微生物检验动物实验

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第十五章 动物实验

动物实验是细菌学检验的重要技术之一。

一、实验动物的分类 根据实验目的不同，对实验动物要求亦不同，因此对实验动物作如下的分类。 （一）遗传学控制分类

1. 近交系动物：近交系动物即一般称的 纯系动物 。此类动物是指采用兄妹交配（或亲子交配）繁殖 代以上的纯品系动物。

2. 突变种纯系动物：是指实验动物正常染色体中某个基因发生了变异的具有各种遗传缺陷的突变品系 动物。

3. 纯杂种动物：是指无计划随意交配而繁殖的动物， 即一般动物室供应的杂种动物 。 （二）微生物学控制方法分类

1. 无菌动物：这种动物无论体表或肠道中均无微生物存在，并且体内不含任何抗体。

2. 悉生动物：是给无菌动物引入已知

5〜17种正常肠道菌丛培育而成的动物。

3. 无特殊病原体动物：又称无病动物或屏障系统动物。无任何传染病的病原体或对实验结果产生干扰 的微生物存在。 此种动物是标准级动物，适用于多数科研。

4. 清洁动物或最低限度疾病动物：该种动物是饲养在设有清洁走廊和不清洁走廓的设施中，其种群均 来自剖腹产。

5. 常规动物：指一般在自然环境中饲养的带菌动物。

二、 实验动物的选择 实验动物种类很多，生理性状也不同，为保证动物试验的准确性，必须选择适宜的实验动物做试验。

常用的有小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔及绵羊等。通常按实验目的、要求选择实验动物，选择时应考虑如 下几点：

1. 根据实验的要求而选择不同的实验动物：如在分离、鉴定病原菌时

选用最敏感的动物作实验对象

如小白鼠对肺炎链球菌、破伤风外毒素敏感、豚鼠对结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌等易感；测定金黄色葡 萄球菌肠毒素以幼猫最敏感等。

2. 选用动物的数量必须符合统计学上预计数字的需要。

3. 根据实验的性质也可选不同品系的动物：其目的在于使动物试验结果有规律性、重复性和可比性。 如测定对病原体的感染性，最好选用无菌动物或悉生动物。

4. 由于同一种实验动物存在着个体差异，还应注意个体的选择：

（1）年龄：一般均选用成年动物来进行实验。动物年龄常按其体重来估计，选用的动物体重大体上小 白鼠20〜30g 、豚鼠500g 左右、家兔 2kg 左右。

（ 2）性别：在实验研究中，动物如无特殊需要，一般宜选用雌雄各半。

（ 3）生理状态：实验动物应证明确实健康外，雌性动物若处于怀孕、授乳期不宜采用。 三、 接种途径和方法 包括：

① 皮内接种：通常以背部皮肤为宜。 ② 皮下接种：选用腹壁、背部或腹股沟等处。

③ 肌肉接种：一般选用臀部和大腿部肌肉，若为禽类以胸部肌肉为宜。

④ 静脉接种：家兔以耳静脉外缘为宜，小鼠和大鼠科注射尾静脉，豚鼠科注射后腿静脉，鸡可注射翅 下静

脉。

⑤腹腔接种：常用于小白鼠。

⑥脑内接种：常用于小白鼠。家兔、豚鼠由于颅骨较硬，需用钢锥先打孔后注射。

⑦脚掌（垫）接种。

四、接种后的观察与解剖

（一）接种后的观察

根据实验目的与要求，一般每天或每周观察一次。观察动物的食欲、精神状态及接种部位的变化，局部有无异常反应，周围淋巴结有无肿大等。必要时，测其体温、体重及血液学指标。并将观察测定的结果记录在实验动物登记卡上。如死亡，应立即解剖或冷藏。

（二）动物解剖

实验动物死亡后，应及时解剖和微生物学检验。到期未死的动物，通常亦应麻醉后剖验。

五、动物采血法

动物采血法包括

①心脏采血法：常用于家兔和豚鼠的采血。

②静脉采血法：颈静脉采血常用于绵羊；耳静脉采血常用于家兔；尾静脉采血常用于小白鼠和大白鼠。

③颈动脉采血法：常用于家兔的全采血。

采血时注意严格消毒，避免微生物污染血液。

六、动物试验在微生物检验中的应用

1. 分离和鉴定病原菌：有些微生物必须通过动物试验进行分离，如立克次体及某些病毒等，结核分枝杆菌的致病性也只有动物试验才能最终确定。

2. 细菌毒素检测：用动物试验检测细菌毒素是了解病原微生物毒力和致病力的一个重要方面，常用方法有白喉棒状杆菌毒力试验、破伤风梭菌毒力保护试验、大肠埃希菌肠毒素检测。

本章练习题：

常用实验动物接种途径包括

A. 皮内接种

B. 皮下接种

C. 肌肉接种

D. 静脉接种

E. 腹腔接种

O[答疑编号500735150101]

『正确答案』ABCDE

动物采血法包括

A. 心脏采血法

B. 皮内采血法

C. 静脉采血法

D. 肌肉采血法

E. 颈动脉采血法

O[答疑编号500735150102]

『正确答案』ACE

第十六章菌种保存与管理

本早考点：

1. 菌种保存方法

2. 菌种保管菌种保管简述、注意事项

、保存菌种的方法

二、菌种保管

1. 应充分了解每种细菌的不同生物性状及营养要求，以选择适宜的培养基。一般原则是使细菌能够生

长而不易变异的前提下，必须选择营养丰富的培养基，一般不用含糖的培养基。液体培养基不适于保存菌种。

2. 培养后最好在细菌尚未旺盛发育之前取出，放冰箱内保存。

但应注意，一般细菌大多保存于4C冰箱中，但真菌，霍乱弧菌、铜绿假单胞菌及粪产碱杆菌需在室温保存。而脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌及初次分离的流感嗜血杆菌需保存于37C孵箱中。

3•保存菌种应做鉴定记录。在主要培养基上生长情况、菌落特征、形态及革兰染色或特殊染色反应、生化反