单克隆抗体制备步骤及注意事项
抗体制备方法
第1章 抗体制备技术抗体（antibody，Ab）是机体B淋巴细胞受到抗原刺激后所产生的特异性球蛋白，故亦称为免疫球蛋白。
机体初次接触抗原后，激发机体产生的特异性抗体亲和力低、持续时间短；而当同一抗原再次刺激机体后，则能产生高亲和力、高效价、持续时间长的抗体。
由于抗体能与相应的抗原发生特异性结合反应，因此特异性抗体是免疫学实验中常用的试剂，不仅对于抗原的分析鉴定和定量检测极为重要，而且广泛应用于临床疾病的诊断、治疗和预防中。
在免疫学检测中应用的主要抗体是多克隆抗体和单克隆抗体，多克隆抗体常用免疫动物的方法获得，而单克隆抗体则采用杂交瘤技术制备。
本章主要介绍这两种抗体的制备方法。
实验一 多克隆抗体的制备多克隆抗体（polyclonal antibody）是机体针对抗原的不同表位所产生的抗体混合物。
是用制备的纯化免疫原按照一定的免疫程序接种给所选择的动物，在含有多种抗原表位的抗原刺激下，该动物体内多个B细胞克隆被激活并产生针对这种抗原多种不同表位的抗体混合物。
含有这些特异性抗体的动物血清称为免疫血清或抗血清，而从免疫血清中纯化的免疫球蛋白则称为抗体。
一、抗体制备的流程优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫原性，动物的应答能力以及免疫程序（如免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因素）。
因此制备高质量的抗体必须具备理想的免疫原、适宜的动物和切实可行的免疫方案。
（一）免疫动物的选择免疫用的动物主要为哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、豚鼠及小鼠等。
选择动物要依据抗体制备的条件而定。
1．抗原与动物的种系 抗原的来源与免疫动物之间种系关系越远，其抗原免疫原性越强，越易产生免疫应答；反之，种系关系越近，则抗原免疫原性越弱。
如用鸡球蛋白免疫亲缘关系较近的鸭或鹅，则免疫原性较差。
2．动物的个体状况 动物的年龄与健康状况可影响产生抗体的效价，年龄太小者易产生免疫耐受，而年老体衰者免疫应答能力低下，不易产生高效价的抗体。
ABO、RhD血型定型检测卡(单克隆抗体)
长春博迅生物技术有限责任公司一、准备工作（一）微柱凝胶检测卡的准备：观察检测卡外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡平衡至室温（18－25℃），再用专用离心机离心5分钟。
（二）检测标本的准备：1．红细胞悬液的制备：取被检者压积红细胞10微升，加入1毫升红细胞稀释液或生理盐水，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。
2．血浆标本的制备：用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，3000r/min 离心3min或3500r/min 离心2min，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。
二、操作步骤1. 将准备好的检测卡做好标记。
2. 将待检者血浆分别加入第5和第6管中，每管50微升。
3. 将待检者的红细胞悬液分别加入第1至第4管中，每管50微升。
4. 将0.8%浓度的ABO血型反定型红细胞试剂，分别加入第5和第6管，各50微升。
5. 使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟），取出检测卡，肉眼判定结果。
结果判定：阳性结果：红细胞表面抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或悬于胶中，为阳性反应。
阴性结果：红细胞表面抗原未与相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞完全沉降于微柱凝胶管尖底部，为阴性反应。
血型判定：三、注意事项1. 检测标本必须为抗凝血。
2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。
尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。
如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本试验。
3. 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体强阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。
4.若正定型结果凝集强度小于3＋或反定型结果凝集强度小于2+需进一步分析，可能为亚型或弱化抗原、抗体。
5. 每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置一段时间至室温，以防冷凝集。
6.检测卡应放在2-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。
(培训课件)单克隆抗体PPT幻灯片
4
• 抗体：机体免疫细胞被激活后，由分化成熟的 B淋巴细胞-浆细胞合成、分泌的免疫球蛋白。
5
6
脾脏与B淋巴细胞(B lymphocytes)
淀）。
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（2）HAT培养基的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
