分子实验室、细胞实验室常用配方

（一）WB相关试剂及常用缓冲液
●
●10%过硫酸铵溶液AP（分装保存于-20度）
AP粉末 1g
ddH20 10ml
●10％SDS（十二烷基硫酸钠）：
SDS粉末 10g
ddH20定容到 100ml
注意：用磁力搅拌器搅拌不会容易起泡泡
●6X蛋白质sample buffer
Tris-HCl(1M,pH6.8) 30mL
SDS 10g
甘油 30mL
DTT（154.25） 9.3g
溴酚蓝 0.06g
dd H20 定容至100mL
●10XPBS缓冲液的配制：
NaCl 80g
KCl 2g
Na2HPO4 14.4g（十二水合36g）
KH2PO40 2.4g
加800 mLddH2O,根据开始的pH用NaOH或HCL调pH到7.4，调好pH再定容到1升。

配好后用高压蒸气灭菌后常温保存最好是在4度
●PBST(1X)
PBS(1X) 500ml
Tween 20 500μl
●50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液配制1L溶液各成分的用量
Tris粉末 242g
冰醋酸 57.1ml
Na2EDTA·2H2O 37.2g
ddH20定容到 1L
●封闭液
脱脂奶粉 5g
叠氮钠 0.02g(现配现用时可不加)
PBS 定容到100mL
●脱色液：(室温)
甲醇 165mL
乙酸 50 mL
H20 785 mL
ddH20 定容至1L
●TBST(1X)
TBS(1X) 500ml
Tween 20 500μl
●Stripping buffer(可反复利用)温老师组配方
10%SDS 10ml
Β-巯基乙醇 350 l
Tris-HCI（pH6.8） 6.25ml（6.06加到50mL水）
加入ddH2O 至50mL
●Stripping buffer(可反复利用)郭老师给配方
甘氨酸 15g
SDS 1g
Tween20 1ml
dd ddH2O 1L
作这个buffer洗20min，然后用PBST洗3次，再重新封闭孵抗体。

（二）细胞和细菌培养基、抗生素
●SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨 20g
酵母提取物 5g
氯化钠 0.5g
1mol/L氯化钾 2.5ml
用水补足体积到1L。

分成100ml的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁
●1M IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3））溶液
IPTG粉末 2.383g
ddH20 定容到10ml
用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

●Amp+(50mg/ml)
Amp+粉末 50mg
ddH20 1ml
注意：分装保存于-20度，使用时按1000：1的比例用
●Kana+(50mg/ml)
Kana +粉末 50mg
ddH20 1ml
注意：分装保存于-20度，使用时按1000：1的比例用
●胰酶：抽滤，长期保存可放负20度
粉末 0.25g
EDTA 0.02-0.03g
1XPBS 100ml
●高糖DMEM培养基：抽滤保存在4度
粉末全部
碳酸氢钠 3.7g
ddH20 定容到1L（用盐酸调pH值到：7.2-7.4）
●G418母液（100mg/ml）用0.22μM滤菌，分装存于-20度
粉末 1g
PBS 10ml
●zeocin母液（100mg/ml）用0.22μM滤菌，分装存于-20度
粉末 1g
ddH2O 10ml
●Blasticidin（100mg/ml）用0.22μM滤菌，分装存于-20度
粉末 0.3g
PBS 10ml
●
Na3PO4（164） 8.2g（50mM）
NaCl (58.5) 17.55g（300mM）
加800 mL ddH2O溶解，用2M NaOH或者2M HCL 调pH到8.0，再定容到1升。

