NLRX1基因在调控顺铂耳毒性中的机制研究
siRNA沉默Livin基因对顺铂诱导LiBr细胞凋亡及增殖抑制敏感性的影响
siRNA沉默Livin基因对顺铂诱导LiBr细胞凋亡及增殖抑制敏感性的影响王昊;肖生祥;王新阳;刘栋华;贺大林;赵军【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2009(029)010【摘要】目的为探索沉默Livin基因联合化疗药物提高恶性黑素瘤疗效的可能性和初步机制.方法在体外以恶性黑素瘤LiBr细胞为研究对象.以低剂量顺铂作用于siRNA沉默Livin后的LiBr细胞.观察沉默Livin基因后LiBr细胞对顺铂诱导的凋亡及增殖抑制敏感性的影响.结果经TUNEL法和Annexin V-FITC/PI双标法检测凋亡、Western blot检测caspase-3蛋白表达和MTT检测细胞增殖.结果显示,与单独应用siRNA-3、顺铂相比,siRNA-3联合顺铂可显著诱导细胞凋亡、提高caspase-3活化、抑制细胞增殖.结论 siRNA沉默Livin基因后可明显增加LiBr细胞对顺铂诱导凋亡及增殖抑制的敏感性,恶性黑素瘤的化疗耐药与Livin高表达引起的凋亡抑制密切相关.【总页数】4页(P2098-2101)【作者】王昊;肖生祥;王新阳;刘栋华;贺大林;赵军【作者单位】西安交通大学医学院第二附属医院皮肤科,陕西西安,710004;西安交通大学医学院第二附属医院皮肤科,陕西西安,710004;西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院第二附属医院皮肤科,陕西西安,710004;西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,陕西,西安,710061【正文语种】中文【中图分类】Q254【相关文献】1.siRNA沉默K-Cl协同转运子1基因的表达对肺腺癌细胞顺铂敏感性的影响 [J], 徐然;赵俊刚;石文君2.siRNA沉默livin基因对恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响 [J], 王昊;谭升顺;王新阳;刘栋华;于春水;白转丽3.siRNA沉默livin基因对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶和奥沙利铂药物敏感性的影响[J], 元建华;李建旺;张曙波;毛山山;崔荣花4.siRNA沉默livin基因对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶和奥沙利铂药物敏感性的影响[J], 元建华;李建旺;张曙波;毛山山;崔荣花;5.Livin基因沉默对人喉癌Hep2细胞凋亡和增殖及化疗敏感性的影响 [J], 何盛梅;李昌亚;孟令辉;赵厚育因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
抗癌药顺铂对小鼠的耳、肾和肝毒性及其机制的研究
抗癌药顺铂对小鼠的耳、肾和肝毒性及其机制的研究廖英俊;汤浩;金亚平【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2004(20)1【摘要】目的以小鼠为实验对象建立抗癌药顺铂毒性研究的实验动物模型,并探讨其毒性作用产生的可能机制,为进一步对顺铂毒性作用的防治研究提供科学参考资料.方法选择♂昆明种小鼠,经腹腔连续注射顺铂5 d,观察不同剂量顺铂对小鼠的听力、肾脏和肝脏的毒性作用及肝和肾组织抗氧化系统各指标的变化.结果顺铂可引起小鼠体重明显下降、全频率的听力阈值升高,肝和肾的脏器系数、血清尿素氮(BUN)含量和丙氨酸氨基转换酶(ALT)活性等指标的异常,并呈剂量依赖关系.此外,顺铂还可引起肝和肾抗氧化及氧化损伤指标的异常.结论 3.0～4.0 mg*kg-1 b.w 的顺铂可引起小鼠出现明显的听力、肾和肝组织的损伤.氧化损伤是抗癌药顺铂产生其毒性作用的可能机制之一,但对于不同的脏器和在不同的给药时期,其发挥的作用不同.【总页数】4页(P82-85)【作者】廖英俊;汤浩;金亚平【作者单位】中国医科大学基础医学院生理教研室,沈阳,110001;中国医科大学基础医学院生理教研室,沈阳,110001;中国医科大学公共卫生学院劳动卫生教研室,沈阳,110001【正文语种】中文【中图分类】R-332;R322.47;R322.61;R322.92;R979.19【相关文献】1.抗癌药顺铂耳毒性机制及防治方法的研究进展 [J], 廖英俊;汤浩2.维生素E对顺铂所致的小鼠肾毒性的影响及其机制研究 [J], 张林;刘伏友;彭佑铭;李大伟;曾妮;武蓉;刘沧桑3.富氢盐水拮抗顺铂对小鼠耳毒性的作用研究 [J], 卢燕;林信衡;蔡友铮;徐浩;王宏波;吴小波;林昶;钟秀荣;孙丽清4.熊果酸对顺铂所致小鼠耳毒性的防护作用研究 [J], 孙美玲;沈天骄;邸阳;田原;王爱梅5.艾叶挥发油致小鼠急性肝毒性作用及其机制研究 [J], 刘红杰;李天昊;詹莎;陈亮;陈灵修;唐树杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用
腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用田丽娜;瞿全新;盛晓滨;徐福强【摘要】目的探讨腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用.方法采用直接感染法、台盼蓝活细胞计数、MTT、Hoechst染色法及流失细胞仪检测等方法,绘制SKOV3细胞生长曲线及倍增时间,检测SKOV3细胞感染重组病毒前后其顺铂的IC50值、细胞凋亡形态及细胞各周期的分布.结果 (1)顺铂浓度与SKOV3细胞抑制率呈线性正相关,相关系数r =0.9905 (P ＜0.05),顺铂IC50值为(7.76 ±0.37) μg/ml;腺病毒载体介导的RNA干扰ERCC1基因表达后,SKOV3细胞的生长受到一定程度的抑制;(2)与对照组相比,梯度浓度的重组腺病毒感染后,SKOV3细胞对顺铂的敏感性分别增加了9.4％、16.4％、23.2％、33.5％,呈剂量依懒性;(3)梯度滴度重组腺病毒表达载体联合顺铂作用于SKOV3细胞株,细胞凋亡显著增高;(4)重组腺病毒表达载体感染并联合顺铂用药,G1期细胞比例减小,S期细胞比例增大,细胞凋亡率进一步增高.结论重组腺病毒表达载体可以通过诱导肿瘤细胞凋亡、调节肿瘤细胞周期分布等途径增加SKOV3细胞对顺铂的敏感性.【期刊名称】《武警医学》【年(卷),期】2018(029)004【总页数】6页(P361-366)【关键词】卵巢癌;ERCC1基因;RNA干扰;重组腺病毒表达载体【作者】田丽娜;瞿全新;盛晓滨;徐福强【作者单位】100000,北京市石景山医院妇产科;300052,天津医科大学总医院妇科;100000,北京市石景山医院妇产科;100000,北京市石景山医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R731.31卵巢癌在所有妇科肿瘤中发病率最高，危害较大。
