不同脱细胞方式下所得胞外基质存在的差异
组织脱细胞方法的研究进展
组织脱细胞方法的研究进展孙亨【摘要】脱细胞组织和器官作为一种生物材料,已经在组织工程和再生医学中成功应用,各种组织的脱细胞方法也受到关注.组织脱细胞的方法可以分为物理、化学和酶学方法,各组织脱细胞的效率和结果与组织的来源、结构和组成、脱细胞的方法等都有关,不同的方法对不同的组织不仅清除细胞的效果不同,对细胞外基质(ECM)的影响也不同,这反过来又会使宿主对移植的脱细胞材料产生不同的反应.因此,我们要根据组织特点和不同脱细胞方法的特点来选择最优的脱细胞方法,以期达到理想的效果.本文介绍了最常用的一些脱细胞方法,包括物理、化学和酶学方法,并简单描述了它们对组织支架的影响.【期刊名称】《四川解剖学杂志》【年(卷),期】2011(019)004【总页数】7页(P24-30)【关键词】脱细胞;细胞外基质;组织工程【作者】孙亨【作者单位】四川大学华西基础医学与法医学院,成都610041【正文语种】中文1 介绍在医学研究中，寻找可替代的生物材料一直是一个热门话题。
尤其对于移植的组织来源，若是使用自体的组织，则组织的量和可取的部位都十分有限；若是来源于异体组织，则免疫反应可能会造成十分严重的后果。
因此，寻找不会产生免疫反应的异体组织来源，成为研究的一个方向。
经过脱细胞的组织，能够很大幅度降低免疫反应，是作为组织工程和再生医学应用的理想材料。
脱细胞的方法很多，也会根据组织和器官的不同而改变。
根据脱细胞方法性质的不同，可以大体上将其分为物理、化学和酶学方法，每种方法对组织的作用不同，清除细胞的成分和效率不同，对剩下的细胞外基质支架的影响也不同。
这些差异反过来也会影响移植后宿主对生物材料的反应。
2 脱细胞的基本原理从组织中脱细胞可以分离出由结构蛋白和功能蛋白组成的复杂混合物，即细胞外基质（Extracellu－lar Matrix，ECM）。
异种和同种异体的细胞抗原会被宿主识别为异物，因此会使组织产生炎症反应和免疫排斥。
脱细胞真皮基质分析报告
前言大面积深度烧伤或其他创伤导致皮肤真皮成分缺损，通过刃厚小皮片或微粒植皮技术虽然能使创面愈合，但由于其缺乏真皮层，导致愈合后创面弹性差，凸凹不平，易挛缩且不耐摩擦。
移植自体皮瓣或全厚及中厚皮片固然是最好的方法，但大面积深度烧伤后，能作为供皮区的部位已很少，供皮区又将形成同等程度的缺损，日后形成瘢痕。
为解决这一问题，国内外学者致力于寻找一种理想的真皮替代品。
1.脱细胞真皮基质概述脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix ADM）是用物理、化学等方法将人或动物皮肤中的表皮层及细胞成分彻底去除仅保留真皮中含胶原网架的细胞外基质。
脱细胞真皮基质由于完全没有了细胞成分和Ⅰ、Ⅱ型细胞相容性抗原的主要免疫活性,故一般不会诱发排斥反应。
但脱细胞真皮基质保留有正常胶原的三维结构和真皮中含胶原支架的细胞外基质能为组织细胞的再生提供一个良好的支架结构，具有创面覆盖、组织缺损填充、引导组织再生和支架等作用。
脱细胞真皮基质中无细胞成分,免疫活性低,不会诱发免疫反应。
它保留了表皮和真皮间的基底膜,移植后可形成真皮面和基底膜面。
基底膜面可支持断层皮片的生长,这对表皮细胞的增殖分化以及移植皮的外观和功能起着重要作用,同时也有利于种子细胞的点附增殖等。
真皮面利于脱细胞真皮基质的快速血管化,为成纤维细胞的增殖提供支架,有助于胶原成分改建,促使成纤维细胞排列分布规则,形成结构形态正常的胶原纤维,此外,还有诱导、调节宿主细胞和新生血管长入,促进上皮形成等作用。
此外,细胞外基质蛋白也可以促进表皮细胞的再生。
因此,脱细胞真皮基质可作为真皮替代品,在为烧伤创面提供真皮的同时,可明显减少瘢痕形成。
是一种理想的真皮替代材料。
1.1脱细胞真皮基质的制备方法根据来源的不同脱细胞真皮基质分为异体脱细胞真皮基质（来源主要为尸体皮）和异种脱细胞真皮基质（来源为动物皮以猪皮和牛皮为主）两种。
制备过程都是尽可能的去除具有抗原性的细胞(表皮细胞、毛囊、皮脂腺、汗腺及真皮中血管内皮细胞、成纤维细胞等), 保留完整的胶原纤维成分和组织基本结构。
异种脱细胞真皮基质(ADM)包扎治疗烧烫伤Ⅱ度创面的临床效果观察
异种脱细胞真皮基质(ADM)包扎治疗烧烫伤Ⅱ度创面的临床效果观察【摘要】本研究旨在观察异种脱细胞真皮基质(ADM)包扎治疗烧烫伤Ⅱ度创面的临床效果。
研究方法采用对照实验设计，观察治疗组与对照组的治疗效果。
结果分析显示，ADM包扎组疗效显著优于对照组，创面愈合时间缩短，愈合率提高。
讨论部分探讨了ADM在烧烫伤治疗中的机制及临床应用前景。
结论指出ADM包扎治疗烧烫伤Ⅱ度创面具有显著效果，展望将来可进一步优化治疗方案提高疗效，具有重要的临床应用前景及研究意义。
【关键词】烧烫伤、异种脱细胞真皮基质、ADM、包扎治疗、Ⅱ度创面、临床效果观察、研究方法、实验设计、结果分析、讨论、临床应用前景、总结、展望、意义。