配好后用高压蒸气灭菌后常温保存。

●洗涤液(wash buffer)：2011年做蛋白纯化时用
Na3PO4 8.2g（50mM）
NaCl 17.55g（300mM）
咪唑 0.681g（10mM）
加800 mLddH2O溶解,根据开始的pH用2M NaOH或者2M HCL调pH到8.0，调好pH再定容到1升
●洗脱液(elution buffer)：2011年做蛋白纯化时用
Na3PO4 8.2g（50mM）
NaCl 17.55g（300mM）
咪唑 17.025g（250mM）
加800 mLddH2O溶解,根据开始的pH用2MNaOH或者2M HCL调pH到8.0，调好pH 再定容到1升）
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●8X LEW Buffer (Lysis-Equilibrium-Wash Buffer)：（室温保存）pH：8.0
NaH2PO4.2H2O 6.2404g（400mM）
NaCl 14.0256g（2.4M）
dH20 定容到100 mL （调节pH：8.0）
●4X Elution Buffer：（室温保存）pH：8.0
NaH2PO4.2H2O 3.1202 g（200mM）
NaC l7.0128g（1.2M）
咪唑 6.81 g（1M）
dH20 定容到100 mL（调节pH：8.0）
●EDTA:（100mM）
EDTA 2.923 g
dH20 定容到100 mL
●NiSO4:
NiSO4 .6H2O 2.6285g（100mM） dH20 定容到100 mL
●溶菌酶：（使用时1ml溶液加入20ul）
粉末 50mg
ddH20 1mL
(四)利用His-tag从细胞中富集蛋白配方
●磷酸钠缓冲液
按图示比例混合0.2 M Na2HPO4溶液和0.2 MNaH2PO4溶液，得到两种缓冲液，pH分别调节成为8.0和6.3.
（注意二价阳离子螯合剂，还原剂，会导致镍从树脂上的洗脱）
本实验的所有试剂中EDTA浓度不得超过1 mM,DTT浓度不超过5 mM，巯基乙醇浓度不超过20 mM。

注意使用pH为6.3的磷酸缓冲液，而且pH不得低于6，pH要精确配制，非常重要！Histidine 的质子化，会导致镍树脂上的解离，所以要精确测定pH，并且以pH试纸校对，而不是仅仅依靠pH仪器。

洗脱溶液
200mMImidazole咪唑，
5% (wt/vol)SDS，
150mM Tris-HCl(pH 6.7)
30% (vol/vol)丙三醇
720mM巯基乙醇
0.0025%(wt/vol)溴酚蓝
注意wt/vol是质量/体积之比例，而vol/vol是体积：体积的比例。

(五)双向电泳溶液配制
●水化上样缓冲液（I）：
尿素(8M) 4.805g
CHAPS(4%) 0.4g
DTT(65mM) 0.098g(现加)
Bio-Lyte0.2%（w/v）50μI(40%现加)
溴酚蓝0.001% 10μI(1%溴酚蓝)
MilliQ水定容到10mI,分装成10小管，-20度冰箱保存●上样缓冲液（II）：
尿素(7M) 4.2g
硫脲(2M) 1.52g
CHAPS(4%) 0.4g
DTT(65mM) 0.098g(现加)
Bio-Lyte0.2%（w/v）50μI(40%现加)
溴酚蓝0.001% 10μI(1%溴酚蓝)
MilliQ水定容到10mI,分装成10小管，-20度冰箱保存
●上样缓冲液（III）
尿素(5M) 3g
硫脲(2M) 1.52g
CHAPS(2%) 0.2g
SB 3-10(2%) 0.2g
DTT(65mM) 0.098g(现加)
Bio-Lyte0.2%（w/v）50μI(40%现加)
溴酚蓝0.001% 10μI(1%溴酚蓝)
MilliQ水定容到10mI,分装成10小管，-20度冰箱保存
●平衡缓冲液母液
尿素(6M) 36g
SDS(2%) 2g
Tris-HCI(pH8.8)0.375M 25mI(1.5M)
甘油(20%) 20mI
MilliQ水定容到100mI，分装10管，-20度保存
●胶条平衡缓冲液I（充分混匀，用时现配）
胶条平衡缓冲液母液10mI
DTT 0.2g
●胶条平衡缓冲液II（充分混匀，用时现配）
胶条平衡缓冲母液10mI
碘乙酰胺0.25g
●低熔点琼脂糖封闭液
低熔点琼脂糖0.5% 0.5g
Tris（25mM）0.303g
甘氨酸(192mM) 1.44g
SDS（0.1%）1mI（10%SDS）
溴酚蓝（0.001%）100μI（1%溴酚蓝）
MilliQ水定容到100mI,加热溶解至澄清，室温保存
（六）同位素实验相关试剂
●
●
● 2 X Annealing buffer
Tris-HCI(pH7.5-8.0) 20mM
NaCI 100mM
EDTA 2mM
●
●
Tris 0.89M 26.945g
硼酸（pH8.3） 0.89M 13.757g
Na2EDTA 20mM 1.86115g
●15% Denatured DNA PAGE gel(100ml)
10 X TBE 15ml
40%,19:1 gel stock 37.5ml
ddH2O 16ml
Urea 48g
存放在4度，使用前加200μl 10%AP和20μl TEMED
●20% Denatured DNA PAGE gel
10 X TBE 15ml
40%,19:1 gel stock 50ml
ddH2O 3.5ml
Urea(尿素) 48g
存放于4度，使用前取35ml混合液加140μl 10%AP和140μl TEMED ●硼氢化钠（1M） 37.83
粉末 0.7566g
ddH2O 10ml
● 2 X dRP buffer（分装保存于负20度）
DNA binding buffer
（七）酶切打质谱相关配方
NH4HCO3(79.06) 100mM
粉末 0.7906g
ddH2O定容到100ml,pH7.8-8.0
DTT（154.25g） 100mM
粉末 0.01542g
ddH2O 1ml
IAA(碘乙酰胺，184.96) 200mM
粉末 0.036992g
ddH2O 1ml
（八）其他配方
●2XHEPES-缓冲液（潘老师给的配方做细胞转染，需要调pH为7.05，用0.22μM滤菌，
分装存于-20度）。

