生理实验常用试剂.

生理实验常用试剂

一、各种生理盐溶液的配制

生理盐溶液为代体液，用于维持离体组织、器官及细胞的正常生命活动。它必须具备下列条件：既渗透压与组织液相等；应含有组织、器官维持正常机能所必须的比例适宜的各种盐类离子；酸碱度应与血浆相同，并具有充分的缓冲能力；应含有氧气和营养物质。

动物的种类不同，体液的组成各异，渗透压也不一样。因此，作为代体液的生理盐溶液，在组成成分上要有相应的区别。如两栖类动物体液的渗透压相当于0.65%

NaCl溶液；哺乳类动物体液的渗透压则相当于0.9%NaCl溶液；海生动物体液的渗透压约相当于3.0%NaCl溶液。

对氧和营养物质的需要，不同的动物及组织也有差异，如两栖类动物的组织器官对氧和营养物质的需要程度明显低于哺乳动物。

由于研究的目的不同，生理盐溶液的组成成分也可作变动。生理实验中最常用的大体有三种：蛙心灌注多用任氏液：哺乳动物的实验多用乐氏液；而哺乳动物的离体小肠实验多用台氏液（表1）。

这些代体液不宜久置，一般临用时配制。为了方便可事先配好代体液所需的各种成分较浓的基础液（表2），使用时按所需量取基础液于量杯中，加蒸馏水到定量刻度即可。配制生理盐溶液时，容易起反应而沉淀的主要是钙离子，所以氯化钙应最后加。

表1. 常用生理盐溶液及其成分

表2.配置生理盐溶液所需的基础溶液及所加量

二、常用血液抗凝剂的配制及用法

（一）肝素

肝素的抗凝作用很强，常用来作为全身抗凝剂，尤其是进行动物循环方面的实验，肝素的应用更有其重要意义，纯的肝素每10mg能抗凝100ml血液。用于试管内抗凝时，一般可配成1%肝素生理盐水溶液。方法是取已配制好的1%肝素生理盐水溶液1mL加入试管内，加热100℃烘干，每管能抗凝5~10ml血液。用于动物全身抗凝时，一般剂量：兔10mg/kg 体重；狗5~10mg/Kg体重。

（二）枸橼酸钠

常配成3~5%水溶液，也可直接使用粉剂，3~5mg可抗凝1ml血液。枸橼酸钠可使血液中的钙形成难于离解的可溶性复合物，从而使血液不凝固。但抗凝作用较差，且碱性较强，不宜作化学检验用，可用于红细胞沉降速度测定等。生理学实验常用5~10%的水溶液，这一浓度只能用于体外抗凝。如果倒流入体内，会使动物发生枸橼酸钠休克。

（三）草酸钾

1~2mg草酸钾可抗凝1ml血液。如配成10%水溶液，每管加0.1ml，可使5~10ml血液不凝固。

三、生理实验中常用药品介绍

（一）乙酰胆碱

乙酰胆碱的作用与刺激胆碱能神经的效应相似，在体内易被胆碱酯酶所分解，所以作用时间短暂，如果同时应用毒扁豆碱，可以延长作用时间。乙酰胆碱在空气中极易潮解，应密闭保存，使用时临时配成溶液，生理实验常用乙酰胆碱浓度为0.001%。

（二）肾上腺素

肾上腺素的作用与刺激肾上腺素能神经的效应相似，见光易分解，应避光保存。如由无色变成红色，即失效。在生理实验中，常以盐酸肾上腺素注射液临时稀释成0.01%水溶液。

（三）阿托品

对抗乙酰胆碱，能解除迷走神经对组织器官的作用。用乙醚麻醉时，可阻抑气管粘液分泌，防止气管堵塞。一般使用浓度为1%的硫酸阿托品溶液。

（四）双氧水

双氧水的强氧化剂，能将血块、坏死组织等除去，但不稳定，作用时间很短。3%双氧水一般用于慢性手术中清洗创口；5%双氧水用于埋藏电极时，清洗颅骨和止血。由于双氧水的作用不稳定，容易失效，常以30%的浓度保存，临用时再稀释。

(五)促胰液素

促胰液素的制备方法简单易行，而且效果比较满意。常用预备实验动物（狗或猪）的十二指肠，不需购买。下面介绍两种制备方法。

1.粗制法

（1）在急性实验的狗或猪刚死后，马上截取它的十二指肠和上段空肠1m左右即可，用自来水缓慢冲洗，冲净肠内容物。用线结扎肠管的一端，向肠管内注入0.5%HCL约500ml，再结扎肠管另一端。静候0.5-1h后，将肠管里的盐酸倒入烧杯中，并用手轻轻地挤出残余的盐酸，此液内即含有促胰液素。将其煮沸后加入氢氧化钠溶液，使呈碱性反应（pH8-9），然后再慢慢地加入盐酸溶液，使略呈酸性反应（pH5-6），此时就有大量沉淀物析出，将此液体过滤，即得含有促胰液素的液体。如果不急用，可将此液放入冰箱保存，或者将从肠管里倒出的盐酸溶液放入冰箱内暂时保存，使用时再照上法制备。

