总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB速率比色法)
碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号 产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。
绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。
细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。
本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。
本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。
谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。
细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。
谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。
在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。
谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。
但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。
人谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒说明书
人谷胱甘肽（GSH）酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中谷胱甘肽（GSH）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人谷胱甘肽（GSH）水平。
用纯化的人谷胱甘肽（GSH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入谷胱甘肽（GSH），再与HRP标记的谷胱甘肽（GSH）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽（GSH）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人谷胱甘肽（GSH）的含量。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。
谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。
GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ，并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。
适当设置应体系，前后两个反应合并起来后，GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时，该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素，此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。
从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。
本试剂盒的具体反应原理如下：两个反应相合并：本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。
图中可见，对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。
图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。
本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号保存条件：-20ºC保存，一年有效。
氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量检测试剂盒说明书
氧化型谷胱甘肽（GSSG微量法货号：BC1185规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体100 mL×1瓶4℃保存试剂二液体130 μL×1支4℃保存试剂三液体20 mL×1瓶4℃保存试剂四液体2.5 mL×1瓶4℃保存试剂五粉剂×1瓶4℃保存试剂六液体12.5 μL×1瓶4℃保存标准品粉剂10 mg×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：有毒易挥发试剂，涉及该试剂的步骤建议在通风橱内操作。
2、试剂五：临用前加入2.5 mL蒸馏水，溶解后-20℃分装保存；3、试剂六：液体置于试剂瓶内EP管中。
临用前根据样本量将试剂六、蒸馏水按1:20（V:V）的比例配制备用，现用现配；4、标准品：用1 mL蒸馏水溶解，浓度为10 mg/mL，4℃保存。
产品说明：氧化型谷胱甘肽（GSSG）是谷胱甘肽（GSH）的氧化形式，又称为二硫代谷胱甘肽，是两分子的谷胱甘肽氧化而成。
GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH，因此机体中大多数是以还原型形式存在。
测定细胞内GSH 和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
本试剂盒利用谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸，2-硝基-5-巯基苯甲酸在波长412nm处具有最大光吸收的特点，通过2-乙烯吡啶抑制样本中原有的还原型谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG还原为GSH，借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。
