生物药物的杂质与安全性检查

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2、硫酸盐的检查
? 原理： SO4 2-+ Ba2+ → BaSO 4↓ 白色（稀盐酸环境下） 与标准硫酸钾溶液比较浊度
? 方法与限量： 样品配成水溶液约 40ml (溶液如为碱性，可加盐 酸使成中性 )+稀盐酸2ml+25% 氯化钡溶液5ml, +水至50ml摇匀,与硫酸钾标准溶液（ 0.1mg/ml, 1.0-5.0ml/50ml ）对照管比较。
3）其它阴离子的干扰 I-、Br – 干扰的排除：①加入一定量的酸和过氧 化氢，加热煮沸，使其氧化为 I2和Br2挥发后， 溶液澄清后检查。②利用 AgI沉淀稳定，在氨溶 液中不溶解，而 AgBr、AgCl沉淀在氨溶液中溶 解的性质，除去 I- 的干扰。
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4）不溶于水的药物： ①加水使氯离子溶解后，过滤，取续滤液检查。 ②药物在稀乙醇或丙酮中有一定的溶解度，可 加稀乙醇或丙酮溶解后检查，但对照液也应用 稀乙醇或丙酮配。 5）更难使氯离子溶出的药物，如有机氯杂质， 可采取碱水解后检查。有的需有机破坏。
? 原理：同第一法
? 方法与限量：同第一法
? 注意点： 1）炽灼温度应控制在 500-600 ?C，否则重金属 将损失。 2）炽灼的残渣用硝酸加热处理时，要蒸干氧化 氮，否则亚硝酸会氧化硫化氢析出硫而影响比色。 3）蒸干后加盐酸使之成为氯化物，盐酸中带入 重金属的机会较多，应作空白检查。
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第三法：硫化钠法 适用于难溶于稀酸，但能溶于稀碱的药物，如 磺胺类、巴比妥类药物。
? 特殊杂质是指在药物的生产和贮藏过程中， 根据该药物的性质、生产方法和工艺条件， 有可能引入的杂质。如阿司匹林中的游离水 杨酸，盐酸普鲁卡因注射剂中对氨基苯甲酸， 肾上腺素中的肾上腺酮等。
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2)按其性质分类：信号杂质/有害杂质。 ? 信号杂质本身一般无害，但其限量的多
少可以反映出药物的纯度水平，如限量 过大，表明药物的纯度差，因此也称为 指示性杂质。氯化物、硫酸盐等就属于 信号杂质。
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? 方法与限量： 样品+ pH3.5醋酸盐缓冲液 2ml+水适量使成 25ml + 硫代乙酰胺试液 2ml（溶液总量为 27ml）,放置2min，与标准铅盐按同法制成的对 照液比较。
1）纳氏比色管应置于白纸背景下，自上而下观察。 2）标准铅溶液配法（10μg/ml硝酸铅，取 12ml, 浓度以 27ml 溶液中含 10 —20μg的铅）为防 止铅盐水解，配制时，加入 5ml硝酸，应在临用 前配制，使用不超过一周。 3）酸度以 pH3.5 为宜，此时PbS↓完全，酸度增 大，呈色变浅，酸度太大则不显色。若供试品呈 强酸性，则需碱化至中性，然后加入醋酸盐缓冲 液。
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1） 纳氏比色管应置于黑色背景下，自上而下观察。 2） 加入稀硝酸可加速生成 AgCl，浊度较好，另
外还可避免碳酸银，氧化银，磷酸银沉淀的干扰， 以每50ml中含稀硝酸 10ml为宜。 3） 温度以30-40?C浊度最大，室温亦可。 4） 比色前应在暗处放置 5min，光照将使 AgCl分 解，影响比色。 5） 氯化钠标准溶液用量 5.0-8.0ml/50ml （10μg/ml）时浊度区别最为明显
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3、注意点： 1）某些药物（葡萄糖、糊精、硫酸镁）在检 查过程中需加硝酸处理，则不加过硫酸铵，但 需煮沸除氧化氮（ NO、NO2），因硝酸中含 有亚硝酸，能与硫氰根离子作用，生成红色亚 硝酰硫氰化物，影响比色。 2）色调不一致时，可加正丁醇或异戊醇提取， 取醇层比色，（ ? Fe (SCN ) 6?3-在有机溶液中 溶解度大，易于浓缩）。
? 重金属、砷盐、氰化物等，对人体有毒 害，为有害杂质，在质量标准中必须严 格控制，以保证用药的安全。
3)按其结构分类：无机杂质/有机杂质。
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二、药物中杂质的限量检查
1、杂质限量检查
? 药物中所含杂质的最大允许量，叫做 杂质限量。 药物中杂质的检查，一般不要求准确测定其含量， 而只检查杂质的量是否超过一定的限量。这种杂 质检查的方法叫做 杂质的限量检查 （Limit test）。 在药品质量标准中杂质检查多数为 限量检查。
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3）锌粒和供试品中可能含有少量硫化物，在酸性 条件下产生硫化氢气体，与溴化汞的色斑，干扰 试验结果，故用醋酸铅棉花吸收硫化氢。 4）醋酸铅棉花的松紧程度应控制。 ? 注意点： 1）所生成的砷斑不稳定，应干燥、避光、立即 比较。 2）有机结合态的砷应破坏后检查（加酸或碱）， 但温度应低于 600?C。 3）供试品若为铁盐，能消耗碘化钾和氯化亚锡， 可加酸性氯化亚锡，使高铁离子还原后检查。
