细胞系来源的异体移植肿瘤模型
裸鼠异种移植急性T淋巴细胞白血病模型的建立
急性 Ｔ淋巴细胞白血病 （ａｃｕｔｅＴｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏ ｂｌａｓｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ，ＴＡＬＬ）是一种来源于骨髓的侵袭 性恶性肿瘤［１］。近年来，我国 ＴＡＬＬ发病率呈升高 趋势，部分患者出现耐药和复发等现象导致预后不 佳［２］，因此 ＴＡＬＬ的相关病理机制和药理学研究有 着重要意义。目前对 ＴＡＬＬ疾病发病机制的认识 很大程度上来源于对人体以及原代人 ＴＡＬＬ细胞 的体外研究，在研发治疗 ＴＡＬＬ新药的药理学研究 中，实验动物模型的选择和建立至关重要。目前的
１ 材料与方法
１．１ 主 要 药 物、试 剂 与 仪 器 环 磷 酰 胺 粉 针 剂 （ＣＴＸ，０２ｇ／支）购自安徽医科大学第一附属医院； ＢＶ４２１抗 人 ＣＤ３抗 体 购 自 美 国 ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ公 司； ＣＤ３抗体购自美国 ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司；ＴｒｉｔｏｎＸ１００购 自上海碧云天公司；ＥＤＴＡ抗原修复液、Ｈ２Ｏ２、ＤＡＢ 购自北京中杉金桥生物技术有限公司；仪器 Ｏｌｙｍ ｐｕｓ显 微 成 像 系 统 购 自 日 本 Ｏｌｙｍｐｕｓ公 司；Ｃｙｔ ｏＦＬＥＸ型流式细胞仪购自美国贝克曼公司；人白介 素２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ２，ＩＬ２）ＥＬＩＳＡ试剂盒购自南京优 宜佳生物 科 技 有 限 公 司；ＴｅｃａｎＩｎｆｉｎｉｔｅＭ１０００酶 标 仪购自瑞士 ＴＥＣＡＮ公司。 １．２ 细胞来源与培养 人 Ｊｕｒｋａｔ细胞株购于美国 ＡＴＣＣ细胞库，将 Ｊｕｒｋａｔ细胞置于 １０％灭活胎牛血 清、１％ 双 抗 的 ＲＰＭＩ１６４０培 养 液 中，然 后 放 入 ３７℃、５％ ＣＯ２恒温培养箱中培养［７］。 １．３ 实验动物 ４０只雌性 ＢＡＬＢ／ｃ裸鼠，５周龄， 体质量 １７～２０ｇ，购自江苏集萃药康生物科技有限 公司［ＳＰＦ级，合格证号：ＳＣＸＫ（苏）２０１８０００８］。 １．４ ＴＡＬＬ白血病细胞移植 将 ４０只裸鼠随机 分为正常组（ｎ＝１０）、尾静脉移植组 （ｎ＝１５）和皮 下移植组（ｎ＝１５）。粉针剂环磷酰胺用灭菌 ０９％ 氯化钠溶液稀释成浓度为 ２０ｍｇ／ｍｌ的溶液，腹腔注 射 ＣＴＸ２ｍｇ／只，连续注射 ２ｄ；第 ３天收集处于对 数生长 的 Ｊｕｒｋａｔ细 胞，调 整 细 胞 密 度 至 ２５×１０７ 个 ／ｍｌ。尾静脉移植组裸鼠，尾静脉缓慢注射无菌 Ｊｕｒｋａｔ细胞 ５×１０６个 ／只（０２ｍｌ），连续注射２ｄ；皮 下移植组裸鼠，于裸鼠颈背皮下注射无菌 Ｊｕｒｋａｔ细 胞 ５×１０６个 ／只（０２ｍｌ），连续注射 ２ｄ。 １．５ 动物饲养 所有裸鼠饲养在层流架上无菌独 立送风隔离 ＩＶＣ笼中，与其接触的物品、饲料和饮 用水均须灭菌处理。ＳＰＦ条件下饲养 １周后正常组 裸鼠尾静脉注射 ０２ｍｌ无菌 ＰＢＳ，其余两组分别采
食管鳞癌患者来源移植瘤模型B-NDG小鼠与BALBc裸鼠的比较
2015年中国新诊断食管癌47.8万人，37.5万人死于食管癌，分别占2015年癌症新诊断人数和死亡人数的11.1%和13.3%［1］。
对于食管癌的治疗，手术仍是主要治疗方法［2］，大多数患者预后较差，5年生存率不到20%［3］。
放、化疗仍是治疗食管鳞癌患者（ESCC ）的主流方法，然而药物有效率低且并发症大［4-6］。
近年来，以分子为靶标的治疗已发展成为食管癌中一种有希望的有效治疗方法。
主要是抗EGFR 抑制剂［5］，很多药物仍处于临床试验阶段，对于ESCC 患者是否安全有效仍有待评估。
因此建立模拟患者来源的ESCC 特异性的模型对临床前研究、药物评估、治疗和预后具有重要的转化意义。
目前已知的研究食管癌的动物模型不少，许多已进入主流研究平台［7-9］。
患者来源的移植瘤（PDX ）模型，PDX 模型是将患者手术切除的肿瘤组织移植到免疫缺陷小鼠体内，这不仅能够高度保留患者肿瘤组织的异质性、病理特征，还保存了肿瘤细胞间相互作用及肿瘤微环境［10］。
PDX 模型可以直接携带患者身上肿瘤靶标的模型，并且药效反应与临床结果一致［11］，因此PDX 模型对于ESCC 患者精准用药的筛选具有很大的优势。
