-薄层色谱总结

-薄层色谱总结

薄层色谱方法总结

1.方法原理

(1)流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。

(2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行

过程中由于偶极- （诱导）- 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。

2.溶剂

使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇- 冰乙酸- 水= 4：1：1，V/V/V），或者绝对量（如18ml 甲苯+ 2 ml 甲醇）。其总量应足以使TLC/HPTLC 板的浸入深度约为5mm。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。

一、溶剂选择规则：

1、考虑分离成分的极性、溶解度、吸附度。

2、先加入极性较小的溶剂，若不容再加入少

量极性大的溶剂

3、一般根据相似相溶原则，需要注意，极性

相差大的不混溶。

4、混合溶剂通常使用一个高极性和低级性

溶剂组成的混合溶剂。

5、展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中

报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比

例，直到找到一个分离效果好的展开剂。6、一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极

性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。

二、展开剂的选择条件：

①对的所需成分有良好的溶解性；

②可使成分间分开；

②待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在

0.3～0.5之间；

③不与待测组分或吸附剂发生化学反应；

⑤沸点适中，黏度较小；

⑥展开后组分斑点圆且集中；

⑦混合溶剂最好用新鲜配制。

三、溶剂极性参数表

环已烷:-0.2、石油醚（Ⅰ类，30~60℃）、石油醚（Ⅱ类，60~90℃）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、

二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2

1、一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；

2、中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；

3、强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。

四、展开剂的选择

物质分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部分。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应

的展开剂。

1、类极性较小的挥发性物质

冰片：石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯(17:3)、厚朴酚：苯－醋酸乙酯(9:1.5)、

α-香附酮：苯－醋酯乙酯－冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚：环己烷－醋酸乙酯(3:1)，

结论：以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂，通常起溶解和分离化合物的作用，而用醋酸乙酯为调节Rf（比移值）的溶剂。为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响，适当加入添加剂，如有机酸或者有机碱。

2、类极性较小的不挥发性物质

β -谷甾醇：环己烷－醋酸乙酯－甲醇(6:2.5:1)或者环己烷－丙酮(5:2)、

熊果酸：甲苯－醋酸乙酯－冰醋酸

(12:4:0.5)、齐墩果酸：氯仿－甲醇(40:1)、

猪去氧胆酸：氯仿－乙醚－冰醋酸(2:2:1)、大黄素：苯—醋酸乙酯—甲醇(15:2:0.2)或者苯—乙醇(8:1)、

丹参酮ⅡA：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4)、

穿心莲内酯：氯仿-无水乙醇(9:1)

靛玉红、靛蓝氯仿－乙醇(9:1)或者苯－氯仿－丙酮(5:4:1)

结论：这类物质展开剂极性比极性较小的挥发性物质洗脱力强一些，因为这类物质极性小的母核大，而极性大的基团通常可以形成氢键，比如羧酸、羟基。以上物质，母核分子量减小、母核结构中不饱和健的增加（尤其是出现苯环），极性基团的增加，都使极性增加，展开剂极性也增大。。这个范围内的物质很多，一般展开剂大百分数的溶剂可以从环己烷—〉甲苯—〉二甲苯—〉苯—〉氯仿的顺序，按照极性要求选择。这里注意，异丙醇、正丁醇极性指数也比较小，在这范围的化合物很少用，因为粘性大、展开慢，造成斑点扩散；另外，羟基的氢键作用力也有不利。调节Rf值的溶剂，从醋酸乙酯—〉甲醇—〉丙酮—〉乙醇。挥发性物质也有很多带羰基、羟基的，但从它的挥发性就可以明白，分子间作用力不强，另外，母核与石油醚、正构烷和苯的结构差异小，估计更容易脱离硅胶吸附，更快进入溶剂中，而不需要通过提高展开剂的极性。

由于存在糖的多羟基结构，苷元的结构影响变小。展开剂中使用极性大的有机溶剂（氯仿、醋酸乙酯、甲醇、正丁醇）和水。乙酸和甲酸的使用，一方面增大展开剂极性，另外也可以抑制硅胶羟基的作用，减少拖尾。由于混溶性和硅胶耐酸能力的限制，水和酸的使用是有限度的。

3、类极性大的小分子有机酸：

没食子酸：氯仿－醋酸乙酯－甲酸(5:4:1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸、异绿原酸。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。相应展开剂分别为：正己烷—乙醚—冰醋酸

(5:5:0.1)、苯－冰醋酸－甲醇(30:1:3)、氯仿－甲醇－甲酸（9:1: 0.5）、石油醚－乙酸乙酯－甲酸（3:6: 1）、醋酸丁酯－甲酸－水(7:2.5:2.5)。

结论：

这类物质多数是苯乙烯母核的，这个结

构的极性本身比较大，另外有酚羟基和羧酸基团，个别有多羟基配基。皂苷的展开剂差不多，极性大。注意甲酸通常指的是浓度85%左右的，含有水。

4、类含氮有机物：

盐酸小檗碱：苯－醋酸乙酯－甲醇－异丙醇

－浓氨试液(12：6：3：3：0.6)(氨

蒸气饱和)或正丁醇－冰醋酸-水

(7:1:2)、

麻黄碱：氯仿－甲醇－浓氨试液(20:5:0.5)或正丁醇－冰醋酸－水(8:2:1)

甘草酸铵：醋酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15:1:1:2)。

结论分析：由于NH2硅醇基的作用很强，在强极性展开剂加有机酸、有机碱扫尾。对于极性化合物，使用正丁醇对斑点扩散影响较小，因为化合物和硅胶的作用强。

当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石

粉代替硅胶），则洗脱剂的极性亦须相应降低。

3.TLC的通用显色方法

理想的显色希望灵敏度高，斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好，斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比，在样品组成并不完全已知的情况下，通用显色方法显得尤为重要，通用显色方法主要有：