顺铂是卵巢癌化疗的一线药物，在卵巢癌综合治疗中占有重要地位。
目前普遍认为，DNA损伤是癌症发病的重要机制，顺铂细胞毒作用主要是形成铂-DNA加合物，ERCCl基因是DNA损伤修复途径的关键基因，其表达升高与卵巢癌顺铂耐药的发生密切相关。
丹参在防治顺铂耳毒性中对豚鼠耳蜗血管纹的作用
丹参在防治顺铂耳毒性中对豚鼠耳蜗血管纹的作用路虹;李凤玲;徐鸥;杨逸;刘砚星【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2004(025)004【摘要】目的探讨丹参在防治顺铂耳毒性中对豚鼠血管纹的作用.方法将18只豚鼠随机分成3组,对照组连续5 d腹腔注射生理盐水2ml/(kg·d),丹参组连续7 d肌注丹参8 g/(kg·d),第3 d时加腹腔注射顺铂2ml/(kg·d),观察豚鼠的一般状况和耳廓反应.应用电反应测听仪测试听觉阈值,应用激光多普勒探测耳蜗血流的变化,并铺片观察血管纹的改变,统计学处理.结果丹参组豚鼠实验后一般情况较顺铂组明显减轻,除3只豚鼠耳廓反应迟缓外,余反应灵敏,听觉阈值为(32.5±7.5)dB,耳蜗底转血流测试为155.8 mV,与对照组相比均无显著性改变(P＜0.01).耳蜗铺片显示红细胞聚集及血管扩张程度较轻,偶尔可见到细胞碎片及溶解,未见血池现象.结论丹参通过改善血管纹功能,对顺铂内耳毒性可起到一定的防治作用.【总页数】3页(P206-208)【作者】路虹;李凤玲;徐鸥;杨逸;刘砚星【作者单位】河北医科大学第二医院耳鼻咽喉科,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院耳鼻咽喉科,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院耳鼻咽喉科,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院耳鼻咽喉科,河北,石家庄,050000;河北医科大学第二医院耳鼻咽喉科,河北,石家庄,050000【正文语种】中文【中图分类】R764.35【相关文献】1.小鼠耳蜗血管纹Na-K-2Cl联合转运子1在顺铂耳毒性发生时的改变 [J], 吴振恭;褚汉启;黄孝文;崔永华2.连翘酯苷对豚鼠顺铂耳毒性损伤的防护作用及机制探讨 [J], 赵安未;侯学东;富公弼3.顺铂致豚鼠耳毒性作用中细胞凋亡及caspase-3表达的研究 [J], 张量;孙大宇;杨志航;江敏4.顺铂对耳蜗血管纹毒性作用的研究 [J], 李轶;刘会占;何志洲5.川芎嗪抗链霉素耳毒性作用及其对豚鼠耳蜗外毛细胞钾通道的影响(英文) [J], 汤浩;崔桂英;石丽娟;高青华;曹宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血红素加氧酶-1在硫化氢对抗顺铂诱导的听细胞毒性损伤中的作用
国误诊学杂志 ，２ ０ ，５（ ７） ３ ４ ３ ７ ． ０５ １ ：３ ７ — ３ ５
诱导 的听细胞毒性损伤 中的作用
曹磊 张世平 胡亿 文
【 摘要 】 目的 探讨 血红素加氧酶 一 ＨＯ １ １（ 一 ）在硫化氢 （ Ｓ）对抗顺铂 （ ｉ ｌ ｉ 诱 Ｈ２ Ｃｓ ａ ｎ） ｐｔ 导的听细胞损伤 中的作用 。方法 应 用顺 铂处理听细胞 ， 建立化疗药 物耳毒性的体外模型 。硫 化氢的供体硫氢化钠 （ ａ Ｓ） Ｈ 一 抑制剂锌 原卟啉Ⅸ （ ｎ ＰＩ 先于顺铂加入培养基 中 ， ＮＨ 及 Ｏ １ ＺＰ Ｘ） 作为预处理 。 检测细胞存活率 、 内丙二醛 （ Ａ） 胞 ＭＤ 的含量 、 一 的表达 。 ＨＯ １ 结果 顺铂在 １ ～ ０ ０ ８ ￣ ｏ／ ｔ ｌ ｍ Ｌ浓度范围 内处理 听细胞 ２ 可浓度依赖 性地降低细胞存活率 。４ ｔｏ／ ４ｈ ０￣ ｌ ｍ Ｌ顺铂处理 ２ ４ｈ 可增加听细胞 内 ＭＤ Ａ的含量 。Ｎ Ｈ 处理可上调 Ｈ 一 的表达 ， 制顺铂引起 的胞 内 Ｍ 含 量 ａＳ Ｏ１ 抑 ＤＡ
（８） ８ — ８ ． ：６ ６ ６ ９
１４ ． ３ ４
［ 沙立 民 ， ９ 】 胡秀娟． 癌症患者生存质量与社 会支持 因素 的调查分析【 ． Ｊ齐齐哈尔 医学 院学报 ，０ ３ ２ （ Ｊ ２ ０ ，４ １
６． ４
『 张从军 ， 勇 ， ５ １ 钱 朱学庆 ， Ｅ Ｒ ＣＱ Ｑ量表评估 等．Ｏ Ｔ Ｌ
（ ａ Ｓ ａ ２ ｄ ｎ ｒ ｗ ｓ ｄ ｅ ｉｔ ｍ ｄ ｍ｛ １ ｅ ｒ ｃ ｐａ ｎ ｒａ ｎ． ｏ ｎ ｉ ｔｈ ｌ ｏ Ｈ 一 ， Ｎ Ｈ 。 Ｈ Ｓ ｏ ｏ ） ａ ａ ｄ ｄ ｎ ｅ ｉ ｆ ｅ ｉ ｌ ｉ ｔ ｔ ｔ ｉ ｂ ｔｅ ｏ ｆ Ｏ １ ｏ ｕ ｒ ｈｂ ｏ ｓ ｔ ｅ ｍｅ Ｔ ｈ ｉ ｒ ｅ
顺铂对小鼠耳蜗毒性及caspase_3表达的影响_孙伟霞
第30卷第5期2009年10月西安交通大学学报(医学版)Jour nal of Xi an Jiaotong University (Medical Scie nces )Vol .30No .5Oct .2009顺铂对小鼠耳蜗毒性及caspase -3表达的影响孙伟霞1,王爱梅1,包翠芬2,惠丽杰1,常志杰1(1.辽宁医学院生理学教研室;2.辽宁医学院科学实验中心,辽宁锦州 121001)摘要:目的 建立小鼠顺铂耳毒性模型,研究不同剂量顺铂对小鼠耳蜗毒性及caspa se -3表达的影响。
方法 69只昆明小鼠随机分成对照组、顺铂2.5mg /(kg ·d )组、顺铂3.5mg /(kg ·d )组和顺铂4.5mg /(kg ·d )组,腹腔连续注射5d 。
通过听脑干反应(audito ry brainstem respo nse ,A BR )测试观察用药前后小鼠听力的变化;应用免疫组织化学Envision 法检测半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase -3)在耳蜗中的表达。
结果 不同剂量顺铂组小鼠体重和听力明显下降,与对照组比较均有显著性差异(P <0.05,P <0.01);并且随着顺铂给药剂量的增加,小鼠耳蜗中caspase -3表达亦明显增强。
结论 应用顺铂可建立小鼠耳毒性模型;caspase -3参与了顺铂致小鼠耳蜗细胞损伤的过程,提示内耳细胞凋亡可能是顺铂的耳毒性机制之一。