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HAT培养基筛选
H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶
(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase)
骨髓瘤细胞 (myeloma cells)的选择原则
①克隆效应高，能在体外连续生长，倍增期短于24小时； ②缺乏HGPRT酶和TK酶； ③本身不合成Ig，且不抑制杂交瘤细胞中的Ig合成基因。 ④与小鼠淋巴细胞融合率相当高；
脾细胞的选择
由于目前常用的骨髓瘤细胞普遍来自Bal b/c小鼠，因此应尽 量选择同源的Bal b/c健康小鼠（8-12周）作为免疫动物。
死亡
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3、阳性杂交瘤细胞的筛选（抗体的检测）
• 检测时间：杂交瘤细胞布满孔底1／10时开 始检测特异性抗体，进行筛选。
• 检测方法：最常用酶联免疫吸附法(ELISA) 间接免疫荧光法(IFA) 放射免疫法(RIA) 双相扩散法
3）离心，弃上清，加15mL HAT培养基，混匀，转入96孔 板（预先有HAT培养基培养的饲养细胞），每孔100 ul。
单克隆抗体制备步骤及注意事项
单克隆抗体制备步骤及注意事项单克隆抗体（Monoclonal antibody，mAb）是指由单一B细胞克隆分离得到的抗体，其具有高特异性和高亲和力。
制备单克隆抗体的方法主要有杂交瘤技术和重组DNA技术。
以下是单克隆抗体制备的步骤及注意事项。
步骤一：抗原免疫1.选择合适的抗原：根据需要检测的分子或细胞表面标志物，选择合适的抗原。
2.免疫动物：常用的动物有小鼠、兔子等。
选择适合的动物后，根据抗原的种类和免疫动物对该抗原的敏感性，设计免疫方案。
3.免疫计划：免疫计划包括免疫剂量、免疫途径和免疫次数等。
通常先进行原位免疫，然后再以单体或混合抗原进行体内免疫。
步骤二：细胞融合1.收集脾细胞：在最佳时期，解剖免疫动物，取出脾脏。
2.细胞培养：将收集的脾细胞在无菌条件下分散成单个细胞，并在培养基中培养，以供细胞融合使用。
3.准备骨髓瘤细胞：选择合适的骨髓瘤细胞，例如NS0或SP2/0等。
将其培养至对数生长期。
4.细胞融合：在抗原刺激下，将脾细胞与骨髓瘤细胞以一定比例混合，用聚乙烯醇或其他化合物促进细胞融合。
步骤三：细胞筛选与扩展1. HT增重培养：用含有hprt缺陷的培养基筛选融合细胞，以选择杂交瘤细胞。
2. Limited Dilution扩展：以一细胞一孔的方式将杂交瘤细胞进行有限稀释，使其实现单克隆化。
3.细胞培养：将单克隆细胞株移植到培养瓶中，进行培养和扩增。
步骤四：单克隆抗体鉴定1.酶联免疫吸附试验（ELISA）：用ELISA方法筛选单克隆细胞株，检测其抗原特异性。
2.免疫组织化学检测：将单克隆抗体应用于细胞和组织切片，检测其在特定细胞或组织中的反应。
3.流式细胞术：通过流式细胞仪检测单克隆抗体与特定细胞表面标志物的结合情况。
步骤五：单克隆抗体生产与纯化1.细胞培养：将单克隆细胞株培养扩增至一定程度。
2.抗体收集：将培养上清液进行抗体收集。
3.纯化与浓缩：利用亲和层析、离子交换、凝胶过滤等技术，对抗体进行纯化和浓缩。
单克隆抗体制备流程
单克隆抗体制备流程单克隆抗体是一种来源于单一B细胞克隆的抗体，具有高度的特异性和亲和力，被广泛应用于生物医药领域。
其制备流程主要包括免疫原制备、动物免疫、细胞融合、筛选和鉴定等步骤。
下面将详细介绍单克隆抗体制备的流程。
1. 免疫原制备。
首先需要准备纯化的抗原蛋白，可以是蛋白质、多肽、细胞膜蛋白等。
抗原蛋白的纯度和活性对单克隆抗体的制备至关重要，因此需要进行严格的纯化和活性检测。
通常采用亲和层析、离心、电泳等方法进行抗原蛋白的提取和纯化。
2. 动物免疫。
将纯化的抗原蛋白注射到小鼠或兔子等动物的体内，诱导其产生特异性抗体。
在免疫过程中，需要注意控制免疫程序，监测抗体滴度，以及合理调整免疫方案，以提高单克隆抗体的产量和质量。
3. 细胞融合。
从免疫动物中获取脾细胞或骨髓细胞，与骨髓瘤细胞（如SP2/0、NS-1等）进行融合，得到杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞具有较高的产抗体能力，能够长期稳定地分泌单克隆抗体。
4. 筛选和鉴定。
通过ELISA、免疫印迹、细胞免疫荧光等方法对杂交瘤细胞培养上清液进行筛选和鉴定。
筛选出特异性较强的单克隆抗体阳性杂交瘤细胞，并进行亚克隆的鉴定，最终获得单克隆抗体细胞株。
5. 扩大培养和纯化。
将筛选出的单克隆抗体细胞株进行扩大培养，获得大量的单克隆抗体上清液。
然后采用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等方法对单克隆抗体进行纯化，获得高纯度的单克隆抗体制剂。
总结。
单克隆抗体制备流程是一个复杂而又精细的过程，需要在每个环节都严格控制条件，确保单克隆抗体的产量和质量。
通过上述步骤的实施，可以获得高效、高纯度的单克隆抗体，为生物医药领域的研究和应用提供有力支持。
单抗配制过程护士要注意事项_概述说明
单抗配制过程护士要注意事项概述说明1. 引言1.1 概述本文旨在概述单抗配制过程中护士需要注意的事项。
随着单克隆抗体治疗的普及，单抗配制成为了临床工作中不可或缺的环节。
