临床免疫学检验---凝集反应
细胞凝集反应原理
细胞凝集反应原理
细胞凝集反应是一种免疫学实验技术，通常用于检测抗体与抗原之间的相互作用。
该反应原理涉及到抗体与抗原结合导致凝集的现象。
以下是细胞凝集反应的基本原理：
1.抗原和抗体结合：在实验中，通常使用红细胞（如羊红细胞）
或其他细胞作为抗原。
这些细胞表面可能具有特定的抗原。
当
与具有相应抗体的血清或其他抗体溶液相互作用时，抗体与抗
原发生结合。
2.凝集现象：当抗体与抗原结合时，会形成一个抗原-抗体复合
物。
在一定条件下，这些复合物可能会导致细胞凝集，即细胞
聚集在一起形成团块。
这种凝集现象通常是可见的，尤其是在
显微镜下。
3.最优反应条件：细胞凝集反应的发生需要一定的条件，包括适
当的温度、pH值和离子浓度。
这些条件的调节可以影响抗原与
抗体的结合强度，进而影响细胞的凝集程度。
4.阳性和阴性反应：在细胞凝集反应中，阳性反应表现为明显的
细胞凝集，而阴性反应则表现为细胞均匀分散，没有凝集现象。
阳性和阴性的判断可能通过目视观察或者使用适当的测量仪器
来进行。
5.应用：细胞凝集反应在免疫学和临床诊断中广泛应用，例如血
型鉴定、病原微生物检测、自身免疫疾病诊断等。
不同的抗原
和抗体系统可用于检测不同的疾病或生物学过程。
总体而言，细胞凝集反应是一种简单而有效的实验技术，通过观察细胞的凝集状态可以获取有关抗体与抗原相互作用的信息。
医学免疫学实验
【实验方法】
1. 标记。取洁净载玻片1块，如下图标记。
A B
2. 采血。用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采 血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。收入小 试管，用吸管各取适量分别加在载玻片的两端。
A B
3. 加抗体。将抗A、B试剂分别加1滴与玻片上两 侧的血液混匀。
A
抗A
B
抗B
4. 观察红细胞有无凝集发生？ 如有凝集，可见红细胞凝集成细沙样； 无凝集，红细胞呈均匀分散。
【讨论】
实验二、直接凝集反应（玻片法） —— 血型鉴定
玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作 为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗 原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼 观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便， 快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断 或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。
医学免疫学实验（一） ——凝集反应
【实验目的】
1. 了解凝集反应的原理、基本类型及其临床意义。 2. 掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的实验方法和 结果分析。
【实验内容】
1. 直接凝集反应（试管法）— 溶血素效价的测定 2. 直接凝集反应（玻片法) — 血型鉴定
3. 间接凝集反应 — RF因子的乳胶凝集实验（示教）
NS (ml)
溶血素 (ml)
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
弃去
—
0.2
稀释度
1%SRBC(ml）
1:100
0.2
1:200
0.2
临床免疫学检验
一、名解带现象（前带、后带）：在等价带的前后，由于抗体和抗原过量，形成的沉淀物少，上清液中可测出游离的抗体或抗原，这种现象称为带现象。
当抗体过量时称为前带，抗原过量时称为后带。
凝集反应：是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。
直接凝集反应：在适当电解质参与下，细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原直接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象，称为直接凝集反应。