技术指标：最低检出限：3.211 μg/mL线性范围：3.9-125 μg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
还原型谷胱甘肽靶向氧化应激对肝癌干细胞的作用
网络出版时间：２０２０－８－２５１４：１９ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０２００８２４．１６０６．００２．ｈｔｍｌ还原型谷胱甘肽靶向氧化应激对肝癌干细胞的作用高 兰１，龙世棋２，陈博鑫１，章 俊１摘要：目的 探讨还原型谷胱甘肽（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，ＧＳＨ）对肝细胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）干细胞性的作用。
方法 采用总谷胱甘肽／氧化型谷胱甘肽（Ｔ ＧＳＨ／ＧＳＳＧ）测试盒检测细胞内Ｔ ＧＳＨ／ＧＳＳＧ水平；应用ＣＣＫ ８实验评估细胞活力及干细胞培养基培养干细胞球（ＨＣＣｓｐｈｅｒｅ）；运用流式细胞技术分析ＣＤ１３３阳性细胞亚群比例。
结果 ＨＣＣ细胞中内源性Ｔ ＧＳＨ／ＧＳＳＧ水平比正常细胞显著升高。
外源性补充ＧＳＨ减少胞内活性氧物质（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）并抑制ＨＣＣ细胞活力及ＨＣＣｓｐｈｅｒｅ形成。
进一步分析发现ＧＳＨ显著降低ＣＤ１３３＋肝癌干细胞（ｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＬＣＳＣ）的亚群比例。
结论 ＨＣＣ细胞中ＲＯＳ水平及抗氧化防御能力增强。
外源性ＧＳＨ能够降低胞内的ＲＯＳ水平，并抑制ＨＣＣ细胞活力及干细胞性，降低ＬＣＳＣ在ＨＣＣ细胞中的亚群比例。
为靶向异常氧化应激（ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ，ＯＳ）及肿瘤干细胞（ｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｃｅｌｌ，ＣＳＣ）治疗ＨＣＣ提供了新靶点。
关键词：肝肿瘤；肝细胞癌；肿瘤干细胞；还原型谷胱甘肽；氧化应激中图分类号：Ｒ７３５ ７ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－７３９９（２０２０）０８－０８８７－０６ｄｏｉ：１０．１３３１５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｃｅｐ．２０２０．０８．００２接受日期：２０２０－０５－２７基金项目：国家自然科学基金（８１８６０５４４）、贵州省教育厅青年科技人才成长项目［黔科合ＫＹ字（２０１７）１６８］作者单位：贵州医科大学１病理教研室、２免疫学教研室，贵阳 ５５０００４作者简介：高 兰，女，硕士研究生。
还原型谷胱甘肽（reducedglutathione,GSH）试剂盒说明书
还原型谷胱甘肽（reducedglutathione,GSH）试剂盒说明书货号：QS1200 规格：50管/48样还原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：GSH是细胞内最主要的抗氧化巯基物质，在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。
还原型与氧化型比值（GSH/GSSG）是细胞氧化还原状态的主要动态指标。
因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
测定原理：DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度与GSH含量成正比。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
GSH测定操作：1. 分光光度计预热30min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温30min。
3. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL蒸馏水，700μL 试剂二，200μL试剂三，混匀静置2min后测定412 nm吸光度A1。
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒(比色法)
离心 10min，取上清用于酶活性的测定。
GSH 工作液的配制：用 GSH 配制夜：GSH 储存液(100μ mol/L)=99:1 的比例稀释至 1mmol/L，即为 GSH 工作液(1mmol/L)，该溶液配制好以后可 4℃保存 1 天。
2、 GSH-Px 酶促反应: 可参考下表设置检测反应体系，依次加入试剂：
30.8mg 200ml 125ml 30ml 100ml 说明书
Storage
RT -20℃ RT RT -20℃ 避光 -20℃ 避光
操作步骤(仅供参考)：
1、 样本处理： ① 血清、血浆样本：从待测样本中分理出的血清或血浆丌应有溶血，如果含有应去除红细
胞后，直接检测，如超过检测范围，用生理盐水稀释后检测。血清去除红细胞的简易方 法如下：用抗凝管收集血液，颠倒混匀。取至少 500μl 全血。弃上清，用冰冷的红细 胞沉淀 10 倍体积的样品匀浆液重悬沉淀，再同前离心，弃上清。加入约红细胞沉淀 4 倍体积的冰冷的 ddH2O 裂解红细胞。取上清。亦可采用红细胞裂解液去除红细胞，如 Leagene ACK 红细胞裂解液等。 ②组织样本：动物用含有 20U/ml heparin 的生理盐水(0.9% NaCl containing 20U/ml heparin)灌流清除血液后获取组织样品。按照每 20mg 组织加入 200μl 样品匀浆液的比例，
计算：
谷胱甘肽过氧化物酶酶活力单位的定义：1 个酶活力单位(1unit)是指在 37℃， 每 1L 血清，排除非酶促反应，1min 内可以催化 1μmol/L GSH 氧化所需(减少)的酶量为一个 GSH-Px 活性单位。