目Comparison of B-NDG ®and BALB/c mouse models bearing patient-derived xenografts of esophageal squamous cell carcinomaGUAN Liuliu 1,2,ZOU Qingqing 1,2,LIU Qian 2,3,CHEN Size 1,2,31Department of Oncology,3Scientific Research Center,First Affiliated Hospital of Guangdong Pharmaceutical University;2Guangdong Provincial Engineering Research Center for Esophageal Cancer Precise Therapy,Guangzhou 510080,China摘要：目的探讨不同品系的小鼠对于食管鳞癌患者来源的异种移植瘤（ESCC PDX ）成瘤率的影响，为ESCC 的临床个体化治疗建立更优势的临床前动物模型。
同种异体骨髓移植后全身多发性粒细胞肉瘤2例并文献复习
性， Ｃ Ｄ ３ 、 Ｃ Ｄ ７ ９ ａ 、 Ｃ Ｄ ２ ０ 、 ｄ ｅ ｓ ｍ ｉ ｎ 、 Ｓ ｙ ｎ 、 Ｃ Ｋ（ Ａ Ｅ １ ／ Ａ Ｅ ３ ） 均 阴性 ， Ｋ ｉ － ６ ７增 殖 指 数 约 ８ ０ ％。
移植 ， １ 年前发现乳腺 肿块 ， 逐渐 增大 ， 全身 ＭＲ Ｉ 示乳 腺 、 肠
道均有肿块。手术切除乳腺及乙状结肠肿块并 送检。
２ ． ２ 病 理 检 查
２ ． ２ ． １ 眼观
例 １ 上腹 部肿块 １ ７ ｃ ｍ ×１ ２ ｃ ｍ× ９ ． ５ ａ ｍ 大
常罕见 ， 一旦 出现 提示 骨髓 移植 失败 ， 其预后差 ， 免疫组化 标
Ｇ Ｓ并复 习相关文献 ， 探讨该病的临床病理 学特征 、 诊断与 鉴
别诊 断 ， 旨在提高对该病 的认识 。
１ 材 料 与 方 法
等细胞 ， 形态单一 ， 弥漫分 布 ， 呈 圆形或 卵圆形 ， 细胞 质少 ～ 中等（ 图１ ） ， 核 圆形 、 深染， 部分 核不规 则 （ 图２ ） ， 核 仁不 明
１ ． １ 材 料 收 集 收 集 徐 州 医学 院 附 属淮 安 医 院病 理科 ２ ０ １ ０— ２ ０ １ １年收治的 ２例同种异体骨髓移植后全身 多发 Ｇ Ｓ 病例 。包 括临床 、 影像学和 随访 资料 。 １ ． ２ 方法 ２例标 本均 经 １ ０ ％ 中性福 尔 马林 固定 ， 常规石 蜡包埋 ， ３ ｍ厚切 片， Ｈ Ｅ染色 ， 光镜 观察 。免疫组 化染色 采 用 Ｅ ｎ Ｖ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ两 步 法 ， 所 用 抗 体 包 括 ＭＰ Ｏ、 Ｃ Ｄ ６ ８ ， Ｃ Ｄ １ １ ７ 、
CT26细胞系移植瘤模型、高淋巴转移肿瘤模型的建立及评价的开题报告
CT26细胞系移植瘤模型、高淋巴转移肿瘤模型的建立及评价的开题报告一、研究背景癌症是一种常见的疾病，其中部分癌症具有高度的转移性。
目前，对于高淋巴转移肿瘤的研究尚不够深入。
CT26细胞系是一种分化程度低、高度转移的结直肠癌细胞系，具有广泛的应用价值。
因此，建立CT26细胞系移植瘤模型以及高淋巴转移肿瘤模型，对于研究高淋巴转移肿瘤的机制以及建立有效的治疗方案具有重要意义。
二、研究目的本研究的主要目的是建立CT26细胞系移植瘤模型以及高淋巴转移肿瘤模型，并评价其模型的可靠性和适用性。
其中，移植瘤模型用于研究CT26细胞系在体内形成转移瘤的过程，而高淋巴转移肿瘤模型则用于深入探究高淋巴转移肿瘤的生物学特性以及制定有效的治疗方案。
三、研究内容1.建立CT26细胞系移植瘤模型将CT26细胞根据细胞密度的需要，注射入小鼠皮下或肌肉内，观察移植瘤的生长情况，记录生长曲线，并测定体积和重量。
2.建立高淋巴转移肿瘤模型将CT26细胞注射到小鼠尾静脉中，随后观察淋巴结转移和肝、肺等远处转移的情况。
通过对小鼠血清和淋巴液中肿瘤标志物的检测，评估肿瘤转移的程度。
3.模型评价对模型进行数据统计和分析，评价模型的可靠性和适用性，并比较两种模型的差异。
同时，利用CT检查和病理学检测对模型进行确认，确保结果的准确性。
四、研究意义建立CT26细胞系移植瘤模型以及高淋巴转移肿瘤模型，有利于研究高淋巴转移肿瘤的机制，探究转移及其发生机制，同时有助于筛选新的治疗方法和药物。
该研究有望为临床治疗提供新的思路和手段，为结直肠癌及其他高淋巴转移性肿瘤的治疗和治疗监测提供新的方法和参考依据。
这些肿瘤免疫小鼠模型,别说你不知道
这些肿瘤免疫小鼠模型，别说你不知道订阅号APExBIO要说当今社会哪种癌症治疗手段最火热，癌症免疫疗法（Cancer Immunotherapy）当之无愧。
科学家们热衷于从免疫系统着手消灭肿瘤细胞。
自美国詹姆斯·艾利森（James P. Allison）和日本免疫学家本庶佑（Tasuku Honjo）因其开创性的癌症治疗方法获得2018年诺贝尔医学奖后，更是为癌症的免疫治疗增添了热度。
虽说免疫检查点抑制剂、癌症疫苗和细胞治疗等方面取得的成就为患者带来了希望，然而建立可以模拟人类疾病的免疫活性小鼠模型仍是一个重大挑战。
免疫疗法的临床前研究需要具有完整功能免疫系统的体内模型。
当前的临床前免疫治疗小鼠模型包括同源肿瘤模型、基因工程小鼠模型和人源化肿瘤模型，本文将浅谈这几种模型。
一、同源肿瘤模型▲同源肿瘤模型（Syngeneic tumor models）。
利用在体外生长和扩增的鼠肿瘤细胞系，将其注射（通常皮下或原位）到免疫活性（Immune-competent）宿主中。