●CaCI2·2H2O(2M) 147.02 潘老师给的配方做细胞转染
粉末 5.88g
ddH2O 20ml
0.22μm滤菌，分装存于-20度
●5XTBS（1L体系）（在利用flag tag带磁珠的抗体富集蛋白时用）
Tris-HCI(250mM) 30.275g
NaCI(750mM) 43.875g
dd H20 定容至1L（调节pH为7.4）
●MMS甲磺酸甲酯（Sigma 密度为1.3g/mI,M=110.13）
1M 体系：液体85μI ddH2O 915μI
●Hochest
母液：1mg/ml,避光存于-20度
工作液：母液按1:1000稀释
●TritonX-100（0.2%）
TritonX-100 2 l
ddH2O 1ml
● 2 X HDM buffe(II)曾用于LSD1去甲基化
100mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氟)：分成贮存于-20℃。

PMSF粉末 1.742g
异丙醇/甲醇定容到10ml
【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。

一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。

凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

●5mol/L氯化钠（NaCl）：
氯化钠 29.2g
ddH20 定容到100ml
● 2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：
X-gal 25mg
二甲基甲酰胺（DMF） 1ml
注意：用铝箔包裹装液管，贮存-20℃。

●DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水
加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。

在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC 处理Tris缓冲液。

●1mol/L CaCl2溶液
在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2•6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃
● 2.5mol/L CaCl2溶液
在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2•6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

●pH校准液
通常称为标液，现在你买仪器一般厂家都会标配三小瓶粉末：邻苯二甲酸氢钾（pH=4.003），混合磷酸盐（pH=6.864），硼砂（pH=9.182）这需要你把它稀释，一瓶只能兑250毫升（250C）的纯净水，兑好后摇一摇直到充分溶解（三瓶要分三个瓶子装哦）
NaOH(2M) 8g NaOH粉末定容到100mL
HCL(2M) 10mL 11M HCL溶液定容到110 mL
（一）WB相关试剂及常用缓冲液（1-3页）
（二）细胞和细菌培养基、抗生素（4-5页）
（三）利用His-tag从细菌中纯化蛋白配方（6-7页）
(四)利用His-tag从细胞中富集蛋白配方（8-9页）
(五)双向电泳溶液配制（10页）
（六）同位素实验相关试剂（11-13页）
（七）酶切打质谱相关配方（14页）
（八）其他配方（14-16页）。