GSH-Px(U/L)= (A 本底－A 测定－A 空白)/(A 本底－A 空白)×200
谷胱甘肽(GSH)含量测定
谷胱甘肽（GSH）含量测定一、实验目的1.了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程;2.学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。
二、实验原理谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）、甘氨酸(Gly)组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。
它作为体内重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如与自由基、重金属等结合，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。
谷胱甘肽能和2-硝基苯甲酸（DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG），2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm 处具有最大光吸收。
因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。
三、实验材料小麦幼嫩叶片四、实验方法及步骤1.制作标准曲线取7只干净的试管编号，按如下表格加入各试剂，反应20分钟后在412nm 下用分光光度计测其吸光度，制作标准曲线；2.样品测定a、称取小麦叶片0.2g，加入少量5%偏磷酸缓冲液研磨提取，并用5%偏磷酸缓冲液定容至6ml，8000rpm离心10min,取上清液；b、取上述上清液2ml显色，操作同标准曲线。
3.结果计算：GSH含量（ug/Gfw）= (Cx*Vt)/(Fw*Vs)注：Cx---2ml样品中GSH含量（ug），即每管中GSH的含量Vt---样品提取液总体积(ml)；Vs----显色时所取样的体积(ml)；FW---样品鲜重（g）。
五、实验结果1.标准曲线1.样品测定结果六、注意事项1.使用移液管吸取试剂时，视线要垂直于移液管且与液面凹面水平，不能斜视，以免量取试剂不准确。
2.在提取样品时，最好沉淀出去蛋白质，以防止蛋白质中所含巯基及相关酶对测定结果的影响。
3.在研磨叶片时，为方便研磨，刚开始时加入少量的提取液。
还原型谷胱甘肽 (reduced glutathione,GSH)含量测定试剂盒使用说明
还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）含量测定试剂盒使用说明产品简介：GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。
因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度变化与GSH含量成正比。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水产品内容：试剂一×1支，充分溶解于100ml双蒸水，4℃保存试剂二×1支，充分溶解于50ml试剂一中，4℃保存试剂三×1支，充分溶解于10ml双蒸水中，4℃避光保存操作步骤：一、样品前处理：取组织约0.1g，加1ml试剂二，冰上充分研磨，8000rpm4℃离心10min，取上清。
（如上清不清澈，再离心3min）GSH测定操作：测定前将试剂一于25℃水浴20min按每100mg组织加入1000µL生理盐水的比例进行匀浆。
8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
对于非哺乳动物组织：按每100mg组织加入1000µL提取液的比例进行匀浆。
8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
（2）血清（浆）样品：直接检测。
二、测定操作表：测定管空白管样本0.1ml/试剂一0.7ml0.7ml蒸馏水/0.1ml试剂三0.2ml0.2ml 迅速混匀，于412nm测吸光值，并记录第60s的OD值GSH含量计算：GSH标准曲线公式：y=0.0015x+0.0818（x为GSH浓度，y为吸光值）液体中GSH（µmol/L）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数组织中GSH计算：①GSH（µmol/mg prot）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品蛋白浓度（Cpr）②GSH（µmol/g mass）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品质量（g）注意事项：（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力测定时，除试剂一外，其它试剂均需放置在冰上；（2）样本测定前先取1-2个样做预实验，如吸光值太高（超过标准曲线范围，即y ＞0.2时），应先用试剂二稀释到适当倍数，使得吸光值在标准曲线范围内。
谷胱甘肽过氧化物酶的检测及意义
等)在技术上比较困难.而通过检测血液中抗氧物
(酶)及FR氧化产物的含量(酶活力)，来间接反映
氧白由从的存在，则比较容易，这也是当前氧白由从
研究中最普遍应用的方法.本文重点介绍一种抗过氧
化物酶—谷眺甘肤过氧化物酶的检测及意义.l谷胶甘肚过级化物酶及其盆要生理功能〔，·2，
GSH的消耗量，以反映酶活性.ZGSH+DTNB一卜
GssG+ZTNB.Gross〔5〕首先报道osH一PX宁舌力以
每克Hb每分钟GSH以一级反应速度(K)表示，
即
K一〔，·，‘忿2一:)·，二(GSHGSH
Haffcman〔‘，以单位时间内一09〔GsH〕降低量表示加
46
GsH中X活性，称为Haffeman单位.唐琼华等在
生一系列血液流变学的改变.
2.GSH一PX的检测
GSH一PX活性检测有直接法和问接法两种.
2.1直接法即测定GSH一PX的墓质GSH的消耗
量或GSSG的生成量.以反映其活性.
