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动物接种是最原始的分离病毒的方法，但目前少用。
（二）病毒的鉴定
1．病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标 （1）细胞病变（ cytopathic effect, CPE ）
大多数病毒属溶细胞型感染，在敏感细胞内增殖会 出现CPE。CPE表现为细胞内颗粒增多、圆缩、聚集、融 合，有的可形成包涵体，出现细胞溶解、脱落、死亡等。
（二）非寻常病毒的分类
1 卫星病毒（satellites） 2 类病毒（viroids） 3 朊粒（prion）
第三节 病毒学诊断
自身免疫病和肿瘤密切相关。病毒性疾病在人类疾 病中占有十分重要的地位。
由于病毒感染的防治原则不同于细菌等其他微生物， 尽早判定病人感染或某传染病的流行是由病毒所致，是 医生和微生物学实验室的责任和任务。
或 生物素、地高辛苷原、辣根过氧化物酶等标记，在一 定条件下按碱基互补规律与标本
毒包涵体。包涵体对病毒的诊断有一定价值。观察病毒 CPE。病理标本根据病理特征，再配合组化染色技术进行 诊断。
（二）病毒蛋白抗原检测
1. 酶联免疫技术（ELISA） 2. 免疫荧光标记技术（IF） 3. 放射免疫标记（SPRIA）
这些技术操作简便、特异性强、敏感性高。尤 其使用单克隆抗体标记技术可测到ng（10-9g） 至 pg（10-12g）水平的抗原或半抗原。其中由于放射 性核酸可引起放射性污染，已逐渐被非放射性标记 物（如地高辛等）所代替。
（一）形态学检查
1．电镜和免疫电镜检查
含有高浓度病毒颗粒（≥107颗粒/ml）的样品，可直 接应用电镜技术观察。对含低浓度病毒的样本可用免疫电 镜技术，或用超速离心机将标本离心进行电镜观察，以提 高检出率和特异性。电镜下不仅能观察病毒的形态学特征 ，还可测量病毒的大小。
2．光学显微镜检查
病理标本或含有脱落细胞及针吸细胞的标本检测病
病毒的分类及微生物检验
二、病毒分类系统和命名
（一）病毒分类一般系统 病毒分类系统将病毒分类为 科(families)、
属(genera)、种(species)等三级，或科、亚科、 属、种等四级。
根据病毒体的形态、基因结构和复制模式 等特征将病毒分为科和亚科；
在科或亚科中又根据理化特性和血清学特 性等分病毒属，属名后缀为—virus，属下分为 不同的病毒种。
（一）病毒的分离培养
1．细胞培养：原代培养细胞、 二倍体细胞株、传代细胞 系或株
标本接种后溶细胞型感染病毒可致细胞出现细胞病毒 效应（CPE），稳定感染病毒细胞并不出现明显病变，但 被感染的细胞膜表面会表达病毒蛋白等标志物，如血凝素 、神经氨酸酶、病毒特异性抗原等。 2．鸡胚培养和动物接种：
流感病毒的分离培养虽可用犬肾传代细胞（MDCK）, 但鸡胚接种仍是最常用的敏感而特异的方法。
不同病毒的CPE特征不同。因此，观察病毒所致 CPE的特点，根据细胞类型，细胞病变种类可对标本中感 染的病毒进行判定。
脊髓灰质炎病毒感染所致CPE
a. 未感染的vero细胞（一种非洲绿猴肾细胞系） b. 脊髓灰质炎病毒感染的vero细胞（显示细胞圆缩、分散 、
坏死、脱落）。
（2）红细胞吸附（hemadsorption）
病毒的分离与鉴定当然是病毒病原学诊断的金标准， 但因病毒是严格细胞内寄生，病毒分离必须
有活的细胞支持，故病毒的分离鉴定较困难。
二、病毒的分离与鉴定
以下情况需考虑进行病毒分离与鉴定： 1. 病程长且诊断困难的病人。 2. 怀疑为新现病毒（emergent virus）感染或已被消 灭
的病毒性疾病怀疑“死灰复燃”。 3. 为鉴别临床上具有相同症状的疾病。 4. 监测所用减毒活疫苗。 5. 用于病毒生物学性状的研究或流行病学调查等。
2．病毒感染性测定及病毒数量测定
（1）空斑形成试验（plaque formation） （2）50%组织细胞感染量 （3）感染复数
（Multiplicity of infection, MOI）
三、病毒感染的快速诊断