正确而规范地完成单抗配制过程对于确保治疗效果、保证患者安全至关重要。
因此，本文将介绍在单抗配制过程中，护士应该关注和遵循的几个主要方面。
1.2 文章结构本文按以下几个部分进行阐述：引言、单抗配制过程护士要注意事项、警示和风险提示、术语解释与常见问题解答以及结论。
通过这些部分的详细介绍，读者将能够全面了解在单抗配制过程中所需遵循的步骤、注意事项和相关知识。
1.3 目的本文旨在提供给从事临床工作的医务人员参考，特别是与单克隆抗体治疗有关的护士。
通过详细描述单抗配制过程中需要注意和遵循的各个方面，我们的目标是帮助他们更好地理解并正确执行单抗配制工作，提高临床操作的准确性和安全性。
以上为“1. 引言”部分内容。
2. 单抗配制过程护士要注意事项:2.1 确认患者信息和医嘱:在开始单抗配制之前，护士必须仔细核对患者的个人信息，包括姓名、年龄、性别等，并与医嘱进行一致性确认。
确保所使用的单抗是给予正确的患者，并且符合医生指示。
2.2 准备工作环境和材料:在开始单抗配制之前，护士需要确保工作环境整洁无菌。
清理工作台面并使用消毒剂对其进行消毒。
同时，检查所有所需材料是否齐全并处于有效期内，包括注射器、针头、试剂、溶剂等。
2.3 配置单抗的步骤与规范操作:以下是配置单抗的步骤和规范操作：1) 准备好所有需要用到的药物及溶液。
2) 戴上手套和口罩以确保个人卫生，并避免污染药品。
3) 按照医嘱中规定的剂量准确称量所需药物。
4) 将溶剂转移到药品瓶中，并轻轻摇动使其充分溶解。
5) 将药品抽取并注入空白的注射器中。
6) 顺利进行专用贴纸（标签）的填写以确保能够识别瓶上的药物信息。
7) 在专门的装满可回收容器中丢弃废弃物和使用过的药品容器。
请注意，以上步骤只是一个基本的示例，并且应根据实际情况和医生指示进行调整。
单抗的课程设计
单抗的课程设计一、课程目标知识目标：1. 让学生理解单克隆抗体的概念、结构及功能，掌握其制备的基本原理。
2. 使学生了解单克隆抗体在医学、生物学研究及临床应用中的重要性。
3. 帮助学生掌握单克隆抗体的应用领域，如疾病诊断、治疗及生物技术。
技能目标：1. 培养学生通过查阅资料、进行实验设计，提高科学研究和解决问题的能力。
2. 培养学生动手操作能力，能够独立完成单克隆抗体制备的实验操作。
3. 提高学生的团队合作能力和实验数据分析能力。
情感态度价值观目标：1. 培养学生对生物学科学的兴趣，激发其探索生命奥秘的欲望。
2. 培养学生严谨的科学态度，使其遵循实验操作规范，注重实验安全。
3. 增强学生的环保意识，使其在实验过程中关注生物伦理问题，遵循可持续发展原则。
课程性质：本课程为生物学科选修课程，针对具有一定生物学基础的高中生。
学生特点：学生具备一定的生物学知识，具有较强的学习能力和动手能力，对实验课程有较高的兴趣。
教学要求：结合学生特点，注重理论与实践相结合，通过启发式教学和实验操作，使学生能够全面掌握单克隆抗体的相关知识，提高其科学素养。
在教学过程中，关注学生的学习进度，及时调整教学策略，确保课程目标的实现。
将课程目标分解为具体的学习成果，以便后续教学设计和评估。
二、教学内容1. 单克隆抗体的概念与特性- 单克隆抗体的定义- 单克隆抗体与多克隆抗体的区别- 单克隆抗体的结构及功能特点2. 单克隆抗体的制备原理及方法- 制备原理：杂交瘤技术- 制备流程：细胞融合、筛选、克隆化培养、抗体检测- 常用制备方法：小鼠腹腔注射法、体外培养法3. 单克隆抗体的应用- 医学诊断：病原体检测、疾病诊断- 生物技术：重组蛋白制备、免疫组化- 临床治疗：靶向治疗、免疫调节4. 实验操作技能培训- 杂交瘤细胞的制备与筛选- 克隆化培养与抗体检测- 单克隆抗体制备实验操作注意事项5. 教学内容的安排与进度- 第1课时：单克隆抗体的概念与特性- 第2课时：单克隆抗体的制备原理及方法- 第3课时：单克隆抗体的应用- 第4课时：实验操作技能培训教材章节：《生物》选修3 第7章 免疫学原理及其应用教学内容依据课程目标，结合教材章节进行选择和组织，保证科学性和系统性。
Dot blot 原理
免疫学活性测定Dot blot 原理：原理：抗原抗体和受体配体结合可以被利用作蛋白质简单快速的定量分析。
被吸附在96孔板底部的抗原抗体或者受体配体可以被标记的抗体识别并进行定量记数形成定量分析方法的基础。
由于细胞培养需要不断监测，工作量很大。
因此快速简洁的定量分析是检测细胞表达水平监测的重要手段。
主要监测方法包括Dot blot 和ELISA。
Dot blotDot blot是最快速简捷的方法之一，简述如下：在超净台内，使用无菌多孔加样器将96孔板内的细胞克隆培养液以5μL上样量，成排点于硝酸纤维素膜上并风干，记录好样品顺序（可在膜的正面边缘处标记正面及名称，也可通过在膜的右下角剪去一角作为标记，识别膜的正反面及方向）。
取上面风干好的硝酸纤维素膜，用配制好的封闭液（脱脂奶粉或白蛋白溶液）室温震荡孵育至少一小时。
此步骤的目的是封闭硝酸纤维素膜上的非特异性蛋白结合位点，以避免下一步加入的抗体与膜发生非特异性结合。
将封闭好的硝酸纤维素膜浸泡在第一抗体中，室温震荡孵育1小时，然后用TTBS溶液淋洗膜2遍后，将膜浸泡到TTBS溶液中，室温震荡洗涤3次，每次5分钟。
将洗涤后的硝酸纤维膜浸泡在含有酶标第二抗体溶液中，室温震荡孵育1小时，然后用TTBS溶液淋洗膜2遍后，将膜浸泡到TBST溶液中，室温震荡洗涤3次，每次5分钟。
最后，将膜浸于荧光显色剂（新鲜刚刚混合的等量A和B 液）。