3）重金属干扰的排除：某些重金属将极大地干 扰测定（如汞、银、铜离子，形成络合物或沉 淀）。
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4）阴离子干扰的排除：氯离子、磷酸根离子、 硫酸根等离子，与 Fe3+ 形成无色配离子干扰检 查，可适当增加酸度和增加硫氰酸铵试液的量， 用正丁醇或异戊醇提取后比色。氯离子有影响， 加入过量的硫氰酸铵可使氯离子干扰排除；硫酸 根离子干扰较大，故不能在硫酸酸性条件下。 5）环状结构或不溶于水的药物需炽灼后检查。
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4、重金属的检查（影响药物稳定性， 有毒，以铅盐为代表检查）
第一法：硫代乙酰胺法 仅适用于供试液澄清、无色、对检查无干扰或经 处理后无干扰的药物。
? 原理： CH3CSNH2 + H2O → CH 3CONH2 + H2S H2S + Pb 2+→ PbS↓+ 2H +（pH3.5醋酸盐缓冲 液环境下）与标准铅溶液比较所呈颜色（黄色到 棕黑色）
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2、杂质限量检查方法
? 对照法（最常用的方法） ? 灵敏度法 ? 比较法
ຫໍສະໝຸດ Baidu? 3、杂质限量的表示方法
? 杂质限量就是指药物中所含杂质的最大允许量， 是通过与一定量的杂质标准溶液进行比较来确 定，杂质的最大允许量也就是杂质标准溶液的 浓度（C）与体积（ V）的乘积。杂质的限量通 常用百分之几或百万分之几（ ppm）来表示。
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? 注意点： 1）溶液不澄清应过滤后取续滤液检查，但纸中 含有氯离子，用含硝酸的蒸馏水洗滤纸，再过滤。
2）溶液有色：①使其褪色，但不影响氯离子的 测定（如检查高锰酸钾中的氯离子可先用乙醇褪 色）；②将供试液分成两份，一份加入硝酸银反 复沉淀，再在其中加入氯化钠标准溶液，配成对 照液；另一份作为供试液。
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? 药物的纯度（药用规格或药用纯度）主 要是从保证人民用药安全、有效考虑， 而化工产品及试剂纯度并不考虑杂质的 生理作用，仅从杂质可能引起的化学变 化，在使用上所产生的影响以及它们使 用的范围和目的来加以规定。所以，二 者不能相互代替使用。
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3、药物中杂质的主要来源
? 由生产中引入。如原料、中间体、副产物、 残留溶剂、器皿中金属等
第七章 生物药物的杂质 与安全性检查
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一、概述
1、杂质的概念： 药物中的杂质是指存在于药物中无治疗作用 或者影响药物的疗效和稳定性，甚至对人 体健康有害的一种物质。
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2、药物的纯度 ? 是指药物的纯净程度 ? 它反映了药物质量的优劣。 ? 事实上，许多杂质不可能完全除掉。只要将
其降低到最低限度，不妨碍药物的疗效和人 体的健康，不影响药物的稳定性以及调配处 理，可允许药物中有一定限量的杂质存在。 ? 纯净的药物是相对的，不纯的药物是绝对的。
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? 注意点： 1）供试品如有色，可采取外消色法（焦糖） , 使两管颜色相似或内消色法。 2）若溶液中有微量的高铁盐存在，在弱酸性 溶液中将氧化硫化氢析出硫，影响比色，可加 入维生素 C或盐酸羟胺，使 Fe3+→Fe2+，Fe2+ 不干扰测定。 3）若供试品为铁盐，可使其与盐酸络合为 HFeCl 62-,用乙醚除去再碱化后用氰化钾掩蔽微 量的铁盐，加硫化钠检查铅盐（酸性条件会破 坏络合物）。
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1） 标准铁溶液（用稀硫酸配硫酸铁铵 FeNH4(SO4)2·12H2O，防止水解）浓度以 50ml中含10-50? g为宜，吸收度与浓度呈良好 的线性关系，呈色梯度明显。 2） 酸度以50ml中含稀盐酸 4ml为宜，所生成 红色最深。另外稀盐酸可防止铁水解和避免弱 酸盐的干扰。 3） 过硫酸铵可使供试液中的 Fe2+ → Fe3+；防 止遇光光线敏使 感，? F易e 还(S原CN或)分6?3解-褪）色。（另?外Fe过(量SC的N过) 6硫?3酸铵还可增加配离子的稳定性，提高反应灵敏 度和消除氯化物与铁盐形成配合物的干扰 。
? 原理：同第一法