病毒的分离与鉴定是病毒诊断的金标准，
但临床实验室应用困难，而且费时，对临床病 毒感染症的诊治帮助不大。快速诊断主要指临 床标本绕过分离培养复杂而较长的过程，直接 在电镜下观察病毒颗粒，或直接检测标本中的 病毒成分和IgM抗体等，以作出快速和早期诊 断。
▪ 分类
可将病毒分为科、亚科和属 常用核酸类型分类 1 DNA virus (DNA病毒中有9科 ) 2 RNA virus ( ssRNA－ 7 科. ssRNA＋ 7 科. dsRNA 2科 ) 3 反转录病毒 (DNA和RNA反转录病毒中有2科) 依传播方式和感染部位分类 1 虫媒病毒 2 肠道病毒 3 呼吸道病毒 4 肝炎病毒 5 gM型特异抗体检测
检测病毒感染机体产生的特异性IgM，如 孕妇羊水中查到IgM型特异抗体可早期诊断某 些病毒引起的胎儿先天性感染；IgM抗体测定 有助于早期诊断，但感染机体产生IgM抗体有 明显个体差异。
2．免疫印迹试验（Western blot, WB）
某些病毒感染的诊断需持慎重认真的作法 。如AIDS和成人白血病等，在初筛试验阳性 后，尚需用WB法进行确认试验。
包膜上带有血凝素的病毒感染敏感细胞后， 血凝
素会出现于细胞膜表面，使感染细胞能与加入的红细胞结 合出现红细胞吸附现象，这是检测正粘病毒和副粘病毒的
间接指标。
（3）中和试验（neutralization test, NT）
用抗某病毒血清先与待测病毒悬液混合，经作用一定 时间后接种敏感细胞，培养后观察CPE或 红细胞吸附现 是否消失，即特异性抗体是否能 中和相应病毒的感染。 如用不同浓度的抗血清 进行中和试验，还可根据抗体的 效价对待测病毒 液进行半定量检测。
（四）检测病毒核酸
1．核酸电泳：正粘病毒属和呼肠病毒属的核酸是分节段 的，甲型流感病毒8个节段，轮状病毒11个节段。从 标本中直接提取轮状病毒的核酸，经聚丙烯酰胺凝胶 电泳（PAGE）和银染色后在凝胶板上清楚核酸条 带，结合临床情况可进行诊断。
2．核酸杂交：其原理是应用已知序列的核酸单链作为探 针（probe），探针预先用放射性核素（32P或131I）
（二）病毒的鉴定
1．病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标 （1）细胞病变（ cytopathic effect, CPE ）
大多数病毒属溶细胞型感染，在敏感细胞内增殖会 出现CPE。CPE表现为细胞内颗粒增多、圆缩、聚集、融 合，有的可形成包涵体，出现细胞溶解、脱落、死亡等。
（二）非寻常病毒的分类
1 卫星病毒（satellites） 2 类病毒（viroids） 3 朊粒（prion）
第三节 病毒学诊断
自身免疫病和肿瘤密切相关。病毒性疾病在人类疾 病中占有十分重要的地位。
由于病毒感染的防治原则不同于细菌等其他微生物， 尽早判定病人感染或某传染病的流行是由病毒所致，是 医生和微生物学实验室的责任和任务。
或 生物素、地高辛苷原、辣根过氧化物酶等标记，在一 定条件下按碱基互补规律与标本
毒包涵体。包涵体对病毒的诊断有一定价值。观察病毒 CPE。病理标本根据病理特征，再配合组化染色技术进行 诊断。
（二）病毒蛋白抗原检测
1. 酶联免疫技术（ELISA） 2. 免疫荧光标记技术（IF） 3. 放射免疫标记（SPRIA）
这些技术操作简便、特异性强、敏感性高。尤 其使用单克隆抗体标记技术可测到ng（10-9g） 至 pg（10-12g）水平的抗原或半抗原。其中由于放射 性核酸可引起放射性污染，已逐渐被非放射性标记 物（如地高辛等）所代替。
（一）形态学检查
1．电镜和免疫电镜检查
含有高浓度病毒颗粒（≥107颗粒/ml）的样品，可直 接应用电镜技术观察。对含低浓度病毒的样本可用免疫电 镜技术，或用超速离心机将标本离心进行电镜观察，以提 高检出率和特异性。电镜下不仅能观察病毒的形态学特征 ，还可测量病毒的大小。
2．光学显微镜检查
病理标本或含有脱落细胞及针吸细胞的标本检测病
病毒的分类及微生物检验
二、病毒分类系统和命名