1. 引言1.1 背景烧烫伤是一种常见的皮肤损伤，其临床表现包括疼痛、红肿、水泡等。
烧烫伤的治疗一直是临床上的重要课题，尤其是对于Ⅱ度烧烫伤的治疗更加复杂和困难。
传统的治疗方法包括药物敷料、换药等，但效果往往有限，且易引起感染和愈合延迟。
对于ADM包扎治疗烧烫伤Ⅱ度创面的临床效果尚缺乏大规模的临床观察和研究。
本研究旨在通过系统的实验设计和临床观察，评估ADM在治疗烧烫伤Ⅱ度创面中的临床效果，为临床实践提供科学依据。
通过对该领域的深入研究，可以为提高烧烫伤的治疗效果和促进创面愈合提供重要的参考和借鉴。
1.2 目的烧伤是一种常见的皮肤损伤，严重的烧烫伤会给患者带来极大的痛苦和生活负担。
在治疗烧烫伤的过程中，创面的处理是至关重要的环节。
传统的处理方法包括药物覆盖、敷料换药等，但这些方法存在着一定的局限性，如容易引起感染、疼痛等。
本研究旨在通过一系列系统的临床观察，评估ADM在治疗烧烫伤Ⅱ度创面中的实际效果，并探讨其可能的作用机制，为临床治疗提供更为科学的依据。
希望通过这项研究，为烧伤患者提供更加有效、安全的治疗方案，并为临床应用提供新的思路和方法。
1.3 研究意义本研究旨在观察ADM包扎治疗烧烫伤Ⅱ度创面的临床效果，探讨其在烧伤治疗中的应用前景。
脱细胞外基质及其制备方法和应用与流程
脱细胞外基质（Decellularized Extracellular Matrix,dECM）的概述细胞外基质（Extracellular Matrix, ECM）是细胞周围的结构网络，由一系列复杂的生物分子组成，如胶原蛋白、弹性蛋白、蛋白多糖复合体等。
ECM对细胞的生长、分化、迁移和功能发挥起着重要的调控作用。
脱细胞外基质是直接从生物组织中去除细胞后得到的ECM结构，保留了其生物物理特性和生物活性，成为一种重要的再生医学材料。
脱细胞外基质经过一系列制备过程，可以提取出ECM的蛋白质骨架，然后可以通过重新细胞种植或结构改造等手段实现其应用。
脱细胞外基质的制备方法1. 组织采集和处理首先，从特定的生物组织（如动物器官或组织）中收集要制备脱细胞外基质的样品。
采集的组织应选择易于分离细胞的、丰富的ECM组织，如皮肤、骨骼、心脏等。
组织应存储在冷藏条件下，以防止细胞死亡和ECM降解。
2. 细胞去除细胞去除是制备脱细胞外基质的关键步骤。
通常采用生物物理或化学方法去除细胞。
生物物理方法包括冻融、热冲击和超声波等，其原理是通过物理力破坏细胞膜结构。
而化学方法则使用洗涤剂（如Triton X-100、SDS等）和酶（如胰蛋白酶、DNA酶等）来分离细胞和ECM。
3. 脱细胞处理脱细胞处理的目的是去除细胞残留物，如核酸、细胞器等。
这一步通常使用去污染剂（如DNA酶和RNase）、洗涤剂和缓冲液来充分清洗，同时加强ECM的去细胞过程。
4. 去污染和净化为了去除细胞残留物和洗涤剂，需要进行去污染和净化处理。
这一步可以通过多次洗涤和加入高浓度盐水、醇类和蛋白酶等来实现。
5. 消毒处理对于制备脱细胞外基质后的ECM，为了去除潜在的细菌、病毒和其他病原体，需要进行消毒处理。
常用的消毒方法包括紫外线照射、辐射和化学消毒剂等。
脱细胞外基质的应用与流程1. 细胞种植脱细胞外基质可以为细胞提供适宜的生长环境，并促进细胞附着、增殖和分化。
细胞外基质名词解释
细胞外基质名词解释细胞外基质（extracellularmatrix，ECM）是构成细胞外环境的特殊结构，它也是细胞增殖、迁移和形态改变的基础。
它既可以作为一种独立的结构，可以支持细胞的生长和分化，也可以作为细胞外活动的调节器，参与细胞外信号传导和活性物质的调节转运等。
细胞外基质的种类比较多，主要有水凝胶类、矿物质类和蛋白质类三大类。
水凝胶类细胞外基质主要是由糖聚糖和多聚糖构成，其中糖聚糖以多糖分子链、支链和定位结合而形成三维结构网络。
糖聚糖在细胞外环境中有着重要的作用，它可以支撑细胞的内墙，提供细胞内高度可控的空间环境，促进细胞的增殖分化；另外，它还可以结合细胞外的特殊蛋白，抑制细胞的迁移，是细胞的稳定界面。
矿物质是另一类细胞外基质，主要有磷酸钙、碳酸钙和硅酸盐。
其中磷酸钙和碳酸钙具有很强的钙离子结合能力，可以控制多种无机物质的吸收和释放，硅酸盐是细胞外环境中的流体结构成分，它可以抵抗压力，支撑细胞多孔网络结构。
蛋白质是细胞外基质中最为重要的组分，它构成细胞外基质的支链和骨架，是细胞的重要组成部分。
一般来说，蛋白质细胞外基质主要分为胶原蛋白、凝血酶原及附着素三大类。
胶原蛋白具有优质的粘度和弹性，具有良好的抗拉应力，能有效抵抗压力，并可以作为细胞移动的滑轨，促进细胞的迁移与增殖。
凝血酶原则是由大量的凝血酶原分子组成，可以参与细胞外信号传导，促进细胞的活性物质的释放和调节转运。
附着素是一类特殊的细胞外基质蛋白，具有高度特异性的附着力，可以紧密结合细胞表面，阻止细胞的漂移，控制细胞的形态和迁移。
