原花青素的分离纯化实验方案(修改)

原花青素的分离纯化

一、实验目的

对上一步提取的原花青素进行分离纯化，熟悉实验相关仪器设备及过程

二、仪器、材料及试剂

原花青素提取液、原花青素标准品、大孔树脂、75%乙醇、60%乙醇（作解吸剂）、50%乙醇（作洗脱剂）、盐酸（磷酸或乙酸）、分析天平、带筛板的玻璃柱（可无筛板，但是要脱脂棉或者用酸式滴定管改装（尝试性），同样需要脱脂棉）、紫外分光光度计（286nm）（可用可见光分光光度计（536nm）代替）、真空干燥箱（用真空泵+密封的抽滤瓶（尝试）代替）、PH计、铁架台、漏斗（小号）、小试管若干（不少于5支）、试管架、烧杯若干（不少于3个）、玻璃棒、滴管、锥形瓶

三、实验步骤

大孔树脂的预处理：

新购树脂含有未聚合单体、致孔剂、分散剂等残留的杂质成分，使用前必须加以处理。

将新购大孔树脂用乙醇浸泡24h，充分溶胀，取一定量湿法装柱，先用适当浓度的乙醇清洗至洗出液加等量蒸馏水无白色浑浊为止，再用蒸馏水洗至无醇味且水液澄清，备用。通过乙醇(或甲醇)与水交替反复洗脱，可除去树脂中的残留物，一般洗脱溶剂用量为树脂体积的2～3倍，交替洗脱2～3次，最终以水洗脱后即可使用。

大孔树脂动态饱和吸附曲线图的绘制：

1、将试验中需要用到的50%乙醇、60%乙醇的PH用盐酸调至5，在波长为286nm（如果采用可见光分光光度计则为536nm）测定原花青素提取液的吸光值（以75%的乙醇溶液为对照）

2、取一定量的大孔树脂于烧杯中缓慢倒入50%的乙醇溶液（同时搅拌），搅拌至可流动的糊状，取一支干净的带筛板的玻璃柱，将糊状大孔树脂加入玻璃柱，用手指轻轻敲打玻璃柱，使大孔树脂均匀铺在玻璃柱底部（用烧杯接住此时流出的液体），用50%的乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出液，直至与水混合不呈白色浑浊为止（乙醇：水一1：5）。然后以大量蒸馏水洗去乙醇（必须洗净乙醇，否则将影响吸附效果），待用。将样品液直接或拌入树脂中加到已处理好的大孔吸附树脂柱柱顶，拌样时样液和树脂的比例为1：（2～3）。（乙醇湿法装柱）

3、沿玻璃柱壁缓慢加入洗脱剂（50%的乙醇溶液，PH为5），使其覆盖在大孔树脂上方，厚度约为0.5cm，用滴管吸取原花青素提取液沿玻璃柱壁加入玻璃柱，再沿玻璃柱壁缓慢加入流动相（洗脱剂），使原花青素提取液流入大孔树脂床，并用试管在下方接收流出液

4、每5ml（大约）接收一份流出液，测定吸光值，重复此流程直至流出液的吸光值相近，根据所测数据绘制大孔树脂动态饱和吸附曲线图

饱和大孔树脂的解吸：

5、向玻璃柱缓慢加入60%的乙醇溶液（PH为５）进行解吸，用

锥形瓶接收流出液，当流出液为无色时停止接收

６、将接收的流出液（取少量用于测定吸光值）用真空干燥箱减压浓缩至干，得到固体粉状物，所得产物即为原花青素，并利用所测得的吸光值计算原花青素精制品的纯度

四、结果记录

１、大孔树脂动态饱和吸附曲线图

１.１、表格

１.２、吸附曲线图

２、原花青素精制品的纯度计算

假设原花青素标准品的纯度为100%，则相同浓度下的原花青素精制品溶液和原花青素标准品溶液所测得的吸光值之比则为原花青素精制品的纯度。即：

A（原花青素精制品）/A（原花青素标准品）×100%