乙型肝炎病毒表面抗原弱反应性结果的确认

2 结果
2.1 抗-HBs 抗体阳性 血清中和法 确认 187 份 HBsAg 待确认血清， 有 165 份确认试验阳性，22 份确 认试验阴性。 确认试验阳性的 165 份血清，其”(样本 确认 S/CO 值/样本对照 S/CO 值)×100%“值在 10%~ 40%之间。 确认结果阴性的 22 份血清中，有 14 份样 本 对 照 S/CO 值 小 于 1， 另 8 份 样 本 对 照 S/CO 值 1.4~2.6,但其”(样本确认 S/CO 值/样本对照 S/CO 值) ×100%“值在 78.16%~90.34%之间。
湖南师范大学学报（医学版）
50
2010，7（2） J Hunan N ormal Univ（Med Sci）
乙型肝炎病毒表面抗原弱反应性结果的确认
吴斌
（岳阳市中心血站检验科，湖南岳阳 414000）
【摘要】 目的：建立一种简单、经济、实用的确认乙肝表面抗原弱反应性结果的方法。 方法：采用抗-HBs 抗体
CO 值界于 1~4 的标本；收集血清-40℃保存备检。 1.1.5 阴性对照血清收集 收集 2008 年 6~8 月本室 使用的山东潍坊三维生物工程集团有限公司 HBsAg ELISA 法 诊 断 试 剂 剩 余 阴 性 对 照 血 清 ，4℃ 保 存，使用前混合均匀。 1.1.6 抗-HBs 抗体阳性血清(下称”抗-HBs 血清“)收 集
53
应，和新生儿溶血病，具有现实的临床意义。 MCT 的原理是，通过凝胶的浓度，控制凝胶间
隙的大小，使间隙只能让游离的红细胞通过，从而 使游离的红细胞与聚集红细胞分离，通过离心的红 细胞沉在凝胶管底部，这表明红细胞未凝集(阴性 反应)。 若红细胞在凝胶带上部，则表明红细胞发生 凝集(阳性反应)。该方法已逐渐用于血型鉴定、交叉 配血实验、抗体特异性鉴定，以及抗人球试验等血 清、血型学检查中来。
3 讨论
乙肝表面抗原检测， 灰值区结果的准确性问题 一直困扰着检验医学工作者。近年来，抗病毒药物在 临床广泛应用， 乙肝表面抗原弱反应性结果的比率 也在随之增高， 乙肝表面抗原假有反应性结果对被 检者造成巨大的负面影响，而假阴性结果又会造成 临床误判，延误患者病情，这些情况都要求对乙肝表 面抗原进行 确认。 确认试 验 阳 性 临 界 点 的 设 定[4]， ELISA 法检测 HBsAg 结果 S/CO 值允许有一定的变 异，为了减少重复测定中实验误差对确认试验结果 判断的影响， 确认试验阳性临界点应尽可能地远离 允许误差；但各种干扰因素对 ELISA 法检测 HBsAg 结果的影响也较大，尤其是弱反应性结果。所以，将” 样本确认与样本对照比较，S/CO 值被中和下降 50% “设定为确认试验阳性的临界点。
to detect red cell antigen-antibody reactions [J]. Transfusion,1990,30(2):109-113.
[2] Hitzler W, Bauernfeind U, Sch.o.mig -Brekner J,et al. The
gel centrifugation test in serologic compatibility testing [J]. Beitr Infusionsther, 1990,26:358-361. [3] 杨 世 明,崔 颖,张 勇 萍,等.微 柱 凝 胶 法 在 抗 体 筛 查 中 的 应 用 及 其 影 响 因 素 探 讨[J].现 代 检 验 医 学 杂 志 ,2006,21(4): 55-57.
1 材料与方法
1.1 仪器及试剂 1.1.1 WELLSCAN K3 酶标仪、anthos fluido 洗板机、 ARCHITECT i2000 SR 全自动免疫分析仪， 分别是 上海雷勃公司、郑州安图生物工程公司、美国雅培公 司产品。 1.1.2 ELISA 法检测 HBsAg 诊断试剂盒购自山东潍 坊三 维生物工程 集团有 限 公 司 ， 批 号 ：20080501； MEIA 法 HBsAg 诊断试剂盒购自美国雅培公司，批 号：53518HNOO。 1.1.3 4IU/mL 的 HBsAg 参比血清由卫生部临床检验 中心提供，批号：GBW(E)090042。 1.1.4 待确认血清 2006 年 11 月~2008 年 6 月间本 实验室用 ELISA 法检测血清 HBsAg， 初检结果 S/
我国临床输血技术规范记载:凡遇到交叉配血 不合,有输血史、妊娠史或短期内需要多次输血的 病人，必须进行不规则抗体筛选试验。 MCT 检测， 是现今最好、最灵敏的检测方法之一。
在 Rh 血型系统里，D 抗原的抗原性最强，因此 对受血者和献血员进行 RbD 抗原的检测， 是有必 要的。 但是这一检测方法，在国内开展还不是十分 普遍。 正因为如此，Rh 血型系统的其它抗原(E、C、 c、e)也是没有开展。 致使一些 Rh 阴性者，首次输血 时，接受 Rh 阳性血，机体被处于致敏状态 ，当再次 输 入 Rh 阳 性 血 时 ，出 现 免 疫 记 忆 ，导 致 溶 血 性 输 血反应。 而这种免疫产生的抗体必须采用凝聚胺或 抗人体球蛋白试验才能检测出来。 因此，用特异性 强、敏感性高的检验方法，对受血者和孕产妇，在输 血和产前及产妇在输血进行血型免疫性不规则抗 体筛查，和抗体特异性鉴定，对预防溶血性输血反
