猪链球菌2型检验程序-中国疾病预防控制中心
DB11T 828.1-2011 实验用小型猪 第1部分：微生物学等级及监测
ICS65.020.30B 44备案号：DB11 北京市地方标准DB11/T 828.1—2011实验用小型猪第1部分：微生物学等级及监测Experimental minipigPart 1：Microbiological standards and surveillance2011-11-10发布2012-03-01实施目次前言 (II)1 范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 术语和定义 (2)4 微生物学等级分类 (2)5 检测要求 (2)6 检测程序 (3)7 检测方法 (4)8 检测规则 (5)9 结果判定 (6)10 判定结论 (6)附录A（资料性附录）猪圆环病毒2型ELISA抗体检测 (7)前言DB11/T 828的本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
DB11/T 828《实验用小型猪》分为六个部分：——第1部分：微生物学等级及监测；——第2部分：寄生虫学等级及监测；——第3部分：遗传质量控制；——第4部分：病理学诊断规范；——第5部分：配合饲料；——第6部分：环境及设施。
本部分为DB11/T 828的第1部分。
本部分由北京市科学技术委员会提出并归口。
本部分由北京市科学技术委员会组织实施。
本部分起草单位：中国食品药品检定研究院、中国动物疫病预防控制中心、中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心、北京实验动物研究中心。
本部分主要起草人：贺争鸣、田克恭、范薇、巩薇、遇秀玲、付瑞、卢胜明。
实验用小型猪第1部分：微生物学等级及监测1 范围DB11/T 828的本部分规定了实验用小型猪微生物学等级分类、检测要求、检测程序、检测方法、检测规则、结果判定、判定结论等。
本部分适用于实验用小型猪微生物学等级监测。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
(完整版)猪链球菌的检测和鉴定技术
ATCC43765
+ + + + + + + + + + 4641427 （92%）
HA9801
+ + + + + + + + + + + 4651427 (80%)
ATCC35246
+ + + + + + + + + 0461607 (99.9%)
32210 化脓链球菌
0161415 (99.9%)
读数仪
比浊仪 电子加样枪
计算机 打印机
19
试条组成
试条种类：
24h常规鉴定试条
Ref.32400，ID32 E Ref.32100，ID32 GN Ref.32500，ID32 Staph Ref.32200，ID32 C
4h快速鉴定试条
Ref.32700，rapid ID32 E Ref.32300，rapid ID32 A Ref.32600，rapid ID32 Strep
粪肠球菌
7143711 （98.7%）
猪链球菌的API鉴定结果
TRE（海藻糖）、RAF（棉子糖）等几个的试验与API 菌种库有些不符，但 都属于SS2型或1型，数值分类
相对于双歧分类的优点
ATCC43765
HA9801
ATCC35246
32210 化脓链球菌
粪肠球菌
编码 4641427（92%） 4651427(80%) 0461607(99.9%)0161415(99.9%)7143711（98.7%）
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施猪链球菌病是由猪链球菌（Streptococcus suis）引起的一种传染性疾病。
以下是关于猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施的详细介绍。
一、实验室鉴定：1. 细菌培养鉴定：猪链球菌可以在一般的细菌培养基上生长，常采用含有5%酒精血琼脂、牛血琼脂、肉汤琼脂等不同培养基进行培养。
猪链球菌在琼脂培养基上形成圆形、凹陷的菌落。
2. 生化试验：进行一系列的生化试验可进一步鉴定猪链球菌。
常用的试验包括溶血试验、半乳糖发酵试验、气体生成试验等。
3. 血清学鉴定：可通过对猪链球菌进行抗原性鉴定，如凝集试验、血清型试验等。
4. 分子生物学鉴定：使用PCR法对猪链球菌进行检测和鉴定，可以准确快速地确定猪链球菌的存在。