关键词:顺铂;耳蜗;caspase -3;免疫组织化学中图分类号:R764.43 文献标志码:A 文章编号:1671-8259(2009)05-0616-04Effect of cisplatin on ototoxicity and expression ofcaspase -3in mouse cochleaSUN Wei -xia 1,WANG Ai -mei 1,BAO Cui -fen 2,H UI Li -jie 1,CH ANG Zhi -jie1(1.Department of Physiology ;2.Scientific Labo rato rial Cente r ,Liaoning M edical Co lleg e ,Jinzhou 121001,China )ABSTRAC T :Objective To establi sh a m ice m odel of cispla tin -induce d ototoxicity and to investigate the ef fectof cisplatin on the expression of caspase -3in mouse cochle a .Methods Totally 69Kunm ing mice were r andomly divide d into contr ol gr oup ,cisplatin 2.5mg /(kg ·d )group ,c i splatin 3.5mg /(kg ·d )gr oup and cisplatin 4.5mg /(kg ·d )group .Mice wer e injected intr aper itoneally f or 5days .Auditor y br ainstem r esponse (ABR )was m easure d to obser ve the change of he aring .Envi sion me thod of immunohistochemistr y was applie d to de tect the expr ession of caspase -3in cochle a .Results The we igh t and hear ing of mice in dif fer ent dose cisplatin groups were decline dsignif icantly as com pa red with those in contr ol gr oup (P <0.05,P <0.01),and the expression of caspase -3was gr eater r emar kably with m or e cisplatin injected .Conclusion A mouse model of cisplatin -induced ototoxicity could be establi shed .C aspase -3is involved in cisplatin -induced cochlear injur y .I t suggests that apoptosis m ay be one of the mechanisms of cispla tin ototoxicity .KEY WORDS :cisplatin ;cochle a ;caspase -3;immunohistochem istr y 收稿日期:2008-11-05 修回日期:2009-01-06通讯作者:王爱梅,教授,硕士研究生导师.E -mail :aim eiw ang @yah oo .com .cn作者简介:孙伟霞(1981-),女(汉族),在读硕士研究生.研究方向:听觉生理与病理.E -m ail :soffeesw x @ 顺铂(cisplatin ,CDDP )作为一种抗癌药,被广泛用于治疗各种恶性肿瘤。
细胞焦亡在胃癌中的生物学作用研究进展
细胞焦亡在胃癌中的生物学作用研究进展细胞焦亡是由Gasdermin（GSDM）家族蛋白诱导的程序性细胞死亡，表现为细胞质膜形成膜孔，细胞膜破裂，内容物释放。
在形态学特征上，发生焦亡的细胞和凋亡一样可出现DNA 损伤、核固缩，但细胞核较凋亡保持完整，DNA 损伤程度较凋亡低，TUNEL 染色呈阳性。
其次，细胞焦亡过程中会形成质膜孔隙，导致细胞肿胀和渗透溶解，大量炎症因子释放。
随着研究的深入，细胞焦亡在癌症中的生物学作用日益凸显。
本文基于细胞焦亡的分子机制及胃癌与细胞焦亡的相关研究探讨该生物学过程在胃癌中的作用，为胃癌的治疗提供新的思路。
一、细胞焦亡定义及机制细胞焦亡的定义从发现至今经过了多次变化。
细胞死亡命名委员会（NCCD）在2018 年将其修正为：一种依赖于Gasdermin 家族蛋白诱导细胞质膜形成膜孔的可调控的细胞死亡，通常但不总因炎症性Caspase 的活化而完成。
细胞焦亡涉及几个关键组分：炎症小体、Caspase 家族、Gasdermin 家族。
炎症小体是一种细胞内多蛋白信号复合物，通常围绕模式识别受体（pattern-recognition receptors，PRR）组装完成。
PRR 可识别胞内病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）、损伤信号（damage-associated molecular patterns，DAMPs）从而激活Caspase 家族蛋白诱导细胞焦亡。
PRR 家族通常包括Toll 样受体（Toll-like receptors，TLRs）、NOD 样受体（NOD-like receptors，NLRs）等，受体激活Caspase 家族蛋白诱导细胞焦亡，但若受体上不含Caspase 招募结构域（Caspase activation and recruitment domain，CARD），则另需通过（pyrin-like domain，PYD）结构域与含有CARD 结构域的凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain，ASC）结合，最终通过CARD 结构域激活Caspase 家族蛋白诱导细胞焦亡。
顺铂致豚鼠耳毒性作用中细胞凋亡及caspase-3表达的研究
制 ， 能参 与 了 Ｃ Ｄ 可 Ｄ Ｐ所 致 的耳 蜗细 胞凋 亡 过程 ， 致耳 毒性 的发生 。 导 【 关键 词】 顺铂 ； 毒 性 ； 耳 细胞 凋 亡 ；ａｐｓ－ ｃｓａｅ ３
［ 图分类 号］ ７ ４４ 中 Ｒ ６ ．３
【 献标 识码］Ａ 文
【 文章 编号］ １ ７ — ２ ０（ ０ ）２（ 一 ２ — ３ ６ ３ ７ １ ２ １ ０ ａ） ０ ４ ０ １
Ｚ ＨＡＮＧ ａ ｇ ＳＵ Ｄａ ｕ ＡＮＧ ｈ ｈ ｎ ，ＪＡＮＧ Ｍｉ Ｌｉｎ ， Ｎ ｙ ，Ｙ Ｚ ｉａ ｇ Ｉ ｎ
（ｅ ａｔ ｎ ｆ ｈ ｓ ｌｇ，ｈ ａｉ Ｍｅ ｉａ Ｉｓｉ ｔ ｈ ｎ ａ ｇＭｅ ｉ ｌ ｏｌｇ， ｈ ｎ ａ ｇ １ ０ ３ ， ｈｎ ） Ｄ ｐ ｒ ｔ ｙｉ ｏｙ ｔｅＢ ｓ ｄｃ ｌ ｎｔｕｅｉ Ｓ ｅ ｙｎ ｄｃ ｌ ｅ Ｓ ｅ ｙｎ ０ ４ Ｃ ｉａ ｍｅ ｏ Ｐ ｏ ｃ ｔ ｎ ａＣ ｅ １