（2）在急性实验的狗或猪刚死后，马上截取它的十二指肠和上段空肠1m左右，用自来水缓慢冲洗干净。顺肠管纵向剪开平铺在木版上，用解剖刀刮下全部粘膜放入研钵，再加细碎玻璃约5g和0.5%HCL10-15ml共同研磨。将研碎的稀浆倒入瓷杯中，再加

0.5%HCL100-150ml，煮沸10-15min，用10-20%NaOH溶液趁热中和，边加边用玻璃棒搅拌，不时的用pH试纸检查，待到中性时过滤即可。急性实验的促胰液素可以调至弱酸性（pH5-6）。已制好的促胰液素应保持在冰箱中。

2.精制法在急性实验的狗或猪刚死后，马上截取它的十二指肠和上段空肠1m左右，用自来水缓慢冲洗干净。轻轻刮取其粘膜，用相当于粘膜体积四倍的酒精来抽提，取上清夜加入0.1N CaCL2进行沉淀或皂化其中的脂肪，过滤后，将滤液在低温真空中蒸发，待蒸发到剩原来体液的1/4时，加入1%醋酸（每100ml加3ml醋酸）混匀。15min后用离心机沉淀。取出沉淀下来的胶性物，反复用无水乙醇抽提，弃取不能抽提的沉渣，然后浓缩乙醇提取液，用相当于此液四倍的丙酮沉淀，再取沉淀物用丙酮洗干，即可得到较纯净的促胰液素。这样制备的胰液素可以长期保存。

四、生理实验常用的骨骼肌松弛药

在生理实验中，骨骼肌松弛药主要用于需完全消除动物的躯体活动，以免影响实验观察，例如，某些应用微电极技术的急性实验，还有些实验需在不受麻醉药干扰而动物又能安静不动的条件下进行。前一类实验可在已用药物麻醉的基础上加用骨骼肌松弛药；后一类实验则先行短时程的麻醉以完成准备手术，待动物清醒，再用骨骼肌松弛药消除躯体的运动机能。由于所用药物剂量能使包括呼吸肌在内的全部骨骼肌麻痹，必须用人工呼吸机能呼吸。常用的有以下几种：

（一）氯化铜箭毒

易溶于水，溶液甚为稳定，可储存较长时间而不失效，并能耐受高压消毒。箭毒类属于非除极型骨骼肌松弛药，可与神经-肌肉接头突触后膜的胆碱能受体结合，阻断乙酰胆碱的作用而产生肌松效应。箭毒从胃肠吸收很慢，需用静脉（不能从口给药）给药，致骨骼肌的顺序，一般是眼肌、面肌最先，而后为颈肌（出现垂头）、四肢及背部肌肉，再后为腹壁及肋间肌，最后为膈肌，终致呼吸停止。其他骨骼肌松弛药作用顺序与此大致相同。

乙醚与箭毒有协同作用，两者合用时箭毒剂量减至常量的1/3即可。哺乳动物静脉注射常用剂量为1mg/kg体重。

（二）三碘季胺酚

易溶于水，溶液稳定，可久置，属非除极型骨骼肌松弛药，对神经-肌肉接头产生竞争性阻滞作用。它对迷走神经有选择性阻滞效应，可导致心动过速。在猫，能引起组织胺释放，并能抑制胆碱脂酶，使血压短暂下降。对狗无明显组织胺释放作用，不致引起血压下降，所以此药用于狗比箭毒安全。其肌松作用仅及箭毒的/5-1/7。哺乳动物静脉注射常用剂量

1-2mg/kg体重，也有比此剂量更高的。

（三）瑚珀酰胆碱

易溶于水，溶液不稳定，易分解，应用时临时配置。为除极型骨骼肌松弛药，其作用强度因动物种属而异。由于作用时引起肌肉除极，可出现束颤。它有烟碱样效应，能兴奋副交感神经而使胃肠运动增强，引起排尿和流涎。对支配心脏的植物性神经有刺激作用，可导致心率失常，甚至血压下降。大剂量对神经节有阻滞作用。此药作用时间短暂，肌肉活动在单次注射后10min左右即见恢复，故需要在相应时间内重复给药，或采取静脉滴注法以维持药效。哺乳动物常用剂量一般为1mg/kg体重，必要时加大剂量。

附录二常用实验动物部分生理参数

动物种类

红细胞

（1012/升）

白细胞

(千个/升)

红细胞

压积(%)

血红蛋白

(克/升)

心率

(次/分)

体温

（℃）

呼吸频率

（次/分）