2.1.1紫外分光度法〔，，osH在波长255nm处呈
最大吸收，通过酶与基质作用，从255nm吸光度的
降低计算GSH的消耗量，从而判断酶活性.此法仅
成，在GSH一PX作用下，LOOH转化为无活性的
LoH.osH一px参与前列环素(，GIZ)和血栓素
(TxAZ)的合成，而LooH抑制pGI:合成酶的活
性，从而破坏了PGT:和TxA:之介，]的平衡.Lo0H
与TxA:呈正相关，PGI:与LooH呈负相关.将引
起血小板聚集和血管收缩，红细胞膜通透性降低，发
Faraji(.)对几种osH甲X测定方法进行T比
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法) 简介：谷胱甘肽(glutathione，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，保护组织细胞免受氧化损伤，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，故常简写为G-SH或GSH，易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、铅、汞、砷等)等结合，具有整合解毒作用。
谷胱甘肽具有广谱解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。
谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)(GSSG Assay Kit)是一种简单易行的氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测的试剂盒，其检测原理是先检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量，再检测总谷胱甘肽(T-GSH)含量T-GSH减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)：待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB反应，产生稳定黄色的TNB和GSSG；谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，由GSSG还原成的GSH和样品本身含有的GSH都与发色底物DTNB反应，生成黄色的TNB和GSSG，前后两个反应合并起来，总谷胱甘肽(GSSG+GSH)就相当于一个呈色的限速反应，总谷胱甘肽(T-GSH)含量决定了黄色含量。
通过分光光度法(酶标仪)检测410nm处吸光度，与相应处理的GSH标准比较，分别获得还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)，用T-GSH 减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。
该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量，亦可检测还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)含量。
总谷胱甘肽检测试剂盒
50 μl
50 μl
50 μl
b. 加入50微升0.16mg/ml NADPH溶液，混匀。
c. 立即用酶标仪测定A412，每5分钟测定一次或实时测定，共测定25分钟，测得5个数据。(说明：为了简化实验步骤，可 以在加入NADPH溶液混匀后25分钟，仅测定一次A412)。如果仪器可以设置温度，把温度设置在25℃，否则就在室温
2. Xiao-Long W, Chuan-Ping Y, Kai X, Ou-Jv Q. Selenoprotein W depletion in vitro might indicate that its main function is not as an antioxidative enzyme. Biochemistry (Mosc). 2010;75(2):201-7.
NADPH。每检测一个样品需50微升0.16mg/ml NADPH。
2. 标准品的准备：
把10mM GSH储备液用蛋白去除试剂S溶液稀释成50μM GSH溶液。然后依次稀释成25、15、10、5、2μM GSH溶液。取
50、25、15、10、5、2μM GSH溶液六个点做标准曲线。注意：由于GSH在蛋白去除试剂S溶液中不太稳定，用蛋白去除
b. 细胞样品的准备。请尽量使用新鲜的细胞进行测定，而不要使用冻存的细胞进行测定。PBS洗涤细胞一次，离心收集
细胞，吸尽上清。加入细胞沉淀体积3倍量的蛋白去除试剂S溶液，即如果细胞沉淀为10微升，则加入30微升蛋白去除
试剂S溶液，充分Vortex。(细胞沉淀的体积可以根据细胞沉淀的重量进行估算。收集细胞前后分别对离心管进行称
等处理，而直接加入适量蛋白去除试剂S溶液进行匀浆)。4℃放置10分钟后，10,000g 4℃离心10分钟，取上清用于总
谷胱甘肽
高效液相色谱法
原理：高效液相色谱法是由于溶质在同定相和流动相之间的分配系数、亲和力、分子大小、吸附能力等不同， 而进行连续分离的过程 。
操作步骤： ①色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm） 。 流动相：磷酸二氢钠和辛烷磺酸钠混合溶液（磷酸二氢钠3.0 g、辛烷磺酸钠1.0 g，加水溶解并定容至500 mL，用磷酸调溶液pH为3）：乙腈 = 96：4（体积比） 。 检测波长：210 nm，流速0.8 mL/min，柱温30℃，进样量10 μL 。 ②制作标准溶液 准确称取谷胱甘肽标准品适量，用去离子水溶解于容量瓶中，混合均匀，定容，制成25 μg/mL、50 μg/mL、100 Vg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL、800 μg/mL系列浓度样品液，作为标准溶液 。
谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统功能，并具有抗氧化作用、整合解毒作用。半胱氨酸上的巯基为其活性 基团（故常简写为G-SH），易与某些药物、毒素等结合，使其具有整合解毒作用。谷胱甘肽不仅可用于药物，更 可作为功能性食品的基料，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。
