少突胶质前体细胞缺血缺氧损伤模型的建立
脑缺氧缺血时少突胶质细胞损伤的机制
清除率是碱性尿时的!"#倍$尿流量大时对美金胺的清除率高%提示应用美金胺时$尽量避免能够改变尿液&’值的一些饮食习惯$可更好发挥其治疗效应$而减少副反应的发生()*+%综上所述$鉴于美金胺作为治疗帕金森病的首选药物已在欧洲广泛应用),余年$罕见副作用报道()-+$同时$美金胺作为低亲和力的非竞争性./01受体拮抗剂$又具有良好的神经保护作用$因此$对今后作为治疗新生儿缺氧缺血脑损伤无疑具有潜在的重要意义%但目前对美金胺的安全性和有效性的研究$仅限于成年动物实验和成人的临床实验$有关美金胺对新生动物脑缺氧缺血性损伤的保护作用及其可能的毒副作用$尚有待进一步研究%随着美金胺在新生动物脑缺氧缺血损伤方面的研究不断深入$有关美金胺用于新生儿缺氧缺血性脑损伤的临床治疗必将有所突破%(参考文献+()+122345678$9:;65<267=$/>22670$?@A B C ./0176:6&D E 7:;474:D 675F 4D 5E G 4G H I J <J G 5D 6K &76I I 5E G 5G 74D :J 2D J 76H L 6I 6G :6&;425:G 6J 7E G 6I (M +C N 7M=;47L 4:E 2$)O O O $)P Q R )S T )P )")U ,C(P +V E W 73J 2J W 1$X 5G I Y $8E <4G E 32J9$?@A B C Z 6H J :D 5E GE [6H 6L 44G H5G [47:D 5E G <\L 6L 4G D 5G 64G H /X ]#,)4[D 67[E :42:676<7425I :;6L 544G H76&67[J I 5E G5G74D (M +C 1:D 4.6J 7E :;57$P ,,,$)-P R ))S T )P #!")P O P C(U +N 76I 5G ^_$N 6G ^6Y 1$8E 226D D ‘M $?@A B C a [[6:D I E [L 6L 4G D 5G 6E G76:E L <5G 4G D74D./0176:6&D E 7I6K &76I I 6H 5G ’a X P O U :622I (M +C N 7M =;47L 4:E 2$)O O Q $))O R P S T )O *"P ,-C (-+N 24G &56H Y 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),万方数据要作用!少突胶质细胞的前体细胞主要来源于前脑脑室下区"#$%&’()!依据抗原表达*形态和功能+少突胶质细胞系可分为先祖细胞*早期少突胶质祖细胞*晚期少突胶质祖细胞*未成熟少突胶质细胞*成熟少突胶质细胞+共,个发育阶段!二*少突胶质细胞的缺氧缺血损伤(-少突胶质细胞成熟依赖的易损性.少突胶质细胞几乎和神经元一样对缺氧缺血敏感+其对缺氧缺血的易损性与细胞成熟程度有关!实验证实+晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞在缺血启动后迅速死亡+平均死亡时间和死亡百分数显著高于成熟少突胶质细胞"/01-11(&+对缺血的敏感性高于以往所检测的任何中枢神经系统细胞+包括神经元’2)!晚期少突胶质祖细胞对缺氧缺血的敏感性高于未成熟少突胶质细胞!这两种对缺氧缺血最敏感的少突胶质细胞是胚胎后期少突胶质细胞系的主要组成部分!早期少突胶质祖细胞和成熟少突胶质细胞对缺氧缺血较为耐受’3)!2-少突胶质细胞缺氧缺血损伤.在大鼠缺氧缺血模型中+#$%的神经干细胞及少突胶质祖细胞死亡+造成慢性白质少突胶质细胞衰竭+髓鞘形成不良!顶叶皮层*皮质下白质*脑室周围白质*胼胝体等部位均有明显少突胶质细胞死亡+随后胼胝体变薄+脑室扩大+增生的星形胶质细胞取代脑室周围白质中少突胶质细胞’(+34,)!细胞死亡的电镜分析显示+缺氧缺血后56以坏死为主+54256脑室周围白质受损少突胶质细胞由早期坏死过渡到具有坏死*凋亡两种形态特征的混合性细胞死亡+再到经典的凋亡’5)!缺氧缺血后(26#$%中以混合性细胞死亡为主+至256发现典型的凋亡细胞’()!但有学者发现缺氧缺血后3456缺血侧#$%*胼胝体中凋亡细胞高于对侧’,)!损伤区周围有少突胶质细胞反应性增生+可能参与修复过程’3)!三*少突胶质细胞缺氧缺血损伤机制(-少突胶质细胞兴奋毒性损伤.