细胞外基质是细胞环境的基础，其各种组分的功能是互补的、共生的，不仅能为细胞提供良好的生长环境，也能调节细胞的活动，保持其正常的形态，并参与细胞外信号传导。
细胞外基质与细胞的关系既有相互制约又有促进作用，对细胞的增殖、迁移和发育具有重要的影响，是细胞生长发育中不可或缺的一部分。
总之，细胞外基质是形成细胞外环境的最重要组成部分，它可以作为细胞增殖、发育和迁移的基础，也是细胞外活动的调节器，抑制细胞的迁移，支撑细胞墙，参与细胞外信号传导和活性物质的调节转运。
各种生物膜功能差别较大的原因
各种生物膜功能差别较大的原因
答：
一、各种生物膜功能差别较大的原因
1、结构差异：每种生物膜的结构都不尽相同，从细胞质膜到胞外基
质膜，所包含的蛋白、糖和脂肪等组分都各不相同，其功能也就不尽
相同。
2、组分差异：不同的生物膜中所含的化学物质组成和含量都不尽相同，对其功能也会有不小影响。
3、加工差异：不同的生物膜受到了不同的加工处理，以此来调整其
功能。
4、运动学差异：不同的生物膜的运动学相对不同，也会影响其功能。
5、包裹程度：不同的生物膜的细胞内蛋白等物质包裹成度不尽相同，也会左右其功能。
6、细胞动作差异：不同的生物膜中的细胞可能存在不同的动作性质，也会影响其功能。
二、综上所述
由于结构、组分、加工处理、运动学、包裹程度和细胞动作等各种因
素的不同，各种生物膜的功能就会有较大的差异。
因此，要研制出性
能特异性较强的生物膜，就必须充分考虑这些因素，更加准确地进行
对比分析，从而探寻到生物膜的不同功能表现。
几种脱细胞ecm材料研究
脱细胞ecm材料是一种广泛应用于组织工程和再生医学的生物材料。
它是由细胞外基质（ECM）组成，而细胞外基质是细胞间和细胞与细胞外基质间的重要连接物质，具有支持、保护、营养和调节等作用。
脱细胞ecm材料能够模拟人体天然组织结构，为细胞提供一个良好的生长环境，促进细胞的生长和增殖，从而促进组织的再生和修复。
目前，脱细胞ecm材料的研究主要集中在以下几个方面：首先，脱细胞过程的研究。
脱细胞过程需要将细胞从ecm中分离出来，这个过程需要精确控制温度、时间和机械力等因素，以避免对ecm结构的破坏。
目前，研究人员正在探索更加高效、安全的脱细胞方法，以提高ecm材料的品质和稳定性。
其次，ecm成分的研究。
ecm是由多种成分组成的，包括胶原蛋白、糖蛋白、多糖等。
这些成分对细胞的生长和增殖具有重要作用。
因此，研究人员正在研究如何精确控制ecm成分的比例和分布，以促进细胞的生长和增殖。
第三，ecm材料的生物相容性研究。
脱细胞ecm材料需要具有良好的生物相容性，以避免免疫排斥反应和感染等问题。
因此，研究人员正在研究如何提高ecm材料的生物相容性，如采用天然生物材料、纳米技术等手段。
第四，脱细胞ecm材料的力学性能研究。
脱细胞ecm材料需要具有良好的力学性能，以适应人体组织的需要。
因此，研究人员正在研究如何提高脱细胞ecm材料的强度和韧性，以满足不同应用场景的需求。
最后，脱细胞ecm材料的应用研究。
目前，脱细胞ecm材料已经广泛应用于组织工程、再生医学、药物释放等领域。
未来，研究人员将继续探索脱细胞ecm材料在更多领域的应用，如皮肤修复、骨骼再生、心血管疾病治疗等。
总之，脱细胞ecm材料的研究是一个具有重要意义的领域，它为组织再生和修复提供了新的可能性。
随着技术的不断进步，我们相信脱细胞ecm材料将在未来的医疗领域发挥越来越重要的作用。
两种肝脏全器官脱细胞基质制备方法的比较
两种肝脏全器官脱细胞基质制备方法的比较王立曼;王妍;段翠密;王海滨;王常勇【摘要】目的对两种肝脏全器官脱细胞基质制备方法进行比较,为筛选更为有效的制备方法提供依据.方法选取两种脱细胞方案[分别以十二烷基硫酸钠(SDS)和Triton X-100+SDS (Tx+SDS)为主要洗涤剂]制备肝脏全器官脱细胞基质,制备完成后进行三维形态、脉管结构及组织学、免疫荧光染色观察,并对脱细胞基质中的DNA残留量、胶原含量及生长因子[肝细胞生长因子(HGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)]含量进行检测.结果两种方法均成功制备出肝脏全器官脱细胞基质.组织学和DNA含量检测显示两种方案均可成功移除细胞和细胞核组分,保留细胞外基质(ECM)蛋白;Tx+SDS方案可以维持肝脏的天然脉管结构,而SDS方案则会损坏脉管结构;与SDS方案比较,Tx+SDS方案能保留更多的ECM蛋白成分(7.76±0.15μg/mg vs 4.23±0.05μg/mg),更多的HGF含量(44.5±2.9ng/g vs 11.3±1.8ng/g)和bFGF含量(15.9±0.4ng/g vs 6.1±0.7ng/g).结论以Tx+SDS 为主要洗涤剂的脱细胞方法成功制备出了较好的肝脏全器官脱细胞基质,可为肝组织工程和再生医学提供优良的支架材料.