物料、容器、 器具内外的病原微生物，一般只能杀死营养细胞 而不能杀死芽孢。 消毒不一定能达到灭菌的要求，而灭菌则可达到 消毒的目的 无菌
15
消毒灭菌方法：
（一）干热灭菌法 （二）湿热灭菌法 （三）过滤除菌 （四）紫外线杀菌 （五）药物杀菌
38
请大家查询LB培养基配方 每组配置LB液体培养基50mL于锥形瓶中，包扎 好瓶口（纱布+牛皮纸/报纸）后灭菌 请大家先写出1L的配方，然后再写出50mL的配 方
39
1.固体物品的灭菌
√
2.配制培养基并进行灭菌 √
牛肉膏蛋白胨培养基的配 制和灭菌方法
1
一、复习 二、实验：配培养基与灭菌 三、斜面的划线培养 四、倒平板的操作 五、平板划线培养
2
一、复习
3
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《微生物培养与检验》主要课程内容
1.微生物营养需求 2.微生物形态 3.微生物纯化、分离 4.微生物培养、筛选与保存 5.微生物检验
5
课程内容
1
微生物吃什么？
20
（五）药物杀菌 1.酒精 2.新洁尔灭
21
（三）认识微生物培养所需的仪器设备
1.培养平板
22
2.试管与棉塞
23
3.接种环，涂布棒
24
4.高温高压蒸汽灭菌锅
25
p42 高压蒸汽灭菌
请回顾灭菌锅的操作方法
26
1）用之前检查水位及水质。若水质不好，需换水 2）放置灭菌物品，勿过满；瓶子灭菌，瓶盖拧松 3）盖上锅盖，相对的两个螺帽一起拧 4）启动加热，同时打开放气阀；检查安全阀是否关上。 调整温度时间121℃ 15min。 5）待排气阀冒出大量热气并持续约2~5min后排尽冷空 气后，再将其关闭； 6）灭菌结束，待压力下降至0，可打开放气阀，之后开 盖。注意防止烫伤 7）固体物品可进行干燥；液体物品冷却后拧紧。尽量 避免二次污染。
pH 7.4-7.6，加水至1 000mL；若需分装，需先融化，摇
匀后分
于121℃高压灭菌15~20min备用
用途：普通细菌常用的培养基
35
请大家配制：
请大家查看“营养琼脂”的成分与配制说明，每组 配置牛肉膏蛋白胨固体培养基150mL于锥形瓶 中 请大家先写出1L的配方，然后再写出150mL的 配方
33
2.培养基：
培养基分 液体、半固体和固体 3种 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌扩 大培养； 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细 菌
34
（1）固体培养基配置
牛肉膏蛋白胨培养基
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
琼脂 15-20g
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配制完毕，将配制好的培养基装入锥形瓶内， 瓶口塞上棉塞，用牛皮纸/报纸包扎瓶口，标 注好组别，进行高温高压蒸汽灭菌
37
（2）液体培养基
为固体培养基中不含琼脂 牛肉膏蛋白胨培养液
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
pH 7.4-7.6，加水至1 000mL 于121℃高压灭菌15~20min备用 用途：普通细菌常用的培养基
2 微生物长的什么样？
3 如何得到微生物？
4 如何保存微生物？
5 我很爱吃熟食（猪头肉），但是听说 熟食微生物超标，这是怎么检测的？
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LOGO
规则：
1.上课不迟到：第1、5节课，提 前10min到教室 2.下课前，自己的实验物品归类， 该清洗的清洗，该收拾的收拾 3.值日生负责擦黑板、扫地、擦 桌；为大家做好服务工作 4.上课时间请不要玩手机
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5.鼓风干燥箱
28
6.超净工作台
29
每次使用前，先用75%酒精（或新洁尔灭）擦洗 台面，并提前用紫外线灭菌灯照射15~30min处 理净化工作区内积存的微生物；关闭灭菌灯后应 启动风机使之运转2min后再进行培养操作；工 作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流 流型不受干扰；使用完毕应及时清理工作台面上 的物品并用酒精擦拭台面使之始终保持洁净。