兴奋毒性指以谷氨酸受体"789:;&为主的兴奋性神经递质受体过度活化引起的神经细胞死亡!少突胶质细胞表达的789:;主要是非<=>?@789:;"?=A?和B C D E C F G受体&!缺氧缺血时轴突和神经胶质释放谷氨酸"789&!通常认为+从神经末梢释放出789清除和失活的唯一途径是通过位于突触前膜和神经胶质细胞膜上的兴奋性氨基酸转运体"H??I&的摄取而实现的!H??I 对789的摄取顺<C J浓度梯度进行+是<C J依赖的耗能过程!缺氧缺血使能量供应受阻+加上强烈去极化反应使脑内<C J浓度急剧增高+最终可造成789顺胞内<C J逆向转运+从胞内排向胞外’2)!局部789浓度显著增加使?=A?KB C D E C F G受体过度活化介导L C2J内流+导致细胞内L C2J超载+同时消耗谷胱苷肽并活化L@M9E<@F G N O D E C8B D E C;G"M<P&*L C;Q C;G@3*钙激活蛋白酶引起少突胶质细胞死亡’R)!兴奋毒性可同时引起细胞坏死和凋亡!2-氧自由基导致的少突胶质细胞损伤.脑缺血产生大量氧自由基"S T:&并造成少突胶质细胞损伤!少突胶质细胞对S T:损伤高度敏感!与星形胶质细胞和神经元相比+少突胶质细胞中含有丰富的铁和铁蛋白+而还原型谷胱苷肽含量和谷胱甘肽过氧化物酶活性低!一方面少突胶质细胞中的铁蛋白和转铁蛋白可作为铁螯合剂和抗氧化物保护细胞U另一方面+少突胶质细胞缺氧缺血+促使铁蛋白和转铁蛋白释放铁+通过V G E F W E反应和X C Y G N@ZG D;;反应产生大量S T:+引发脂质过氧化"[A S&!还原型谷胱苷肽在S T:清除中起关键性作用!过氧化物由谷胱苷肽过氧化物酶清除’\+])!由于少突胶质细胞内铁含量高+清除自由基能力弱且显著依赖于氧化磷酸化+少突胶质细胞更易受到氧化应激损伤!由此引发的链式脂质过氧化反应损伤细胞膜和线粒体膜+而产生的脂质过氧化物和细胞毒性副产品5@6^_N W‘^E W E G E C8等+对轴突和少突胶质细胞也具有毒性!X W88G E;a W N F6等认为氧化应激还可能损伤线粒体><?+从而增加L^F@b释放+激活b C;Q C;G@ c+启动凋亡反应’c)!3-线粒体损伤与少突胶质细胞损伤.缺血条件下+胞浆内L C2J浓度升高+线粒体从胞浆摄取L C2J+以避免胞浆L C2J 过高造成细胞损害!高浓度L C2J可损害线粒体功能+使氧化磷酸化效率降低+?I A合成减少+而线粒体钙释放过程是耗能过程!线粒体呼吸功能障碍和?I A耗竭加速和促进L C2J 浓度增加并活化L C2J依赖性蛋白水解酶系统如b C8Q C D E;! L C8Q C D E;可激活b C;Q C;G;+相反b C;Q C;G;可通过剪切内源性蛋白水解酶抑制剂b C8Q C;F C F D E来激活b C8Q C D E;!两类蛋白酶都能引起线粒体渗透性转运的发生并灭活L C2J顺序性运转系统+从而循环增加L C2J浓度和活化L C2J依赖性蛋白水解酶!同时+L C2J过量*氧化应激使线粒体通透性改变"A I&+发生不可逆性损伤+能量来源完全丧失+线粒体膜间腔内的多种潜在有害蛋白释放至胞浆+包括b C;Q C;G前体+b C;Q C;G激活剂L d F@b+具有裂解><?能力的凋亡诱导因子"?e T&*核酸内切酶7等+诱导细胞死亡U线粒体释放其积聚的L C2J+使脑浆L C2J剧烈升高+激活胞浆内各种蛋白水解酶和磷酯酶+促使细胞死亡’c+(1)!5-b C;Q C;G;与少突胶质细胞损伤.b C;Q C;G;是一组天门冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶+属e L H蛋白酶家族+被激活后发生连续的级朕反应+导致凋亡发生!缺氧后少突胶质细胞中有b C;Q C;G@3活化+但其活化程度低于神经元!肌动蛋白"?b F D E&是一种主要的细胞骨架蛋白+经b C;Q C;G@3介导裂解为肌动蛋白碎片"V N C b F D E&+缺氧缺血后大量固缩晚期少突胶质祖细胞有明显V N C b F D E标记+提示b C;Q C;G@3参与少突胶质细胞缺氧缺血损伤’3)!b C;Q C;G@((是b C;Q C;G@(和b C;Q C;G@3活化的一种启始因子+在少突胶质细胞缺氧缺血损伤中起着关键的作用’(()!,-小胶质细胞*巨噬细胞活化与少突胶质细胞损伤.