染色体制备实验

此时细胞体积膨大，处于一个极其容易破裂的状态。 此时细胞体积膨大，处于一个极其容易破裂的状态。 破裂的状态
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5.固定 固定
低渗后将样品1000 rpm离心 离心5min，收集沉淀；加入甲醇和 低渗后将样品 离心 ，收集沉淀； 冰醋酸(3:1)混合液，轻轻吹打样品沉淀，使其充分散开； 冰醋酸(3:1)混合液，轻轻吹打样品沉淀，使其充分散开；加 (3:1)混合液 样品沉淀 充分散开 入固定液至5ml，并静置15分钟 ，使其充分固定；样品再离心、 使其充分固定；样品再离心、 入固定液至5ml，并静置15分钟 5ml 15 再固定，重复1次后，样品可长期保存（4℃）。 再固定，重复1次后，样品可长期保存（4℃）。 可长期保存
细胞生物学实验四
——染色体制备
覃钦博 博士 湖南师范大学生命科学学院 鱼类发育生物学实验室
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1.刺激淋巴细胞的有丝分裂 刺激淋巴细胞的有丝分裂
对实验鱼注射PHA 3次，每次剂量为 体重， 对实验鱼注射 次 每次剂量为8-10 µg/g体重，每一针 体重 PHA的效应时间分别为 的效应时间分别为12h、4h和2h; 的效应时间分别为 、 和 原理：植物血球凝集素（ 原理：植物血球凝集素（PHA）能刺激 淋巴细胞有丝分裂 ）能刺激B淋巴细胞有丝分裂 ，但是过量使用PHA能导致血液凝聚。 但是过量使用 能导致血液凝聚。 能导致血液凝聚
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3.取材 取材
将实验鱼剪鳃放血，从泄殖腔沿腹部剖开实验鱼， 将实验鱼剪鳃放血，从泄殖腔沿腹部剖开实验鱼，从相应 部位取出肾脏组织（包括前肾和中肾脏）；放入盛有0.8%的生 部位取出肾脏组织（包括前肾和中肾脏）；放入盛有 前肾和中肾脏）；放入盛有 的生 成糊状） 理盐水的培养皿中清洗，用剪刀充分剪碎（ 理盐水的培养皿中清洗，用剪刀充分剪碎（约3min成糊状）材 充分剪碎 成糊状 料后移于离心管中，充分吹打（ 料后移于离心管中，充分吹打（3min)；将离心管中的生理盐水 ； 加至10ml后，静置5-8min。 加至 后 静置 。
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2.抑制淋巴细胞有丝分裂 2.抑制淋巴细胞有丝分裂
注射秋水仙素， 体重。 在解剖取材前的2h注射秋水仙素 剂量为2-4 µg/g体重。 体重 在解剖取材前的 注射秋水仙素，剂量为
原理：秋水仙碱能破坏纺锤体，是分裂的细胞处于有丝分裂中期。 原理：秋水仙碱能破坏纺锤体，是分裂的细胞处于有丝分裂中期。 纺锤体 有丝分裂中期
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4.低渗 4.低渗
将样品1000 rpm离心 离心5min，弃上清液；收集的细胞沉淀 将样品 离心 ，弃上清液； 在低渗液（ ），充分吹打使沉淀均匀分散 在低渗液（0.075 M Kcl），充分吹打使沉淀均匀分散，加低 ），充分吹打使沉淀均匀分散， 渗液至10ml，低渗30-40 min；低渗过程中每隔 分钟轻轻吹 ，低渗 分钟轻轻吹 渗液至 ；低渗过程中每隔5分钟 打溶液，使其充分低渗。 打溶液，使其充分低渗。