乙型肝炎病毒表面抗原弱反应性结果的确认

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1 材料与方法
1.1 仪器及试剂 1.1.1 WELLSCAN K3 酶标仪、anthos fluido 洗板机、 ARCHITECT i2000 SR 全自动免疫分析仪, 分别是 上海雷勃公司、郑州安图生物工程公司、美国雅培公 司产品。 1.1.2 ELISA 法检测 HBsAg 诊断试剂盒购自山东潍 坊三 维生物工程 集团有 限 公 司 , 批 号 :20080501; MEIA 法 HBsAg 诊断试剂盒购自美国雅培公司,批 号:53518HNOO。 1.1.3 4IU/mL 的 HBsAg 参比血清由卫生部临床检验 中心提供,批号:GBW(E)090042。 1.1.4 待确认血清 2006 年 11 月~2008 年 6 月间本 实验室用 ELISA 法检测血清 HBsAg, 初检结果 S/
3 讨论
乙肝表面抗原检测, 灰值区结果的准确性问题 一直困扰着检验医学工作者。近年来,抗病毒药物在 临床广泛应用, 乙肝表面抗原弱反应性结果的比率 也在随之增高, 乙肝表面抗原假有反应性结果对被 检者造成巨大的负面影响,而假阴性结果又会造成 临床误判,延误患者病情,这些情况都要求对乙肝表 面抗原进行 确认。 确认试 验 阳 性 临 界 点 的 设 定[4], ELISA 法检测 HBsAg 结果 S/CO 值允许有一定的变 异,为了减少重复测定中实验误差对确认试验结果 判断的影响, 确认试验阳性临界点应尽可能地远离 允许误差;但各种干扰因素对 ELISA 法检测 HBsAg 结果的影响也较大,尤其是弱反应性结果。所以,将” 样本确认与样本对照比较,S/CO 值被中和下降 50% “设定为确认试验阳性的临界点。
CO 值界于 1~4 的标本;收集血清-40℃保存备检。 1.1.5 阴性对照血清收集 收集 2008 年 6~8 月本室 使用的山东潍坊三维生物工程集团有限公司 HBsAg ELISA 法 诊 断 试 剂 剩 余 阴 性 对 照 血 清 ,4℃ 保 存,使用前混合均匀。 1.1.6 抗-HBs 抗体阳性血清(下称”抗-HBs 血清“)收 集
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应,和新生儿溶血病,具有现实的临床意义。 MCT 的原理是,通过凝胶的浓度,控制凝胶间
隙的大小,使间隙只能让游离的红细胞通过,从而 使游离的红细胞与聚集红细胞分离,通过离心的红 细胞沉在凝胶管底部,这表明红细胞未凝集(阴性 反应)。 若红细胞在凝胶带上部,则表明红细胞发生 凝集(阳性反应)。该方法已逐渐用于血型鉴定、交叉 配血实验、抗体特异性鉴定,以及抗人球试验等血 清、血型学检查中来。
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阳性血清中和法检测 187 份待确认血清;随机抽取用此法确认的阳性血清和阴性血清,用 Abbott MEIA 法检测,
用抗原稀释法测定该确认方法的最低确认限。 结果:187 份待确认血清中有 165 份被确认阳性,22 份被确认阴性;
Abbott MEIA 法对照检测的 44 份血清结果 22 份阳性、22 份阴性,与确认结果相同;最低确认限 1.1 IU/mL。 结论:
均值
0.052 2.151 1.18 0.12 10.48%
SD
0.004 0.11 0.12 0.015 0.97%
CV(%)
7.69 5.11 10.02 12.5 9.25
2.4 44 份用 Abbott MEIA 法对照 检测的血清 ,结 果为 22 份阳性、22 份阴性,与抗-HBs 抗体阳性血清 中和法确认结果一致。
湖南师范大学学报(医学版)
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2010,7(2) J Hunan N ormal Univ(Med Sci)
乙型肝炎病毒表面抗原弱反应性结果的确认
吴斌
(岳阳市中心血站检验科,湖南岳阳 414000)
【摘要】 目的:建立一种简单、经济、实用的确认乙肝表面抗原弱反应性结果的方法。 方法:采用抗-HBs 抗体
2 结果
2.1 抗-HBs 抗体阳性 血清中和法 确认 187 份 HBsAg 待确认血清, 有 165 份确认试验阳性,22 份确 认试验阴性。 确认试验阳性的 165 份血清,其”(样本 确认 S/CO 值/样本对照 S/CO 值)×100%“值在 10%~ 40%之间。 确认结果阴性的 22 份血清中,有 14 份样 本 对 照 S/CO 值 小 于 1, 另 8 份 样 本 对 照 S/CO 值 1.4~2.6,但其”(样本确认 S/CO 值/样本对照 S/CO 值) ×100%“值在 78.16%~90.34%之间。
to detect red cell antigen-antibody reactions [J]. Transfusion,1990,30(2):109-113.