间接凝集反应：将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体（如正常人O型红细胞、细菌、胶乳颗粒等）的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适当电解质存在条件下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应或被动凝集反应。
Coombs试验：又称抗球蛋白试验，是抗球蛋白参与的间接血凝试验，用于检测抗红细胞不完全抗体。
不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但因其分子量较小，体积小，不能起到桥联作用，在一般条件下不出现可见反应。
利用抗球蛋白抗体作为第二抗体起桥联作用，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞凝集。
沉淀反应：是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出现可见的沉淀现象。
高剂量钩状效应：抗原过量可引起高剂量钩状效应，即抗原过量致形成的IC分子小，发生再解离，浊度下降，光散射减少。
海德堡曲线理论：当抗体过量时，IC的形成随着抗原递增至抗原、抗体比例最适处达最高峰，沉淀反应最明显，称等价带，高峰区域左侧，抗体浓度过高，沉淀反应不明显，称前带；高峰区域右侧，抗原浓度过高，沉淀反应也不明显，称后带，这就是海德堡曲线理论。
包被：将抗体或抗原结合在固相载体上的过程称为包被。
封闭：由于包被过程中固相载体表面不能被抗体或抗原蛋白质完全覆盖，实验操作过程中加入的血清标本以及酶结合物中的蛋白质也会部分地非特异性吸附于固相载体表面，最终产生非特异性显色导致测定本底偏高，在这种情况下，需用1%-5%的牛血清白蛋白或5%-20%小牛血清再包被一次，消除此干扰，此过程称为封闭。
免疫学凝集反应实验报告
免疫学凝集反应实验报告1. 背景1.1 免疫学凝集反应免疫学凝集反应是一种常用于检测抗原和抗体之间相互作用的免疫学实验方法。
在凝集反应中，抗原与抗体结合形成可见的混合凝集物，通过观察凝集物的形态和强度，可以判断是否存在特定的抗原或抗体。
1.2 实验目的本实验旨在通过免疫学凝集反应检测某种特定抗原和抗体之间的相互作用，并分析实验结果，为后续的相关研究提供基础支持。
2. 实验设计与方法2.1 实验材料•血清样本：包含目标抗原的血清样本。
•抗体试剂：特异性抗体，用于与目标抗原发生凝集反应。
•Buffer液：用于稀释血清样本和抗体试剂。
•凝集板：用于装载反应液。
2.2 实验步骤1.准备工作：将所需材料准备齐全，并清洗凝集板。
2.取一块凝集板，标注样本位置。
3.向每个凝集板孔中加入等体积的buffer液，作为空白对照。
4.序号为1-10的凝集板孔中分别加入不同浓度的血清样本，每个孔加入相等体积的样本。
5.在每个凝集板孔中加入相等体积的抗体试剂，使其与血清样本充分混合。
6.轻轻摇动凝集板，使反应液均匀混合。
7.置于适宜的环境温度，反应一定时间（根据抗原和抗体的特点和供应商建议进行）。
8.观察凝集板孔底部是否出现可见凝集反应，并记录凝集反应的强度和形态。
9.对凝集反应进行分析并得出结论。
3. 结果与分析3.1 凝集反应观察观察实验结果发现，在血清样本和抗体试剂反应后，部分凝集板孔底部出现明显的凝集反应。
凝集反应的形态呈现为小颗粒状凝聚体。
3.2 结果分析根据凝集反应的形态和强度，可以初步判断样本中是否含有目标抗原。
凝集反应的强度越强，说明样本中抗原的浓度越高；凝集反应的形态越明显，说明样本中存在的抗原与抗体结合能力越强。
对于凝集反应未出现或凝集反应较弱的样本，可能是由于抗原浓度过低或抗体试剂的工作效能不佳导致的。
因此，可以针对这些样本进行进一步的稀释或更换抗体试剂。
3.3 结论综合分析实验结果，初步可以得出以下结论：•在血清样本和抗体试剂的反应中，部分样本中存在目标抗原。
临床医学检验技师初级(师)临床免疫学及检验(凝集反应)-试卷1
【A】高抗体滴度 【B】抗体滴度逐渐下降 【C】抗体滴度逐渐增高 【此项为本题正确答 案】 【D】阳性补体结合试验 【E】没有相应抗体
临床医学检验技师初级【师】临床免疫学及检验【凝 集反应】-试卷 1
(总分：66 分，做题时间：90 分钟) 一、 A1 型题(总题数：22，score:44 分) 1.间接血凝可检测的是 【score:2 分】