这是最早出现和最常使用的临床前模型。
同源肿瘤模型是将永生化的小鼠肿瘤细胞系接种到近交品系小鼠中形成的同种移植模型。
肿瘤细胞系可以是自发性的、致癌物诱导的或转基因的。
受体小鼠拥有完整的鼠源免疫系统，具有完全的免疫活性（immuno-competent），且该免疫系统与同种移植肿瘤组织相容。
▲常见的同源肿瘤小鼠模型整理（包括鼠肿瘤细胞系、癌症类型、鼠宿主和使用的药物）同源模型易于建立，且有良好的免疫应答。
可以用免疫检查点抑制剂（例如抗PDL-1，抗PD-1，抗-CTLA-4）等药物来评估荷瘤小鼠中肿瘤免疫疗法的效果。
同源细胞系可以在实验室中轻松培养和大量扩增，这种模型价格低廉，操作起来相当简单且重复性强。
同系模型的另一个优点是宿主的免疫系统是正常的，这可能最大化模拟肿瘤微环境的真实生活情况。
缺点是移植的小鼠组织可能无法完全代表临床情况下人类肿瘤的复杂性。
免疫疗法相关肿瘤模型介绍
免疫疗法相关肿瘤模型介绍导读前两期我们介绍了常见的肿瘤动物模型，考虑到肿瘤免疫疗法不同于普通抗癌药物的作用方式和评价体系，有必要在此单独介绍一下肿瘤免疫疗法研究领域常用的肿瘤动物模型。
为此，笔者专门搜集和整理了一些相关资料，以当前较为成熟的CAR-T/TCR-T以及免疫检查点阻断技术为例，对免疫疗法肿瘤模型的特点、常用实验动物及细胞株、建立方法以及药物评价方式等关键点做个简要介绍，以期为有志于从事肿瘤免疫疗法研究的同行们提供些许参考。
背景在当今众多的癌症治疗手段中，免疫疗法无疑是近年来最为吸引人们眼球的“明星”治疗手段，普遍引起学术界及医学界的强烈关注和研究兴趣。
随着以T细胞受体T细胞技术（TCR-T）、嵌合抗原受体T细胞技术（CAR-T）以及免疫检查点阻断技术（Immune Checkpoint Blockade）为代表的新兴肿瘤免疫疗法不断取得临床上的突破和成功，奇迹频现，捷报频传，持续更新着人们对机体免疫系统潜在的强大肿瘤杀伤能力的认知，进一步提高人们战胜恶性肿瘤的信心，当然也持续激发着科研人员对“肿瘤免疫疗法”这一强大抗癌利器的研究和开发热情。
而对于肿瘤免疫疗法的研究，离不开相关动物模型的选择和建立。
事实上，目前已经取得临床成功的肿瘤免疫疗法中，无一例外都已经过大量严格的临床前动物实验进行验证、评估和预测。
可见，相关动物模型的建立对于肿瘤免疫疗法的开发和应用是至关重要且必不可少的。
免疫疗法相关肿瘤模型一、以CAR-T/TCR-T为代表的细胞过继性疗法（Adoptive Transfer）常用肿瘤动物模型细胞过继性疗法是指将供体（donor）细胞（此处主要是T淋巴细胞）经体外刺激活化或者基因修饰后再次回输入受者（Recipient）体内，从而达到相关治疗目的的治疗方式。
供体细胞可以是来源于受者自身，也可以来自于其他个体，前者称为自体移植（Autograft），后者则有两种情况，如果受者与供者属于相同种属，称为同种异体移植（Allograft），反之则为异种移植（Heterograft）。
肿瘤小鼠造模方法
肿瘤小鼠造模方法肿瘤小鼠模型是研究肿瘤发展、治疗和预防的重要工具。
通过模拟人类肿瘤的形成和发展过程，可以更好地了解肿瘤的病理生理特征，并为肿瘤的早期诊断和治疗提供有益的信息。
下面我们将介绍几种常用的肿瘤小鼠造模方法。
1. 异种移植模型异种移植模型是最常用的肿瘤小鼠模型。
它通过将人类肿瘤细胞或肿瘤组织移植到小鼠体内形成肿瘤。
该方法可以用于研究肿瘤的生长、转移、侵袭和药物敏感性等方面。
在异种移植模型中，首先需要获取人类肿瘤细胞或肿瘤组织样本。
常用的来源包括人类肿瘤细胞株、肿瘤切片、肿瘤移植瘤等。
然后，将这些样本注射到小鼠体内，通常是通过皮下注射、腹腔注射或静脉注射的方式。
注射后，观察肿瘤的生长情况，定期测量肿瘤体积，并进行影像学检测以评估肿瘤的进展和治疗效果。
2. 转基因小鼠模型转基因小鼠模型是通过改变小鼠基因组中的特定基因，使其表达或缺失某种特定基因，从而模拟人类特定基因异常引起的肿瘤。
这种模型常用于研究特定基因对肿瘤发生和发展的影响。
转基因小鼠模型的制备通常分为两个步骤：基因敲除和基因敲入。
基因敲除是指将目标基因从小鼠基因组中彻底删除，而基因敲入是指将目标基因导入小鼠基因组中，使其表达或缺失。
基因敲除通常采用胚胎干细胞技术。
首先，通过体外培养的方法获得小鼠胚胎干细胞，然后，通过基因编辑技术，将目标基因从胚胎干细胞基因组中删除。
最后，将这些基因敲除的胚胎干细胞注入到小鼠的早期胚胎中，使其发育成为具有目标基因敲除的小鼠。
基因敲入通常采用质粒转染、病毒载体转染或基因修复等方法。
通过以上方法，将目标基因导入小鼠的基因组中，使其表达或缺失。
这种模型的制备过程比较复杂，需要专业的实验条件和技术支持。
3. 化学诱导模型化学诱导模型是通过给予小鼠特定的诱癌物，如化学物质或药物，来诱发肿瘤的形成。
这种模型可以模拟某些环境因素或生理机制与肿瘤发生的关系。
在化学诱导模型中，首先选择合适的诱癌物，如DMBA（二甲基苯并[a]芘）、DEN（二乙胺）等。
移植性人骨肉瘤OS_732裸鼠模型的建立_刘巍峰
染，两组实验过程均未出现裸鼠死亡。两组裸鼠 像及部分区域肿瘤细胞坏死灶；符合骨肉瘤的病