脑缺氧缺血后+小胶质细胞*巨噬细胞被激活+它们通过释放一系列潜在的神经毒性物质和炎性因子+如S T:*789*一氧化氮"<S&*肿瘤坏死因于@f"I<T@f&等+造成少突胶质细胞损伤!同时+活化的小胶质细胞吞噬死亡神经细胞残骸和变性突触+分泌多种神经营养因子+并表达细胞调亡的负调控因子Y b(@2+发挥神经保护作用’,+(2)!脑缺血后小胶质细胞*巨噬细胞活化的确切作用尚待进一步研究!g(3]g实用儿科临床杂志2113年(1月第(]卷第(1期hi j j k l k m n/o p m q r s+t u r v w o s2113+x v k-(]yv-(1万方数据!"少突胶质细胞成熟依赖的易损性机制#前面已提到$不同发育阶段的少突胶质细胞对缺氧缺血的易损性不同%晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞最为易损%这种成熟依赖的易损性机制还不太清楚%近来&’(’)*(+等研究发现$,-.,受体的/0*123/0*14亚单位表达在少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞中短暂上调可能与此有关%,-.,受体在非5-6,受体介导的兴奋毒性损伤中起主要作用%但并非所有,-.,受体均能介导7’89内流%/0*1: ;4是组成,-.,受体的4种亚单位%缺乏/0*18亚单位的,-.,受体对7’89具有通透性%/0*1:在各阶段的少突胶质细胞中表达极低</0*18表达稳定</0*12在早期少突胶质祖细胞中发达最高$随后逐渐下降</0*14在少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞中表达最高$发育为成熟少突胶质细胞后逐渐降低%离体培养的各期少突胶质细胞经/0*18抗体处理后$晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞中/0*123/0*14剩余最多%如果,-.,受体的各种亚单位随机组合$在晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞中形成无/0*18亚单位受体的数量最多%此外$少突胶质细胞中含有/1=.$帮助/0*18和/0*12在,-.,受体中组装%因此$/0*14对于7’89通透的,-.,受体可能更为重要%实验发现$早期少突胶质祖细胞,-.,受体的7’89电导高于晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞$但由于后者浆膜表面积约为前者8倍$通过,-.,受体的总7’89流明显高于前者%由于,-.,受体的/0*123/0*14亚单位表达短暂上调和较高的总7’89流$晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞对缺氧缺血更具易损性%而先祖细胞的,-.,受体几乎均表达/0*18亚单位$对7’89不通透%与少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞相比$成熟少突胶质细胞中/0*123/0*14表达下降$,-.,受体7’89电导明显降低$所以对缺氧缺血更为耐受>:2?%此外$离体实验证实$少突胶质细胞对氧化应激的易损性也是成熟依赖的>:4?%总之$缺氧缺血后通过兴奋毒性3氧化应激及一系列级联反应造成少突胶质细胞死亡%阐明脑缺氧缺血后少突胶质细胞损伤机制将为脑缺氧缺血相关疾病的治疗提供新思路%四3药物治疗脑缺氧缺血实验显示$非@5-6,受体拮抗剂75A B或5C A B3谷氨酸逆向转运抑制剂6D,3钙离子拮抗剂3自由基清除剂3E’F G’F H@2抑制剂6I J6@7K L3E’0G’+M抑制剂.6:N O!O!等可明显减轻脑缺氧缺血后少突胶质细胞的损伤$离体实验显示去铁敏可减轻过氧化氢引起的少突胶质细胞损伤>8$!$:N?%>参考文献?>:?P H Q+F R M S T$1R U V F U H+M1.