1-2分钟后将浸泡过的膜，抖去多余显色剂，夹入保鲜膜（保鲜膜应薄而透明，以免阻挡曝光效果）中，同时观察显色情况，确定大致曝光时间（一般情况下，如果样品亮度肉眼可见且较强，那么初次曝光时间应较短，一般选3-5秒；如果样品亮度肉眼不可见，则初次曝光时间应略长一些，一般选择1分钟），曝光完毕，经显影，定影后，用清水冲洗X光胶片，根据胶片上结果情况，再将膜放入曝光暗盒中进行二次曝光及显影、定影反应。
溶液配制及整个操作过程请斑点杂交操作流程图。
单克隆抗体制备操作方法及注意事项JEN
单克隆抗体制备操作方法及注意事项JEN无菌室清洁要求：1、进入无菌间，须更换白大褂，口罩、鞋套必须戴上，最好戴上帽子、手套；2、进去后用酒精棉球擦洗手；3、生物安全柜常见酒精棉球擦洗，擦后棉球不显黑；柜内垃圾当日及时清理；柜内所有实验操作应在酒精灯前进行；经常紫外杀菌；4、无菌间物件传递，经窗口紫外照射方可；5、有关试剂使用后及时用封口膜封住；6、细胞培养盖子旋松，以便二氧化碳气体进入；拿瓶、加液体均需注意瓶口，避免污染瓶盖；7、出门后需要用钥匙锁上；8、整个无菌间两周清洁一次；免疫动物：选择与瘤细胞同一品系的动物做为免疫对象，现在常见的是Balbc/c小鼠，6-8周龄，一种抗原一次性注射2-3只小鼠，小鼠不宜过大，雌性相对较好；首次注射抗原100微克与等体积弗氏完全佐剂混匀，在背部两侧皮下与腹腔分别注射，形成几个小泡；间隔两周左右时间（14天）二次免疫注射抗原50微克与等体积弗氏不完全佐剂混匀，在背部皮下及腹腔分别注射，一般上次背部小泡依然存在；间隔两周左右时间（14天）三免小鼠注射抗原50微克与等体积弗氏不完全佐剂混匀，在背部皮下及腹腔分别注射，一般上次背部小泡依然存在；间隔7-10天左右时间尾部采血测定抗体效价：方法一：手拇指和食指从背部抓住小鼠颈部皮肤，将小鼠头朝下，小鼠保定后将其尾巴置于50°热水中浸泡数分钟，使尾部血管充盈。
擦干尾部，再用剪刀或刀片剪去尾尖1～2mm，用试管接流出的血液，同时自尾根部向尾尖按摩。
取血后用棉球压迫止血并用6%液体火棉胶涂在伤口处止血。
每次采血量0.1ml。
方法二：固定小鼠，一人捏住小鼠耳朵固定小鼠，同时抓住尾梢协助取血，另一个人左手捏住小鼠尾巴根部，右手用酒精棉球擦洗，使尾部血管充盈，食指抵住尾巴，用一次性1ml注射器穿刺血管，用10微升移液枪及时吸取全血2.5微升，加在盛有97.5微升的PBS缓冲液中稀释10倍，再稀释一百倍，之后做倍比稀释测定效价，读数到阴性血清值的 2.1倍，合理效价应高于12.8万倍。
单克隆抗体
克隆化方法
经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一 般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞 有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤 细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细胞丧失产生抗体的能力，所 以需要再次或多次克隆化培养。克隆化次数的多少由分泌能力强弱和抗原的免疫性强弱而决定。一般说，免疫性 强的抗原克隆次数可少一些，但至少要3～5次克隆才能稳定。克隆化的方法很多，包括有限稀释法、显微操作法、 软琼脂平板法及荧光激活分离法等。
周期第1天采血0.2ml（获得0.1ml免疫前血清） 第一次免疫（抗原加弗氏完全佐剂） 第14天第二次免疫（抗原加弗氏不完全佐剂） 第21天采血和ELISA检测 第35天第三次免疫（抗原加弗氏不完全佐剂） 第42天采血和ELISA检测 第56天第四次免疫（抗原溶于PBS或盐水） 第61天细胞融合
细胞融合
融合的方法很多，常用的有转动法和离心法。融合时脾细胞和骨髓瘤细胞的比例为1:1至10:1不等。3:1或 5:1最为常用。
1．试剂与材料 (1)供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。 (2)1640培养液100ml。 (3)完全1640液100ml。 (4)2.5%FCS－1640液50ml。 (5)HAT培养液100ml。 (6)50%PEG：取分子量4000，高纯度的（日本进口或Serva）PEG10g放入25ml瓶中高压灭菌，使用前用预热 于40℃的1640液10ml等量（W/V）混合，以酚红检查pH，一般不必调pH。如pH有改变，可用HCl或NaHCO3调整。 (7)10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。 (8)40孔塑料培养盘。
单克隆抗体制备流程
单克隆抗体制备流程首先，在单克隆抗体制备之前，需要选择一个适当的抗原。
抗原可以是蛋白质、多肽、糖类或其他小分子。
选取抗原时，需要考虑抗原的表达水平、抗原的免疫原性以及抗原的稳定性等因素。
接下来，选择一个合适的实验动物进行免疫。
常用的实验动物有兔子和小鼠。
在免疫之前，需要先给实验动物注射适量的佐剂，以增强免疫效果。
通常，实验动物会被多次免疫，每次免疫之间有一段时间的间隔。
在实验动物免疫一段时间后，可以进行细胞融合以产生混杂瘤细胞。
混杂瘤细胞通常是由B细胞和骨髓瘤细胞融合而成，对于小鼠骨髓瘤细胞，常用的有SP2/0和NS0细胞系。
融合的方法主要有两种：一种是将免疫细胞和骨髓瘤细胞混合，然后使用聚乙二醇（PEG）进行融合；另一种是使用电击脉冲进行细胞融合。
融合细胞会经过适当的培养条件进行筛选和扩增。
在融合细胞扩增过程中，会进行筛选以保证融合细胞是产生单克隆抗体的。
最常用的筛选方法是酶联免疫吸附测定（ELISA）。
抗原会被固定在微孔板上，然后将培养液中的细胞涂覆在孔中。