生长状况均良好，体重在接种初与实验终点均无 理组织学特征。两组肺组织压片均未发现转移灶。
明显差异。Ａ 组接种当天局部皮下有液泡形成， ２～ ３ 天 后 液 泡 吸收，１ 周左右局部小包块明 显 ，接
讨 论
种 ２ 周后可见明显局部肿瘤形成，无自然消退现
【摘要】 目的 建立移植性人骨肉瘤裸鼠模型，为骨肉瘤的提供研究实验模型。方法 采取皮下细胞悬 液注射法与组织块植入接种法，建立人骨肉瘤裸鼠模型。人成骨肉瘤 ＯＳ－７３２ 细胞株体外传代培养后，将 １ × １０７ 细胞悬液注入裸鼠腋后皮下（１０ 只裸鼠），或将已成瘤的瘤组织块接种于裸鼠腋后皮下（１０ 只裸鼠）， 观察肿瘤生长情况。接种后 ４ 周处死裸鼠，剥瘤称重，行病理鉴定。比较两种方法的成瘤率、终末瘤体积及 瘤重、肿瘤相对增长率；大体观及病理组织学。结果 两组裸鼠接种 ２ 周后均有局部肿瘤形成，细胞悬液 组成瘤率 ７０％，组织块组成瘤率 １００％，两组成瘤率差异无显著性（Ｐ ＞ ０．０５）；两组终末瘤体积及瘤重差异 具有显著性（均 Ｐ ＜ ０．０５）。细胞悬液组相对增长率高于组织块组，接种后第 １６ 天开始两组肿瘤增长率具有 显著性差异（Ｐ ＜ ０．０５）。病理组织学鉴定符合骨肉瘤镜下特点。结论 成功建立了移植性人骨肉瘤裸鼠模 型，为临床研究提供了可靠方法。
·２０４·
中国骨肿瘤骨病２００８年８月第７卷第４期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｂｏｎｅ Ｔｕｍｏｒ ＆ Ｂｏｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅ， Ａｕｇｕｓｔ ２００８， Ｖｏｌ ７， Ｎｏ．４
·论著·
移植性人骨肉瘤 ＯＳ－７３２ 裸鼠模型的建立
刘巍峰 郭卫 牛晓辉 袁润英 张清 徐海荣 陈大福
侧群细胞与卵巢癌干细胞
侧群细胞与卵巢癌干细胞赵玲;邱倩【摘要】@@ 侧群细胞(side population,sP)是一类具有干细胞特性,能够排出活性污染Hoechst33342而具有弱荧光染色特性的细胞.利用这一特性,sP细胞可以通过免疫荧光激活细胞法结合流式细胞仪被分选,目前在人、鼠多种卵巢癌细胞株及患者腹水中成功分选、鉴定、培养,证实了sP细胞的存在,并证实其与肿瘤干细胞之间存在一致性.基于对sP细胞生物学特性的研究,进一步了解肿瘤干细胞在基因调控、信号转导等方面的研究,并且为研究卵巢癌干细胞创造有价值的细胞模型.本文就sP细胞在卵巢癌干细胞中的研究进展作一综述.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2011(040)028【总页数】4页(P2891-2894)【关键词】肿瘤干细胞;侧群细胞;卵巢癌【作者】赵玲;邱倩【作者单位】第三军医大学新桥医院妇产科,重庆,400037;河南开封市第155医院内二科,475000【正文语种】中文侧群细胞(side population,sP)是一类具有干细胞特性,能够排出活性污染Hoechst33342而具有弱荧光染色特性的细胞。
利用这一特性,sP细胞可以通过免疫荧光激活细胞法结合流式细胞仪被分选,目前在人、鼠多种卵巢癌细胞株及患者腹水中成功分选、鉴定、培养,证实了sP细胞的存在,并证实其与肿瘤干细胞之间存在一致性。
基于对sP细胞生物学特性的研究,进一步了解肿瘤干细胞在基因调控、信号转导等方面的研究,并且为研究卵巢癌干细胞创造有价值的细胞模型。
本文就sP细胞在卵巢癌干细胞中的研究进展作一综述。
1 侧群细胞的发现1996年Goodell等[1]在研究鼠造血干细胞(hemaopoies stem cells,HSCs)的过程中,用荧光染料 Hoechst33342染色小鼠骨髓细胞后,经流式细胞仪检测,在流式二维分析点阵图上发现一小群具有弱荧光染色或拒染特性的细胞,呈彗星状分布在细胞主群的一侧,他们将这群细胞称为侧群细胞(side population,sP),也称边群细胞。
2024肝癌类器官的研究进展要点(全文)
2024肝癌类器官的研究进展要点（全文）肝癌在各类致死癌症中位居第四位，是我国第六大常见癌症疾病。
我国肝癌的发病率位居世界前列，患者预后效果差且致死率高。
肝癌治疗一般以手术切除和化疗联合为主，多数患者由于其发现病症时已经处于肝癌中晚期，治疗效果并不理想。
近年来，尽管肝癌治疗方式不断完善，如手术、微创介入、免疫、靶向治疗等，患者5年生存率有了一定提高，但整体治疗效果仍不理想。
因此，开发新型抗肿瘤药物以及个体化药物迫在眉睫，而抗肿瘤药物从研发到临床应用肿瘤模型的选择至关重要。
肝癌研究的传统模型包括体内模型和体外模型两种，由于肝脏疾病存在明显的异质性，而传统肝癌研究模型对于细胞真实形态、空间结构和细胞微环境无法完全准确反映及表达，故研究结果无法应用到临床实践；动物模型的种属差异性限制了其在临床研究的延续性。
致力于反映人体真实情况的肝癌模型是研究者梦寐以求的目标，类器官作为一种新型体外模型，不仅弥补了传统模型不准确、不全面、不稳定的缺点，还为肝癌免疫研究和血管生成等微环境研究提供了可能性，并可用于高通量药物筛选和生物样本库的构建。