【A】直接抗 ABO 系统抗原 【B】不完全红细胞凝集素 【此项为本题正确答 案】 【C】直接致敏红细胞上的抗原 【D】直接抗 Rh 抗原 【E】白细胞表面抗原 本题思路：血凝试验又称为 Coombs 试验，是检测抗 红细胞不完全抗体的一种方法。它分为直接 Coombs 试验和间接 Coombs 试验，直接试验的目的是检查红 细胞表面的不完全抗体而间接试验的目的是检查血清 中存在游离的不完全抗体。 2.直接凝集反应是 【score:2 分】
本题思路：不完全抗体多半是 IgG 类抗体，该抗体与 相应抗原结合牢固，但在一般条件下不出现可见反 应，Coombs 试验利用抗球蛋白抗体作为第二抗体达 到桥梁作用，使红细胞凝集。 6.间接血凝试验所使用的红细胞，为使其可长期保存 而不溶血，常用的处理方法是 【score:2 分】
【A】无水酒精处理 【B】甲醛处理 【此项为本题正确答案】 【C】4℃处理 【D】液氮保存 【E】酸化处理 本题思路：致敏的新鲜红细胞保存时间短，易变脆、 溶血和污染，只能用 2～3 天。为此，一般在致敏前 先将红细胞醛化，可长期保存而不溶血。常用的醛类 有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。 7.血凝试验中根据红细胞凝集程度判断阳性反应的强 弱，判断的凝集终点为 【score:2 分】 【A】+
凝集反应实验报告思考题
凝集反应实验报告思考题凝集反应实验报告引言凝集反应是一种免疫学现象，指的是在体外条件下，特定抗原与相应抗体结合形成可见的沉淀。
本实验旨在通过观察凝集反应来确定血清中特定抗体的存在与浓度。
材料与方法1. 实验材料：- 血清样品：包括病人血清和对照血清。
- 目标抗原：根据实验目的选择相应的抗原。
- 磷酸盐缓冲液：用于稀释血清和制备试剂。
- 牛血清白蛋白（BSA）：用于防止非特异性凝集现象。
- 无菌生理盐水：用于稀释试剂和洗涤沉淀。
- 凝集板或玻片：用于进行凝集反应。
2. 实验步骤：a. 稀释血清样品：将病人血清和对照血清分别与磷酸盐缓冲液按比例混合，得到不同浓度的稀释血清。
b. 制备抗原悬液：将目标抗原与BSA按比例混合，并加入磷酸盐缓冲液制成抗原悬液。
c. 进行凝集反应：在凝集板或玻片上滴加不同浓度的稀释血清和抗原悬液，轻轻摇晃使其充分混合。
d. 观察凝集现象：观察凝集板或玻片上是否出现可见的沉淀。
结果与讨论根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 凝集反应的强度与血清中特定抗体的浓度呈正相关关系。
即血清中特定抗体浓度越高，凝集反应越明显。
2. 病人血清样品与对照血清之间存在明显差异，表明病人血清中可能存在特定抗体。
我们还可以进一步讨论以下问题：1. 凝集反应的机制是什么？凝集反应是由抗原与相应抗体结合形成可见沉淀的现象。
当特定抗原与相应抗体结合时，它们会形成一个大型复合物，这些复合物之间会发生交联作用，导致沉淀的形成。
2. 为什么需要使用BSA？BSA是一种蛋白质，它具有较好的溶解性和稳定性。
在实验中，加入BSA可以防止非特异性凝集现象的发生，保证凝集反应的特异性。
3. 凝集反应有哪些应用？凝集反应在临床诊断和疾病监测中具有广泛应用。
在血清学检测中，可以通过凝集反应来检测某些病原体的抗体水平，从而判断患者是否感染了该病原体。
凝集反应还可以用于血型鉴定、药物免疫学等领域。
结论通过本实验，我们成功观察到了凝集反应现象，并确定了血清中特定抗体的存在与浓度。
医学免疫学：实验2 凝集反应(ABO血型测定)
实验目的:
检测血清标本中有无HBsAb
材料:
48孔ELISA板
阳性对照血清（HBsAb） 阴性对照血清 酶标二抗
乙肝病毒表面抗体 诊断试剂盒
洗涤液
底物A和B
微量加样器，待测血清标本等
实验方法
微孔板已包被HBsAg
HBsAg
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
+ + — — ① ① ① ① ② ② ② ②A + + — — ③ ③ ③ ③ ④ ④ ④ ④B + + — — ⑤ ⑤ ⑤ ⑤ ⑥ ⑥ ⑥ ⑥C + + — — ⑦ ⑦ ⑦ ⑦ ⑧ ⑧ ⑧ ⑧D
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值
酶标板
酶标仪Βιβλιοθήκη 样+-1 2 3456
每孔加 50μl 不同的血清样本 Positive control (HBsAb) ：1 滴 Negative control (NS): 1 滴
加样
+
- sample
加酶结合物
enzyme
每孔加酶结合物1滴 混匀， 37 ℃ 30 min.