二、防治措施：1. 提供良好的饲养环境：猪链球菌易在拥挤、肮脏的环境中传播，因此要注意保持猪舍的通风、干燥、清洁，定期清理粪便和消毒。
2. 加强疫苗免疫：猪链球菌病的疫苗接种是有效控制传染的重要手段。
可采用灭活疫苗或活减疫苗进行预防，并按照兽医的指导进行接种。
3. 合理用药：猪链球菌病的治疗可使用青霉素、头孢菌素等抗生素，但需要按照兽医的指导进行用药，避免滥用和药物残留。
4. 引起猪链球菌病的猪只需要隔离和治疗，防止疫情扩散。
5. 食品安全措施：猪链球菌能引起人畜共患感染，因此对于猪链球菌病疫区的猪肉和猪产品，要进行严格的检验和处理，确保食品安全。
6. 定期检测和监测：定期监测猪群的健康状况，及时发现并处理患病猪只，以避免疫情扩散。
7. 做好个人防护：与猪接触的人员要做好个人防护，使用口罩、手套等防护用具，以避免感染。
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施对于预防和控制疾病的传播非常重要。
及时发现和治疗疫情，加强饲养管理和个人防护，有助于减少猪链球菌病的发生和传播，保障农业生产和食品安全。
猪链球菌病的屠宰检疫与防治措施
452023.11猪链球菌病的屠宰检疫与防治措施田 芬，彭郁霖*，李晓林（贵州省六盘水市动物疫病预防控制中心，贵州 六盘水 553000）猪链球菌病是由猪链球菌引起的一种急性、败血性人畜共患接触性传染病。
病猪和带菌猪是主要传染源，其次是羊、马、鸭、鸡等，主要经呼吸道、受损的皮肤及黏膜感染，一年四季均可发生。
人群普遍易感，食用病、死猪肉及被病原污染的肉类产品也可发病。
人感染后通常表现为发热、头痛，皮肤有出血点、瘀点、瘀斑。
有的患者会出现恶心、呕吐、腹泻等症状。
重者血压下降，脉压缩小，很快休克，如果诊治不及时，病死率较高，或留后遗症。
加强猪链球菌病屠宰检疫尤为重要，是保证居民的饮食安全以及肉类供应质量的重要保障。
1 宰前检疫宰前检疫检验是保证肉品安全检查的重要环节，既要查证验物，做好动物疫病的检查工作，还要检查动物有无外伤、中毒或其他普通病以及是否有瘦肉精等违禁药物残留，以此判定生猪是否健康可食以及是否适合屠宰。
1.1 败血症型勇疫链球菌、猪链球菌等多种病原均会导致败血症型病的发生，急性病例死亡率极高，且病程短，多数在发病当天或次日即会导致猪只死亡。
主要表现为血液凝固不良，胸、腹下和四肢皮肤有紫斑或出血斑；吻突、喉头及气管黏膜充血；全身淋巴结肿胀；心包积液，心冠沟和右心室内膜有出血点；肺充血肿胀；肝脏边缘钝厚，质地硬；脾脏明显肿大，出血、呈现暗红色；肾脏肿大且有血液渗出；胃、小肠黏膜、脑膜亦会出现不同程度的血液性病变；脑组织切面有点状出血；食欲衰退或废绝；体温升高至40～42℃，一般1～3天后死亡。
1.2 脑膜炎型病初体温升高至40.5～42.5℃，不食，便秘，继而出现神经症状，如转圈，空嚼、磨牙、仰卧，继而影响运动，多利用前肢运动，部分病猪关节肿大，局部皮下水肿，30～36小时后死亡。
1.3 淋巴结脓肿型 主要由E群链球菌引起，多见于颌下淋巴结发生脓肿，并伴有全身症状。
脓肿可破溃、流脓、结疤而愈，病程3～5周。
猪链球菌病预防工作方案（3篇）
猪链球菌病预防工作方案近期，___省资阳、内江等地区发生由猪链球菌引起的人感染猪链球菌病疫情。
猪链球菌病是一种人畜共患的急性传染病，由c、d、e 及l群链球菌引起的多种疾病的总称，属于二类动物疫病。
链球菌分布广泛，常存在于健康的哺乳动物和人体内，在动物机体抵抗力降低和外部环境发生变化的诱导下，会引起动物和人发病。
猪链球菌可以通过伤口、消化道等途径传染给人。
根据___部___《___加强人感染猪链球菌病预防控制工作的紧急__》（卫发电___号）、___市卫生局《___加强对人感染猪链球菌病防治工作___》（沪卫疾控___号）文件精神，为加强我区人感染猪链球菌病预防控制工作，保障人民群众身体健康，特制订本工作预案。
一、临床症状本病潜伏期短，平均常见潜伏期2～___天，最短可数小时，最长___天。
病人感染后起病急，临床表现为畏寒、发热、头痛、头昏、全身不适、乏力、腹痛、腹泻。
外周血白细胞计数升高，中性粒细胞比例升高，严重患者发病初期白细胞可以降低或正常。
重症病例迅速进展为中毒性休克综合征，出现皮肤出血点、瘀点、瘀斑，血压下降，脉压差缩小。
可表现出凝血功能障碍、肾功能不全、肝功能不全、急性呼吸窘迫综合征、软___坏死、筋膜炎等。
少数病例在中毒性休克综合征基础上，出现化脓性脑膜炎表现。
部分病例表现为脑膜炎，恶心、呕吐（可能为喷射性呕吐），重者可出现昏迷。
脑膜刺激征阳性，脑脊液呈化脓性改变。