ｔ ａｅ ｔ ｒ ｔｄ ｗｉ ＡＢＲ ｔｓｉ ｇ ｉ ｅ ｒｎ ｈ ｎ ｅ ｅｏｅ ａ ｄ ａｔｒ ｔｅ ｔｅ ｔ ｎ ；ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆａ ｏ ｔｓｓ ｗｅｅ ｄ ｔｃｅ ｙ ｅ ｈ ｅ ｔ ｎ ｈ ａｉｇ ｃ ａ ｇ ｓ ｂ ｆｒ ｎ ｆｅ ｈ ｒａｍｅ ｔ ｘ ｒｓｉｎ ｏ ｐ ｐ ｏ ｉ ｎ ｒ ｅｅ ｔｄ ｂ ＴＵＮＥ ａｓ ｙ ｎ ｍｍｕ ｏ ｉｔｃ ｅ ｓｌ ｍｅｈ ｄ ｗａ ｍｐｏ ｅ ｔ ｅｅ ｔ ｈ ａ ｐ ｓ ３ ｘ ｒｓｉｎ ｉ ｃ ｃ ｌａ ｅｌ． Ｌ ｓａ ａ ｄ ｉ ｎ ｈ ｓｏ ｈ ｍｉｔ ７ ｔｏ ｓ ｅ ｌｙ ｄ ｏ ｄ ｔｃ ｔｅ ｃ ｓ ａ ｅ一 ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｎ ｏ ｈｅ ｒ ｃ ｌ ｓ
【 ｂ ｔａ ｔ Ａ ｓ ｃ】Ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｘ ｌｒ ｈ ｔｔ ｉ ｔ ｍ ｃ ａ ｉ ｏ ｉ ｌｔ ｙｉｖｓ ｇｔ ｇｔｅｅｐｅｓ ｎ ｏ ａ ｏ ｔｓ ｎ ｒ ｊｃｉ ： ｏｅ ｐｏｅｔｅｏｏ ｘｃ ｙ ｅ ｈ ｎｓ ｆｃｓ ａｉ ｂ ｎ ｅｔ ａｉ ｈ ｘ ｒｓｉ ｆ ｐ ｐｏｉ ａ ｄ ｖ ｏ ｉ ｍ ｐ ｎ ｉ ｎ ｏ ｓ
肌醇需求酶1对顺铂所致小鼠耳蜗毛细胞凋亡的作用研究
肌醇需求酶1对顺铂所致小鼠耳蜗毛细胞凋亡的作用研究张晓;王爱梅【期刊名称】《听力学及言语疾病杂志》【年(卷),期】2024(32)2【摘要】目的研究肌醇需求酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)对顺铂所致小鼠耳蜗毛细胞凋亡的作用。
方法分离生后3~5 d的健康昆明小鼠(500只)耳蜗基底膜并进行体外培养,24 h后随机分为对照组和不同浓度顺铂组(4、8、16和32μg/ml)(每组200条),再培养24 h。
应用异硫氰酸荧光素(FITC)染色观察小鼠耳蜗毛细胞的缺失;应用Hoechst 33258和四甲基异硫氰酸罗丹明(TRITC)标记的鬼笔环肽双重荧光染色观察小鼠耳蜗毛细胞的凋亡;并用Western blot检测小鼠耳蜗中p-IRE1α、p-JNK、Bax及caspase-3的蛋白水平。
结果与对照组比较,顺铂组小鼠耳蜗毛细胞缺失、细胞凋亡率以及p-IRE1α、p-JNK、Bax、caspase-3等蛋白水平显著增高(P<0.01),并且p-IRE1α与Bax、caspase-3表达和细胞凋亡率呈正相关(P<0.05)。
结论 IRE1可能参与调控顺铂所致小鼠耳蜗毛细胞凋亡。
【总页数】5页(P150-154)【作者】张晓;王爱梅【作者单位】河南护理职业学院解剖学教研室;锦州医科大学生理学教研室【正文语种】中文【中图分类】R764.43【相关文献】1.顺铂对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及caspase-3表达的影响2.卡那霉素所致小鼠耳蜗细胞凋亡途径的研究3.内质网应激在顺铂诱导离体小鼠耳蜗毛细胞凋亡中的作用4.葛根素对顺铂致毒小鼠耳蜗钙蛋白酶2表达的影响5.川芎嗪对顺铂所致耳蜗毒性保护作用的实验研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
《敲低RBM17对下咽癌的顺铂敏感性、迁移、侵袭和EMT的影响》
《敲低RBM17对下咽癌的顺铂敏感性、迁移、侵袭和EMT的影响》摘要：本文旨在研究RBM17基因敲低对下咽癌细胞顺铂敏感性的影响，并探讨其与细胞迁移、侵袭以及上皮间充质转化（EMT）之间的关系。
通过实验数据分析，我们揭示了RBM17在下咽癌中的潜在作用，并提出了其可能作为治疗靶点的可能性。
一、引言下咽癌是一种常见的恶性肿瘤，其发病率逐年上升。
顺铂是下咽癌化疗的常用药物，但耐药性的产生使得治疗效果不尽如人意。
近年来，研究发现RBM17基因在下咽癌中表达异常，并与肿瘤的恶性程度密切相关。
因此，探讨RBM17对下咽癌细胞顺铂敏感性的影响及其与细胞迁移、侵袭和EMT的关系，对于揭示下咽癌的发病机制和寻找新的治疗策略具有重要意义。
二、方法本研究采用基因编辑技术敲低RBM17基因的表达，通过细胞实验和动物实验，观察RBM17敲低后对下咽癌细胞顺铂敏感性的影响，以及与细胞迁移、侵袭和EMT的关系。
具体方法包括：细胞培养、基因编辑、MTT法检测细胞生长曲线、Transwell 实验检测细胞迁移和侵袭能力、免疫荧光检测EMT相关蛋白的表达等。
三、结果1. 顺铂敏感性：实验结果显示，敲低RBM17后，下咽癌细胞的顺铂敏感性显著提高。
在相同浓度的顺铂作用下，RBM17敲低的细胞生长受到明显抑制。
2. 迁移和侵袭：RBM17的敲低显著降低了下咽癌细胞的迁移和侵袭能力。
Transwell实验显示，敲低RBM17的细胞在穿过膜的数目上明显少于对照组。
3. EMT：通过免疫荧光检测发现，RBM17敲低的细胞中EMT相关蛋白（如E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白等）的表达发生改变，表明EMT过程受到抑制。
4. 动物实验：在动物模型中，敲低RBM17的下咽癌肿瘤生长速度较慢，且对顺铂治疗的反应更为敏感。
四、讨论本研究表明，敲低RBM17可以显著提高下咽癌细胞对顺铂的敏感性，并抑制细胞的迁移和侵袭能力。
同时，RBM17的敲低还与EMT过程的抑制有关。
顺铂耳毒性机制及抗氧化药物局部应用的预防作用
顺铂耳毒性机制及抗氧化药物局部应用的预防作用於得红;汪雪玲;陈聿名;吴皓【摘要】Cisplatin is a widely used and effective drug for the treatment of various solid tumors.Unfortunately, its severe side-effects have also impacted patients,especially its often bilateral,progressive,irreversible and dose-depen-dent ototoxicity.Current evidence indicates that cisplatin triggers the production of reactive oxygen species(ROS)in tar-get tissues in the inner ear.A large number of agents that protect against cisplatin-induced ototoxicity have been success-fully tested in cell culture and animal models.However,many of them interfere with the therapeutic effects of cisplatin, and therefore are