放射物标记技术 酶标技术
免疫荧光技术
酶联免疫吸附试验
酶免疫组化技术
双抗体夹心法
竞争法
双抗原夹心法
间接法
直接法
原理：间接ELISA法(酶联免疫吸附试验)
不显色
洗涤
洗涤
1.包被已知抗原 2.加入待测标本 （未知抗体？） 3.加入酶标二抗 （即抗抗体 ：抗人Ig的抗体） 4.加入底物
颜色改变 = 待测标本中存在抗体
实验结果
呈红色片状凝集颗粒为阳性 实验结束后，洗涤试管；
凝集反应
质偶联在红细胞上，常用的偶联剂有戊二醛、CrCL3
和双偶氮联苯胺。
临床免疫学及免疫检验
2.胶乳颗粒载体及致敏
聚苯乙烯胶乳颗粒是人工合成的载体，它是一种大小均
一，直径为0.8μm大小的圆形颗粒，带有负电荷，可用物 制备成带有化学活性基团的颗粒(如带有羧化聚苯乙烯胶 乳)，抗原或抗体能以共价键交联在胶乳表面(通过缩合剂 碳化二亚胺将胶乳颗粒表面的羧基与被交联物上的氨基
的反应。1945年Coombs等根据抗体球蛋白对异种动物亦 是抗原的原理，把产生“不完全抗体”的机体正常血清球 蛋白，注射到异种动物使之产生抗球蛋白，这种抗球蛋 白加入表面结合有不完全抗体的红细胞的复合物中，就
能出现可见的凝集现象，称抗球蛋白试验。因为此反应是
Coombs首先建立的，故又称Coombs试验。
(1) 取细菌或红细胞悬液1滴，在玻片上 和1滴诊断血清混匀。 (2) 置室温，数分钟后即可用肉眼或低 倍显微镜观察凝集结果，出现颗粒凝 集者为阳性。
临床免疫学及免疫检验
3．方法评价 本试验是一种特异性强、简
便、快速的定性试验方法。 4．临床意义 适用于大量普查，未知菌种 的鉴定或分型，或用标准血清作红细胞 ABO血型的鉴定。有时也可用于定量检测 前的筛选试验(如布氏菌、土拉弗氏菌等 抗原)，初步观察病人血清中有无相应的 抗体，然后再对阳性标本作试管凝集试验 测定其效价。
间接凝集试验又称被动凝集试验(passive agglutination test)。所用的与免疫无关颗 粒称为载体，将抗原(或抗体)吸附或偶联 于颗粒表面的过程称致敏。而吸附有已 知抗原或抗体的颗粒称致敏颗粒。
临床免疫学及免疫检验
一、间接凝集技术类型
根据致敏载体用的是抗原或抗体以及 凝集反应的方式，间接凝集反应可分为：
10简述凝集反应的原理及凝集反应的类型
凝集反应是一种免疫学实验技术，广泛应用于临床诊断和研究领域。
它是通过抗原与抗体的特异结合来发生凝聚现象，从而实现对特定抗原的检测和定量。
凝集反应的原理是基于抗原与抗体相互结合后形成免疫复合物，使得溶液中的物质发生可见的沉淀或凝聚现象。
这种凝聚现象可以通过肉眼观察或者光学仪器来进行定性或定量分析。
凝集反应主要包括直接凝集反应、间接凝集反应和双重凝集反应等类型：1. 直接凝集反应直接凝集反应是指抗原与抗体直接结合形成凝集物质的反应。
在这种反应中，抗原与抗体的结合是直接发生的，不需要其他介质的参与。
该反应通常用于检测红细胞凝集抗体、细菌抗原等。
2. 间接凝集反应间接凝集反应是指抗原与抗体先间接结合，再与介体结合形成凝集物质的反应。
在这种反应中，介体起到传递抗原-抗体复合物的作用，使得凝集反应能够进行下去。
间接凝集反应通常用于检测病毒抗体、梅毒螺旋体抗体等。
3. 双重凝集反应双重凝集反应是指两种抗体与抗原之间分别发生凝集反应，最后抗原-抗体复合物之间再发生凝集现象的反应。
这种反应在研究免疫球蛋白结构和功能、检测致病微生物等方面具有重要意义。
凝集反应的类型多种多样，各自在临床诊断和免疫学研究中发挥着重要作用。
通过对不同类型凝集反应的原理和特点的深入研究，可以更好地理解免疫学的基本原理，提高临床诊断的准确性和敏感性。
凝集反应也为药物研发和免疫治疗提供了重要依据和支持。
希望未来能有更多的科研人员投入到凝集反应领域的研究中，推动该领域的发展，为人类健康做出更大的贡献。