2.2 采用抗-HBs 抗体 阳性血清中 和法 确 认 HBsAg 系列浓度血清，最低确认限（灵敏度）为 1.1IU/mL。 2.3 重复性检测结果见表 1。
表 1 对混合血清检测的精密度(重复性)结果(n=20)
血清
阴性对照 OD 值 阳性对照 OD 值 混合血清样本对照 S/CO 值 混合血清样本确认 S/CO 值 样本确认/样本对照
阳性对照 阳性对照血清 50μL
样本对照 待确认血清 50 μL
样本确认 待确认血清 50 μL
分别 37℃温育 30min，洗板 5 次，吸干
清洗液 100μL
阴性对照血清 100μL
阴性对照血清 100μL
阴性对照血清 100μL 抗-HBs 血清 100μL
分别 37℃温育 30min
清洗液 50μL
酶结合物 50 μL
酶结合物 50 μL
酶结合物 50 μL
酶结合物 50 μL
分别混匀，37℃温育 30min，洗板 5 次，吸干，各孔加底物混合液 100μL，37℃避光显色 15 min，各 孔加 终 止 液 50μL，酶 标仪450nm 读取各孔 OD 值，并计算 S/CO 值
结果判断：⑴样本对照 S/CO 值>1，且（样本确 认 S/CO 值/样 本 对 照 S/CO 值 ）×100%<50%被 认 为 确认试验阳性；⑵样本对照 S/CO 值、样本确认 S/CO 值均小于 1，或 样本对照 S/CO 值>1，但 （样本确认 S/CO 值/样本对照 S/CO 值）×100%>50%， 均被认为 确认试验阴性。 ⑶样本对照 S/CO 值>18，（样本确认 S/CO 值/样本对照 S/CO 值）×100%>50%时， 需要对 标本稀释后再确认。 1.2.2 灵 敏 度 将 4IU/mL 的 HBsAg 参 比 血 清 用 阴 性 对 照 血 清 精 确 稀 释 为 1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、 0.9、0.8、0.7、0.6、0.5IU/mL 系列浓度血清， 每个稀释 度 3 份，用 1.2.1 确认法检测 0.5~1.5 IU/mL 共 11 个 系列浓度 33 份血清,求各稀释度 S/CO 值的均值,后 按 1.2.1 结果判断方法判断确认结果，判断为确认试 验阳性的 HBsAg 最低浓度被认为是该方法的最低 确认限(灵敏度)。 1.2.3 重复性 将数份确认阳性的血清混合, 制成 S/ CO 大约为 1.2 的混合血清,用 1.2.1 确认法每天检测 1 次 , 共 测 20 天 , 然 后 计 算 其 均 值 (mean )、 标 准 差 (SD)、变异系数(CV)。 1.2.4 Abbott MEIA 法 对 照 检 测 试 验 从 抗-HBs 抗体阳性血清中和法确认 为阳性的 165 份 血清中 随机抽取 22 份及确认为阴性 的全部 22 份血 清用 MEIA 法检测，检测步骤严格按操作说明书进行。
总之，MCT 即便对初学者而言，结果判断上也 比试管法可靠。 且省时、操作简单，试剂消耗少，成 本低，环境污染少。 特别是对输血病人和妊娠妇女 抗体的筛查， MCT 的敏感性更有利于 早期检出这 些抗体。
参考文献： [1] Lapierre Y, Rigal D, Adam J,et al. The gel test: a new way
收集本实验室检测乙肝病毒五项标志物， 抗HBs 抗体强阳性(抗-HBs 抗体 S/CO 值大于 20)的标 本剩余血清，收集期间 4℃保存(五天为一个收集周 期)；收集结束将所有血清混合均匀，用 ELISA 法再 次检测， 结果抗-HBs 抗体强阳性 (抗-HBs 抗体 S/ CO 值大于 20)，HBsAg 及 HBeAg 阴性；用实时荧光 PCR 法测定 HBV-DNA，结果<1000copies/mL。 完成 后-40℃保存备用。 1.2 方法 1.2.1 抗-HBs 抗体阳性血清中和法确认 187 份 HBsAg 待确认血清， 每份血清均设样本对照和样本确 认，按试剂盒操作说明书进行，临界值(CO)=2.1×N。
抗-HBs 抗体阳性血清中和法确认 HBsAg 结果可靠，可以用于 HBsAg 的确认，且操作简单、经济、实用，能在各级
医疗机构推广应用。
【关键词】 乙肝表面抗原；乙肝表面抗体；中和法；确认试验
【中图分类号】 R331 【文献标识码】A
【文章编号】1673-016x(2010)02-0050-02
在乙型肝炎病毒感染人群中，部分患者血清乙 肝表面抗原(HBsAg)呈低水平表达，随着检测技术不 断改进，HBsAg 弱反应性结果的比率也在升高[1]，但 不同方法、不同试剂检测血清 HBsAg，弱反 应性结 果有较大差异[2-3]。为此，我们探讨采用同一厂家试剂 用中和法对 HBsAg 弱反应性结果进行确认。