类器官模型将在精准治疗与再生医学方面提供更大的潜力。
1.肝癌的发病机制目前已知肝癌的发生和发展是一个多基因、多步骤、多阶段的复杂过程，肝癌通常由慢性肝炎、肝硬化逐渐发展而来，是一种典型的炎症驱动的肿瘤。
肝脏长期处于刺激环境（HBV、过度饮酒等）会产生炎症反应，经长期积累最终导致肝癌发生。
肝癌发病机制主要由两方面导致，其一是原癌基因的激活，在正常生物体内均存在原癌基因，但一般处于低表达或不表达状态，而在病毒感染或者辐射的作用下，原癌基因就会被激活转变成为癌基因，诱导细胞发生癌变。
其二是抑癌基因失活，抑癌基因的作用是具有潜在抑癌作用，抑癌基因与原癌基因相互制约，如果抑癌基因发生突变导致其调控细胞增殖和分化作用失活，则最终造成细胞恶性增殖进而发展成为肿瘤。
近年来发现多种信号通路异常也会导致癌变，例如在动物胚胎发育早期、Wnt信号通路（形成器官）活化异常可能会促进肝癌的发生。
肿瘤移植模型
肿瘤模型我们一般常用的就是小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。
其中用得最多的是皮下模型，另外还有腹水（或者尾静脉注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他们了。
小鼠模型分三大类：第一类是以S180、EAC、H22等为代表的，他们的宿主小鼠多选用KM，可产生腹水，也可在皮下成瘤。
多以腹水传代，实验时抽取腹水，经过一定稀释后皮下接种构建模型，接踵后第二天开始给药，给药7到10天，接种10天后结束试验，剥取肿瘤称瘤重。
1. 关于构建瘤种可以用体外细胞株培养后，用PBS悬浮至1~3×106/0.1ml/mouse，i.p接种即可，最好用6号左右的针头，就是常用的2ml一次性注射的针头。
2. 关于腹水传代观察到第一代的种鼠肚子较大后（一般约8~9天左右），可以传代，传代时取1ml注射器，用2ml注射器的针头，种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可，注意不要把针头插得很深，尽量浅一点，还可以把老鼠拎起来，利用重力，让腹水集中在某处便于抽取，一般抽个0.5ml就可以了，不用离心，直接用PBS3~6倍稀释后，接种到新的老鼠腹腔，腹水颜色为白色或者略有发黄都是正常的，但是血性腹水说明不好，需要注意调整，第二代以后，尽量6~7天的时候传代，不要等的时间太久，否则腹水容易血性。
三代后可用于试验。
3. 关于接种进行试验这个时候抽取的腹水需要量比较多，一般需要处死种鼠后，小心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤，注意不要弄破肌肉，然后，用镊子（最好是哪种前面有倒勾的镊子，学名好像是唇型镊）拎起腹部的肌肉，用剪刀剪开一个小口，然后用玻璃滴管或者去掉针头的注射器吸取腹水。
然后进过一定的稀释后，接种到小鼠的腋下。
关于稀释量，各个实验室的情况都不一样，最好摸索一下，开始的时候可以适当的计数，但是要用台盼兰染色后计活细胞数。
接种部位在小鼠腋下，但是不要深入到腋窝里面，会给以后的操作带来麻烦。
接种时的进针处离接种处远一点，让针头在皮下多走一段，不容易污染。
乳腺癌的转移模型构建
乳腺癌的转移模型构建乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，其转移是导致患者死亡的主要原因之一。
为了更好地研究乳腺癌的转移机制以及提高其治疗率，科研人员一直在探索乳腺癌的转移模型构建。
本文将介绍几种常见的乳腺癌转移模型构建方法，并探讨其优缺点。
一、乳腺癌的转移模型构建1. 细胞系模型构建细胞系模型是通过从患者中提取肿瘤细胞并纯化培养得到的。
这种方法的优点是操作简单、成本低廉，可以在体外研究肿瘤细胞的生物学特性。
然而，由于体外环境与体内环境差异较大，细胞系模型无法完全模拟患者体内的复杂情况，因此其研究结果需要进一步验证。
2. 动物模型构建动物模型是通过将乳腺癌细胞或组织移植到小鼠等实验动物体内，使其形成原位瘤或者转移瘤。
这种方法可以更好地模拟乳腺癌在体内的生长和转移过程，能够为研究乳腺癌的发生机制以及筛选新的治疗方法提供重要依据。
然而，动物模型的建立相对复杂，需要专业的技术人员和条件，并且由于动物与人体之间的差异，其研究结果也需要谨慎解读。
3. 化学诱导模型构建化学诱导模型是通过给实验动物注射特定的药物或致癌物质，诱导其形成乳腺癌病变。
这种方法能够模拟一部分乳腺癌的发生过程，但与自然发生的乳腺癌仍有一定差异。
因此，化学诱导模型常常作为乳腺癌转移模型构建的补充手段，帮助科研人员更全面地了解乳腺癌的发病机制。
二、乳腺癌转移模型构建方法的优缺点1. 细胞系模型构建的优缺点优点：- 操作简单、成本低廉。
- 可以在体外研究肿瘤细胞的生物学特性。
缺点：- 无法完全模拟患者体内复杂的病理情况。
- 研究结果需要在动物模型或患者体内进一步验证。
2. 动物模型构建的优缺点优点：- 能够更好地模拟乳腺癌的生长和转移过程。
- 可以为研究乳腺癌的发生机制以及筛选新的治疗方法提供重要依据。
缺点：- 建立相对复杂，需要专业的技术人员和条件。