凝集反应是一种免疫学实验技术，广泛应用于临床诊断和研究领域。
它是通过抗原与抗体的特异结合来发生凝聚现象，从而实现对特定抗原的检测和定量。
凝集反应的原理是基于抗原与抗体相互结合后形成免疫复合物，使得溶液中的物质发生可见的沉淀或凝聚现象。
这种凝聚现象可以通过肉眼观察或者光学仪器来进行定性或定量分析。
凝集反应主要包括直接凝集反应、间接凝集反应和双重凝集反应等类型。
临床免疫学检验 课件 第5章 凝集反应
4.协同凝集试验 (coagglutination test )
载体 可溶性抗原
粒颗敏致
用特异性抗原致 敏载体，检测标 本中的相应抗体 的方法。
致敏
NS
待测抗体
结果判读：凝集，阳性(+)。 不凝集，阴性(-)。
粒颗集凝
粒颗集凝 粒颗敏致
载体
已知抗体
＋
致敏
用特异性抗体
致敏载体，检
NS
测标本中的相
? 结果判读： 已知Ab ＋ 未知Ag → 凝集，阳性 (+)。 不凝集，阴性 (-)。
? 方法评价： 特异性强; 简便、快速 ;敏感度低。 ? 应用：ABO 血型鉴定。
细菌的鉴别与分型 。
ABO血型的鉴定
1.已知抗体
抗A
抗B
2.未知抗原 (待检RBC)
3.结果：
凝集
不凝集
4.结论： 受检者血型为：A型
?致敏颗粒（sensitized particle) :吸附有已知抗 原或抗体的颗粒。
粒颗敏致
载体 可溶性抗原 致敏
NS
粒颗集凝
一、常用载体种类及其处理方法
?红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一
般先醛化后应用。
?聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学
活性基团的颗粒。
?活性炭： ?SPA：
? 方法评价：
– 特异性易受影响； 敏感性不高。
? 应用：
– 多用以测定 抗体的含量 （效价、滴度 ）。 –肥达氏反应 、外斐氏反应 、交叉配血试验 。
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5
菌液 1
2 3 45 6 7
结 果
免疫学实验-凝集试验
实验一凝集试验颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。
参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。
抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于离子的作用，中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。
根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。
[目的要求]1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]1. 玻板，载玻片，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），牙签或火柴棒，记号笔。
2. 灭菌的生理盐水，灭菌的0.5%石炭酸生理盐水。
3. 布氏杆菌病试管凝集抗原，布氏杆菌病平板凝集抗原，布氏杆菌病虎红平板凝集抗原，布氏杆菌病阳性血清，布氏杆菌病阴性血清，被检血清（牛、羊或猪）。
4. 鸡白痢平板凝集抗原，鸡白痢阳性血清，鸡白痢阴性血清，被检鸡血清。
[实验内容及操作方法]（一）试管凝集试验以牛布氏杆菌病试管凝集试验为例。
1. 试管准备：每份血清用试管4支，另取3支试管作为对照，作好标记，置试管架上。
如被检血清有多份，对照只需做1份。