谷胱甘肽有还原型（G-SH）和氧化型（G-S-S-G）两种形式，在生理条件下以还原型谷胱甘肽占绝大多数。 谷胱甘肽还原酶可以催化两型间的互变，该酶的辅酶还可以为磷酸戊糖旁路代谢提供的NADPH。
方法步骤：
1、DTNB贮存液配制：将0.01 mol/L的DTNB溶解于0.05 mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0）中形成DTNB贮存液 。
2、DTNB分析液配制：将DTNB贮存液用0.5 mol/L、pH8.0的Tris - HCl缓冲液稀释100倍，配成DTNB分析 液，避光放置，现配现用 。
人谷胱甘肽(GSH)说明书
人谷胱甘肽(GSH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中谷胱甘肽(GSH)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人谷胱甘肽(GSH)水平。
用纯化的人谷胱甘肽(GSH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷胱甘肽(GSH)，再与HRP 标记的谷胱甘肽(GSH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽(GSH)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人谷胱甘肽(GSH)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：720ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px_GPX)活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4499
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：UPLC-MS-4499规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×2瓶4℃保存试剂二液体10μL×1瓶4℃保存试剂三液体30mL×1瓶4℃保存试剂四液体15mL×1瓶4℃保存试剂五液体5mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存稀释液液体20mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入3.3mL稀释液，充分溶解；2、试剂二：临用前按2μL试剂二：10mL蒸馏水的比例稀释试剂二，现用现配；3、试剂三：瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；4、标准品：10mg还原型谷胱甘肽。
临用前加入0.405mL稀释液溶解为80μmol/mL的标准溶液备用。
产品说明：谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px或GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。
GPX能够催化还原型谷胱甘肽（GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。
GPX催化H2O2氧化GSH，产生GSSG，GSH能与DTNB生成在412nm处有特征吸收峰的化合物，412nm下吸光度的下降即可反应GPX的活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取0.05g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
GSSG。1 U=1000 mU。
c. 对于谷胱甘肽还原酶：1mU/ml＝1nmol NADPH/min/ml＝(A340/min)/0.00622 即相当于：[检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]=[A340/min(sapmle)－A340/min(blank)]/0.00622 注：[检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]的单位为mU/ml。
如果A340/min(sapmle)＝0.0255，A340/min(blank)＝0.0006，那么 [检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]= (0.0255-0.0006)/0.00622=4.0mU/ml
[样品中谷胱甘肽还原酶活力]= 4.0mU/mlX10X20/(0.5mg/ml)=1.6U/mg(蛋白)
注意事项：
¾ 本试剂盒检测时牵涉到氧化还原反应，所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。另外，硫酸钠、硫酸铵和铁氰化 物都会干扰本试剂盒的测定。请尽量避免。
¾ 样品可以立即测定，也可以-70℃冻存待以后测定。 ¾ 一定要严格控制反应时的温度，否则会引起较多误差。 ¾ NADPH不太稳定，要严格按照后续说明操作，谨防失活。 ¾ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 S0055
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
产品名称 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
包装 100次
产品简介：