$1R W’M(R-X$Y Z[\"K)G R]+’^+F E V H W+’_H G0H U H FU V H‘’UG H‘+M’U’0F*a Q H M U‘+E*0’‘b R M H R cR0+d R_H M_‘R E)U HG‘R d H M+U R‘F’M_M H*‘’0F U H W E H00F>X?"6H Q5H*‘R F E+$8O O:$82e2f#824;84g">8?h H‘M1$-R i00H‘&"1’G+_+F E V H W+EE H00_H’U V+M+W W’U*‘H R0+d R_H M_‘R E)U H F#’c’U’0d0*U’W’U H‘H0H’F H c H H_a’E(0R R G>X?"X5H*‘R F E+$8O O O$8O e:f#24;48">2?C’E(S,$K’MC K$P*R5P$Y Z[\"S H0H E U+Q H Q*0M H‘’a+0+U)R c0’U H R0+d R_H M_‘R E)U H G‘R d H M+U R‘F U R V)G R]+’@+F E V H W+’>X?"X5H*‘R F E+$8O O8$88e8f#4N N;4!2">4?5H F F X D$1R W’M(R-X$1R U V F U H+M1.$Y Z[\".H‘+M’U’0V)G R]+’@ +F E V H W+’+M_*E H F’G R G U R U+E’M_H]E+U R U R]+E_H’U V R cG H‘+Q H M U‘+E*0’‘j V+U H W’U U H‘R0+d R_H M_‘R E)U H G‘R d H M+U R‘F>X?"6H Q5H*‘R F E+$8O O:$82e2f#8O2;8O k">N?7’+l$.’M dm$B+’Rh$Y Z[\"7V‘R M+E+F E V H W+’G‘H c H‘H M U+’00) E’*F 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PEDIATRICS年，卷(期)：2003,18(10)被引用次数：10次参考文献(14条)1.Levison SW;Rothstein RP;Romanko MJ Hypoxia/ischemia depletes the rat perinatal subventricular zone of oligodendrocyte progenitors and neural stem cells[外文期刊] 2001(03)2.Fern R;Mller T Rapid ischemic cell death in immature oligodendrocytes:a fatal glutamate release feedback loop 2000(01)3.Back SA;Han BH;Luo NL Selective vulnerability of late oligodendrocyte progenitors to hypoxia-ischemia 2002(02)4.Ness JK;Romanko MJ;Rothstein RP Perinatal hypoxia-ischemia induces apoptotic and excitotoxic death of periventricular white matter oligodendrocyte progenitors[外文期刊] 2001(03)5.Cai Z;Pang Y;Xiao F Chronic ischemia preferentially causes white matter injury in neonatal rat brain[外文期刊] 2001(01)6.Liu HN;Giasson BI;Mushynski WE AMPA receptor-mediated toxicity in oligodendrocyte progenitors involves free radical generation and activation of JNK,calpain and caspase 3[外文期刊] 2002(02)7.Juurlink BH Response of glial cells to ischemia:roles of reactive.oxygen species and glutathione [外文期刊] 1997(02)8.Juurlink BH;Thorbume SK;Hertz L Peroxide-scavenging deficit underlies oligodendrocyte susceptibility to oxidative stress[外文期刊] 