2. 被检血清稀释：第1管加入2.3ml 0.5% 石炭酸生理盐水，第2、3、4管加入0.5 ml 0.5% 石炭酸生理盐水；然后用加样器或刻度吸管吸取被检血清0.2 ml，加入第1管中，反复吹吸5次混匀，吸取1.5 ml弃之，再吸取0.5 ml加入第2管中，混匀后吸取0.5 ml加入第3管，依此类推至第4管，混匀后吸弃0.5 ml（见表1-1）。
临床免疫学检验-第五章凝集反应和沉淀反应
Radial Immunodiffusion (RID)
Two methodologies of RID
Fahey method A linear relationship
exists between the log of the protein concentration and the diameter of the precipitin ring prior to equivalence (or completion)
FIGURE 6-5 Diagrammatic representation of radial & double immunodiffusion. : precipitation reactions in gels yield visible precipitin lines; no visible
Ability of a test to correctly identify individuals who HAVE a given disease/condition
How likely is the test to detect the presence of a characteristic in someone with the characteristic?
简单易行 特异性好 灵敏度低(10µg/ml) 时间长
免疫电泳技术
免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique）是可溶性抗原和抗体在直流电场 的作用下，在凝胶内加速定向运动，彼此相 遇结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。
免疫电泳技术
医学免疫学：实验2 凝集反应(ABO血型测定)
实验目的:
检测血清标本中有无HBsAb
材料:
48孔ELISA板
阳性对照血清（HBsAb） 阴性对照血清 酶标二抗
乙肝病毒表面抗体 诊断试剂盒
洗涤液
底物A和B
微量加样器，待测血清标本等
实验方法
微孔板已包被HBsAg
HBsAg
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
+ + — — ① ① ① ① ② ② ② ②A + + — — ③ ③ ③ ③ ④ ④ ④ ④B + + — — ⑤ ⑤ ⑤ ⑤ ⑥ ⑥ ⑥ ⑥C + + — — ⑦ ⑦ ⑦ ⑦ ⑧ ⑧ ⑧ ⑧D
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值
酶标板
酶标仪
加样
+-1 2 3456
每孔加 50μl 不同的血清样本 Positive control (HBsAb) ：1 滴 Negative control (NS): 1 滴
加样
+
- sample
加酶结合物
enzyme
每孔加酶结合物1滴 混匀， 37 ℃ 30 min.
ELISA(酶联免疫吸附试验) 凝集反应(ABO血型测定)
凝集反应
原理:
颗粒性抗原与相应抗体发生特异性结合，并 在一定条件下形成肉眼可见的凝集物。
应用：检测未知Ag或Ab
分类：
1.直接凝集反应： 玻片法---ABO血型鉴定、菌种鉴定
试管法---肥达反应
2.间接凝集反应
ABO血型测定
实验目的: 检测待测者ABO血型
材料: 抗A和抗B血清, 生理盐水, 载玻片, 采血针等.