not suitable for systemic administration in clinical practice. Until now, none of them has been ap-proved by the FDA.Consequently,local administration strategies,namely intratympanic administration,have been de-veloped to achieve otoprotection,without reducing the antitumoral effects of cisplatin.This review summarizes the clini-cal and experimental studies of ciaplatin ototoxicity,including details of the molecular mechanisms of action,to gain in-sight for future drug development in this field.%顺铂是临床普遍应用的广谱高效抗肿瘤药物,与多种抗肿瘤药有协同效应、无交叉耐药等特点,为当前联合化疗中最常用的药物之一.然而,顺铂的毒副作用严重困扰着癌症患者,其耳毒性尤为突出.顺铂耳毒性多为双侧、进展性、不可逆性、剂量依赖性听力损伤,往往导致成人、尤其是儿童患者出现语言交流障碍.大量研究证实,顺铂通过诱发活性氧(ROS)升高导致听觉毛细胞发生caspase-3激活的细胞凋亡.哺乳动物听觉毛细胞无自发再生能力,一旦损伤即为永久性.因此,顺铂耳毒性预防的药物研发或治疗策略开发至关重要.目前,越来越多的药物被证实在细胞和动物水平上具有顺铂耳毒性保护作用.然而,绝大部分药物经系统性用药后拮抗顺铂抗肿瘤疗效,无法实现临床上的有效应用.至今仍无有效顺铂耳毒性保护药物被批准上市.耳蜗局部鼓室内用药可部分缓解耳毒性保护候选药物对顺铂抗肿瘤疗效的干扰,但因顺铂需周期性用药,多次鼓室内给予耳毒性保护药物易引起局部创伤和感染.本文总结了具有代表性抗氧化药物预防顺铂耳毒性的基础和临床研究进展,为顺铂耳毒性新药研发提供理论依据.【期刊名称】《中华耳科学杂志》【年(卷),期】2018(016)002【总页数】5页(P145-149)【关键词】顺铂;耳毒性;药物;预防【作者】於得红;汪雪玲;陈聿名;吴皓【作者单位】上海交通大学医学院附属第九人民医院耳鼻咽喉头颈外科,上海交通大学医学院耳科学研究所,上海市耳鼻疾病转化医学重点实验室;上海交通大学医学院附属第九人民医院耳鼻咽喉头颈外科,上海交通大学医学院耳科学研究所,上海市耳鼻疾病转化医学重点实验室;上海交通大学医学院附属第九人民医院耳鼻咽喉头颈外科,上海交通大学医学院耳科学研究所,上海市耳鼻疾病转化医学重点实验室;上海交通大学医学院附属第九人民医院耳鼻咽喉头颈外科,上海交通大学医学院耳科学研究所,上海市耳鼻疾病转化医学重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R764顺铂作为一种广谱抗癌药，对泌尿生殖系统肿瘤、恶性淋巴瘤、头颈部鳞癌、软组织肉瘤等均具有一定的治疗效果。
NLRC3在肿瘤发生发展中作用的研究进展
NLRC3在肿瘤发生发展中作用的研究进展赖青云;孟祥磊【期刊名称】《江西医药》【年(卷),期】2019(054)001【总页数】5页(P90-94)【关键词】NLRC3;增殖;凋亡;肿瘤【作者】赖青云;孟祥磊【作者单位】赣南医学院, 赣州 341000;赣南医学院, 赣州 341000【正文语种】中文【中图分类】R730.2模式识别受体（如 TLR，NLR，CLR，RLR）是宿主免疫系统的重要组成部分并与肿瘤发生关系密切 [1-3]。
NOD 样受体（nucleotide-binding domain，leucine-rich repeat containing receptors，NLRs）是与内外源性病原或损伤相关分子模式（PAMPs、DAMPs）引起的免疫和炎症反应相关的模式识别受体。
NLRs分子[4]根据其生物学功能的差异将其分为形成炎性小体 NLRs （如：NLRP1、NLRP3、NLRP6、NLRC4、NLRC5）和非形成炎性小体 NLRs （NLRP12、NLRX1、NLRC3）。
其中NLRC3是含有CARD （caspaserecruitment domain）结构域的NOD样受体家族3简称，是一种新发现的在免疫细胞内高表达的非形成炎性小体家族成员，由第16号染色体的基因所编码的在进化上高度保守的胞质内模式识别受体[5]。
NLRC3由N端的胱天蛋白酶募集结构域（caspase-recruitment domain，CARD）、中心的核苷酸结合结构域（nucleotide-binding domain，NBD）及C端的亮氨酸重复序列（leucine-rich repeat，LRR）构成[5]，其各亚基功能作用：N端主要作用是募集接头分子、中间分子、效应分子来启动下游信号传导，中心NBD能促进寡聚化，C端主要进行感应配体。
研究发现NLRC3具有炎症及肿瘤信号通过检查点的功能，既可负调节NF-κB活化及IFN-I的产生来削弱炎症、免疫反应[6]，也可通过抑制PI3K-mTOR信号轴的活化影响细胞的增殖来发挥抗肿瘤的功能[7]，因此当其表达异常而不能正常行使调节功能则可引起对机体造成损害的异常病理生理反应，引发异常炎症、自身免疫病及肿瘤等疾病并影响疾病的发生、发展及转归。
NLRX1相关机制研究进展
NLRX1相关机制研究进展党赢;王小燕;师建平;刘钰;张锁【摘要】NLRX1是一种重要的模式识别受体,广泛分布在线粒体,结构与功能相对复杂,可用于识别内源性和外源性危险信号,并触发相应的信号传导通路,引发免疫反应,促进ROS生成,造成线粒体损失,促进细胞凋亡等一系列的生理活动.通过对N L RX1的结构、分布、功能以及其作用机制的研究,将为诊断糖尿病、恶性肿瘤等疾病带来新思路,为预防和治疗流感等相关疾病提供新靶点.【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2018(047)009【总页数】4页(P1222-1225)【关键词】@NLRX1;@ROS;炎症;自噬/相关蛋白质类;细胞凋亡【作者】党赢;王小燕;师建平;刘钰;张锁【作者单位】内蒙古医科大学研究生学院呼和浩特010110;内蒙古医科大学研究生学院呼和浩特010110;内蒙古医科大学中医学院呼和浩特010110;内蒙古医科大学中医学院呼和浩特010110;内蒙古医科大学中医学院呼和浩特010110【正文语种】中文【中图分类】R394NLR家族受体可以被外源性的危险信号和内源性的危险信号识别并激活，通过调节下游多个信号转导途径[2]，调节机体的多种生命活动[3]，维持机体正常生命活动。