? 方法与限量： 标准铅溶液制备：精密量取标准铅溶液一定量， 用水或规定溶剂稀释成 10ml + pH3.5 醋酸盐 缓冲液2ml与硫代乙酰胺试液 1.0ml,放置 10min，用50ml注射器转移至滤器中滤过（滤 速为 1ml/min ），滤毕，取下滤膜，在滤纸上 干燥即得标准铅斑。另取供试液 10ml,同上操 作，与标准铅盐对照液比较。
? 贮藏过程中受外界因素的影响，引起药物 结构发生变化，水解、氧化、分解、聚合 等。（与药物的稳定性有关）
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4、药物中杂质的分类
1)按来源分类：一般杂质/特殊杂质。
? 一般杂质是指在自然界中分布较广泛，在多 种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质， 如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、 酸碱、水分等。共12项，重点是前5项。
7、溶液颜色检查法 8、易炭化物检查法
9、澄清度检查法
10、炽灼残渣检查法
11、干燥失重测定法
12、有机溶剂残留量测定法
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1、氯化物的检查
? 原理： Cl- +Ag+ → AgCl↓（稀硝酸环境下）与氯化钠 标准溶液比较浊度
? 方法与限量： 1）样品配成水溶液约 25ml (溶液如为碱性， 可加硝酸使成中性 )+稀硝酸10ml+硝酸银试液 1.0ml+ 水至 50ml 摇匀 , 2）与氯化钠标准溶液（10μg/ml,5.0 8.0μg/50ml）对照管比较。
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5、砷盐的检查
（一）、古蔡法（ Gutzeit ） ? 原理
金属锌与酸作用生成新生态的氢，与药物中微 量的砷反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞 试纸，产生黄色至棕色的砷斑。
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? 方法与限量： 1)标准砷斑用 2ml ，1μg/ml标准砷液相当于 2μg的砷，制备可得清晰的砷斑。 2)反应液中加入碘化钾和氯化亚锡能将 As5+ →As3+ ,碘化钾被As5+氧化为碘分子又被氯化 亚锡还原为碘离子，它与锌离子能形成稳定的 络合物，有利于砷化氢的不断生成。另外，碘 化钾和氯化亚锡还能抑制锑化氢的生成（锑化 氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑）。氯化亚 锡又可与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起 去极化作用，从而使氢气连续、均匀地发生。
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3、铁盐的检查（影响药物稳定性）
（一） 硫氰酸盐法（ chp 、usp 采用） ? 原理：
Fe3+ + 6SCN- → ? Fe (SCN ) 6?3- （稀盐酸环境 下）与标准铁溶液比较所呈颜色（红色） ? 方法与限量： 样品配成水溶液约 25ml +稀盐酸4ml+过硫酸 铵50mg, +水至35ml +30% 硫氰酸铵溶液 3ml+水至50ml,摇匀,与标准铁溶液（ 10? g/ml, 1.0-5.0ml/50ml ）对照管比较。
? 原理：S 2- + Pb 2+→ Pb S↓（在碱性条件下） 与标准铅溶液比较所呈颜色（黄色到棕黑色）
? 方法与限量： 取供试品+氢氧化钠试液 5ml和水20ml使溶解 +硫化钠试液 5滴，与标准铅溶液比较所呈颜色。
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第四法：微孔滤膜法 适用于含 2-5μg重金属杂质的检查（纳氏比色 管难以观察的）。
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4）不溶性的硫化物应作处理（加酸、碱或形成配 合物），使其可溶后检查。 5）配制供试品溶液时，如使用盐酸超过 1.0ml， 氨试液超过 2ml，或加入其它试剂进行处理者， 除另有规定外，对照液中应取同样同量的试剂置 瓷皿中蒸干，同上进行检查。
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第二法：炽灼破坏法 将供试品炽灼破坏后检查或取炽灼的残渣进行检 查的方法，适用于在水、乙醇中难溶的药物，或 能与重金属离子形成配合物的有机药物。
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4、杂质限量的计算
杂质限量 ?
杂质最大允许量 供试品量
?
100%
杂质限量
?
标准溶液的浓度 ? 标准溶液的体积 供试品量
?
100%
L ? C ?V ? 100% S
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第二节 一般杂质检查的原理与方法
一般杂质检查包括：
1、氯化物检查法
2、硫酸盐检查法
3、铁盐检查法
4、重金属检查法
5、砷盐检查法
6、酸碱度检查法