皮肤没有出血点、淤点、淤斑，无休克表现。
二、疫情监测（一）信息收集区疾控中心要加强信息收集工作，及时了解国内外人感染猪链球菌病疫情动态（范本），同时加强与农委、畜牧兽医部门的信息沟通，了解家畜感染猪链球菌病疫情，为预警和决策提供依据。
（二）病例监测各医疗机构的感染性疾病科、内科、儿科、急诊科等相关科室在诊疗过程中发现畏寒、高热、伴有头痛、头昏、全身不适、乏力、腹痛、腹泻、昏迷等全身中毒症状患者，应按照《人-猪链球菌病诊断标准（参考标准）》做好甄别、诊断工作，应重点询问病人发病前___天内是否有与病死猪（羊）接触史，如宰杀、洗切、销售等流行病学史。
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施
猪链球菌病的实验室鉴定及防治措施
猪链球菌病是由猪链球菌引起的一种疾病，其临床症状包括发热、关节炎、瘀斑、皮疹等。
为了及时发现和鉴定猪链球菌病，可采取以下实验室鉴定方法：
1. 细菌培养：从患猪的淋巴结、关节滑膜或瘀点皮肤等部位采集样本，接种于营养琼脂平板上，进行革兰氏染色，观察菌形、结构和分布等特征。
2. 生化试验：可用青霉素酶试验、氧化-发酵试验等检测菌的代谢特征，以确认其为猪链球菌。
3. 血清学检测：采集血清样本，通过血球凝集试验、乳凝试验或ELISA等方法检测抗猪链球菌抗体水平，以判断感染情况。
4. 分子生物学检测：利用PCR技术或实时荧光PCR技术，检测样本中是否存在猪链球菌的DNA，从而确诊病原体。
对于猪链球菌病的防治措施，可以采取以下措施：
1. 提高猪舍卫生：保持猪舍的清洁，定期清理猪舍内的污物，避免粪便、尿液和呕吐物等积聚，减少病原菌的传播。
2. 严格隔离：在发现猪链球菌感染的猪时，需要立即将其隔离，并密切观察其他猪的健康状况，以防止疫情扩散。
3. 注重饲养管理：加强对猪的饲养管理，提高猪的免疫力，确保其身体健康。
合理饲喂猪只，保持饮水清洁，并定期进行疫苗接种等。
4. 使用抗生素：对于已经感染猪链球菌的猪只，可以使用适当的抗生素进行治疗，以缓解症状并减少病原菌的数量。
5. 加强疫苗接种：对于猪链球菌病的疫苗，可根据兽医的建议进行接种，以提高猪只对该疾病的免疫力，减少感染的风险。
及时进行实验室鉴定和采取正确的防治措施，可以有效控制猪链球菌病的传播，保障猪只的健康和养殖业的稳定发展。
人感染猪链球菌病应急处理预案
吉安县人感染猪链球菌病应急处理预案人感染猪链球菌病是由猪链球菌（主要是猪链球菌2型）引起一种较重的人畜共患病。
该病主要临床表现为急性起病、高热、伴有头痛等全身中毒症状，重者出现中毒性休克综合征和脑膜刺激征。
为了防止该疫情传入我县，提高我县卫生系统对该病突发疫情的预防、预警反应和应急处理能力，保障广大群众的身体健康与生命安全，维护社会稳定，促进经济发展，制定本预案。
一、总则（一）、目的有效预防和及时控制人感染猪链球菌病突发疫情，规范和指导突发疫情应急处理工作，最大限度地减少突发疫情造成的危害，保障人民身体健康和生命安全。
（二）、工作原则人感染猪链球菌病突发疫情的应急处理工作贯彻预防为主、常备不懈的方针，坚持统一指挥、分级负责、快速反应、依靠科学、依法管理的原则。
（三）、编制依据本预案依据《中华人民共和国传染病防治法》、《突发公共卫生事件应急条例》、《突发公共卫生事件与传染病疫情监测信息报告管理方法》制定。
（四）、适用范围全县卫生系统所有工作人员在我县范围内应对人感染猪链球菌病突发疫情的应急处理工作适用本方案。
二、组织机构与职责（一）、县卫生系统应急组织机构与职责1、应急领导小组县卫生局设立人感染猪链球菌病疫情应急领导小组，统一组织领导疫情的应急处置工作。
2、专家指导组成立人感染猪链球菌病疫情专家指导组，其主要职责是：对人感染猪链球菌病疫情级别的判定及采取的应急措施提出建议，并对应急处置工作进行技术指导，对病人的救治进行技术指导，对应急反应的终止提出意见，对处置成效进行评估。
3、现场处理组现场处理组下设3个专业组，负责指导疫情流行学调查、现场消毒处置及检验检测工作。
其中流行病专业组负责指导全县卫生系统做好疫情监测，指导并参与疫情的流行病学调查，提出并实施现场控制、处理措施；消毒杀虫组负责指导并参与疫情现场消毒处理措施；检验专业组负责指导全县卫生系统进行标本采集、开展病原学或血清学检测，并承担疑难病例的鉴定检测工作。
微生物检验危急值报告程序
微生物检验危急值报告程序
1 目的
对于在血、骨髓、脑脊液等标本中（涂片或培养）发现细菌或真菌，以及发现疑似高致病性病原微生物或国家规定立即上报的法定传染病，第一时间报告给临床医生及医院相关部门，为诊断治疗或隔离防疫赢得时间。