如果其中一孔中有抗体分泌，则抗原会被结合，并且可以通过添加辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗和基质来检测抗体的存在。
经过筛选和鉴定后，选择一个或多个产生单克隆抗体的细胞进行单克隆扩增。
单克隆扩增时，可以通过细胞有限稀释法以及酵母酶聚合酶链式反应（YAC-PCR）等方法进行。
最后，可以通过收集上述单克隆细胞的上清液或细胞提取物来得到单克隆抗体。
上清液或细胞提取物中的抗体可以通过纯化方法，如蛋白A/G 亲和层析或蛋白L亲和层析等，得到纯化的单克隆抗体。
综上所述，单克隆抗体的制备流程包括抗原选择、免疫动物、细胞融合、筛选和克隆等步骤。
通过这些步骤，可以获得单克隆抗体用于科学研究和临床应用。
单克隆抗体制备步骤及注意事项
单克隆抗体制备步骤及注意事项制备步骤如下：1.免疫原选择：选择具有免疫原性的抗原作为单克隆抗体制备的靶点。
免疫原可以是蛋白质、多肽、糖类等。
2.动物模型选择：根据免疫原的性质选择适合的动物模型，如小鼠、兔子等。
应考虑动物模型对免疫原的免疫响应情况以及制备成功的单克隆抗体的应用价值。
3.免疫原注射：将免疫原注射到动物模型体内，通常通过多次注射来诱导免疫反应。
在注射前，可以选择适当的佐剂来增强免疫原的免疫原性，如完全弗氏佐剂或委氏佐剂。
4.混合细胞瘤的制备：在免疫原注射后，等待免疫反应充分发生。
细胞瘤可用于细胞融合，产生融合细胞并筛选单克隆抗体。
常用的细胞瘤包括SP2/0和NS-15.细胞融合：将免疫小鼠脾细胞和癌细胞融合成杂交瘤细胞。
融合的常见方法有聚乙二醇融合法和电融合法。
6.肿瘤细胞筛选：将融合细胞播种在含有选择剂的培养基上，通过选择剂来杀死未融合细胞和不产生抗体的融合细胞，留下产生单克隆抗体的细胞。
7.单克隆抗体筛选：对产生的单克隆细胞进行筛选，常用的方法有ELISA和细胞免疫荧光检测。
8.单克隆抗体培养：将筛选出的单克隆细胞进行扩增培养，获得大量的细胞。
9.单克隆抗体纯化：将培养得到的细胞培养上清进行蛋白A/G亲和层析柱纯化，获得纯化的单克隆抗体。
10. 单克隆抗体鉴定：通过Western blot、免疫组化或其它适当的方法对单克隆抗体进行鉴定，确定其特异性和亲和力。
注意事项如下：1.免疫原的选择应根据具体实验要求合理选择，确保其免疫原性和制备成功的单克隆抗体的应用价值。
2.在注射免疫原前，应充分考虑动物模型对所选择免疫原的免疫响应情况，并进行充分的预备实验和试验。
3.免疫小鼠注射免疫原时，需要严格控制免疫原注射的剂量和频率，以避免过度免疫导致不良反应。
4.细胞融合时，应根据实验要求选择合适的融合方法，并注意细胞融合的时间和条件，以获得高效的细胞融合率。
5.单克隆抗体筛选和鉴定时，应使用多种合适的方法进行综合评估，确保获得特异性和亲和力较高的单克隆抗体。
Dot-blot原理
1、取硝酸纤维素膜1张，将标准品倍比稀释、样品、阴性对照、阳性对照点在膜上，风干。
2、将膜置于封闭液（5%脱脂奶粉溶于超纯水中）室温封闭1小时（也可4℃过夜封闭）。
3、弃去封闭液后，加入含有待检样品第一抗体的TTBS缓冲液30mL（抗体稀释度为1：1000），且其中含有1%的脱脂奶粉，室温震荡孵育1小时。
2、间接法：适用于灵敏度要求低，样品含量高的分析方法，步骤如下。将制备好的标准品及样品，加至96孔酶标板，置4℃过夜,或室温放置3小时。用洗涤液PBS-T配制的1%BSA溶液加至板内， 37℃放置1小时。将封闭好的酶标板用洗涤液洗板2次。将一抗加至板内，同时加入两孔空白对照(稀释液)， 37℃放置1小时。用稀释液稀释HRP酶标记的第二抗体加至板内，37℃放置1小时。用洗涤液洗板2次。加入底物液显色和上机读数。
7、取出硝酸纤维素膜，略除去膜上多余溶液后，加入适量的荧光显色剂A、B（一般1/2张96孔板大小的膜加4mLA、B混合液，且A液：B液=1：1）。
8、用保鲜膜将硝酸纤维素膜覆盖，尽量平整，避免产生气泡，并放在曝光夹上，根据样品及标准品的亮度，初步确定曝光时间（一般情况下，如果样品亮度肉眼可见且较强，那么初次曝光时间应较短，一般选3-5秒；如果样品亮度肉眼不可见，则初次曝光时间应略长一些，一般选择1分钟），然后取适当大小的胶片覆盖在薄膜上，关夹曝光。
Dot blot
Dot blot是最快速简捷的方法之一，简述如下：在超净台内，使用无菌多孔加样器将96孔板内的细胞克隆培养液以5μL上样量，成排点于硝酸纤维素膜上并风干，记录好样品顺序（可在膜的正面边缘处标记正面及名称，也可通过在膜的右下角剪去一角作为标记，识别膜的正反面及方向）。取上面风干好的硝酸纤维素膜，用配制好的封闭液（脱脂奶粉或白蛋白溶液）室温震荡孵育至少一小时。此步骤的目的是封闭硝酸纤维素膜上的非特异性蛋白结合位点，以避免下一步加入的抗体与膜发生非特异性结合。将封闭好的硝酸纤维素膜浸泡在第一抗体中，室温震荡孵育1小时，然后用TTBS溶液淋洗膜2遍后，将膜浸泡到TTBS溶液中，室温震荡洗涤3次，每次5分钟。将洗涤后的硝酸纤维膜浸泡在含有酶标第二抗体溶液中，室温震荡孵育1小时，然后用TTBS溶液淋洗膜2遍后，将膜浸泡到TBST溶液中，室温震荡洗涤3次，每次5分钟。最后，将膜浸于荧光显色剂（新鲜刚刚混合的等量A和B液）。1-2分钟后将浸泡过的膜，抖去多余显色剂，夹入保鲜膜（保鲜膜应薄而透明，以免阻挡曝光效果）中，同时观察显色情况，确定大致曝光时间（一般情况下，如果样品亮度肉眼可见且较强，那么初次曝光时间应较短，一般选3-5秒；如果样品亮度肉眼不可见，则初次曝光时间应略长一些，一般选择1分钟），曝光完毕，经显影，定影后，用清水冲洗X光胶片，根据胶片上结果情况，再将膜放入曝光暗盒中进行二次曝光及显影、定影反应。溶液配制及整个操作过程请斑点杂交操作流程图。Dot blot需要TTBS溶解的倍比稀释后的标准品做对照方能进行半定量。同时样品倍比稀释也是半定量所必需。