¾ 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(Glutathione Reductase Assay Kit)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样 品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase)活性的试剂盒。谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷 胱甘肽(GSH)。谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。GSH可以清 除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒(谷胱甘肽底物法)产品技术要求jiuqiang
谷胱甘肽还原酶测定试剂盒（谷胱甘肽底物法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清谷胱甘肽还原酶的含量。
1.1 包装规格包装规格见表1。
表1 包装规格1.2 主要组成成分主要组成成分见表2。
表2 主要组成成分2.1 外观试剂1a为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂1b为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。
试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。
2.2 净含量液体试剂的净含量应不少于标称量。
2.3 试剂空白吸光度2.3.1 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≤1.5000。
2.3.2 试剂空白吸光度变化率A340nm下测定试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤ 0.0100。
2.4 准确度与已上市产品进行比对试验：在[12，184] U/L区间内，相关系数r≥0.975，在[12，50] U/L区间内测定的绝对偏差应不超过±7.5 U/L，在(50，184]U/L区间内测定的相对偏差应不超过±15%。
2.5 分析灵敏度样本浓度为70U/L时，其吸光度变化率应不超过0.5000。
2.6 线性范围在[12，184] U/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[12，50]U/L区间内线性绝对偏差应不超过±7.5U/L，在(50，184] U/L区间内线性相对偏差应不超过±15%。
2.7 测量精密度2.7.1 重复性使用高、低不同浓度的血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。
2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。
2.8 瓶间差试剂1b、试剂2、质控品的瓶间差应≤10%。
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总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB速率比色法)
简介：
谷胱甘肽(glutathione，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。
谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，保护组织细胞免受氧化损伤，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，故常简写为G-SH或GSH，易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、铅、汞、砷等)等结合，具有整合解毒作用。
谷胱甘肽具有广谱解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。
谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。
还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。
总谷胱甘肽(T-GSH)检测试剂盒(DTNB速率比色法)(Total Glutathione Assay Kit)是一种简单易行的检测总谷胱甘肽(T-GSH)的试剂盒，其检测原理是谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，由GSSG还原成的GSH和样品本身含有的GSH都与发色底物DTNB反应，生成黄色的TNB和GSSG。
前后两个反应合并起来，总谷胱甘肽(GSSG+GSH)就相当于一个呈色的限速反应，总谷胱甘肽(T-GSH)含量决定了黄色含量，通过分光光度法(分光光度计)检测吸光度，与相应处理的GSH标准比较，获得样品的总谷胱甘肽(T-GSH)即(GSSG+GSH)含量。
可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中总谷胱甘肽(T-GSH)含量。
该试剂盒仅用于科研，不用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：编号
名称TO1049
100T
Storage
试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准10mg 4℃避光试剂(B): GSH assay buffer 250ml RT
试剂(C): DTNB 40mg RT 避光试剂(D): 蛋白沉淀剂4g RT 避光试剂(E): NADPH 10mg -20℃避光试剂(F): DMSO 1.5ml RT 避光试剂(G): ddH2O 50ml RT 避光试剂(H): GSH还原酶原液90μl -20℃避光使用说明书1份
1、离心管或小试管
2、蒸馏水
3、离心机
4、水浴锅
5、96孔板
6、酶标仪或生化分析仪
操作步骤(仅供参考)：
1、配制GSH标准储存液：取还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入ddH2O，溶解并混匀，即为
还原型GSH标准储存液(10mM)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