2 适用范围
适用于临床微生物检验的所有血培养、骨髓培养、脑脊液涂片或培养标本，以及可能发现疑似高致病性病原微生物或国家规定立即上报的法定传染病病原体的所有标本。
3 职责
实验室所有经授权工作人员均应执行本程序。
4 程序内容
4.1 微生物检验危急值：
4.1.1 血液、骨髓或脑脊液检出（涂片或培养）病原微生物。
4.1.2 O1群霍乱弧菌、O139群霍乱弧菌、鼠疫杆菌、炭疽杆菌、肠出血大肠埃希菌 O157：H7、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌、猪链球菌、结核杆菌（或抗酸染色阳性）、生殖道淋病奈瑟菌、布鲁菌、脑膜炎奈瑟菌等传染性较强的微生物及其他国家规定立即上报的法定传染病病原体。
4.2 微生物危急值报告方式和处理。
4.2.1 血培养、骨髓培养、脑脊液培养的危急值报告方式按《微生物检验结果》中的分级报告程序进行，电话通知相应临床科室并及时填写《检验科危急值报告登记表》。
4.2.2 脑脊液涂片发现细菌或真菌，应立即审发涂片结果，电话通知临床并及时填写《检验科危急值报告登记表》。
4.2.3 检出 O1 群霍乱弧菌、O139 群霍乱弧菌、鼠疫杆菌、炭疽杆菌、肠出血大肠埃希菌 O157：H7、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌、猪链球菌、结核杆菌（或抗酸染色阳性）、生殖道淋病奈瑟菌、布鲁菌、脑膜炎奈瑟菌等传染性较强的微生
物或国家规定立即上报的法定传染病病原体，按《疑似高致病性病原微生物标本管理程序》处理。
猪链球菌2型的生物学特性检测与分析
猪链球菌2型的生物学特性检测与分析猪链球菌可以引起猪、人及其他动物疾病，是一种产生严重经济损失的病原菌。
猪链球菌在生物学上分型，主要以血清型分类，目前已确定23个血清型。
其中，2型猪链球菌是最常见的病原型，在猪和人中广泛分布。
2型猪链球菌的形态特征是革兰氏阳性球菌，直径在0.5~1.0μm之间，呈二联体或长链状。
它是一种能利用大量碳源的嗜肉性细菌，生长速度较慢，需要富含营养物质的培养基，如Todd-Hewitt培养基或Columbia-血培养基。
它能够利用细胞外基质附着蛋白（FnBP）进行附着，在细胞表面形成胞外聚集体（biofilm），从而增加了其与宿主免疫反应的逃避性。
2型猪链球菌能够产生多种外毒素和组织破坏酶，并在感染过程中形成膿性分泌物，对宿主组织产生直接的损害。
检测2型猪链球菌的方法主要包括传统方法和分子生物学方法。
传统方法主要包括生物化学鉴定和血清学鉴定两种。
生物化学鉴定是基于2型猪链球菌的代谢特征进行，包括商用酶板试剂（API20 STREP系统）、氧化/还原试验等；血清学鉴定是基于2型猪链球菌特异性抗原进行，利用酶联免疫吸附试验、血凝试验等方法进行。
分子生物学方法主要包括PCR技术和DNA测序技术。
PCR技术可以针对2型猪链球菌的特定基因进行扩增，如sodA、ply和cps2J等基因，以实现2型猪链球菌的快速检测和定量分析。
DNA测序技术可以对2型猪链球菌的整个基因组进行测序分析，对其生物学特性进行全面的揭示。
总之，2型猪链球菌是一种常见的病原菌，具有复杂的生物学特性。
传统方法和分子生物学方法可以实现2型猪链球菌的检测和分析，为疫情监测、病原防控和药物研发提供有力支持。
猪链球菌病灭活疫苗(2型,HA9801株)的研制(二)——疫苗免疫效力的研究
盘查数璺 垂科技 ２０ 年 （ ３ 卷） ３ ０８ 第 ３ 第 期
试验研 究 ・ ５・ ４
猪链球菌病灭活疫苗 （ ，Ｈ ９ ０ 株）的研制 （ ） ２型 Ａ ８１ 二 疫 苗免疫效 力 的研究
— —
杨 球 ，游 启有 ， 以体强 ，王 少英 ，林 旭 垫 ，张毓 金 （ 广东永顺生物制药限公司，广东 广州 ５ ５ ） １３６ １
株 ） 肉注 射 仔猪 ， 头 ２ Ｉ ， 疫后 每 ７天抽 血 肌 每 Ｉ 免 ｌ Ｌ
１ ， 离 血 清 ， 定 其 Ｅ ＩＡ抗 体 ， 定 抗 体 消 次 分 测 ＬＳ 制 长 曲线 ， 察 抗 体消 长 规律 ， 图 １２ ３ 观 见 、、 。并于 免
疫 后 ６ 、 ０ １ ０天攻 毒 。 ０ ９ 、２ １７ 不 同免疫剂 量 的免 疫攻 毒保 护试验 及攻 毒时 Ｉ 的血 清 Ｅ Ｉ Ａ抗体 测定 ＬＳ 取 ｌ ８头 仔 猪 ，分 为 ４
／ Ｅ ０ ２ Ｌ 、． ０ ｍ 、． Ｌ １５ Ｌ（ 疫猪 ｍ ） ． ５ ｍ ０ ５ Ｌ １０ ｍ 、． ０ ｍ 免
分 别 以 Ｈ９ ０ 株 及 Ｓ 一 Ａ８１ Ｃ ６株 制 备 的疫 苗 （ 头份 每