- 动物与人体之间存在差异，结果需要谨慎解读。
3. 化学诱导模型构建的优缺点优点：- 能够模拟一部分乳腺癌的发生过程。
干细胞移植中的自体移植与异体移植技巧
干细胞移植中的自体移植与异体移植技巧干细胞移植作为一种创新的治疗技术，已经取得了许多在临床实践中的成功案例。
其中，自体移植和异体移植是两种常见的干细胞移植方式。
在本文中，我们将重点讨论这两种移植技巧，并对它们的实施和相应的临床应用进行解析。
自体移植是指将干细胞从患者的自身获取，并将其再次注入到患者的身体中，以达到治疗的目的。
自体移植是一种相对简单、安全且无排斥反应的方法，因为干细胞来源于患者自身。
从患者身体中获得干细胞的常见方法包括骨髓、脂肪组织和胎盘等。
首先，骨髓自体移植是干细胞移植中最常见的方法之一。
通过骨髓穿刺或骨髓抽取，从患者自身骨髓中获取干细胞。
该方法主要适用于治疗血液系统疾病，如白血病、淋巴瘤等。
在移植前，患者通常需要接受一定的预处理，以去除患者体内的异常细胞，并保证移植后干细胞的生存和功能。
另一种常见的自体移植方式是脂肪组织移植。
脂肪组织中含有丰富的脂肪干细胞，这些干细胞具有多能性，可以分化为多种细胞类型。
脂肪组织的获取相对容易，常通过吸脂手术获得。
该方法在整形外科和再生医学领域有着广泛的应用，可以用于改善皮肤组织再生、促进创伤愈合、修复软组织缺损等。
此外，胎盘来源的自体干细胞也是一种常见的干细胞来源。
胎盘在胎儿发育过程中起着重要的供养和保护作用。
近年来，研究发现胎盘中含有丰富的干细胞，这些干细胞具有干细胞特性，并且具备较好的免疫耐受性。
因此，胎盘来源的自体移植具有很高的临床应用价值，特别是在治疗某些自身免疫性疾病和器官损伤方面。
与自体移植相比，异体移植是将干细胞从一个体内获取，并移植到另一个不同个体中。
这种技术具有挑战性，但也具备一些独特的优势。
首先，通过异体移植可以拓宽干细胞移植的适用范围，因为在某些情况下，患者自身的干细胞数量有限或功能受损，无法满足治疗需求。
其次，异体移植可以为患者提供更广泛的干细胞资源，从而增加成功治疗的机会。
异体移植的关键问题是如何克服排斥反应。
由于干细胞来源于不同个体，移植后可能引发免疫排斥反应，导致移植失败。
裸鼠的肿瘤移植模型研究
裸鼠的肿瘤移植模型研究肿瘤是一种常见的疾病，也是医学研究的一个重要领域。
随着科学技术的不断发展，人们对肿瘤的认识也在不断深入。
其中，裸鼠的肿瘤移植模型研究是一种常用的实验手段。
一、裸鼠是什么裸鼠是一种没有毛发的实验小动物，通常被用来进行肿瘤移植研究。
这种小动物一般来自人工培育的遗传变异株，因为它没有毛发，所以被称为裸鼠。
这种小动物体型小、活力强，非常适合作为实验对象。
二、肿瘤移植模型的意义肿瘤移植模型是一种通过将人类肿瘤细胞移植到裸鼠体内来模拟肿瘤生长和发展的实验方法。
这种实验方法能够为生物医学研究人员提供宝贵的研究材料，用于发现和开发新的抗肿瘤药物和治疗方法。
同时，肿瘤移植模型还能够为临床医学研究提供重要的参考，帮助医生们更好地了解肿瘤生长和发展的规律，找到控制肿瘤的有效方法。
三、裸鼠肿瘤移植模型的基本步骤1. 建立肿瘤细胞株首先，需要建立一种稳定的肿瘤细胞株。
一般来说，肿瘤细胞株可以从患者的体内或者文献报道中获取，然后通过培养和筛选，筛选出能够稳定生长的肿瘤细胞株。
2. 准备裸鼠裸鼠一般都需要进行体表消毒和饲养管理等操作。
在进行实验前，需要将裸鼠的体表消毒，避免外来细菌对实验结果的影响。
此外，裸鼠的饲养、环境、温度、湿度等也需要进行精心管理，确保实验的准确性和有效性。
3. 移植肿瘤细胞将准备好的肿瘤细胞接种到裸鼠的体内，一般是通过皮下注射或者腹腔注射的方式进行。
移植后，需要观察肿瘤的生长和发展情况，并及时进行处理、剖解和测量等操作。
四、裸鼠肿瘤移植模型的优缺点优点：1. 易于建立：裸鼠的肤色和体毛特征明显，容易观察，建立肿瘤移植模型相对容易。
2. 可控性强：通过各种手段可以有效控制实验的变量，确保实验结果的可靠性和准确性。
3. 结论可靠：通过对裸鼠肿瘤移植模型的研究，可以得到比较可靠的实验结论，从而为后续的研究提供重要参考。
缺点：1. 模拟程度低：由于裸鼠与人体存在较大的生物学差异，因此在某些肿瘤特征的模拟程度上会存在一定的局限性。
人源化动物模型的研究进展
文章编号：１６７３ ２９９５（２０２１）０１ ０４２ ０３·综 述·人源化动物模型的研究进展胡锴克，徐 冶 （吉林医药学院肿瘤靶向治疗与转化医学实验室，吉林吉林 １３２０１３）摘 要：实验动物为医学研究不断提供新模型、新技术、新方法。
而伴随着实验技术与仪器的发展，原本孤立的学科也交叉融合，基因研究在动物中的实践诞生了基因工程动物。
为了更好地模拟人类的性状，产生了人源化动物模型。
本文旨在介绍当前几种主流的基因工程动物，以及人源化动物模型的研究进展。
关 键 词：基因工程动物；人源化动物模型；研究进展中图分类号：Ｒ ３３２ 文献标志码：Ａ 动物实验是医学实验中一个历史悠久的分支，对动物模型的研究成果可以延伸到人类的相似疾病，推导其发生发展规律，进而研究防治措施。
由于动物和人体存在的遗传背景、生理特性和免疫状态上的区别，尽管动物实验的结果有一定的相似性，但不能简单地直接套用到人身上。