1998(04)9.Hollensworth SB;Shen C;Sim JE Glial cell type-specific responses to menadione-induced oxidative stress[外文期刊] 2000(08)10.Ravagnan L;Roumier T;Kroemer G Mitochondria,the killer organelles and their weapons[外文期刊] 2002(02)11.Shibata M;Hisahara S;Hara H Caspases determine the vulnerability of oligodendrocytes in the ischemic brain[外文期刊] 2000(05)12.Jamin N;Junier MP;Grannec G Two temporal stages of oligodendrogliaI response to excitotoxic lesion in the gray matter of the adult rat brain[外文期刊] 2001(1)13.Itoh T;Beesley J;Itoh A AMPA glutamate receptor-mediated calcium signaling is transiently enhanced during development of oligodendrocytes[外文期刊] 2002(02)14.Back SA;Gan X;Li Y Maturation-dependent vulnerability of oligodendrocytes to oxidative stress-induced death caused by glutathione depletion 1998(16)本文读者也读过(10条)1.王梅.王友群缺血引发的脑损伤发病学机理[期刊论文]-中国实用医药2008,3(25)2.卓名.陈鸿莲.蔡娜丽.张振英.叶国杰.ZHUO Ming.CHEN Hong-lian.CAI Na-li.ZHANG Zhen-ying.YE Guo-jie 黄芪注射液对新生儿缺氧缺血性脑病的临床与免疫学机制研究[期刊论文]-中国中西医结合急救杂志2008,15(1)3.孙莉.张昱.邹昕颖.金涛.吴江.姚丽芬慢性前脑缺血致痴呆大鼠皮质及皮质下白质区病理学变化的对比研究[期刊论文]-中风与神经疾病杂志2004,21(5)4.陈春富.郭述苏脑缺血缺氧后少突胶质细胞损伤[期刊论文]-国外医学(脑血管疾病分册)2002,10(2)5.王斌.李敏.侯建平.张恩户基于多靶标调控策略的中医药防治脑缺血炎性损伤机制研究[会议论文]-20096.汪长胜.霍正禄.杨瑞和脑白质选择性缺血损伤的机制[期刊论文]-国外医学(脑血管疾病分册)2001,9(6)7.赵金辉.赵娟.刘敬.贺继雯.王琪.ZHAO Jin-hui.ZHAO Juan.LIU Jing.HE Ji-wen.WANG Qi血浆渗透压、血气、血糖变化与早产儿脑室周围-脑室内出血的相关性[期刊论文]-实用儿科临床杂志2005,20(2)8.汪长胜.霍正禄.杨瑞和脑缺血后白质保护的研究进展[期刊论文]-国外医学(脑血管疾病分册)2002,10(1)9.唐康.张均田脑缺血损伤机制和治疗策略研究进展[期刊论文]-中国新药杂志2000,9(12)10.常明则.王新来.吴海琴.赵英贤慢性脑缺血痴呆大鼠额叶细胞凋亡的研究[期刊论文]-疑难病杂志2008,7(11)引证文献(10条)1.马金凤.林宏华.刘维民.吴成.阮珊三早产儿脑室周围-脑室内出血的临床相关因素分析[期刊论文]-安徽医科大学学报 2009(5)2.徐翠琼.张奇.邵红.费世暖.黄佩脑活素及血活素治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床观察[期刊论文]-时珍国医国药 2004(9)3.黄金芳.梁凤华.彭间英早产儿脑室内出血原因分析及护理[期刊论文]-中国保健营养（中旬刊） 2012(6)4.闫晋.贾雁平.陈欣早产儿脑室内出血相关因素分析及护理[期刊论文]-中国实用护理杂志 2009(24)5.潘广赉.杨明.莫坤梅.李文仲床旁彩超对早产儿脑室内出血的诊断价值[期刊论文]-齐齐哈尔医学院学报2009(10)6.