含 菌数 为 ２ 个 ）， ０亿 以常规 剂量 免 疫广 东 土猪 Ｌ ，
２ 天后 同时 以 Ｈ ９ ０ 株 及 Ｓ 一 ｌ Ａ８１ Ｃ ６株 攻击 ， 以测 定 两株 菌 间的免 疫交 叉情 况 。
关键词：猪链球菌病 ２ 型：疫苗效力 中图 分 类 号 ：￥ ５ ． １ ８ ２ ６ １ 文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１０ — ５ ７ ２ ０ ） ３ ０ ４ — ３ ０ ５ ８ ６ （０８ ０ — ０ ５ ０
１ 材 料 和 方 法
养猪：猪链球菌 ( porcine streptococcus )病的预防与治疗
猪链球菌（porcine streptococcus）病的预防与治疗来源：农帮网作者：谭文盛视频大全尽在农帮网一、概念猪链球菌病是由多种不同群的致病性链球菌引起的一种人畜共患的急性、热性传染病。
是一种多型性疾病，主要表现为急性出血性败血症、心内膜炎、脑膜炎、关节炎、哺乳仔猪下痢和孕猪流产等。
二、病原链球菌(stroptococcus)属于G+球菌,种类很多，现已分离出35个菌株，分为32个荚膜型，其中9—14亚型可引起仔猪发病。
生物学性状:（一）形态染色球形或卵圆形，直径0.6～1.0um，呈链状排列，短者4～8个细菌组成，长者有20～30个细菌组成。
幼龄培养物大多可见到透明质酸形成的荚膜。
无芽胞，无鞭毛，革兰氏染色阳性。
（但在陈旧培养基或脓液标本中常呈阴性）（二）培养特性需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。
营养要求较高，普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。
最适温度37℃，最适PH7.4～7.6，血琼脂平板上形成灰白、光滑、圆形突起小菌落，不同菌株有不同溶血现象。
(三)、生化反应能发醇简单的糖类，产酸不产气。
一般不分解菊糖，不被胆汗或1%去氧胆酸钠所溶解。
这两种特性用来鉴定甲型溶血型链球菌和肺炎球菌。
（四）抗原结构主要有三种：1．核蛋白抗原:或称P抗原，无特异性，各种链球菌均同，与葡萄球菌有交叉。
2．群特异性抗原：多糖抗原或称C抗原系统族特异性抗原，是细菌壁的组成成份。
对人致病的90%属于A族，其次为B族，其它族少见。
3．型特异性抗原：蛋白质抗原或称表面抗M、R、T、S等四种不同性制质的抗原组份，具有型特异性。
是链球菌细胞壁的蛋白质抗原，位于C抗原外层，同族链球菌可根据表面抗原不同进行分型，如A族链状菌可据此分为60多型。
（五）分类1．根据对红细胞的溶血能力（1）甲型溶血性链球菌（α-Hemolytic streptococcus）,菌落周围有1～2mm宽的草绿溶血环，称甲型溶血或α溶血。
猪二型链球菌病
多由急性型转变而来，病猪表现为多发性关节炎，关节肿胀、疼痛、跛行，甚至不能站立 ，病程可达数周或数月。
诊断标准及依据
初步诊断
根据流行病学特点、临床症状和病理 变化可做出初步诊断。
实验室诊断
采集病料进行细菌分离培养，鉴定分 离菌的生物学特性，必要时进行动物 接种试验以确诊本病。此外，还可采 用血清学方法进行快速诊断。
相似，需通过细菌学检查和血清学试验等方法进行鉴别。
与猪瘟等病毒性疾病的鉴别
03
猪瘟等病毒性疾病也可引起猪只高热、皮肤发红等症状，需通
过病原学检测和血清学试验等方法进行鉴别诊断。
04
治疗方案及药物选择建议
抗菌药物治疗原则及注意事项
治疗原则
早期、足量、联合、长疗程使用敏感 抗菌药物，以彻底清除病原菌，减少 并发症和病死率。
02
预防措施与控制策略
生物安全防范措施
1 2
严格猪场生物安全管理制度
实施封闭式管理，控制人员和物品的进出，防止 病原体传入。
加强环境消毒
定期对猪舍、用具、环境等进行彻底消毒，杀灭 病原体。
3
实行全进全出饲养制度
避免不同批次、不同日龄的猪混养，减少交叉感 染的机会。
疫苗接种与免疫程序设置
01
02
03
诊断方法与技巧分享
细菌学检查方法介绍
采样与涂片镜检
从病猪的病变部位采集病料，如关节液、脑脊液、心血等， 进行涂片镜检，观察细菌形态和数量。
分离培养与鉴定
将病料接种于适宜的培养基上，如血液琼脂平板、血清肉汤 等，进行细菌分离培养，并通过生化试验、血清学试验等方 法进行鉴定。
血清学诊断技术应用
THANK YOU
猪2型链球菌