【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2014(039)004【总页数】5页(P288-292)【关键词】全器官脱细胞,肝;组织工程;细胞外基质【作者】王立曼;王妍;段翠密;王海滨;王常勇【作者单位】100850 北京军事医学科学院基础医学研究所前沿交叉学科研究室;100850 北京军事医学科学院基础医学研究所前沿交叉学科研究室;100850 北京军事医学科学院基础医学研究所前沿交叉学科研究室;100850 北京军事医学科学院基础医学研究所前沿交叉学科研究室;100850 北京军事医学科学院基础医学研究所前沿交叉学科研究室【正文语种】中文【中图分类】R318.14肝移植是有效根治肝衰竭的方法，然而供体来源有限、费用昂贵等原因限制了肝移植的应用[1]。
脱细胞真皮基质(ADM)制备前后的变化(1)
脱细胞真皮基质(ADM)制备前后的变化(1)】目的探讨脱细胞真皮基质制备前后出现的各种变化。
方法将人全厚皮切制成厚0.5mm的中厚皮片，先后经1M NaCl溶液、0.1％戊二醛、0.5％SDS、0.25％胰蛋白酶、冷冻干燥及水化处理，制得脱细胞真皮基质（ADM）。
观察制备前后出现的各种变化。
结果皮片经处理后，ADM具有良好的弹性和柔韧性。
皮片中所有细胞成分消失，胶原及弹力纤维结构完整、排列规则，基底膜存在。
处理前后弹力/胶原纤维面密度分别为0.25±0.08和0.26±0.08、胶原含量分别为69.18±12.51和85.17±28.93、Ⅲ/Ⅰ型胶原比值分别为0.85±0.22和0.71±0.14，均无明显变化。
结论脱细胞真皮基质制备过程可有效去除皮肤中的细胞成分，完整保留真皮基质和基底膜，形成相对无免疫活性的脱细胞真皮基质。
【关键词】脱细胞真皮基质制备Studies on the changes during preparation of acellulardermal matrix (ADM)【Abstract】 Objective To investigate the changes during preparation of ADM.Methods Split-thickness allograft， 0.5mm thick， wereobtained from full thickness human’s skins with a dermatome. Donor skins were treated with 1 M NaCL， 0.1% glutaraldehyde， 0.5 % SDSand 0.25 % trypsin successively. The resulting acellular dermal matrices were then freeze-dried in a freeze-dryer and hydrated in PBS. The processing technique resulted in acellular dermal matrices (ADM). The dynamic changes during processing were researched.Results All the cellular components in the donor skins were removed and basement membrane was retained. Regular orientation and integral framework of collagen bundles and elastin was present in elastic and flexible ADM. The area-density of elastin/ collagen，gross and Ⅲ/Ⅰ t ype ratio of collagen were 0.25±0.08，69.18±12.51，0.85±0.22 in the donor skins and 0.26±0.08，85.17±28.93，0.71±0.14 in the ADM respectively. There was no change after donor skins weretreated.Conclusion The processing technique removed all the cellular components from the donor skins， retained dermal matrix and basementmembrane， and acquired acellular dermal matrix that exhibited no immunocompetence.【Key words】 acellular dermal matrix preparation脱细胞真皮基质 (acellular dermal matrix， ADM) 是一种良好的基质，可作为真皮替代品与自体表皮复合移植，亦可作为软组织填充材料单独使用，临床上应用愈来愈广泛。