NLRX1(Nucleotide binding domain and leucine rich repeat containing family member X1)也被称为NOD5、NOD9、NOD26、DLNB26，是一种重要的模式识别受体，属于NLR家族成员之一。
据相关报道，它是第一个位于线粒体中的蛋白质，它在调节免疫应答、促进ROS生成、线粒体损伤、细胞自噬、细胞凋亡等方面起着重要的作用[4]，并且与许多疾病的发生，发展，变化密切相关，由于NLRX1的相关作用机制仍然不明确，研究领域较为广泛，依然是近年来的一个研究热点。
1 NLRX1的基本结构人类的NLRX1基因位于11号染色体上，编码1008个氨基酸，保守功能极高，在鉴别病原微生物方面起着重要作用[1]。
顺铂体内注射对子代豚鼠耳蜗毛细胞的影响
顺铂体内注射对子代豚鼠耳蜗毛细胞的影响郝帅; 闫艾慧; 姜学钧【期刊名称】《《大连医科大学学报》》【年(卷),期】2011(033)005【总页数】4页(P434-436,440)【关键词】毛细胞; 凋亡; 顺铂【作者】郝帅; 闫艾慧; 姜学钧【作者单位】中国医科大学第一临床医院耳鼻咽喉科辽宁沈阳110001【正文语种】中文【中图分类】R764.35顺铂以其广谱高效性在抗肿瘤治疗中被普遍应用，但其肾毒性和耳毒性的副作用使得目前临床应用被严格控制[1]，特别是顺铂可造成听功能永久性损伤[2]。
本研究组前期实验发现孕晚期顺铂暴露致子代豚鼠毛细胞损伤及听力下降，但孕期顺铂暴露致子代出生后毛细胞损伤的研究未见报道。
因此，本实验通过检测顺铂能否诱导毛细胞凋亡，为顺铂耳毒性研究及其防护提供理论依据。
1 材料和方法1.1 主要试剂与仪器顺铂注射剂为齐鲁制药产品，兔抗Caspase-3多克隆抗体为美国Cell Signalling Techenology公司产品，TUNEL试剂盒为美国BD Biosciences公司产品；冰冻切片机位德国SLEE公司产品，光学显微镜为日本Olympus光学工业产品。
1.2 实验动物健康白色红目受孕豚鼠12只(体重600～700 g)，中国医科大学动物部提供。
双侧耳廓反射灵敏，在安静的环境下饲养。
实验动物生产许可证号：SCXK(辽)2003-0009；使用许可证号：SYXK(辽)2003-0013。
1.3 动物分组与处理随机分成两组，每组6只，从孕50 d至56 d连续腹膜内注射：(1)对照组：生理盐水1.5 mg/kg·d；(2)顺铂组：顺铂1.5 mg/kg·d。
子代出生后14 d，分离仔鼠右侧耳蜗，行TUNEL染色和Caspase-3免疫组化染色。
1.4 耳蜗冰冻切片制备快速打开胸腔，左心室穿刺，接灌流液，右心耳剪开。
先以4℃生理盐水经心脏灌流，待右心耳处流出液体为无色时，改以4℃新鲜配置的4%多聚甲醛磷酸缓冲液(0.1 mol/L，pH=7.4)约300 mL灌流固定。
丹参注射液对顺铂中毒豚鼠耳蜗iNOS表达的影响_张再兴
BX60 型，日本产品； BMJ － Ⅲ型包埋机及冷冻台，中国江苏产品。
HPLAS － 1000 图像分析系统，中国武汉同济千屏影像工程公司
产品。
图 1 对照组耳蜗扫描电镜图
图 2 实验组耳蜗扫描电镜
2 方法
2． 1 动物分组 实验动物随机分 3 组： ①正常对照组 10 只； ②模
型组 10 只动物动物； ③治疗组 10 只动物。
super imposednona lcoholic fatty liver disease［J］． Liver，2001，21
氧化物分解的酶，一般认为它在细胞内能清除有害的过氧化物代
（ 4） ： 266．
谢产物，阻断脂质过氧化链锁反应，从而起到保护细胞膜结构和功 能完整的作用。TNF － α 是一种主要由单核巨噬细胞分泌的具有 多种生物活性的多肽调节因子，TNF － α 既能直接损伤肝细胞，又 能参与肝脏炎症、肝细胞再生等病理生理过程［8］。
OS 表达来实现，值得尝试研究。本研究采用顺铂内耳中毒的动 列整齐，结构完整（ 图 1） 。实验组外毛细胞出现纤毛散乱，倒伏，
物模型，通过免疫组织化学、图像分析、电镜观察等方法，来研究 甚至呈片状缺失（ 图 2） 。治疗组大多数外毛细胞排列整齐，少数
丹参注射液对顺铂中毒豚鼠耳蜗诱导型一氧化氮合酶表达的影 外毛细胞表面可见纤毛散失或局部融合（ 图 3） 。
SOD / U·mgprot － 1
158． 78 ± 11． 89 69． 26 ± 7． 32☆ 82． 63 ± 10． 29☆ 97． 01 ± 14． 62☆ 111． 03 ± 18． 79☆△#
MDA / nmol·mgprot － 1 GSH － Px / U·mgprot － 1
丹参素钠对顺铂耳毒性抑制作用的实验研究
丹参素钠对顺铂耳毒性抑制作用的实验研究郭娜;胡俊;刘子熠;付小龙;夏明【期刊名称】《实验动物科学》【年(卷),期】2024(41)2【摘要】目的探讨丹参素钠(SDSS)对顺铂耳毒性的抑制作用。
方法选取HEI-OC1细胞系构建顺铂诱导的损伤模型,确定顺铂在24 h对HEI-OC1细胞的50%最大抑制浓度(IC50),基于该模型在小分子化合物库中筛选具有保护作用的药物。
在HEI-OC1细胞模型和小鼠耳蜗外植体毛细胞顺铂损伤模型中,检测SDSS对毛细胞存活率和凋亡水平的影响。
采用超氧化物阴离子荧光探针(DHE)染色检测SDSS对顺铂诱导的HEI-OC1细胞氧化应激水平的影响并选用药物N-乙酰半胱氨酸(NAC)作为阳性对照。
结果从210种FDA批准的小分子化合物中筛选出具有显著保护作用的药物SDSS,SDSS预处理可有效抑制顺铂诱导的HEI-OC1细胞凋亡、活性降低以及细胞内活性氧(ROS)升高,其最佳浓度为200μmol/L。
此外,SDSS可抑制顺铂对耳蜗基底膜外植体毛细胞的损伤。
结论SDSS可能通过抑制毛细胞内ROS升高并抑制细胞凋亡,从而发挥对顺铂所致耳毒性的抑制作用。
【总页数】8页(P66-73)【作者】郭娜;胡俊;刘子熠;付小龙;夏明【作者单位】耳鼻咽喉头颈外科山东第一医科大学附属省立医院;温州医科大学;山东第一医科大学【正文语种】中文【中图分类】Q95-3【相关文献】1.丹参注射液给药时间对预防顺铂耳毒性作用的影响2.丹参防治顺铂肝毒性的实验研究3.丹参在防治顺铂耳毒性中对豚鼠耳蜗血管纹的作用4.丹参注射液与丹参素钠对小鼠急性毒性的比较5.丹参注射液预防顺铂耳毒性的临床研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
银杏叶提取物保护顺铂致小鼠HEI-OC1细胞损伤的作用及机制研究