石河子部分猪场链球菌2型的分离鉴定与毒力因子检测霍永，李劼，张银国*(新疆石河子大学动物科技学院，石河子市832003)摘要：为了解石河子垦区具有呼吸道病症状的病死猪感染猪链球菌2型的情况，对采集的53份肺脏组织进行了猪链球菌的分离培养、生化鉴定、PCR鉴定以及cps2J、ef、mrp毒力因子的检测。
结果：分离出猪链球菌2型21株；其中株毒力因子为ef，株毒力因子为cps2J/ef结论：关键词：猪链球菌2型；分离鉴定；毒力因子猪链球菌2型(Streptococcus suis,SS2)是一种严重危害养猪业的重要病原之一，能引起猪的关节炎、脑膜炎、胸膜肺炎、败血症、脓肿等，并且猪链球菌2型能引起人感染发病，是重要人畜共患病病原[1]，从事屠宰或与生猪肉打交道的人易通过伤口感染，引致人脑膜炎、败血症、心内膜炎、并可致死[2]。
为了解石河子垦区具有呼吸道病症状的病死猪感染猪链球菌2型的情况，对采集的55份肺脏样品进行了猪链球菌2型的分离鉴定与药敏试验，以期为垦区预防和控制该病的流行提供重要依据。
1材料与方法1.1材料1.1.1病料于12个猪场无菌采集具有明显呼吸道病症状的病死猪肺脏组织，共75份。
1.1.2主要试剂及仪器含5%血清的Todd-Hewitt肉汤(THB)，含5%血清的选择性THB，普通琼脂绵羊血平板，选择性普通琼脂绵羊血平板；药敏纸片由本实验室自制；小白鼠由石河子大学实验动物中心提供。
2×Taq PCR MasterMix（北京诺维森生物科技有限公司），定量Marker1、Marker2000(广东东盛生物科技有限公司)，PCR扩增仪、电泳仪、凝胶成像系统均为Bio-Rad公司产品。
1.3.3引物合成猪链球菌2型荚膜多糖基因(cps2J)、溶菌酶释放蛋白基因(mrp)、胞外因子(ef)的引物参照文献[4]由上海生工生物工程有限公司合成。
详见表1：表1 PCR引物、退火温度及目的片段大小目的基因引物序列退火温度/时间产物大小ef P1 5'-ACA AAG GCG TAG GTT CAA TC-3'55℃/30s 269bp P2 5'-CGG CAT CAA GAA TGT CTT TG-3'cps2J P1 5'-GTT GAG TCC TTA TAC ACC TGT T-3' 55℃/30s 450bp P2 5'-CAG AAA ATT CAT ATT GTC CAC C-3'mrp P1 5'-GGTATACCT TGC TGG TAC CGT TC-3' 60℃/30s 532bp P2 5'-AGT CTC TAC AGC TGT AGC TGG-3'1.1.3PCR阳性对照××疫苗。
猪链球菌II型检验方法pdf
ＩＩ型猪链球菌检测方法介绍 自1968年国际上首次报道猪2型链球菌引起人类严重感染病例后，至1989年，国外共报告了108例猪2型链球菌所致人类感染的病例，1994年、1997年及1999年国外又相继有该菌引致人类严重感染及死亡病例的报道。
我国1990年在广东省首次发现猪群中有类似II型链球菌病，但未见人间感染发病。
1998年~1999年，在江苏省和浙江省部分县(市)，先后两次爆发了猪急性败血症。
共有上万头猪发病，同时还传染给从业人员几十人，发生脑膜炎、关节炎及中毒性出血性休克征病例，病人出现多脏器功能损害，并先后从病人和病猪中分离出猪链球菌菌株，经鉴定为猪II型链球菌，人源株与猪源株为同源性。
2005年6月下旬，四川省资阳、内江等地区有近80例患者急性发病，出现中毒性休克、DIC、脑膜炎，有12例重症患者死亡，经鉴定为猪II型链球菌感染。
目前，该菌已成为我国当前引起人兽共患病的一种重要的新病原菌。
猪链球菌归类于链球菌属，菌体呈卵圆形，短链状排列，革兰染色阳性，兼性厌氧，在羊血平板上呈α溶血，部分在马血平板上呈β溶血，菌落细小。
引起人和猪发病的猪链球菌以Lancefield血清群R群血清型2型为主，溶菌酶释放蛋白（MRP）和细胞外蛋白因子（EF）是两种重要的毒力因子。
猪链球菌病是一种人畜共患的急性、热性传染病。
人与病猪密切接触或食用未煮熟的病猪肉制品时猪链球菌可通过人体伤口、消化道等途径传染给人，出现脑膜炎、关节炎、持久性听力缺失，严重者可导致中毒休克综合征并引起死亡。
早期临床诊断疑为：炭疽病、流行性出血热、钩体病、链球菌引起的猪肺疫及O157:H7出血性大肠杆菌等细菌性病原体引起的疾病。
因此病原体的分离和鉴定对疾病的确诊、预防和控制十分重要，本文简单介绍猪链球菌II型的检验程序。
一、病原分离1、可采集病人的血，腹水，脑脊液或者是尸检标本；病、死猪的肝脏、脾脏、腹水、心血，4℃保存。
2、制作肝脏、脾脏的触片，或用腹水、血液、脑脊液涂片，火焰固定后进行革兰染色，油镜下观察是否有成对或短链状革兰阳性球菌。
人感染猪链球菌病