新型脱细胞半月板细胞外基质的制备及其生物相容性的研究-论文
品 ；Ｊ Ｓ Ｍ一 ６ ７ ０ ０ Ｆ 型扫 描 电镜 为 日本 Ｊ Ｅ ＯＬ 公 司产
品 ；细 胞培 养板 、培 养瓶 、离心 管 、载玻 片为 美 国
基 金 项 目： 国家 自然 科学 基金 （ ８ １ ４ ７ ２ ０ ９ ２ ） ；国家 高 技术研 究 发展 计划
（ ８ ６ ３ 计划 ）（ ２ ０ １ ２ Ａ Ａ０ ２ ０ ５ ０ ２ ）
程支 架 是非 常 重要 的组 成部 分 ，所 以选择 合 适 的半
月板 生物 支 架材 料至 关 重要 。采 用脱 细胞 的方法 去 除 细 胞 抗 原 和 细 胞 核 物 质 但 保 留 组 织 的 天 然 细 胞
外基 质 （ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ｌ ａ ｒ ｍａ ｔ ｒ ｉ ｘ ，Ｅ Ｃ Ｍ ）成 分和 生物 活
［ ８ ］ Ｅ ｎ ｇ ｌ ｕ ｎ ｄ Ｍ， Ｒ ｏ ｏ ｓ Ｅ Ｍ， Ｌ ｏ ｈ ｍ ａ ｎ ｄ ｅ ｒ Ｌ Ｓ ． Ｉ ｍ ｐ ａ ｃ ｔ ｏ ｆ ｔ ｙ ｐ ｅ ｏ ｆ ｍｅ ｎ ｉ ｓ ｃ ａ ｌ ｔ ｅ ｒ ａ
国 Ｈｅ ｒ ａ ｅ ｕ ｓ公 司 产 品 ；冰 冻 切 片机 为 日本 Ｌ ｅ ｉ ｃ ａ 公司 产 品 ；Ｂ Ｈ一 ２ 型 倒 置显微 镜 镜 、Ｉ Ｘ ７ ０ 型 荧光
生物 学 和生 物 力学刺 激 三部 分组 成 Ｊ 。 其 中组织 工
显微 镜 、 多功 能显 微 镜均 为 日本 Ｏｌ ｙ ｍ ｐ ｕ ｓ公 司产
异种脱细胞真皮基质敷料产品技术要求
异种脱细胞真皮基质敷料产品技术要求异种脱细胞真皮基质敷料产品技术要求异种脱细胞真皮基质敷料是一种应用于创面修复和再生医学领域的生物材料，具有良好的生物相容性、生物活性和生物相似性。
为了确保产品的安全性和有效性，以下是异种脱细胞真皮基质敷料产品应满足的技术要求。
1. 细胞去除和细胞破坏：- 产品应通过合适的方法彻底去除任何潜在引起免疫排斥和传播病原体的细胞成分。
- 在细胞去除过程中，应避免过度破坏蛋白质和其他生物活性成分。
2. 细胞外基质保留和成分完整性：- 产品应保留细胞外基质的完整结构，以提供适当的支撑和功能。
- 涂层和处理过程应尽量保护细胞外基质中的蛋白质、多糖和其他生物活性分子。
3. 成分纯度和质量控制：- 产品应具备高纯度和一致性的特点，以确保其安全性和可预测性。
- 在生产过程中，应建立完善的质量控制体系，包括原材料选择、质量测试和分析。
4. 生物活性和生物相似性：- 产品应具备生物活性成分，以促进创面愈合和组织再生。
- 在材料选择和生产过程中，应遵循相关生物功能和组织学特征的要求。
5. 非致病性和免疫相容性：- 产品表面应处理成非致病性，以降低接触感染和免疫排斥的风险。
- 在材料选择和加工过程中，应避免使用可能引起免疫反应的物质。
6. 可操作性和储存稳定性：- 产品应具备良好的可操作性，方便医护人员进行操作和使用。
- 在合适的条件下，产品应具备良好的储存稳定性，包括物理性质和生物活性的保持。
以上是异种脱细胞真皮基质敷料产品的技术要求，旨在确保产品的质量和安全性，并提供良好的临床效果和患者体验。
眼科领域应用的脱细胞组织材料
眼科领域应用的脱细胞组织材料
https:///10.12307/2021.251 投稿日期：2020-08-17 送审日期：2020-08-26 采用日期：2020-09-26 在线日期：2021-02-25 中图分类号： R459.9；R318.08；R-1 文章编号： 2095-4344(2021)34-05530-07 文献标识码：A
Funding: the Scientific Research Fund Project of Yunnan Education Department, No. 2020Y0561 (to LJC); the Key Joint Project of Local Colleges and Universities of Yunnan Provincial Department of Science and Technology, No. 202001BA070001-007 (to LCR) How to cite this article: Liu Jc, Li Mj, Sun Sg, Li Cr. Application of acellular tissue in ophthalmology. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2021;25(34):5530-5536.