1、紫外照射法：方便、不破坏样品；

2、碘蒸气法：通用性强，与紫外法结合灵

敏度高于该两法单独使用；

3、荧光试剂：制造荧光背景，使原来紫外

下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显；

4、硫酸溶剂：对绝大多数有机物有效，但

有破坏性。

4.薄层层析和纸色谱操作注意事项

1、点样点样器点样于薄层板上,一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。点样时必须注意勿损伤薄层表面

2、展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离（一般为8～15cm），取出薄层板，晾干，待检测。

注：展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，密闭，一般保持15－30分钟。

3、显色与检视供试品含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色，或加热显色，在日光下检视。有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在356nm紫外光灯下观察荧光色谱。对于可见光下无色，但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板（如GF254板），在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱。

把我的祖传秘方告诉你吧

PE(60-90)EtAc/PE=1:2

EtAc/PE/AcOH=15:5:1

EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2:1:1:1

8年来我用这四种体系,没有出现过什么问题.我一直在用的是乙酸乙酯：环已烷，不断调节

比例，直到有满意的Rf值，有拖尾时可能要加酸或碱，我一般乙酸和三乙胺。

我用了好几年了，都还好。不妨一试！

铺板

铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。

点样

尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙

醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。

展开剂配制

选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必须的。展开系统的饱和一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。

温湿度的控制

温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。

显色

喷显色剂显色最重要是有好的雾化器。

solvent pola

rity Viscosity(

cp20℃)

Boili

ng

point

(℃)

UV

cutoff

(nm)

i-pentane(戊烷) 0.00 -- 30 -- n-pentane 0.00 0.23 36 210

Petroleum ether(石油醚) 0.01 0.30 30-6

210

Hexane(己烷) 0.06 0.33 69 210 Cyclohexane(环

己烷)

0.10 1.00 81 210

Isooctane(异辛

烷)

0.10 0.53 99 210

Trifluoroacetic

acid(三氟乙酸)

0.10 -- 72 --

Trimethylpenta

ne(三甲基戊烷)

0.10 0.47 99 215

Cyclopentane(

环戊烷)

0.20 0.47 49 210 n-heptane(庚烷) 0.20 0.41 98 200 Butyl

chloride(丁基

氯; 丁酰氯)

1.00 0.46 78 220

Trichloroethyle

ne(三氯乙烯;

乙炔化三氯)

1.00 0.57 87 273

Carbon

tetrachloride(四

1.60 0.97 77 265

氯化碳)

Trichlorotrifluo

1.90 0.71 48 231 roethane(三氯

三氟代乙烷)

i-propyl

2.40 0.37 68 220 ether(丙基醚;

丙醚)

Toluene(甲苯) 2.40 0.59 111 285 p-xylene(对二甲

2.50 0.65 138 290 苯)

2.70 0.80 132 -- Chlorobenzene(

氯苯)

o-dichlorobenze

2.70 1.33 180 295 ne(领二氯苯)

2.90 0.23 35 220 Ethyl ether(二

乙醚; 醚)

Benzene(苯) 3.00 0.65 80 280 Isobutyl

3.00

4.70 108 220 alcohol(异丁醇)

3.40 0.44 40 245 Methylene

chloride(二氯甲

烷)

3.50 0.79 84 228 Ethylene

dichloride(二氯

化乙烯)

n-butanol(丁醇) 3.90 2.95 117 210

4.00 --- 126 254 n-butyl

acetate(醋酸丁

酯; 乙酸丁酯)

4.00 2.27 98 210 n-propanol(丙

醇)

4.20 -- 119 330 Methyl isobutyl

ketone()

4.20 0.55 66 220 Tetrahydrofura

n( 四氢呋喃)

ethanol 4.30 1.20 79 210 Ethyl acetate 4.30 0.45 77 260

4.30 2.37 82 210 i-propanol(丙

醇)

Chloroform(氯

4.40 0.57 61 245 仿)

4.50 0.43 80 330 Methyl ethyl

ketone(甲基乙

基酮)

4.80 1.54 102 220 Dioxane(二恶

烷; 二氧六环;

二氧杂环己烷)

Pyridine(吡啶) 5.30 0.97 115 305 Acetone(丙酮) 5.40 0.32 57 330 Nitromethane(

6.00 0.67 101 380 硝基甲烷)

6.20 1.28 118 230 Acetic acid(乙

酸)

6.20 0.37 82 210 Acetonitrile(乙

腈)

Aniline(苯胺) 6.30 4.40 184 --

6.40 0.92 153 270 Dimethyl

formamide(二甲

基甲酰胺)

Methanol() 6.60 0.60 65 210

6.90 19.90 197 210 Ethylene

glycol(乙二醇)

7.20 2.24 189 268 Dimethyl

sulfoxide()

1.00 100 268 water 10.2

常用溶剂参数表

化合物名称中文名称极性粘度沸点

吸

收

波

长

i-pentane (异0 - 30 -

戊烷)

n-pentane (正

戊烷)

0 0.23 36 210

Petroleum ether (石油醚) 0.01 0.3

30～

60

210

Hexane (己

烷)

0.06 0.33 69 210 Cyclohexane (环

己烷)

0.1 1.0 81 210 Isooctane (异

辛烷)

0.1 0.53 99 210 Trifluoroacetic acid (三

氟乙酸)

0.1 - 72 - Trimethylpentane (三

甲基戊烷)

0.1 0.47 99 215 Cyclopentane (环

戊烷)

0.2 0.47 49 210 n-heptane (庚

烷)

0.2 0.41 98 200