[整理]Dotblot原理
![[整理]Dotblot原理](https://img.taocdn.com/s3/m/d1f6e166f342336c1eb91a37f111f18583d00ca5.png)
免疫学活性测定Dot blot 原理：原理：抗原抗体和受体配体结合可以被利用作蛋白质简单快速的定量分析。
被吸附在96孔板底部的抗原抗体或者受体配体可以被标记的抗体识别并进行定量记数形成定量分析方法的基础。
由于细胞培养需要不断监测，工作量很大。
因此快速简洁的定量分析是检测细胞表达水平监测的重要手段。
主要监测方法包括Dot blot 和ELISA。
Dot blotDot blot是最快速简捷的方法之一，简述如下：在超净台内，使用无菌多孔加样器将96孔板内的细胞克隆培养液以5μL上样量，成排点于硝酸纤维素膜上并风干，记录好样品顺序（可在膜的正面边缘处标记正面及名称，也可通过在膜的右下角剪去一角作为标记，识别膜的正反面及方向）。
取上面风干好的硝酸纤维素膜，用配制好的封闭液（脱脂奶粉或白蛋白溶液）室温震荡孵育至少一小时。
此步骤的目的是封闭硝酸纤维素膜上的非特异性蛋白结合位点，以避免下一步加入的抗体与膜发生非特异性结合。
将封闭好的硝酸纤维素膜浸泡在第一抗体中，室温震荡孵育1小时，然后用TTBS溶液淋洗膜2遍后，将膜浸泡到TTBS溶液中，室温震荡洗涤3次，每次5分钟。
将洗涤后的硝酸纤维膜浸泡在含有酶标第二抗体溶液中，室温震荡孵育1小时，然后用TTBS溶液淋洗膜2遍后，将膜浸泡到TBST溶液中，室温震荡洗涤3次，每次5分钟。
最后，将膜浸于荧光显色剂（新鲜刚刚混合的等量A和B 液）。
1-2分钟后将浸泡过的膜，抖去多余显色剂，夹入保鲜膜（保鲜膜应薄而透明，以免阻挡曝光效果）中，同时观察显色情况，确定大致曝光时间（一般情况下，如果样品亮度肉眼可见且较强，那么初次曝光时间应较短，一般选3-5秒；如果样品亮度肉眼不可见，则初次曝光时间应略长一些，一般选择1分钟），曝光完毕，经显影，定影后，用清水冲洗X光胶片，根据胶片上结果情况，再将膜放入曝光暗盒中进行二次曝光及显影、定影反应。
溶液配制及整个操作过程请斑点杂交操作流程图。
单克隆抗体的制备原理及方法
单克隆抗体的制备原理及方法嘿，你知道单克隆抗体不？那可是超厉害的东西呢！单克隆抗体的制备就像是一场神奇的冒险。
先说说制备原理吧。
想象一下，免疫系统就像一个超级大工厂，里面有各种不同的“工人”。
单克隆抗体的制备就是要找到那个能专门对付特定“坏蛋”的“超级工人”。
通过把特定的抗原注入动物体内，让动物的免疫系统产生反应，就像吹响了战斗的号角。
动物体内的免疫细胞们开始行动起来，其中有一种叫B 淋巴细胞的，它们能产生针对特定抗原的抗体。
这就好比是一群勇敢的战士，找到了攻击的目标。
那制备方法呢？首先，把抗原注射到小鼠等动物体内，让动物产生免疫反应。
然后把动物的脾脏取出来，这里面有很多产生抗体的B 淋巴细胞。
接下来，把这些B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合在一起。
这就像是让两个不同的超级英雄合体，产生更强大的力量。
融合后的细胞既有B 淋巴细胞产生抗体的能力，又有骨髓瘤细胞无限增殖的特性。
然后通过筛选，找到能产生特定抗体的杂交瘤细胞。
这就像是在一堆宝石中找到那颗最闪亮的钻石。
在这个过程中有啥注意事项呢？哎呀，那可不少呢！比如注射抗原的剂量要合适，不然可能效果不好。
融合细胞的时候，条件要控制好，不然成功率就低啦。
筛选的时候要仔细，可不能让那些“滥竽充数”的细胞混进来。
那安全性和稳定性咋样呢？单克隆抗体的安全性还是挺高的呢！经过严格的检测和筛选，确保不会对人体造成危害。
而且稳定性也不错，就像一个可靠的小伙伴，在需要的时候总能发挥作用。
单克隆抗体有哪些应用场景和优势呢？那可多了去了！在医学领域，可以用来诊断疾病、治疗疾病。
比如检测癌症标志物，就像一个超级侦探，能快速找到疾病的线索。
治疗某些疾病的时候，就像一个精准的导弹，直接攻击病变细胞，副作用还小。
在科研领域，也是个得力助手，可以用来研究蛋白质的结构和功能。
实际案例也不少呢！比如治疗某些癌症的单克隆抗体药物，让很多患者看到了希望。
就像黑暗中的一束光，给人们带来了温暖和力量。
单克隆抗体的实验流程
单克隆抗体的实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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单抗制备的详细步骤
单抗制备的详细步骤单抗，也被称为抗体药物，是一种能够识别和结合特定分子的抗体衍生物。
制备单抗的过程通常涉及从动物源中获得特异性抗体、制备抗原以及进行抗体组装和纯化等步骤。
下面是单抗制备的详细步骤：第一步：抗原选择与制备抗原是单抗开发的基础，因此抗原选择至关重要。
一般来说，抗原可以是多肽、蛋白质、细胞表面蛋白或其他重要的识别物质。
抗原的制备可以通过合成化学方法或从相关生物样本中提取制备。
第二步：免疫化学动物一旦获得了抗原，下一步是选择合适的实验动物，并进行免疫化学动物。
常见的实验动物包括小鼠、兔子、狗、大猩猩等。
免疫化学动物的目的是刺激动物的免疫系统产生特异性抗体。
第三步：抗体筛选与克隆在动物体内完成免疫程序后，需要收集动物的血浆或脾细胞等样本，进行抗体的筛选和克隆。