摘要 背景：眼科领域许多疾病因缺乏有效的供体及组织重建的材料，目前的治疗效果并不理想。 目的：通过查阅已发表的文献，对脱细胞材料的来源进行总结，并对在眼科临床和基础研究中使用脱细胞材料的文献进行分析，以促进 脱细胞组织材料在眼科的有效应用。 方法：以“脱细胞技术”分别与“角膜、结膜、泪腺、眼睑、泪小管、小梁网、视网膜、巩膜、眼眶”组合检索万方数据库、中国知网 数据库，以“acellular，decellularized”分别与“cornea，conjunctiva，lacrymal gland，eyelid，lacrymal drainage，trabecular meshwork， retina，sclera，orbial”组合检索PubMed数据库，检索时间范围设置为2014年1月至2020 年8月，最终纳入文献56篇，其中英文49篇、中文 7篇。 结果与结论：①当前眼科使用的脱细胞组织的有多种的来源，大致可以分为人源性、动物源性及体外细胞培养后脱细胞基质3类；②眼科 疾病的重建和修复治疗中使用脱细胞组织材料可以取得较好的临床效果，能挽救部分盲人的视力；③通过脱细胞支架联合受体细胞移植 获取含有活性细胞的植片，是未来眼科再生医学治疗的一个新方向；④脱细胞材料应用过程中发现一些不足，如适应时间较长、移植片 溶解及收缩、细胞化不完全等。 关键词：材料；眼科；脱细胞技术；脱细胞组织；组织重建；再生医学；综述
两种羊膜脱细胞基质制备方法的比较
两种羊膜脱细胞基质制备方法的比较雷宁静;胡炜;王成春;朱根明;杨琳琳;关方霞【摘要】目的:探究制备羊膜脱细胞基质的方法.方法:取新鲜羊膜标本,分别采用TritonX-100(Triton组)预处理(恒温36 h)和甘油预处理(4℃,24 h×3次),再经胰蛋白酶、EDTA酶消化(分别用时4 h和10 h),制备羊膜脱细胞基质.经HE染色和扫描电镜观察2组羊膜脱细胞基质残留细胞数和组织结构,并观察接种的第3代人脐带间质干细胞在2种羊膜脱细胞基质上的黏附、生长状况.结果:上述2种方法制备的羊膜脱细胞基质均为白色、半透明膜状物,无细胞及其他组织残留.Triton组羊膜脱细胞基质结构均匀平整,操作时间短.甘油组样本表面凹凸不平,看不到细胞形态.脐带间质干细胞在2种羊膜脱细胞基质表面黏附、增殖状况均良好,Triton组细胞增殖状况总体优于甘油组(P<0.05).结论:TritonX-100预处理并酶消化法是制备羊膜脱细胞基质较好的方法.【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(045)004【总页数】4页(P572-575)【关键词】羊膜脱细胞基质;脐带间质干细胞;生物相容性【作者】雷宁静;胡炜;王成春;朱根明;杨琳琳;关方霞【作者单位】郑州大学生物工程系,郑州450001;郑州大学第一附属医院神经外科,郑州450052;郑州大学生物工程系,郑州450001;郑州大学生物工程系,郑州450001;郑州大学生物工程系,郑州450001;郑州大学生物工程系,郑州450001【正文语种】中文【中图分类】R318.08生物活性材料可用于修补受损组织和大面积缺损，是组织工程的研究热点。
羊膜具有免疫原性极低，排异反应小，可分泌多种生长因子并含有多种炎性因子及新生血管抑制因子等生物学特性，是一种良好的生物活性载体［1］。
羊膜脱细胞基质是一种特殊的细胞外基质，作为细胞培养的生物载体，特别是作为生物活性载体，已用于干细胞体外培养。
不同细胞外基质对细胞行为的影响
不同细胞外基质对细胞行为的影响细胞是生命的基本单位，而细胞外基质是细胞周围的环境。
虽然细胞外基质一直被视为一种被动结构，但其实它对细胞行为产生了深远的影响。
细胞外基质对于细胞的生长、分化和迁移等方面都会产生影响。
本文将讨论不同细胞外基质对细胞行为的影响。
1. 胶原蛋白基质胶原蛋白是一种由胶原蛋白纤维组成的基质。
它是一种坚韧而具有弹性的基质，是许多组织的重要组成部分。
胶原蛋白基质对于细胞生长和迁移产生了显著的影响。
胶原蛋白基质可以为细胞提供支持，同时也可以作为细胞迁移时的基塑体。
研究表明，胶原蛋白基质可以通过改变细胞-基质互作的方式来影响细胞的迁移特性。
胶原蛋白基质表面的蛋白质可以与细胞表面的整合素相互作用，从而控制细胞的迁移速度和方向。
2. 环境压力环境压力是指外部环境对细胞造成的压力，例如机械性质的变化、化学物质的变化等。
环境压力可以改变细胞外基质的物理、化学性质，从而对细胞行为产生影响。
研究发现，细胞对环境压力的响应会影响细胞在细胞外基质中的行为。
当环境压力增加时，细胞会开始分泌胞外基质，并调节细胞外基质的物理和化学性质，从而使细胞外基质适应环境的改变。
同时，环境压力也能改变细胞的形态和运动特性，从而影响细胞外基质的形态和结构。
3. 玻璃基质玻璃基质是一种高分子化合物，它由聚乙烯醇、DMSO和水组成，具有高度透明性和生物相容性。
玻璃基质是一种独特的细胞培养基质，对于细胞生长和分化的影响备受关注。
研究表明，玻璃基质可以提供一种类似于细胞外基质的结构支持，从而促进细胞的生长和分化。
此外，玻璃基质还可以调节细胞的代谢和信号通路活性，从而影响细胞外基质的光学性质和荧光性质。
4. 含细胞因子的基质含细胞因子的基质是一种含有多种细胞因子的基质，它可以在体外模拟细胞外环境。
与其他细胞外基质不同的是，它可以更直接地影响细胞行为。
研究表明，含细胞因子的基质可以促进细胞生长和分化，并增强细胞迁移的能力。
细胞因子的类型和浓度对细胞行为的影响是不同的，因此需要进行详细的研究来确定最佳的培养基质构成。
不同方法处理的角膜脱细胞基质组织学生物特性的比较
一
已被批 准 用 于 临 床 ， 对 角 膜 脱 细胞 基 质 有 过 尝 而 试 Ｊ但 未见 系统报 道 。脱 细 胞 角 膜基 质 最 大 的优 ５，