现代基因工程技术的兴起使得在动物身上营造出类似于人体的环境不再是无法解决的难题。
在此基础上，为了追求更进一步地模拟人类的生理或病理状态，人源化动物模型便应运而生。
该模型的建立是将来自于人的基因、细胞与组织导入到实验动物体内，使其获得与人类更为接近的生理病理特征［１］。
１ 基因工程实验动物基因工程动物是指使用转基因技术、基因敲除或敲入技术和基因组编辑技术等各种基因重组手段，改变基因组的遗传特征并引入特定的性状。
根据基因工程动物的用途，可大致分为遗传动物模型、生物反应器和人源化动物模型。
１．１ 遗传动物模型遗传动物模型是以满足生物医学研究为目的、性状可以持续稳定表达并遗传给后代的基因工程动物。
研究人员对实验动物进行基因编辑，分析特定基因的表达和调控机制。
１．２ 生物反应器生物反应器是通过基因编辑使其表达特定抗体和疫苗等生物因子的动物品系。
与传统的疫苗等药基金项目：２０１８国家大学生创新创业项目（２０１８１３７０６００１）．作者简介：胡锴克（１９９７—），男（汉族），本科生．通信作者：徐 冶（１９７２—），男（汉族），教授，博士．物的制作工艺相比，基因工程改造的生物反应器生产效率更高、产品质量更稳定、生产成本易于控制。
肿瘤动物模型常用建立方法
肿瘤动物模型常用建立方法肿瘤动物模型是用于研究和测试肿瘤发生、发展和治疗的工具。
建立适当的肿瘤动物模型对于揭示肿瘤的生物学特性和评估各种治疗方法的有效性至关重要。
以下是常用的肿瘤动物模型建立方法。
1. 移植瘤模型：这是最常见和简化的动物模型建立方法之一。
它涉及在动物体内或体外移植人类或动物来源的肿瘤细胞株。
这些细胞可以从肿瘤组织中分离得到，并在实验室中培养。
移植瘤模型的优点是易于建立和控制，但它不能反映肿瘤的整个发展过程。
2. 转基因模型：转基因动物模型是通过将特定的基因突变导入小鼠或其他动物体内来模拟肿瘤。
这些基因突变可以是人类肿瘤相关基因的突变，也可以是具有肿瘤形成潜能的其他基因的突变。
转基因模型可以提供更真实的肿瘤发展和治疗反应，但其建立过程相对复杂和耗时。
3. 化学诱发模型：这种方法通过给动物暴露于化学物质，如化学致癌物质或腺病毒，来诱发肿瘤的发生。
这些化学物质可以引起DNA损伤或基因突变，从而促进肿瘤的形成。
化学诱导模型可以提供与人类肿瘤相似的病理特征，但其应用范围受到化学物质的选择和剂量的限制。
4. 遗传模型：遗传模型使用特定品系的小鼠或其他动物，这些动物因其自身的遗传缺陷而具有高发生肿瘤的风险。
这些遗传模型可以是自然突变品系，也可以是通过基因工程技术引入的遗传缺陷。
遗传模型可以提供对特定肿瘤类型和易感因素的研究，但其适用范围受到特定品系的限制。
以上是常见的肿瘤动物模型建立方法。
根据具体研究目的和研究条件的不同，选择合适的肿瘤动物模型对于取得可靠的研究结果至关重要。
不同模型的优劣势需要综合考虑，并根据研究的需要进行合理选择。
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Doses of inoculated fluorescent cells
R a d a n c
e ×105 (p /s e c /c m 2/s r )
A
C
B
D
B12-Luc 皮下接种实体瘤模型B16-Luc 肿瘤转移模型
Bright
B r i g h t
L u c i f e r a s e
V e n t r a l
D o r s a l
12d
15d
18d
12d
15d
18d
The days after
tumor inoculation 12
1234567246810121415
18
V e n t r a l l u c i f e r a s e a c t i v i t y (×108)
D o r s a l l u c i f e r a s e a c t i v i t y (×108)
R e l a t i v e l u c i f e r a s e a c t i v i t y (×108)
Days after operation
NS
0.04U Bleomycin
52图1. A–B.基于人结肠癌细胞系的颅内转移瘤模型。
向裸鼠颈动脉注
射不同接种量的，带有Luciferase 荧光标记的人结肠癌细胞，并选取多个时间点通过活体成像术检测Luciferase 在颅内的表达水平。
C.基于
A549Luc 细胞的原位CDX 肿瘤模型。
Balb/C 裸鼠提前经气管插管注射生理盐水（NS）或博来霉素（诱导肺纤维状损伤以促使外源细胞成瘤）处理，饲养两周后再经气管插管注射1×106个A549Luc 细胞，继续饲养一周后进行活体成像，检查肺部成瘤情况。
D.基于荧光标记B16Luc 黑色素瘤细胞的皮下/转移瘤模型。
细胞系来源的异体移植肿瘤模型
细胞系来源的异体移植肿瘤模型(Cell●line-derived●xenograft,●CDX)是将体外培养的人源或鼠源的肿瘤细胞系移植到免疫缺陷小鼠
体内而构建的肿瘤模型，其具有建模时间短，重复性好，成本低等特点。