2、配制DTNB储存液：在本试剂盒提供的DTNB中加入DMSO，溶解并混匀，即为DTNB
储存液(40mg/ml)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
3、配制50×GSH还原酶：按GSH还原酶原液：GSH assay buffer混合，即为50×GSH
还原酶。
-20℃保存，3个月有效。
4、配制T-GSH检测工作液：按下表配制T-GSH检测工作液。
1个样品10个样品50个样品
GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80ml
DTNB储存液5μl 50μl 250μl
50×GSH还原酶43.2μl 432μl 2160μl
5、配制蛋白沉淀工作液：在本试剂盒提供的蛋白沉淀剂中加入ddH2O，配制成5%的水
溶液，即为蛋白沉淀工作液，4℃保存。
6、配制标准品：把还原型GSH标准储存液(10mM)用蛋白沉淀工作液稀释成标准溶液。
然后依次稀释成25、15、10、5、2μM GSH溶液。
取50、25、15、10、5、2μM GSH 标准溶液6个点做标准曲线。
注意：由于GSH标准在蛋白沉淀工作液中不太稳定，用蛋白沉淀工作液配制的GSH溶液必须新鲜配制后使用，不可冻存后再使用。
7、配制NADPH工作液：在本试剂盒提供的10mg NADPH中加入1ml ddH2O，溶解并
混匀，即为NADPH储存液(10mg/ml)。
一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。
取按NADPH储存液(10mg/ml)加入GSH assay buffer，充分混匀，即为NADPH工作液(0.12mg/ml)。
8、准备样品：
①红细胞或血浆样品的制备：请尽量使用新鲜的血液进行测定。
离心，沉淀为红细胞，上
清为血浆。
对于红细胞，用PBS洗涤两次。
取约红细胞沉淀或血浆，加入蛋白沉淀工作液，充分Vortex振匀。
4℃或冰浴放置10min，离心，取上清用于总谷胱甘肽(T-GSH)测定，样品需暂时4℃保存备用，不立即测定的样品可以-70℃保存，但不宜超过10天。
对于处理好的红细胞样品最后需用蛋白沉淀工作液稀释10倍后再进行后续的测定，
而对于血浆样品，应直接取进行测定。
②组织样品的制备：取组织用液氮速冻，迅速研磨，加入300μl蛋白沉淀工作液，充分
Vortex振匀，再加入蛋白沉淀工作液，用匀浆器充分匀浆。
4℃孵育10min，4℃10000g 离心10min，取上清用于总谷胱甘肽(T-GSH)测定。
样品需暂时4℃保存备用，不立即测定的样品可以-70℃保存，但不宜超过10天。
对于处理好的组织样品通常需用蛋白沉淀工作液进行适当稀释后再进行测定，稀释倍数通常为5～20倍。
③细胞样品的制备：PBS洗涤细胞1次，离心收集细胞，吸尽上清。
加入细胞沉淀3倍
体积的蛋白沉淀工作液，充分Vortex振匀。
(收集细胞前后分别对离心管进行称重，从而就可以计算出细胞沉淀的重量，细胞沉淀的体积可以粗略地看做10ml。
)对样品进行快速的冻融后，4℃或冰上孵育5min。
离心，取上清用于总谷胱甘肽(T-GSH)测定。
样品需暂时4℃保存备用，不立即测定的样品可以-70℃保存，但不宜超过10天。
对于处理好的组织样品通常需用蛋白沉淀工作液进行适当稀释后再进行测定，稀释倍数通常为5～20倍。
9、T-GSH加样操作：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，
并注意避免产生气泡。
如果样品中的T-GSH浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
加入物(ml) 空白管标准管测定管蛋白沉淀工作液0.08 ——
系列标准品(2～50μM) —0.08 —
待测样品——0.08
GSH检测工作液 1.6 1.6 1.6
室温或25℃孵育5min。
NADPH工作液(0.12mg/ml) 0.4 0.4 0.4
10、T-GSH检测：立即用酶标仪或自动生化分析仪于处每隔检测一次，空白管调零，共检测6min(亦可加入NADPH工作液反应6min后检测，只检测1次)，以检测其反应速率ΔA/min。
如果酶标仪不能检测410nm，可测定405～420nm处吸光度。
计算：
①动力学测定法：根据不同时间点测定得到的吸光度值计算出ΔA410/min，以GSH标准
的浓度(50、25、15、10、5、2μM)为横坐标，以ΔA410/min为纵坐标，做出标准曲线。
根据待测的ΔA410/min，对照标准曲线就可以计算出测定时样品中总谷胱甘肽的含量。
动力学法测定结果比终点测定法的结果精确。
根据样品的稀释倍数、以及最初样品的使用量，可以计算出每毫克组织或细胞中的总谷胱甘肽的含量，通过测定蛋白浓度，从而计算出样品的蛋白量，最后计算出每mg蛋白中总谷胱甘肽的含量。
②终点测定法：即反应6min仅测定1次吸光度。
，以GSH标准的浓度(50、25、15、10、
5、2μM)为横坐标，以ΔA410/min为纵坐标，做出标准曲线。
样品对照标准曲线即可
计算出总谷胱甘肽的含量。
终点测定法比动力学法快捷。
根据样品的稀释倍数、以及最初样品的使用量，通过测定蛋白浓度，从而计算出样品的蛋白量，最后计算出每mg蛋白中总谷胱甘肽的含量。
参考区间：
成年全血GSH 1.02～mmol/L
注意事项：
1、GSH比较稳定，血液样品以ACD抗凝后冰箱4℃保存，3～4周内稳定。
2、请尽量用新鲜的细胞进行测定，而不要使用冻存的细胞进行测定，避免使酶活性下降。
3、全血GSH与吸烟和锻炼成正比。
4、测定各孔时，各孔温度均需达到室温或25℃，否则影响结果。
5、轻度溶血样本对GSH测定无影响。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
DC0032 Masson三色染色液
DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液
NR0001 DEPC处理水(0.1%)
PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)
TC0711 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD微板法)。