[2] Hitzler W, Bauernfeind U, Sch.o.mig -Brekner J,et al. The
gel centrifugation test in serologic compatibility testing [J]. Beitr Infusionsther, 1990,26:358-361. [3] 杨 世 明,崔 颖,张 勇 萍,等.微 柱 凝 胶 法 在 抗 体 筛 查 中 的 应 用 及 其 影 响 因 素 探 讨[J].现 代 检 验 医 学 杂 志 ,2006,21(4): 55-57.
总之,MCT 即便对初学者而言,结果判断上也 比试管法可靠。 且省时、操作简单,试剂消耗少,成 本低,环境污染少。 特别是对输血病人和妊娠妇女 抗体的筛查, MCT 的敏感性更有利于 早期检出这 些抗体。
参考文献: [1] Lapierre Y, Rigal D, Adam J,et al. The gel test: a new way
收集本实验室检测乙肝病毒五项标志物, 抗HBs 抗体强阳性(抗-HBs 抗体 S/CO 值大于 20)的标 本剩余血清,收集期间 4℃保存(五天为一个收集周 期);收集结束将所有血清混合均匀,用 ELISA 法再 次检测, 结果抗-HBs 抗体强阳性 (抗-HBs 抗体 S/ CO 值大于 20),HBsAg 及 HBeAg 阴性;用实时荧光 PCR 法测定 HBV-DNA,结果<1000copies/mL。 完成 后-40℃保存备用。 1.2 方法 1.2.1 抗-HBs 抗体阳性血清中和法确认 187 份 HBsAg 待确认血清, 每份血清均设样本对照和样本确 认,按试剂盒操作说明书进行,临界值(CO)=2.1×N。
抗-HBs 抗体阳性血清中和法确认 HBsAg 结果可靠,可以用于 HBsAg 的确认,且操作简单、经济、实用,能在各级
医疗机构推广应用。
【关键词】 乙肝表面抗原;乙肝表面抗体;中和法;确认试验
【中图分类号】 R331 【文献标识码】A
【文章编号】1673-016x(2010)02-0050-02
在乙型肝炎病毒感染人群中,部分患者血清乙 肝表面抗原(HBsAg)呈低水平表达,随着检测技术不 断改进,HBsAg 弱反应性结果的比率也在升高[1],但 不同方法、不同试剂检测血清 HBsAg,弱反 应性结 果有较大差异[2-3]。为此,我们探讨采用同一厂家试剂 用中和法对 HBsAg 弱反应性结果进行确认。
阳性对照 阳性对照血清 50μL
样本对照 待确认血清 50 μL
样本确认 待确认血清 50 μL
分别 37℃温育 30min,洗板 5 次,吸干
清洗液 100μL
阴性对照血清 100μL
阴性对照血清 100μL
阴性对照血清 100μL 抗-HBs 血清 100μL
分别 37℃温育 30min
清洗液 50μL
2.2 采用抗-HBs 抗体 阳性血清中 和法 确 认 HBsAg 系列浓度血清,最低确认限(灵敏度)为 1.1IU/mL。 2.3 重复性检测结果见表 1。
表 1 对混合血清检测的精密度(重复性)结果(n=20)
血清
阴性对照 OD 值 阳性对照 OD 值 混合血清样本对照 S/CO 值 混合血清样本确认 S/CO 值 样本确认/样本对照
混合血清可以增加抗-HBs 抗体相对于 HBsAg 抗原血清型的多样性,从而能够适用于中和多种血 清型的 HBsAg 抗原,并且混合血清可以相互稀释单 份血清中的干扰物质,而减小干扰 (下转第 53 页)
影响微柱凝胶法筛查血清抗体的因素 左立新
好重复性和敏感性[1]。 Hitzler 等在试管法中加入了 酶试剂[2]。 在抗体筛查的实验研究中,必需对未经选 择的病人血清,用凝胶离心技术与试管法作对比研 究。 本组结果显示,在 2000 例受血者血清中,筛查 出 6 例不规则抗体,都为 Rh 血型系统免疫型抗体 (均有输血史或反复输血史),与杨世明的研究结果 大致相似[3]。 说明受血者的血清中的不规则抗体,绝 大多数是 Rh 血型系统的免疫性抗体,而其它血型 系统的免疫性抗体较少。