基于细胞系的肿瘤模型作为经典的体内实验方法，在肿瘤学研究和抗肿瘤药物研发过程中有着极大的需求。
依托超过120种经过验证的具有完善遗传背景的细胞系（部分常用细胞系见表1），南模生物可根据客户的研发需要提供各类基于细胞系的肿瘤模型服务。
我们可以构建各类皮下，原位或者转移瘤模型，并针对相应的模型提供高度定制化的体内药效学服务。
可提供的服务类型：
●●肿瘤细胞系的基因修饰，包括过表达，基因敲除
●●肿瘤细胞表型分析，包括增殖，凋亡，迁移，分化等
●
●成瘤后的表型分析，包括肿瘤生长，转移，血管形成等
Case study 1：活体成像CDX 肿瘤模型
带有Luciferase 荧光标记的肿瘤细胞系可用于构建各类皮下，原位或转移型的CDX 肿瘤模型。
Luciferase 报告基因系统以荧光素
（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶（firefly●luciferase）的活性，其优点是可以在小鼠存活的情况下反复测量，分析不同时
间点的荧光变化，以此来示踪肿瘤细胞的增殖与转移。
Case study 2: 裸鼠HepG2细胞皮下成瘤模型
实验室中常用的移植型肝癌模型根据其移植瘤所在部位可以分为原位型和异位型。
异位型常通过在实验动物的皮下注射肝癌细胞形成肿瘤。
皮下成瘤实验操作简单，成功率高，且肿瘤体积变化易于测量，方便给予局部干预。
图2. 裸鼠皮下注射HepG2细胞4周后肿瘤形成图。
图3. HepG2皮下成瘤的组织学分析。
正常的小鼠肝脏组织细胞（左）呈放射状排列，细胞轮廓清晰，胞核圆形居中，肝小叶结构清晰，
组织结构形态正常；HepG2皮下接种形成的肿瘤组织中，细胞排列无序，胞核不清，可见空泡样变性结构，肝小叶结构消失组织结构呈不规则细胞团，符合肿瘤组织结构特征。
画图
Case study 3: 基于M-NSG®重度免疫缺陷小鼠的CDX 模型构建
南模生物自主研发的M-NSG 小鼠，在NOD-scid 品系的基础上进一步敲除了Il2rg 基因。
该小鼠表现为严重免疫缺陷，同时缺失成熟的B，T 和NK 细胞，可高效地植入人CD34+造血干细胞（HSC），外周血单核细胞（PBMC）或成体干细胞和组织。
M-NSG 小鼠是异种移植和免疫重建的完美载体，对于构建同种或异种肿瘤移植模型具有重大意义。
图4. A549细胞皮下成瘤实验。
3×106●A549细胞以皮下注射的形
式接种到野生型C57BL/6，●Balb/c●Nude，NOD-scid 和M-NSG 小鼠
中，在不同的时间点测量成瘤体积。
20001500
1000
500
Days after injection
T u m o r v o l u m e f o r A 549 (m m 3)
Normal liver tissue
Liver cancer
H &E s t a i n i n g
K i 67 s t a i n i n g
400-728-0660 2 细胞系来源的异体移植肿瘤模型
Case study 4:人源细胞系A549 和MSTO-211H 介导的皮下成瘤模型及后续的药效学研究
向裸鼠体内以皮下注射的方式接种2×106●A549细胞（A&B）或者MSTO-211H 细胞（C&D），并随后注射抗肿瘤药物D1或D2。
在不同的时间点测量成瘤体积（A&C）及小鼠体重（B&D）。
结果显示，抗肿瘤药物D1和D2具有明显的抗癌协同功效。
（E）免疫组化检测MSTO-211H 细胞形成的肿瘤组织中VEGF 蛋白的表达水平。
抗肿瘤药物治疗显著降低了肿瘤组
织中标记物VEGF 的表达。
（F）利用稳定表达GFP 蛋白的人A549细胞A549GFP 细胞追踪肿瘤皮下生长。
8 d a y
16 d a y
23 d a y
31 d a y Saline
400 μm
D1D2
D1&D2
Time (days)
Time (days)
T u m o r v o l u m e (m m 3)
T u m o r v o l u m e (m m 3)
A
C
E
F
B
D
100 μm
Time (days)
B o d y w e i g h t (
g )
Time (days)
B o d y w e i g h t (g )
细胞系来源的异体移植肿瘤模型
3
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模型定制、成品模型、饲养繁育、表型分析、药物筛选及评价
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上海南方模式生物科技股份有限公司
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本资料中提到的基因编辑服务及基因修饰动物模型已得到Broad研究所，哈佛大学和麻省理工学院授权许可。
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类型细胞系细胞来源鼠源
Neuro-2a Renca 4T1B16F10LLC
脑神经瘤细胞肾癌细胞乳腺癌细胞黑色素瘤细胞
肺癌细胞。