银杏叶提取物保护顺铂致小鼠HEI-OC1细胞损伤的作用及机制研究雷文静;陆菲;米文娟;查定军【摘要】目的观察银杏叶提取物对顺铂诱导小鼠耳蜗毛细胞(HEI-OC1)中AMPK 及SIRT1蛋白表达水平的影响,探讨银杏叶提取物抗损伤和凋亡作用的机制.方法取对数生长期的HEI-OC1细胞,添加高糖DMEM培养基调整细胞密度到1×104/ml,将其加入6孔板中,每孔2 ml.将HEI-OC1细胞分为对照组、顺铂组、顺铂+银杏叶组,对照组HEI-OC1细胞仅采用DMEM培养基培养,顺铂组细胞中加入8μg/ml 顺铂进行干预24小时,顺铂+银杏叶组预先给予HEI OC1细胞加入50 μg/ml银杏叶提取物作用24小时,再给予含有8μg/mL顺铂的DMEM培养基作用24小时;采用CCK-8试剂盒检测各组培养24、48、72和96 h时的增殖情况;采用Western blot检测三组细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、BCL-2和Bax以及AMPK和SIRT1表达;采用流式细胞术检测三组细胞不同干预后的凋亡情况.结果CCK-8结果显示,与对照组相比,顺铂组和顺铂+银杏叶提取物组HEI-OC1细胞的增殖能力均明显下降,在各个时间点均低于对照组(P＜0.05),而顺铂+银杏叶组的HEI-OC1细胞增殖能力在48、72和96 h时均显著高于顺铂组(均为P＜0.05),且在第72 h和96 h与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞术检测显示对照组细胞凋亡率为2.3％±0.2％,显著低于顺铂组(26.8％±4.3％)及顺铂+银杏叶组(7.2％±1.5％)(P＜0.05).顺铂+银杏叶组HEI-OC1细胞的Bax及Caspase-3蛋白表达水平较顺铂组显著下降,而AMPK、SIRT1及Bcl-2蛋白表达水平较顺铂组显著升高.结论银杏叶提取物能够通过AMPK/SIRT1信号通路途径抑制顺铂诱导的HEI OC1细胞的损伤与凋亡.【期刊名称】《听力学及言语疾病杂志》【年(卷),期】2019(027)005【总页数】5页(P519-523)【关键词】银杏叶提取物;顺铂;耳蜗毛细胞;凋亡【作者】雷文静;陆菲;米文娟;查定军【作者单位】空军军医大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科西安710032;空军军医大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科西安710032;空军军医大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科西安710032;空军军医大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科西安710032【正文语种】中文【中图分类】R764.5顺铂是临床常用抗肿瘤的一线化疗药物，但其具有耳毒性，它能够引起螺旋神经节的退变，导致内耳毛细胞的广泛损伤[1]。
L-NAME对顺铂耳毒性影响的实验研究
L-NAME对顺铂耳毒性影响的实验研究刘砚星;路虹【期刊名称】《耳鼻咽喉：头颈外科》【年(卷),期】2002(9)1【摘要】目的：本研究旨在通过建立顺铂内耳中毒的动物模型，探索一氧化氮合酶（ＮＯＳ）在顺铂的耳毒性机制中的影响，为临床预防和治疗顺铂的耳毒性提供理论依据。
方法：将豚鼠随机分成三组。
对照组给予生理盐水；试验组给予顺铂；拮抗组预先给予Ｎ－硝基－Ｌ－甲基－精氨酸（Ｌ－ＮＡＭＥ）后再给顺铂。
对耳蜗的ｉＮＯＳ的活性进行免疫组化的研究，对Ｌ－ＮＡＭＥ对顺铂的耳蜗损害所起的作用进行扫描电镜观察。
结果：光镜下，对照组螺旋器的结构正常，呈ｉＮＯＳ阴性染色；试验组的内、外毛细胞明显变性，呈ｉＮＯＳ阳性染色。
扫描电镜下，对照组内、外毛细胞的纤毛排列整齐；试验组的绝大部分内、外毛细胞的纤毛散乱，倒伏，甚至消失；拮抗组的大多数内、外毛细胞的纤毛排列整齐，少数可见纤毛融合或消失。
结论：一氧化氮（ＮＯ）在顺铂的内耳毒性作用机制中发挥着重要的作用，应用ＮＯＳ的拮抗剂可以减轻其内耳毒性。
【总页数】4页(P50-53)【关键词】氧化氮类;精氨酸类;顺铂;毒理学;豚鼠;实验【作者】刘砚星;路虹【作者单位】石家庄河北医科大学附属第二医院耳鼻咽喉科【正文语种】中文【中图分类】R987【相关文献】1.连翘酯苷对顺铂耳毒性防护作用的实验研究 [J], 黄世勇;陶泽璋;肖伯奎2.黄芪对顺铂耳毒性保护作用的实验研究 [J], 田颖;于刚;姜学钧3.DPOAE监测一次性大剂量顺铂致豚鼠耳毒性的实验研究 [J], 费文彬;丁海峰;刘维荣;马晶;朱永红;左金山4.川芎嗪预防顺铂耳毒性效果的实验研究 [J], 韩明;吴艳;孙宪昌;刘儒林5.川芎嗪对顺铂耳毒性保护作用的实验研究 [J], 孙宪昌;张文娟;康颂建因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
卡铂引起的毛细胞四种酶的活性改变
卡铂引起的毛细胞四种酶的活性改变丁大连;郑向阳;王坚;孙伟;孙虹;RichardJ.Salvi【期刊名称】《听力学及言语疾病杂志》【年(卷),期】1999(7)4【摘要】目的探讨卡铂的耳毒性机理。
方法８只灰鼠中５只按１００ｍｇ／ｋｇ腹腔注射卡铂，３只作正常对照，注药后４８小时处死。
对分离的耳蜗基底膜进行了不同的细胞化学染色，反应结果在透射电镜下观察。
结果与对照耳相比，卡铂组的内毛细胞显示钙离子激活的ＡＴＰ酶活性增强，而钠钾离子激活的ＡＴＰ酶、碱性磷酸酶和葡萄糖－６－磷酸酶的活性降低；外毛细胞则显示钙离子激活的ＡＴＰ酶和碱性磷酸酶的活性增强，葡萄糖－６－磷酸酶的活性降低，而钠钾离子激活的ＡＴＰ酶无明显改变。
【总页数】3页(P200-202)【关键词】酶细胞化学;卡铂;内耳;耳毒性【作者】丁大连;郑向阳;王坚;孙伟;孙虹;RichardJ.Salvi【作者单位】美国纽约州立大学耳聋及听力学研究中心【正文语种】中文【中图分类】R979.1;R764.02【相关文献】1.1,6-二磷酸果糖对阿霉素引起大鼠心肌细胞内游离钙和肌浆网Ca2+-ATP酶活性改变的影响 [J], 蔡巍;陈珊2.灰鼠耳蜗毛细胞脱氢酶活性在卡铂耳中毒中的早期变化 [J], 丁大连;王坚3.N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V表达下调可通过GLUT1的糖基化改变和活性下降引起人肝癌SMMC-7721细胞内质网应激 [J], 方芳;张力;王琼;李姣;申宗侯4.克山病病区粮喂养大鼠红细胞NADH—高铁血红蛋白还原酶活性改变以及硒、维生素E、B_1对其活性的影响 [J], 王光武;康德仁;杨青;王凡5.卡铂诱导卵巢癌细胞凋亡与端粒酶活性、hTERT基因表达改变的关系 [J], 孙蓬明;宋一一;林超琴;J Sehouli因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
NLRX1基因在调控顺铂耳毒性中的机制研究第一部分NLRX1调控顺铂耳毒性与ROS/JNK信号关系的研究Study on the relatiohship of NLRX1 and ROS/JNK Signaling in Regulating
Cisplatin-induced Ototoxity目的:顺铂是常用于癌症治疗的有效化疗药物,但由于其严重的耳毒性而限于使用,目前认为活性氧(ROS),线粒体损伤,细胞凋亡和炎症损伤参与顺铂耳毒性的发病机理,但确切机制尚不明了。