卢昌福早产儿室内出血的临床分析及防治[期刊论文]-中国医药导报 2008(20)7.李晋辉.母得志.李德渊.夏斌.熊英早产儿脑室内出血的相关因素[期刊论文]-实用儿科临床杂志 2007(2)8.谢学军.杨红.何宇.王毅.肖丹补肾活血中药对糖尿病大鼠视路胶质纤维酸性蛋白和髓鞘碱性蛋白表达的影响[期刊论文]-中国中医眼科杂志 2007(5)9.杨友.陈惠金.钱龙华.蒋明华.陈冠仪血糖水平对缺氧缺血新生大鼠脑内葡萄糖转运蛋白1合成的影响[期刊论文]-实用儿科临床杂志 2004(2)10.彭小明.高喜容.孙正香.胡月圆.张榕早产儿重度脑室周围-脑室内出血临床高危因素分析[期刊论文]-中国新生儿科杂志 2011(6)引用本文格式：王丽雁.赵聪敏脑缺氧缺血时少突胶质细胞损伤的机制[期刊论文]-实用儿科临床杂志 2003(10)。
新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定
新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定【摘要】［目的］探讨新生（spraguedaley,SD）大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况及培养分离，以获得纯化的少突胶质前体细胞，为今后细胞移植治疗研究提供良好的种子细胞。
［方法］出生48hSD大鼠取大脑皮层进行混合胶质细胞的体外培养，原代培养第9～10d时采用水平振荡、差速贴壁的方法分离、纯化少突胶质前体细胞，继续用定向培养基传代培养。
相差显微镜观察少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况，免疫细胞化学技术进行细胞鉴定。
［结果］混合胶质细胞原代培养第9～10d时出现明显的细胞分层，少突胶质前体细胞散布于单层的星形胶质细胞表面，胞体呈椭圆形或圆形，具有典型的双极突起，少数呈三极突起。
经振荡分离后少突胶质前体细胞纯度达95％，少突胶质细胞特异性标记lig2反应阳性，胶质纤维酸性蛋白抗体反应阴性。
［结论］新生SD大鼠大脑皮层原代培养中少突胶质前体细胞能够维持在未成熟阶段，细胞分层后通过振荡法及差速贴壁法可以获得较高纯度的少突胶质前体细胞。
【关键词】少突胶质前体细胞;细胞培养；脱髓鞘化；脊髓损伤Keyrds：ligdendrytepreursrell;ellulture;deyelinatin;spinalrdinjury脊髓损伤是一种常见的中枢神经系统损伤，可以造成患者严重的神经功能损害。
目前，临床上尚无有效办法治疗脊髓损伤。
随着研究深入，人们对于脊髓损伤的病理过程有了更进一步的认识。
脊髓损伤不仅导致神经元丢失，同时还造成大量少突胶质细胞的死亡，从而引起残留神经轴突的脱髓鞘改变，进一步影响了脊髓神经功能的恢复。
近来不少研究显示通过髓鞘形成细胞移植治疗脊髓损伤，有利于脱髓鞘轴突的再髓鞘化，促进损伤脊髓的神经功能恢复［1,2］。
研究表明，少突胶质细胞不仅形成髓鞘包绕轴突，同时它还起着为其他神经细胞提供营养因子、促进轴突生长等作用［3］。
此外，少突胶质前体细胞是处于分化早期阶段的未成熟细胞，既能够定向分化为成熟少突胶质细胞，同时又具有一定的增殖与迁移能力［4］，更加适合于细胞移植治疗。
抗氧化系统发育与少突胶质细胞损伤作用的研究进展
而 导致 Ｏ Ｌ受 损 ， 引起 各 种 神 经 发 育类 疾 病 的 发 生 。
为 了更好 地认 识该 类疾 病 的发 病 机制 ， 研究 Ｏ Ｌ的损 伤 机制 就具 有极其 重要 的意 义 。
一
ｉ ｍ ｍａ ｔ ｕ ｒ ｅ Ｏ Ｌ重 叠分 布于脑 室周 围 区域 ， 因此 ， 该 时 期
负责 清除 Ｈ Ｏ ： ， Ｇ Ｓ Ｈ —Ｐ ｘ同 时 清 除 Ｈ Ｏ ：和过 氧化
Ｏ Ｌ起 源 于胚胎 神 经 管 的 神 经上 皮 细 胞 ， 主要 功
能是 在 中枢 神经 系统 中包绕 轴 突 、 形成 绝缘 的髓 鞘结 构、 协 助神 经 电信 号 的跳 跃 式快 速 传 递 ， 维 持 和保 护
突 胶质 细胞 （ ｉ ｍ ｍａ ｔ ｕ ｒ ｅ Ｏ Ｌ ） 、 成 熟 少 突胶 质 细 胞 （ ｍａ —
ｔ ｕ ｒ ｅ Ｏ Ｌ ） 这 ４个 发 育 阶段 。 然 而 不 同 发 育 阶 段 抗