背景知识（一）
链球菌(Streptococcus)是化脓性球菌的另一类常见 的细菌，广泛存在于自然界和人及动物粪便和健康人 鼻咽部，引起各种化脓性炎症，猩红热，丹毒，新生 儿败血症，脑膜炎，产褥热以及链球菌变态反应性疾 病等。本菌具有一种特异性的多糖类抗原，又称为C抗 原。用温热稀盐酸浸出的这种抗原与特异性抗血清作 沉淀反应，可将溶血性链球菌进行血清学分类。按兰 氏分类，目前确定的血清群有从A至V共20个群（其中 缺I、J群）。每个群结合生化和培养特性又分为若干型 或亚型。
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（一）预防措施
1．健康教育：通过宣传教育使生猪宰杀和加工人员认识 到接触病、死猪的危害，并要求其做好自身防护；提 高养猪户、屠夫、小刀手识别猪病和病猪肉的能力。 要求养猪户主动报告病猪疫情，死猪应就地深埋或焚 烧，禁止抛入河、沟、塘等水体。群众不要购买及食 用病、死猪肉。
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②诊断标准 应综合病例的流行病学史、临床表现和实验室
检测结果，缺乏其它明确病因的进行诊断。 ➢ 疑似病例：A＋B.1＋B.4 ➢ 临床诊断病例：A＋B.2，或A＋B.3 ➢ 实验室确诊病例：疑似病例或临床诊断病例中具备
C者。
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3. 临床分型 3.1 普通型
起病较急，临床表现为畏寒、发热、头痛、头昏、全 身不适、乏力、腹痛、腹泻，无休克、昏迷。外周血 白细胞计数升高，中性粒细胞比例升高。 3.2 休克型
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2. 流行病学特征 ➢ 本病潜伏期短，平均常见潜伏期2～3天，最短可数小
时，最长7天 ➢ 传染源：病、死的猪（羊） ➢ 传播途径：通过接触感染的猪和猪肉制品经破损皮肤
等感染人体
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➢ 易感人群：多发生在屠夫、养殖场工人、生肉加工和 销售人员，也有盗猎野猪者发病的报道。
实验操作指南
实验操作指南一、亚洲I型口蹄疫抗体检测液相阻断ELISA（LB-ELISA）试验液相阻断ELISA主要用于检测抗体。
应用于两个方面的目的：⑴检测FMD病毒感染，广泛用于国际贸易中；⑵监测免疫抗体，评价FMD疫苗免疫效力，也就是疫苗免疫动物的抗强毒攻击能力。
1、反应原理预先滴定好的固定量病毒抗原与被检血清首先在液相中反应，然后将抗原抗体复合物转移到包被了FMD型特异性抗体的ELISA板中，没有完全被血清抗体阻断的病毒抗原被ELISA板中的抗体捕获，亦与随后加入的豚鼠搞血清中的抗体结合，再通过兔抗豚鼠IgG酶结合物和底物溶液显色。
按试验孔呈现的颜色与抗原对照（未加血清）孔呈现颜色相比较判定结果。
抗体滴定以能阻断50%病毒抗原的血清稀释度表示。
2、主要试剂与耗材⑴主要试剂①捕获抗体：口蹄疫146S兔抗血清②检测抗体：口蹄疫病毒146S豚鼠抗血清③酶结合物：兔抗豚鼠IgG-辣根过氧化物酶结合物④病毒抗原及病毒对照抗原：用BEI灭活的病毒细胞培养物⑤标准阳性血清和阴性血清⑥底物溶液：邻苯二胺（OPD）/H2O2溶液（具体配制溶化后，再加2片OPD片剂，充分溶解，分装成5 ml或10 ml/瓶，避光-20度保存。
用前避光溶化，临用时每10 ml上述溶液加100ul配备的3%的双氧水）⑦终止液：1.25mol/LH2SO4⑧缓冲液包被缓冲液：0.05MNa2CO3/NaHCO3，PH9.6稀释液：0.05%（V/V）Tween-20加入0.01MPBS，PH7.4（PBST）豚鼠抗血清稀释液：5%脱脂奶粉-PBST洗涤液：0.01MPBST，PH7.4⑵主要仪器材料①ELISA板：96孔平底聚苯乙烯ELISA板。
②抗原抗体反应板：96孔U形夜工聚丙微量板。
③移液器：0.5-20ul，5-40 ul，50-200 ul，200-2000 ul可调节移液器各一把，8道或12道移液器一把，移液槽5-6个，各配套移液枪尖若干。
三重PCR方法检测猪链球菌2型
菌 率 很 高 ， 均 为 ４ ．％［ 主 要 定 自中国兽 药监 察 所 ． 号 ： ５ ９ ３ 液 １ｍＬ １ ０ ／ ｉ 平 ２６ ５ １ ． 菌 Ｃ ５５ 。 ．２０ ０ｒ ｎ离 心 ３ｍ ｎ ｍ ｉ．