常用的抗体筛选方法包括ELISA、免疫磁球分离等。
选出具有高效结合抗原且具有特异性的单克隆抗体细胞，并将其单克隆化。
第四步：抗体生产与纯化一旦获得了单克隆抗体细胞，接下来就需要进行大规模的抗体生产。
最常用的方法是将单克隆抗体细胞悬浮于培养基中，并使用细胞培养技术进行大规模培养。
培养时间可以根据需要进行调整，通常需要数天至数周。
之后，可以通过离心、滤过等方法收集抗体，然后进行纯化。
第五步：抗体表征为了确保获得的单克隆抗体质量良好，需要进行抗体的表征。
常用的表征方法包括西方印迹分析、免疫组化等。
这些方法可以检验抗体在特定条件下的表达水平、特异性和亲和力等相关特性。
第六步：药物开发与临床研究一旦获得了具有良好特性的单克隆抗体，接下来就可以进行药物开发和临床研究。
在这个阶段，需要进行药物的安全性和疗效评估，以及大规模生产和制药工艺的优化。
单抗制备是一个复杂而严谨的过程，涉及到多个步骤和技术。
制备出高质量的单抗药物对于疾病治疗和生物医学研究具有重要意义。
随着技术的不断进步，单抗制备的效率和质量将不断提高，为医药领域带来更多机会和挑战。
单克隆抗体制备的详细步骤
单克隆抗体制备的详细步骤1.抗原选择：首先，需要选择目标抗原，该抗原可以是蛋白质、多肽或糖等。
抗原的选择应基于其与研究对象或疾病的相关性。
3.免疫动物选择：选择适合的免疫动物进行免疫。
一般常见的选择包括小鼠、大鼠、兔子等。
选择免疫动物的主要考虑因素是抗原的大小、复杂性和保守性。
4.免疫程序：将免疫原与免疫佐剂混合，并注射到免疫动物体内。
免疫的数量和时间应根据具体情况进行优化，以产生充分的免疫应答。
5.细胞融合：在免疫过程完成后，从免疫动物中收集免疫细胞，如脾细胞或骨髓细胞。
然后与髓样细胞瘤（如骨髓瘤细胞线（SP2/0）或骨髓瘤细胞线（NS0）等）融合。
这些瘤细胞是与免疫细胞无限增殖的细胞系。
6.细胞选择：将融合细胞分装到多孔板上，并添加抗生素来抑制非融合细胞的生长。
通常使用杂交瘤选择培养基来选择单个细胞。
7.筛选抗体：通过酶联免疫吸附试验（ELISA）或流式细胞术等方法，筛选和鉴定产生的杂交瘤细胞，以确定其分泌的单克隆抗体。
8.单克隆抗体的扩增：分离和扩增产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。
这可以通过种植细胞到体外培养中进行，或者通过移植至小鼠腹腔来提高抗体产量。
9.抗体纯化：从培养上清液或小鼠腹水中纯化单克隆抗体。
纯化方法可以包括蛋白质A/G亲和层析或亲和层析柱。
10.抗体验证：进行抗体验证以确认其特异性和亲和力。
常用方法包括免疫印迹分析、免疫组织化学分析、免疫荧光染色等。
11.抗体保存：最后，将抗体储存于适当的条件下，以确保其长期保存和稳定性。
总结：单克隆抗体制备涉及到抗原选择、免疫原制备、免疫程序、细胞融合、细胞选择、筛选抗体、单克隆抗体的扩增、抗体纯化、抗体验证和抗体保存等步骤。
这些步骤通常需要耗费时间和精力，但通过精心设计和优化，可以获得高质量和高特异性的单克隆抗体，从而在研究和临床应用中发挥重要作用。
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单克隆抗体制备步骤及注意事项
一、脾细胞的准备：
1.将Balb/c小鼠拉颈脱臼处死，浸泡于75%酒精3～5min。
无菌操作取出脾脏，置于盛有
5mL不完全培养液的平皿中，洗涤3次去除脾脏表面的脂肪和结缔组织。
2.将洗好的脾脏用剪刀剪成3～5个小块，然后将脾脏研碎，过细胞筛，收集细胞。
3.将脾脏细胞悬液在1000r/min条件下，离心5min，弃上清。
再以同样的方法洗涤离心一
次。
4.将沉淀细胞重新悬浮于10mL不完全培养液中，计活细胞数，取108个脾淋巴细胞悬液
备用。
注意事项：
➢免疫脾细胞一般取最后一次加强免疫3天以后的脾脏，制备成细胞悬液，因为此时B淋巴母细胞比例较大，融合的成功率较高。
二、骨髓瘤细胞的准备：
1.选好骨髓瘤细胞株，取体外培养对数生长期细胞或体内生长的肿瘤分离骨髓瘤细胞。
2.取对数生长骨髓瘤细胞离心，用无血清培养液洗2次。
3.制备细胞悬液，计活细胞数。
4.调整细胞浓度，取107细胞悬液备用。
注意事项：
➢常用的骨髓瘤细胞系有：NS1、SP2/0、X63、Ag8.653等。
➢骨髓瘤细胞系应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤细胞在同一品系小鼠腹腔内生产大量McAb。
➢骨髓瘤细胞的培养适合于一般的培养液，如RPMI-1640基础培养液，DMEM培养基。
小牛血清的浓度一般在10～20%。
细胞的最大密度不得超过106个/mL。
➢一般扩大培养以1:10稀释传代，每3～5天传代一次。
细胞的倍增时间为16～20小时。
➢一般准备融合前的两周就应开始复苏骨髓瘤细胞，为确保该细胞对HA T的敏感性，每3～6个月应用8～AG（8氮杂鸟嘌呤）筛选一次，以防止细胞的突变。
➢保证骨髓瘤细胞处于对数生长期，良好的形态，活细胞计数高于95%，也是决定细胞融合的关键。
三、细胞融合：
1.将骨髓瘤细胞与脾细胞按1:10 或1:5的比例混合，加入20～50mL RPMI-1640培养液。
2.在1000r/min条件下离心8min，弃上清，用滴管轻轻吸净残留液体。
3.用手指轻轻击打离心管底部，使沉淀细胞分散。
4.将离心管置于37℃水浴中，吸取1mL预热的50% PEG，缓慢滴入离心管内，30秒内加
完，边加边轻轻搅拌，作用1～5min。