氧 化能力 差别 很大 ， 通过 对 不 同发 育 阶段 Ｏ Ｌ的特 异 性 细胞表 面抗 原进行 分析 ， 发 现晚期 少 突胶质前 体 细 胞或 ｐ ｒ ｅ—Ｏ Ｌ是 打 破 抗 氧 化 系 统 平 衡 的 主 要 靶 细
体外少突胶质细胞培养的新方法
体外少突胶质细胞培养的新方法翁超;丁曼;樊尚华;董红娟;卢祖能【摘要】目的探讨小鼠鼠婴大脑皮质体外少突胶质细胞培养的新方法.方法取C57/BL6新生小鼠P0～P2(出生后0～2天)的大脑皮质,accummax室温消化10min,然后用含10％ FBS的DMEM/F-12高糖培养基体外培养,培养至第7天时,运用巴氏管吹打,从混合培养的细胞中分离纯化少突胶质前体细胞,然后加入促分化培养基促使少突胶质前体细胞分化发育成熟,行细胞免疫荧光进行鉴定.结果少突胶质前体细胞纯度较高,达到93.3％左右.加入促分化培养基后,少突胶质前体细胞可快速分化发育成熟.结论该体外少突胶质细胞培养方法较简单,细胞纯度及产量高,对临床脱髓鞘疾病的研究具有很大的应用价值.%Objective To explore a new method for oligodendrocyte cell culture from neonatal mouse cerebral cortex in vitro.Methods We selected P0-P2 (0-2 days after birth) cerebral cortex from C57/BL6 neonatal mice,and digested the tissue at room temperature for 10 minutes through accummax,then used DMEM/F-12 medium with high glucose containing 10％ FBS to culture the mixed cells in vitro.After the celles being cultured for 7 days,we used pap tube for pipetting,and purified oligodendrocyte precursor cell (OPCs) from mixed cultured cells.Finally,with oligodendrocyte differentiation medium to promote oligodendrocyte differentiation and maturation,cell lines were identified by immunofluorescence.Results Our approach produced a high yield of purified OPCs,which was about 93.3％.The oligodendrocyte differentiation medium promoted oligodendrocyte differentiation and maturation quickly,when it was added.Conclusion The new method foroligodendrocyte cell culture in vitro is relatively simple with high purity and can produce a high yield of OPCs,which is of great value for clinical demyelinated diseases.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2017(046)004【总页数】4页(P48-51)【关键词】少突胶质细胞前体细胞;纯化;增殖;分化【作者】翁超;丁曼;樊尚华;董红娟;卢祖能【作者单位】430060 武汉大学人民医院神经内科;430060 武汉大学人民医院神经内科;430060 武汉大学人民医院神经内科;430060 武汉大学人民医院神经内科;430060 武汉大学人民医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R74;R3少突胶质细胞(oligodendrocyte, OL)是中枢神经系统(central nervous system, CNS)髓鞘形成细胞。
细胞缺氧复氧模型的建立方法与应用
3、统计分析
3、统计分析
