细胞工程课件 第四章 外植体表面消毒与污染控制

第四章外植体表面消毒与污染控制

一、植物组培污染源与防范措施

污染是植物组织培养的大敌。

污染来源：

1.植物材料自身带菌

2. 操作过程污染

3. 培养基消毒不彻底

4. 培养过程中污染（培养室不洁净、容器封

口不好）

放置过程中的污染

二、外植体表面消毒

外植体(Explant)——用于建立无菌培养的起始植物材料。

表面消毒(Surface sterilization)——（用消毒剂）杀死外植体表面其它生物（主要是细菌和真菌）的过程。

消毒的必要性：

植物材料表面都带有细菌和真菌，如消毒不彻底，细菌和真菌会在培养基中迅速生长，占据空间、消耗营养、分泌毒素，使植物材料死亡。因此，接种前对外植体进行有效的表面消毒是建立无菌培养的关键。

表面消毒的要求：

（1）最大限度地杀死细菌和真菌

（2）对外植体的毒害要尽可能的小

评价消毒效果指标：

污染率和成活率（或死亡率）

常用消毒剂：

用于植物材料表面消毒的消毒剂有乙醇、氯化汞、次氯酸钠、双氧水等。它们的使用浓度、消毒时间和效果见表4.1。

二、消毒步骤：

1.对材料进行适当的处理，用自来水将

材料冲洗干净。

2.将材料剪成适当大小（长短）的小块

（段）。

3.在70%-75%的乙醇中10-60 S，然后

迅速转入到其它消毒剂（氯化汞、次氯酸钠）中，消毒剂中可加入少量表面活性剂（Tween20或80、家用洗涤剂等），以增加消毒效果。

蝴蝶兰

蝴蝶兰花梗

剥去苞叶的外植体

洗涤后外植体剪成小段、在次氯酸钠中消毒25

污染的外植体

未污染的外植体

3%H2O2消毒兰花种子

污染

生姜芋头

石斛兰

有机营养丰富的培养基培养后，容易出现污染。

猕猴桃茎段培养内部带菌污染

表面消毒不能杀死内部的细菌，可尝试下列

方法：

1、用分生组织作为外植体。因为分生组织内

无维管组织，所以不带菌。

2、在培养基中加抗菌素（青霉素、卡那霉素、四环素等），但高浓度的抗生素往往对植物材料生长发育也有抑制作用，而且抗菌效果有时不一定理想。

3、用尽量小的材料接种。每接一个外植体就

将接种工具消毒一次，避免交叉感染。材料越小，污染的机会也就越小，但成活率越低。