5.沿管壁滴加预热的不完全培养液，终止PEG作用，每隔2分钟分别加入1mL，2mL，3mL，
4mL，5mL和10mL，同时边滴加边轻轻转动离心管。
6.800r/min条件下离心5～10min，弃上清。
7.将沉淀细胞轻轻混悬于含有20%的小牛血清的HAT选择培养液中，使细胞重悬。
切记不
能用力吹打，以免使融合在一起的细胞散开。
8.根据96/24孔板的数量，补加完全培养液，然后将上述细胞接种至含有饲养细胞的24孔
板（每孔1.0-1.5mL）或96孔培养板（每孔0.10～0.15mL）。
9.接种完毕后，将上述培养板置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
注意事项：
➢冻存的骨髓瘤细胞在复苏后要2周时间才能处于适合融合的状态，培养目标是处于对数生长的时间尽可能长。
➢饲养层细胞应在使用的前一天备好，这样才能分泌足够的细胞因子。
四、杂交瘤细胞的选择性培养：
1.一般在融合24小时后，加HA T选择培养液。
2.一般选择HA T选择培养液维持培养7～10天后，改用HT培养液。
3.再维持2周后，可改用普通完全培养基。
注意事项：
➢经常观察杂交瘤细胞生长情况，待其长至孔底面积1/10以上时，即可开始检测特异性抗体，筛选出所需要的杂交瘤细胞系。
➢在选择培养期间，一般每2～3天要更换一半培养液。
五、筛选分泌抗体的杂交瘤细胞：
1.包被抗原：将抗原以Na2CO3-NaHCO3缓冲液包被，使抗原浓度为10～20μL，加50～
100μL/孔到96孔酶标板，4℃包被过夜或37℃包被2h，洗涤3次，拍干酶标孔内液体。
同时，每板分别选取无细胞生长的两孔为阴性对照，另选取无细胞生长的两孔加入阳性
血清作为阳性对照。
检测血清或腹水效价时，对血清或腹水做倍比稀释，100μL/孔，以正常小鼠血清为阴性对照，37℃孵育30min，洗涤3次，拍干。
2.封闭：每孔加200μL或加满封闭液（PBST溶解的1%BSA），于4℃过夜或37℃封闭2h
后，洗涤3次，拍干，置4℃冰箱保存备用。
3.加抗血清：无菌条件下取细胞上清，每孔加入100μL不同倍比稀释度的血清，并加入对
照样品，37℃孵育2h，弃去孔内液体，拍干。
4.加酶标二抗：加入PBST洗涤3次，每次5min，每孔加入100μL稀释后的HRP标记的
二抗，37℃孵育1h，PBST洗涤3次，拍干。
5.显色：加入显色剂显色15～20min，待颜色最深时用终止液终止反应。
6.读数：在酶标仪A450上读出各孔OD值，选择出阳性孔。
以各孔与阴性对照孔OD值的
比值（P/M）大于2.1为限，作为判断为阳性或确定效价的临界点。
注意事项：
➢在收集上清时，应在上次换液后3～4天进行，以便抗体积累。
➢上清可不经稀释或1:5～1:10稀释后再测抗体活性，用稀释抗体进行筛选时可以筛掉弱阳性的抗体，也可以去掉因高本底所造成的假阳性。
➢一般做倍比稀释进行检测，需要有相应的对照血清。
➢融合后第一次筛选出的阳性克隆可能因阴性克隆或其他阳性克隆的过度生长而丢失，故应尽早亚克隆。
➢第一次筛选后液可能没筛选到阳性抗体，这可能由于分泌阳性抗体的细胞为数尚少，应重复测定活性2～3次。
➢不同的显色系统对应不同的光吸收值。
六、杂交瘤细胞克隆化：
1.制备饲养细胞（小鼠腹腔细胞）层。
2.将要克隆的杂交瘤细胞从培养孔内轻轻吹干，并计数。
3.调整细胞数为3～10×103个/mL。
4.取事先准备的有饲养细胞生长的96孔细胞培养板，把96孔板分为4组，每组24孔，将
细胞悬液按倍比稀释法稀释成4组细胞，即每组12.5、25、50、100个/mL，每孔加入100μL 稀释细胞，置于37℃、5%CO2条件下进行孵育。
5.8～9天时，肉眼可见细胞克隆形成，及时检测抗体活性。
6.将阳性孔的细胞移至24孔板中扩大培养。
注意事项：
➢初次克隆化的杂交瘤细胞需要在完全培养液中加HT。
➢细胞融合后，一旦经鉴定可以产生目标抗体，就应立即进行克隆化，确保能分离出单个细胞重新形成克隆。
➢应在克隆前1天制备好饲养细胞层。
➢在第7天换液，以后每2～3天换液1次。
➢阳性克隆细胞应尽快冻存。
七、单克隆抗体的大量制备：
1.先腹腔注射0.5mL降脂烷或液体石蜡于BaLb/c鼠。
2.培养杂交瘤细胞，使细胞生长至对数期，将细胞转入50mL锥形离心管中，室温下
1000r/min条件下离心5min。
3.将细胞重悬于50mL无菌的PBS或HBSS（不含FBS）中洗涤，1000r/min条件下离心5min，
弃上清，重复2次，然后细胞重悬于5mL的PBS或HBSS中。
4.计数细胞，通过台盼蓝染色法确定细胞活力。
5.用不含FBS的HBSS或PBS调整细胞浓度至2.5×102个/mL。
6.小鼠预处理1～2周后，对Balb/c小鼠进行腹膜内注射2mL细胞。
接种杂交瘤细胞7～10
天后可产生腹水。
7.一只手抓住并固定小鼠，使其腹部绷紧，另一只手用滴管将腹水吸入试管中，或用注射
器抽取腹水，可反复收集数次。
8.室温下，1500r/min条件下离心10min，收集上清，弃沉淀，将腹水存放于4℃，直到收集
腹水的工作完成。
9.再次收集腹水前，让小鼠再次积累腹水（2～3天），一般一只小鼠可获1～10mL腹水，
将几天内收集到的腹水混合，并于56℃水浴45min进行热处理，如果凝块形成，可用牙签挑出，然后再离心。
注意事项：
➢注射器进针部位为左下腹或右下腹，避免刺入小鼠上腹的重要器官及腹中线处的主要大血管。
➢腹水中含有大量的油脂、巨噬细胞、杂交瘤细胞、腹腔内的上皮细胞、血液中的细胞成分等杂质，应先离心除去这些成分。
➢油脂的密度比较小，一般都漂浮在腹水表面，用枪吸出丢掉即可。