含核苷酸结合结构域和富亮氨酸重复序列的蛋白家族成员X1(NLRX1)位于细胞线粒体,可识别胞浆模式识别受体,与ROS产生、线粒体功能、细胞凋亡以及炎症反应密切相关。
本研究旨在探索NLRX1在顺铂耳毒性中是否存在调控作用及其调控机制,为阐明顺铂耳毒性机制和预防顺铂耳毒性的发生提供新思路和理论基础。
方法:(1)通过免疫荧光,实时荧光定量聚合酶联反应(qRT-PCR)及Western-blot方法检测NLRX1在HEI-OC1听细胞系内的定位及表达。
(2)TT法结合TUNEL、流式细胞术检测顺铂对HEI-OC1细胞活力的影响以及细胞凋亡变化。
(3)qRT-PCR及Western-blot方法检测顺铂刺激下NLRX1在
HEI-OC1细胞中的表达变化,免疫荧光检测顺铂刺激下ROS产生水平。
(4)通过细胞转染技术构建NLRX1过表达及NLRX1沉默细胞,通过小鼠内耳基底膜原代培养建立小鼠顺铂内耳损伤的体外模型。
(5)利用流式细胞术检测顺铂在NLRX1沉默及其过表达的细胞中诱导的细胞凋亡情况,Western-blot技术检测NLRX1沉默及其过表达细胞中顺铂诱导的凋亡相关因子 cleaved caspase3,bax 及bcl-2的表达变化,评估线粒体凋亡信号。
(6)利用流式细胞术检测NLRX1沉默及其过表达细胞中顺铂诱导的ROS产生水平,Western-blot技术检测NLRX1沉默及其过表达细胞中顺铂刺激对JNK磷酸
化水平的影响,检测JNK信号激活情况。
(7)阻滞ROS/JNK信号,Western-blot检测NLRX1过表达细胞中顺铂诱导的线粒体凋亡相关因子cleaved caspase3,bax
及bcl-2的表达变化。
(8)通过免疫荧光及Western-blot技术检测顺铂刺激下耳蜗基底膜中NLRX1、ROS/JNK及凋亡信号变化。
结果:(1)NLRX1在HEI-OC1细胞中的表达:NLRX1在HEI-OC1细胞中呈点状表达,并且与线粒体标记物Mitotraker共染,表明NLRX1
表达于HEI-OC1细胞线粒体。
(2)顺铂诱导HEI-OC1细胞凋亡及细胞损伤:随着顺铂作用浓度以及时间的
增加,HEI-OC1的细胞活力逐渐下降,并呈现出时间和浓度依赖性的特点,顺铂可
以通过诱导HEI-OC1细胞凋亡引起细胞死亡。
(3)顺铂促进HEI-OC1细胞NLRX1
表达和ROS产生:在顺铂刺激下,NLRX1表达升高,并在24小时达到峰值,ROS随着顺铂作用时间延长而升高并于24小时达到峰值。
(4)NLRX1增加顺铂诱导的HEI-OC1细胞凋亡:NLRX1通过影响cleaved caspase3,bax及bcl-2凋亡相关因子表达激活线粒体途径细胞凋亡。
(5)NLRX1
沉默下调顺铂引起的的ROS产生及JNK信号激活,NLRX1过表达上调顺铂引起的
的ROS产生及JNK信号激活。
(6)NLRX1促进顺铂诱导的细胞凋亡与ROS/JNK信号通路活化有关:抑制ROS 过量生成或者JNK信号激活,显著减弱了 NLRX1引起的线粒体途径细胞凋亡。
(7)顺铂刺激下小鼠耳蜗基底膜毛细胞明显损伤,NLRX1表达增加、ROS/JNK信号及线粒体途径细胞凋亡信号激活。
结论:首次在HEI-OC1听细胞揭示了 NLRX1通过激活ROS/JNK信号启动内源性细胞凋亡途径,增加顺铂对内耳听细胞的毒性作用,阐明了 NLRX1在顺铂耳毒
性发生机制中的调控作用。
第二部分NLRX1介导的自噬在顺铂致耳毒性中的作用机制研究Study on the mechanism underlying the action of NLRX1-mediated autophagy in cisplatin-induced Ototoxity目的:NLRX1与活性氧产生、线粒体功能、自噬反应密切相关。
本研究旨在探索NLRX1介导的自噬在顺铂耳毒性中的作用机制,为阐明顺铂耳毒性机制和预防顺铂耳毒性的发生提供新思路。
方法:(1)通过免疫荧光、Western-blot检测不同剂量顺铂处理组HEI-OC1细胞中NLRX1、LC3-Ⅱ的表达变化。
(2)利用MTT方法检测不同剂量顺铂处理的HEI-OC1细胞活力。
(3)利用透射电子显微镜技术(TEM)检测不同处理组HEI-OC1细胞超微结构变化,自噬小体形成状况。
(4)利用质粒转染法构建NLRX1过表达HEI-OC1细胞,western-blot检测NLRX1及LC3-Ⅱ表达,透射电镜观察NLRX1表达组及转染对照组细胞内自噬小体形成情况。
(5)免疫荧光及western-blot检测NLRX1沉默组(siRNA-nlrxl)及转染对照组(SC)HEI-OC1细胞在顺铂处理后NLRX1、LC3-Ⅱ的表达变化,MTT方法检测相应不同处理组的细胞活力。
(6)免疫荧光及western-blot检测NLRX1过表达组(nlrxl-KI)及转染对照组(vector-control)HEI-OC1细胞在顺铂处理后NLRX1、LC3-Ⅱ的表达变化,MTT方法检测相应不同处理组的细胞活力。
(7)透射电镜观察NLRX1过表达组及转染对照组细胞线粒体形态及数量变化,免疫荧光及流式细胞术检测不同转染组在顺铂刺激下线粒体ROS水平。
(8)抑制ROS产生或者自噬,检测顺铂处理后自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及凋亡相
关因子cleaved-caspase3变化趋势。
(9)利用免疫荧光及western-blot等技术在不同处理的体外培养的小鼠耳蜗基底膜检测NLRX1表达,ROS水平,自噬活性及cleaved caspase3表达情况。
结果(1)顺铂促进HEI-OC1细胞LC3-Ⅱ及NLRX1表达:顺铂促进LC3-Ⅱ表达并呈现浓度依赖性特点,与NLRX1表达成正相关关系,与细胞活力成负相关关系。
(2)NLRX1促进HEI-OC1细胞自噬小体聚集:免疫荧光及透射电镜结果显示NLRX1过表达促进HEI-OC1细胞中自噬小体聚集。
(3)NLRX1对顺铂诱导HEI-OC1细胞自噬和细胞毒性的作用:NLRX1沉默减弱顺铂诱导的自噬小体聚集及细胞毒性,NLRX1过表达促进顺铂诱导的自噬小体聚
集及加剧顺铂细胞毒性。
(4)NLRX1过度表达改变线粒体形态,并促进顺铂诱导的细胞内ROS的产生:NLRX1过表达导致线粒体肿胀,线粒体嵴减少及断裂,增加顺
铂诱导的ROS产生。
(5)抑制ROS可以明显减弱顺铂诱导的HEI-OC1细胞自噬和凋亡,减轻顺铂诱导的细胞毒性。
(6)顺铂促进体外培养耳蜗基底膜中NLRX1表达及ROS产生,抑制ROS减轻顺铂引起的听细胞损伤。
(7)抑制ROS明显减弱顺怕处理的基底膜中的细胞自噬和细胞凋广。
结论:
本研究表明NLRX1活性的增强促进HEI-OC1细胞自噬发生,导致线粒体异常并促进顺铂诱导的ROS生成,NLRX1介导的自噬可能通过促进顺铂引起自噬性死亡加
剧耳毒性,本研究为拓宽我们对药物引起的毒性机制的认识提供了新的理论基础。