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脱 细胞 基质 （ ｃｅｕｒｃｒｅｌ ａ ｘ Ａ Ｃ ａｃｌ ａ ｏｎａ ｍ ｔ ， Ｃ Ｍ）主 ｌ ｒ ｉ
要特点是 良好的生物相容性 ， 柔韧性和低抗原性并 含有促进细胞黏附生长 、 增殖和分化的物质 ， 其作为 组 织 工 程 材 料 支 架 越 来 越 受 到 视 ， 用 于 膀 已 胱 、 骨 ］羊 膜 等 的重 建 ， 细胞 真皮 基 质 Ｊ 软 、 ３ 脱 ４
ｒ ｍｉａ ｃ ｆ Ｃ ａ Ｗ ｃｍ ａｅ ｉ ｔ ｔ ｆ ｒｅ． ｏ ｃ ｉ ： Ｃ Ｍ ｔ ｓ ｆ ｅ ｔ ｔ ｓ ｔ ｎ ｅｏ Ｃ Ｍ ｗ ｓ Ｏ ｏ ｐ ｒｄｗｔ ａ ｏ ｏｎａ Ｃ ｎ ｌｓ ｎ Ａ Ｃ （ｒｐｉ— ｒｚｎｍｅ — ａ ｔ Ａ ｌ ｈｈ ｃ ｕｏ ｙ ｎ ｏ ｈ
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于新鲜角膜 。结论 ： 用胰酶 一冷冻法 获得 的脱细胞基质与 自然角膜 接近 ， 可作为组织 工程角膜支 架材料和 角膜 替
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不同脱细胞方式下所得胞外基质存在的差异范利梅;夏荣;窦晓晨【摘要】BACKGROUND:Compared with single or composite biomolecular materials, decellulazied matrices are more biomimetic to natural ectocytic surroundings. So cel-secreted extracellular matrix is paid more and more attention in the field of tissue engineering, and the composition of these matrices are influenced by decellulezired preparation methods more or less. But there are few studies about the biological effect of different decellulazried methods on the extracellular matrix. OBJECTIVE:To investigate the composition of cel-secreted extracellular matrices in vitro by different decellularizing methods and their effects as surface modification on cytobiological reaction. METHODS:After the treatment of different decellularizing methods (freeze/thaw cycles, trypsin, weak alkal, detergents), the extracellular matrix was obtained and grouped into four kinds. The biological composition of the extracellular matrix was determined by ELISA assay. Then osteoblasts were seeded onto the four kinds of extracellular matrix surfaces. cells cultured normal y served as controls. The effect of extracellular matrix coatings on cellgrowth and differentiation were determined by MTT test and alkaline phosphatase activity test. RESULTS AND CONCLUSION:The residual components were the most in the freeze-thaw group, fol owed by the detergent and weak alkal groups, and the least in the trypsin group. Compared with the control group, the absorbance value of cells were lower in the freeze-thawand detergent groups at days 3, 5, 7 after inoculation (both P<0.05);the alkaline phosphatase activity was lower in the trypsin group at days 5, 7 after inoculation (P<0.05), in the weak alkal group at 7 days after inoculation (P<0.05), and in the detergent group at days 3, 5, 7 after inoculation (P<0.05). Therefore, we can harvest more extracellular matrices by the freeze-thaw method, and the extracellular matrix coating synthesized by the freeze-thaw method is more helpful for cellgrowth than others.%背景：比起单一或复合的生物活性分子材料，脱细胞胞外基质更接近天然生物体内的细胞外环境，在组织工程中得到越来越多的重视和应用，但脱细胞方法会影响所得胞外基质的结构和成分，目前缺少脱细胞方法对胞外基质影响的研究。