实验方法
免疫学检验第十三章凝集反应
间接凝集反应 抗球蛋白试验
第一节 直接凝集反应
直接凝集反应： 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质
的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。
•凝集原(agglutinogen)：凝集反应中的抗原。 •凝集素(agglutinin)：凝集参与反应的抗体
（一）玻片凝集试验
方法评价:
定性试验 简便和快速 敏感度低
凝集反应：
颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体 特异性结合，或可溶性抗原（或抗体）与载体 颗粒结合成致敏颗粒（红细胞、聚苯乙烯乳胶 颗粒、炭粒）后，它们与相应抗体（或抗原） 发生特异性反应，在适当电解质存在下，形成 肉眼可见的凝集现象。
可见反应形成
阴性？ 阳性？
凝集反应的分型
直接凝集反应
凝集反应
应用:
菌种鉴定 血清学分型 血型鉴定
（二）试管凝集试验
在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合， 在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集 现象。
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5
菌液 1
2 3 45 6 7
结 果
试管凝集试验原理
结果
上清 清亮 轻度混浊 中等混浊 混浊 与对照相同
沉淀 大的凝集块 大多凝集管底 小、部分凝集块 很小的凝集颗粒 无凝集现象
类风湿性关节炎RA
• 其病因及发病机制仍不完全明了, 机体出现 免疫系统紊乱, 进而引起关节滑膜、软骨组 织慢性炎症和破坏的自身免疫性疾病。
乳胶凝集试验
• RF可与IgG的Fc段结合。将变性IgG包被 于聚苯乙烯胶乳颗粒上，此致敏胶乳在与 待测血清中的RF相遇时，即可发生肉眼可 见的凝集。
主要的试剂和器材
免疫学检验第十三章凝集反应
凝集反应的发现
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– 特异性易受影响； 敏感性不高。
? 应用：
– 多用以测定 抗体的含量 （效价、滴度 ）。 –肥达氏反应 、外斐氏反应 、交叉配血试验 。
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5
菌液 1
2 3 45 6 7
结 果
试管凝集试验原理
? 结果观察：观察管底是否有凝集现象。
①完全凝集（＋＋＋＋）：凝集块完全沉于管底，液体澄清。 ②75%凝集（＋＋＋）：凝集块沉于管底，液体稍混。 ③50%凝集（＋＋）：凝集块沉于管底，液体混浊。 以上结果均为阳性，均出现肉眼明显可见的凝集。
?活性炭： ?SPA：
二、间接凝集反应类型
根据致敏用的试剂和反应方式分为：
1.(正向)间接凝集试验 （indirect agglutination test)
2.反向间接凝集试验 (reverse indirect agglutination test )
3.间接凝集抑制试验 (indirect agglutination inhibition
第五章 免疫凝集试验 (agglutination test)
第一节 概述
? 定义： 颗粒性抗原(可溶性抗原与载体颗粒
结合成致敏颗粒后)与相应抗体发生特 异性反应，在适当电解质存在下，形成 肉眼可见的凝集块。
? 发生机制：特异性；分两阶段进行。 ? IgM的凝集作用＞IgG 。 ? 不完全抗体：与相应抗原结合，但不形
?RBC为载体 ： ?动物，或人的“ 0”型血
RBC ?醛化红细胞 ：
?用戊二醛处理，成团， 不易摇散；吸附大，耐温， 耐冻融。 ?致敏红细胞保存时间短， 易变脆、溶血、被污染， 因此在致敏前醛化。 ?致敏醛化红细胞： 用Ag/Ab 直接或化学联结，与 RBC作用，
?优点：敏感度比直接凝集反应高 2～8倍，亦 明显高于沉淀反应。
?载体(carrier):试验体系中与免疫无关的颗粒。 ?对载体的要求：
?不溶于水，在NS中性质稳定，无化学、血清学活性。 ?大小均一，短时间内不致下沉。 ?能够直接吸附或偶联抗原或抗体，且不影响其活性。