（一）病毒分类一般系统 病毒分类系统将病毒分类为 科(families)、
属(genera)、种(species)等三级，或科、亚科、 属、种等四级。
根据病毒体的形态、基因结构和复制模式 等特征将病毒分为科和亚科；
在科或亚科中又根据理化特性和血清学特 性等分病毒属，属名后缀为—virus，属下分为 不同的病毒种。
（一）病毒的分离培养
1．细胞培养：原代培养细胞、 二倍体细胞株、传代细胞 系或株
标本接种后溶细胞型感染病毒可致细胞出现细胞病毒 效应（CPE），稳定感染病毒细胞并不出现明显病变，但 被感染的细胞膜表面会表达病毒蛋白等标志物，如血凝素 、神经氨酸酶、病毒特异性抗原等。 2．鸡胚培养和动物接种：
流感病毒的分离培养虽可用犬肾传代细胞（MDCK）, 但鸡胚接种仍是最常用的敏感而特异的方法。
不同病毒的CPE特征不同。因此，观察病毒所致 CPE的特点，根据细胞类型，细胞病变种类可对标本中感 染的病毒进行判定。
脊髓灰质炎病毒感染所致CPE
a. 未感染的vero细胞（一种非洲绿猴肾细胞系） b. 脊髓灰质炎病毒感染的vero细胞（显示细胞圆缩、分散 、
坏死、脱落）。
（2）红细胞吸附（hemadsorption）
病毒的分离与鉴定当然是病毒病原学诊断的金标准， 但因病毒是严格细胞内寄生，病毒分离必须
有活的细胞支持，故病毒的分离鉴定较困难。
二、病毒的分离与鉴定
以下情况需考虑进行病毒分离与鉴定： 1. 病程长且诊断困难的病人。 2. 怀疑为新现病毒（emergent virus）感染或已被消 灭
的病毒性疾病怀疑“死灰复燃”。 3. 为鉴别临床上具有相同症状的疾病。 4. 监测所用减毒活疫苗。 5. 用于病毒生物学性状的研究或流行病学调查等。
2．病毒感染性测定及病毒数量测定
（1）空斑形成试验（plaque formation） （2）50%组织细胞感染量 （3）感染复数
（Multiplicity of infection, MOI）
三、病毒感染的快速诊断
病毒的分离与鉴定是病毒诊断的金标准，
但临床实验室应用困难，而且费时，对临床病 毒感染症的诊治帮助不大。快速诊断主要指临 床标本绕过分离培养复杂而较长的过程，直接 在电镜下观察病毒颗粒，或直接检测标本中的 病毒成分和IgM抗体等，以作出快速和早期诊 断。
▪ 分类
可将病毒分为科、亚科和属 常用核酸类型分类 1 DNA virus (DNA病毒中有9科 ) 2 RNA virus ( ssRNA－ 7 科. ssRNA＋ 7 科. dsRNA 2科 ) 3 反转录病毒 (DNA和RNA反转录病毒中有2科) 依传播方式和感染部位分类 1 虫媒病毒 2 肠道病毒 3 呼吸道病毒 4 肝炎病毒 5 gM型特异抗体检测
检测病毒感染机体产生的特异性IgM，如 孕妇羊水中查到IgM型特异抗体可早期诊断某 些病毒引起的胎儿先天性感染；IgM抗体测定 有助于早期诊断，但感染机体产生IgM抗体有 明显个体差异。
2．免疫印迹试验（Western blot, WB）
某些病毒感染的诊断需持慎重认真的作法 。如AIDS和成人白血病等，在初筛试验阳性 后，尚需用WB法进行确认试验。
包膜上带有血凝素的病毒感染敏感细胞后， 血凝
素会出现于细胞膜表面，使感染细胞能与加入的红细胞结 合出现红细胞吸附现象，这是检测正粘病毒和副粘病毒的
间接指标。
（3）中和试验（neutralization test, NT）
用抗某病毒血清先与待测病毒悬液混合，经作用一定 时间后接种敏感细胞，培养后观察CPE或 红细胞吸附现 是否消失，即特异性抗体是否能 中和相应病毒的感染。 如用不同浓度的抗血清 进行中和试验，还可根据抗体的 效价对待测病毒 液进行半定量检测。
（四）检测病毒核酸
1．核酸电泳：正粘病毒属和呼肠病毒属的核酸是分节段 的，甲型流感病毒8个节段，轮状病毒11个节段。从 标本中直接提取轮状病毒的核酸，经聚丙烯酰胺凝胶 电泳（PAGE）和银染色后在凝胶板上清楚核酸条 带，结合临床情况可进行诊断。
2．核酸杂交：其原理是应用已知序列的核酸单链作为探 针（probe），探针预先用放射性核素（32P或131I）