确认实验操作步骤如下:
收 稿 日 期 :2009-11-12 作者简介:吴斌(1973-),男,湖南岳阳人,主管技师,主要从事临床检验工作。 E-mail:hbp3517@yahoo.com.cn;
乙型肝炎病毒表面抗原弱反应性结果的确认 吴 斌
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空白对照 清洗液 50μL
阴性对照 阴性对照血清 50μL
我国临床输血技术规范记载:凡遇到交叉配血 不合,有输血史、妊娠史或短期内需要多次输血的 病人,必须进行不规则抗体筛选试验。 MCT 检测, 是现今最好、最灵敏的检测方法之一。
在 Rh 血型系统里,D 抗原的抗原性最强,因此 对受血者和献血员进行 RbD 抗原的检测, 是有必 要的。 但是这一检测方法,在国内开展还不是十分 普遍。 正因为如此,Rh 血型系统的其它抗原(E、C、 c、e)也是没有开展。 致使一些 Rh 阴性者,首次输血 时,接受 Rh 阳性血,机体被处于致敏状态 ,当再次 输 入 Rh 阳 性 血 时 ,出 现 免 疫 记 忆 ,导 致 溶 血 性 输 血反应。 而这种免疫产生的抗体必须采用凝聚胺或 抗人体球蛋白试验才能检测出来。 因此,用特异性 强、敏感性高的检验方法,对受血者和孕产妇,在输 血和产前及产妇在输血进行血型免疫性不规则抗 体筛查,和抗体特异性鉴定,对预防溶血性输血反
酶结合物 50 μL
酶结合物 50 μL
酶结合物 50 μL
酶结合物 50 μL
分别混匀,37℃温育 30min,洗板 5 次,吸干,各孔加底物混合液 100μL,37℃避光显色 15 min,各 孔加 终 止 液 50μL,酶 标仪450nm 读取各孔 OD 值,并计算 S/CO 值
结果判断:⑴样本对照 S/CO 值>1,且(样本确 认 S/CO 值/样 本 对 照 S/CO 值 )×100%<50%被 认 为 确认试验阳性;⑵样本对照 S/CO 值、样本确认 S/CO 值均小于 1,或 样本对照 S/CO 值>1,但 (样本确认 S/CO 值/样本对照 S/CO 值)×100%>50%, 均被认为 确认试验阴性。 ⑶样本对照 S/CO 值>18,(样本确认 S/CO 值/样本对照 S/CO 值)×100%>50%时, 需要对 标本稀释后再确认。 1.2.2 灵 敏 度 将 4IU/mL 的 HBsAg 参 比 血 清 用 阴 性 对 照 血 清 精 确 稀 释 为 1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、 0.9、0.8、0.7、0.6、0.5IU/mL 系列浓度血清, 每个稀释 度 3 份,用 1.2.1 确认法检测 0.5~1.5 IU/mL 共 11 个 系列浓度 33 份血清,求各稀释度 S/CO 值的均值,后 按 1.2.1 结果判断方法判断确认结果,判断为确认试 验阳性的 HBsAg 最低浓度被认为是该方法的最低 确认限(灵敏度)。 1.2.3 重复性 将数份确认阳性的血清混合, 制成 S/ CO 大约为 1.2 的混合血清,用 1.2.1 确认法每天检测 1 次 , 共 测 20 天 , 然 后 计 算 其 均 值 (mean )、 标 准 差 (SD)、变异系数(CV)。 1.2.4 Abbott MEIA 法 对 照 检 测 试 验 从 抗-HBs 抗体阳性血清中和法确认 为阳性的 165 份 血清中 随机抽取 22 份及确认为阴性 的全部 22 份血 清用 MEIA 法检测,检测步骤严格按操作说明书进行。
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