目的：分析不同脱细胞方法所得胞外基质的成分和作为修饰表面对细胞生物学效应的影响。
方法：取生长良好的第3代SD乳鼠成骨细胞，分别采用冻融法、胰酶法、去污剂法、弱碱法脱去细胞留下基质，形成4组胞外基质，通过酶联免疫吸附实验分析胞外基质的生物成分。
分别在4组胞外基质表面接种成骨细胞，以常规培养的细胞为对照，进行MTT比色实验、碱性磷酸酶活性检测，对比5组成骨细胞的生物活动。
结果与结论：冻融法组胶原成分与胞体残留成分较多，去污剂法组和弱碱法组次之，胰酶法组最少。
冻融法组接种第3，5，7天的细胞A值高于对照组(P<0.05)，去污剂法组接种第3，5，7天的细胞A值低于对照组(P <0.05)。
胰酶法组接种第5，7天的细胞碱性磷酸酶活性低于对照组(P <0.05)；弱碱法组接种第7天的细胞碱性磷酸酶活性低于对照组(P<0.05)；去污剂法组接种第3，5，7天的细胞碱性磷酸酶活性低于对照组(P <0.05)。
表明4种方法中，冻融法脱细胞能够获得更多的胞外基质，所构建基质涂层更有利于细胞的增殖。
【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2014(000)030【总页数】5页(P4863-4867)【关键词】生物材料;骨生物材料;成骨细胞;细胞外基质;脱细胞方法;胰酶法;冻融法【作者】范利梅;夏荣;窦晓晨【作者单位】安徽医科大学第二附属医院口腔科，安徽省合肥市 230601;安徽医科大学第二附属医院口腔科，安徽省合肥市 230601;安徽医科大学附属口腔医院种植科，安徽省合肥市 230032【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言 Introduction胞外基质作为细胞自身分泌代谢的产物，含有多种生物活性分子，对细胞的生物学行为起到重要的调节作用。
各种胞外基质分子(如胶原、纤连蛋白、生长因子等)的生物材料研究都已获得了较为肯定的结果[1-11]。
但是从仿生的角度，完整的胞外基质更接近天然生物体内的细胞外环境和成分，更能够参与促进组织愈合，同时具有低抗原性和可降解性，成为生物材料领域的又一热点。
一方面保有组织形态的胞外基质，如脱细胞处理的真皮、血管、膀胱等作为相应组织的替代物相继开发成功，它们无论在动物实验及临床应用上都显示出了良好的应用前景[12-21]。
另一方面通过脱细胞得到的无定形胞外基质，既可以作为植入体表面改性材料，也可以作为不规则缺损的植入材料，也成为了生物材料学界备受关注的新型材料[22-29]。
脱细胞胞外基质是通过脱出组织细胞的方法得到完整的胞外基质，最大程度保留了其生物活性，去除组织的移植免疫原性。
常用到的脱细胞方法有机械法、酶消化法、化学去垢剂法等，这些方法或多或少会影响胞外基质的生物性能，但是目前对脱细胞方法的研究多集中在组织器官的脱细胞处理及其形态学和生物力学分析[30-40]，缺少探讨这些脱细胞方法对所得无定形胞外基质生物学效应的直接影响。
实验采用不同方法脱细胞，分析所得胞外基质的成分，并将所得的胞外基质作为生物反应表面接种细胞，观察其上细胞的生物行为，从而评估各种构建方式，为进一步筛选高效、安全的脱细胞方法提供依据。
1 材料和方法 Materials and methods设计：细胞-材料学体外对照观察实验。
时间及地点：于2013年7至12月在安徽医科大学口腔医学院中央与地方共建口腔医学中心实验室完成。
材料：SPF级SD乳鼠由安徽省实验动物中心提供。
实验方法：不同脱细胞方式下所得胞外基质差异实验的主要试剂：试剂来源新生小牛血清杭州四季青高糖DMEM培养基 HyClone胰蛋白酶 Solarbio兔抗鼠CollagenⅠ抗体、兔抗鼠actin抗体、羊抗兔IgG抗体、TAB显色试剂盒镇江厚普生物科技有限公司碱性磷酸酶测定试剂盒南京建成生物研究工程所成骨细胞的培养：采用改良组织块法培养成骨细胞[41-45]，取2只新生1-3 d SD 乳鼠断颈处死，放入体积分数75%乙醇中浸泡消毒5 min，无菌操作取下颅盖骨组织，除去附着的血管及结缔组织，用Hank液清洗3次，剪成1 mm3大小的碎块。
用0.25%胰蛋白酶在37 ℃条件下消化20 min；中止消化后用弯吸管吸取碎骨片，均匀接种于25 mL的培养瓶中，翻转培养瓶在体积分数5% CO2的培养箱中孵育二三小时，转正培养瓶并加入含有体积分数20%小牛血清的高糖DMEM培养液后继续培养，3 d后换液，7-10 d后待细胞融合成单层后再传代培养。
取第3代细胞用DMEM培养液将成骨细胞浓度调整为1×108 L-1，取1 mL/孔接种与多个24孔板中，培养三四天直至细胞长满表面，待用。
胞外基质表面的分组构建：①冻融法组：取3板上述成骨细胞，吸出长满成骨细胞培养板中的培养液，0.01 mol/L PBS漂洗3次后，反复快速冻融3次，PBS漂洗3次，备用。
②胰酶组：取3板上述成骨细胞，吸出长满成骨细胞培养板中的培养液，0.01 mol/L PBS漂洗3次后，每孔加入300 μL胰酶20 min，加入培养基中和，吸出培养基，PBS漂洗3次，备用。
③去污剂法组：取3板上述成骨细胞，吸出长满成骨细胞培养板中的培养液，0.01 mol/L PBS漂洗3次后，每孔加入500 μL 0.1% TritonX-100，4 ℃过夜，PBS漂洗3次，备用。
④弱碱法组：取3板上述成骨细胞，吸出长满成骨细胞培养板中的培养液，0.01 mol/L PBS漂洗3次后，每孔加入500 μL 20 mmol/L氨水，4 ℃过夜，PBS漂洗3次，备用。