居在 健 康猪 的腭 扁桃 体 。 此 ． 因 给病 该 菌 接 种 于 加 １ ％小 牛 血 清 的 肉 去 掉上清 。用 ２ ０ Ｌ灭 菌双 蒸水 充 ０ 型 ．即 １ 用 不 同 的 菌 株 感 染 小 猪 时 发 现 ． 离 。 ５ —
３ ４型 和 １２型 。对猪 致病 性较 强 的 ＭＲ ＋ Ｅ ＋ ／ Ｐ Ｆ 的菌 株可 以 引起 典 型 的 １２ 方 法 ． 是 １ 、 和 ９型 。猪链 球 菌 ２ 脑炎 、多发性 浆 液炎及 多发 性 关节 １ ． 引 物 按 参 考 文 献 选 择 三 型 ２型 ．１ ２ 型还 可通 过 伤 口感染人 ．致人 败 血 炎 ．而 ＭＲ — Ｅ 一 Ｐ Ｆ 的表 现 型菌 株对 对 引物 ． 为 三重 Ｐ Ｒ检测 猪 链球 作 Ｃ 症 、 膜炎 和心 肌炎 。１９ — ９ ９年 猪 没 有 致 病 力 因此 认 为 ＭＲ 脑 ９ ８ １９ Ｐ和 菌 ２型 的 引 物 。 引物 名 称 分 别 为 ： 夏 季在 我 国江苏 省部 分 地 区爆 发 流 Ｅ Ｆ是 猪 链 球 菌 的两 种 重 要 的 毒 力 ｃ ｓ Ｊ一１ ｃ ｓＪ 一 ｅ ｆ一 、ｐ ２； ｐ２ 、ｐ ２ ２；ｐ １ ｅ ｆ一
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3、 检测溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段 （mrp） 上游引物： ggtatacctt gctggtaccg ttc 下游引物：agtctctaca gctgtagctg g
二、 血清学检测
1．用兰氏分型乳胶凝集链球菌试剂盒进行分群 2．用猪链球菌 1-34 个型血清进行分型 取一滴猪链球菌诊断血清悬滴于载玻片上，与一滴菌悬液充分混合，或 用接种环（牙签也可）刮取单个菌落直接与血清混合，观察是否出现凝 集反应，同时用生理盐水做对照。
三、 生化反应
可用 API 生化鉴定系统的 api-strep 手工鉴定条进行鉴定，该方法可 直接鉴定到种。普通实验室可以重点做 VP ,七叶苷水解试验，6.5%的氯化 钠生长试验，45 度﹑10 度生长试验，胆汁耐受（麦康凯培养基）。结果依 次为阴性，阳性，阴性，阴性，阴性，阴性，可初步认为猪链球菌。可送 交到有条件的单位做进一步鉴定。
猪链球菌 2 型检验程序
病人检样（脑脊液，关节液，血液）
增菌培养 （脑心肉汤）
革兰氏染色 （有 G+成对球菌、短链球菌）
羊血琼脂平板 （37℃，5%CO2，24h）
α溶血
β溶血
γ溶血
PCR 检测
血清学检测
生化鉴定
一、 分离步骤和程序
1．可采集病人的血，腹水，脑脊液或者是尸检标本；病、死猪的肝脏、 脾脏、腹水、心血。4℃保存。
2．制作肝脏、脾脏的触片，或用腹水、血液、脑脊液涂片，火焰固定后 进行革兰氏染色，油镜下观是否有成对或短链状革兰氏阳性球菌。
3．取有成对或短链状革兰氏阳性球菌的标本接种选择增菌培养液（含 15 微克/毫升多粘菌素 B，30 微克/毫升萘啶酮酸的脑心培养基），或 直接划线接种含两种抗生素的羊血琼脂平板培养基，在蜡烛缸或 CO2 培养箱中培养。
4、PCR 反应的条件： 94℃预变性 5 分钟;94℃、30 秒，60℃、30 秒，72℃、30 秒，25 个循环，最
后延伸 72℃、5 分钟。取 5 微升扩增产物在 1.2℅的琼脂糖凝胶中进行电泳。 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 国家传染病预防控制重点实验室 2005 年 7 月 25 日
阿拉伯糖 ARA — 松三糖
melezitose —
核糖 RBS — 马尿酸盐 hippurate —
四、 基因鉴定， 包括使用 PCR 技术和对 PCR 产物进行序列 分析
可挑取分纯的菌落或在选择平板上湿润的可疑菌落，直接进行 PCR 检测。
1、 检测猪链球菌种特异性 16S rRNA。 上游引物：cagtatttaccgcatggtagatat 下游引物：gtaagataccgtcaagtgagaa
具有参考价值的生化反应项目有：
3.1 生长特性
10℃ 不生长
45℃ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ不生长
6.5%NaCl 不生长
PH9.6 不生长
麦康凯培养基 （胆汁耐受） 不生长
3.2 发酵试验 棉子糖 RAF + 葡糖 INU +
乳糖 LAC
+ 甘露醇 MAN
—
甘露糖 MNS
— 丙酮酸
PRV —
山梨醇 SOR — 甘油
Glycerol —