?致敏：抗原(或抗体)偶联于颗粒表面的过程。
?致敏颗粒（sensitized particle) :吸附有已知抗 原或抗体的颗粒。
载体 可溶性抗原 致敏
致 敏 颗 粒
NS
凝 集 颗 粒
一、常用载体种类及其处理方法
?红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一
般先醛化后应用。
?聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学
活性基团的颗粒。
④25%凝集（弱阳性）：液体混浊。 ⑤阴性：无变化。
? 结果判读： 以产生明显凝集现象（“＋＋~＋＋＋”）的最
高稀释度作为Ab的效价（含量）。
第三节 间接凝集反应
(indirect agglutination test) ?间接凝集试验：用人工方法将可溶性抗原(或 抗体）吸附或偶联于载体上，使之成为致敏 载体颗粒，再与相应抗体（或抗原）作用， 在适宜电解质的参与下，出现的凝集现象。
其中的抗原 (agglutinogen) ：凝集原(细菌,RBC 等) 抗体(agglutinin) ： ：凝集素
? 常用方法 ：
–玻片法： –试管法： –微量血凝反应板法：
直接凝集反应
?凝集原
?凝集素
一、玻片凝集试验 (slideagglutination test)
? 玻片法：定性试验。 常用已知Ab，测定未知Ag(待检样本 )。
原理图
混 合
SPA
IgG
SPA- IgG
SPA- IgG待测抗原 凝集颗粒
待测抗原
二、间接血凝试验 (被动血凝试验 )
（indirect hemagglutination test)
? 原理
将可溶性抗原 (或抗 体）吸附人的“ O”型血 红细胞或绵羊或家兔的 红细胞 ，制成致敏血红 细胞,与相应抗体（或抗 原）作用，在适宜电解 质参与下，出现红细胞 凝集现象。
成可见的凝集现象。主要为IgG 类抗体。
凝集反应的类型：
? 直接凝集反应。 ? 间接凝集反应。 ? Coombs 试验。
凝集反应的应用：
? 抗原或抗体的定性检测 ? 抗体的半定量检测
第二节 直接凝集反应 （direct agglutination test）
? 定义： 颗粒性抗原 + 相应抗体→肉眼可见的凝集块
? 结果判读： 已知Ab ＋ 未知Ag → 凝集，阳性 (+)。 不凝集，阴性 (-)。
? 方法评价： 特异性强; 简便、快速 ;敏感度低。 ? 应用：ABO 血型鉴定。
细菌的鉴别与分型 。
ABO血型的鉴定
1.已知抗体
抗A
抗B
2.未知抗原 (待检RBC)
3.结果：
凝集
不凝集Biblioteka 4.结论： 受检者血型为：A型
test )
4.协同凝集试验 (coagglutination test )
载体 可溶性抗原
致
敏
致敏
颗 粒
用特异性抗原致
敏载体，检测标
NS
本中的相应抗体
待测抗体
的方法。
凝
集
结果判读：凝集，阳性(+)。 不凝集，阴性(-)。
颗 粒
已知抗体
载体
＋
致敏
致 敏 颗
粒
用特异性抗体
致敏载体，检 凝
NS
测标本中的相
细菌的鉴别
? 材料：玻片1张/1人，待检菌，已知诊 断血清，接种环
? 方法：
NS＋待检菌＋诊断血清 NS＋待检菌
轻摇玻片，1～2分钟后观察
? 结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应 ? 结 论：待检菌为？？
二、试管凝集试验 (tube agglutination test)
? 试管法：半定量试验。 常用已知Ag，测定未知 Ab(待检血清)。
集 颗
应抗原的方法。 粒
待测抗原
结果判读：
凝集，阳性(+)。
反向间接凝集试验不凝集，阴性(-)。
待测抗原
已知抗体
＋
特异 结合
NS
用抗原致敏载体及相 应抗体作为诊断试剂， 用于检测标本中是否 存在与致敏载体相同 的抗原。
间接凝集抑制试验
抗 原 抗 体 复 合 物
致敏颗粒 无凝集颗
粒为阳性
待测抗原
已知抗体
＋
无结合
NS
间接凝集抑制试验
有凝集颗
粒为阴性
抗 原 抗 体 分 散 致敏颗粒
协同凝集试验
? 原理 SPA能与血清中的IgG类 抗体的Fc段非特异性结合， 而两个Fab段暴露在葡萄球 菌菌体表面，仍然保持正 常的抗体活性，与特异性 抗原相遇时，能出现特异 的凝集现象。
?应用
微生物的快速 诊断、定种及 定型；以协助 传染病的早期 诊断。