运用统计分析方法对实验结果进行处理，可以得出更准确的结论。例如，可 以通过t检验或方差分析等方法，比较各组之间的差异。同时，可以通过相关分 析和回归分析等手段，探讨缺氧复氧模型中各因素之间的相互关系和影响程度。
三、应用领域
1、神经科学
1、神经科学
细胞缺氧复氧模型在神经科学领域具有广泛的应用价值。例如，可以用于研 究脑缺血和脑梗塞等疾病的发生机制和治疗方法。通过模拟缺氧和再灌注过程， 探讨神经细胞的损伤和修复机制，为临床治疗提供理论依据。
四、未来展望
在此基础上，推进细胞缺氧复氧模型在药物研发、疾病治疗等方面的应用， 为人类健康事业做出更大的贡献。
参考内容
摘要
摘要
细胞缺氧复氧模型是一种用于研究细胞在缺氧条件下代谢和功能变化的实验 模型。近年来，该模型在多个领域如医学、工业和基础研究中得到了广泛应用。 本次演示将综述细胞缺氧复氧模型建立方法的最新研究进展，包括模型建立、应 用、存在的问题和未来发展方向。
四、未来展望
四、未来展望
随着科技的不断进步，细胞缺氧复氧模型将在更多领域得到应用，同时也会 面临一些挑战。未来，需要进一步探索细胞缺氧复氧模型的分子机制，深入研究 不同因素对细胞的影响，以便更好地应用于临床实践。此外，需要加强跨学科合 作，综合运用多学科知识，提高模型的可重复性和可靠性。应注重动物实验和临 床试验的研究设计，确保实验结果的准确性和可靠性。
一、建立细胞缺氧复氧模型
1、细胞培养
1、细胞培养
细胞缺氧复氧模型可以通过细胞培养的方法建立。首先，选取适当的细胞类 型进行培养，例如神经细胞、肿瘤细胞等。在培养过程中，通过控制培养条件的 氧气浓度和温度等因素，模拟缺氧环境。细胞在缺氧环境下生存一定时间后，再 恢复正常的氧供应，观察细胞的变化。
槲皮素保护少突胶质前体细胞缺氧低糖损伤的体外研究
３ ８・ ３
中国药理 学通报
Ｃ ｉ ｓ Ｐ ａｍ ｃｌ ｉ ｌ ｕｌｉ ０ １Ｍａ；７ ３ ：３ ４ ｈｎ ｅ ｈ ｒ ａｏ ｇｃ ｌｔ ２ １ ｒ２ （ ）３ ８— １ ｅ ｏ ａ Ｂ ｅｎ
槲皮素保护少突胶质前体细胞缺氧低糖损伤的体外研究
王 兴启 ， 刘 轩 ， 丽华 ， 红丽 ， 杨 于 翟 ， 刘 静， 姚瑞 芹
化 病 。 （ ｅｉｅｔｃ ｌ ｕ ｏ ｌｃ ， Ｖ ） Ｐ ｓ 。 ｐ ｒ ｎｒ ｕａ ｌ ｋｍａ ｉ Ｐ Ｌ 。Ｏ Ｃ ｖ ｉ ｒｅ ａａ
受 损和 神 经纤 维 脱 髓 鞘 是 Ｐ Ｌ的最 大特 征 。 中枢 Ｖ 神 经 系统能 够通过 诱 导 Ｏ Ｃ 分 化 为成 熟 的 少 突胶 Ｐｓ 质细胞 进 行 髓 鞘 再 生 。 因此 ， 护 和 减 少 Ｏ Ｃ 损 保 Ｐｓ
２ １０ ） ２ ０ ２ （ 州医学院神经 生物 学教研 室， 徐 江苏 徐 州
中 国 图书 分 类 号 ： 一 ２ １ ８． ； ３２８ ；３ ９２ ； ７３ ３ Ｒ３ ；２ ４ １Ｒ ２． １Ｒ ２ ．４ Ｒ ４ ．１ ３ １
护效 果 。
文献标识码 ： 文章编号 ：０ １ ９ ８ ２ １ ）３— ３ ８一 ４ Ａ １０ —１７ （０ １０ ０ ３ Ｏ 摘要 ： 目的 观 察槲 皮 素 （ ｕｒｅ ｎ Ｑ Ｅ） Ｎ ：： 联合 ｑｅｃｔ ， Ｕ 对 ａＳ Ｏ ｉ
长 因子 和重组 人 血小 板 衍 化 生长 因子 均 购 于 Ｇｂ ｏ ｉｃ
槲皮素对 Ｏ Ｃ 缺氧低糖并 Ｕ
育 和预孵育对 Ｏ Ｃ 的保护效 果。结果 随 Ｏ Ｃ 损伤时 间 Ｐｓ Ｐｓ
延长细胞 凋亡数 量增多 ， Ｑ Ｅ能提 高 Ｏ Ｃ 相 对存 活率 、 而 Ｕ Ｐｓ 降低 Ｌ Ｈ漏 出率并改善 其形 态学变 化 ， Ｄ 其神经 保护作 用有
少突胶质前体细胞的培养、鉴定及巨噬细胞移动抑制因子对其促增殖作用
少突胶质细胞是中枢神经系统的髓鞘形成细胞，它的主要功能是产生髓鞘包绕神经轴突，维持神经冲动沿轴突跳跃性传导；另外它还分泌多种神经营养因子，支持神经元的生长与存活[1]。
少突胶质前体细胞（oligodendrocyte pre-cursor cells，OPCs）是处于分化早期阶段的未成熟细胞，具有良好的增殖能力，能在体内增殖、迁移，最后分化为成熟少突胶质细胞并为髓鞘形成发挥重要作用。
高纯度OPCs 的制备、培养是一切研究工作的基础，目前，国内外对大鼠OPCs的培养报道很多，有关小鼠OPCs的培养方法及研究报道还比较少，本文参照国内外文献报道的新生大鼠OPCs的培养方法[2-3]，探索小鼠OPCs的培养及鉴定，并研究重组巨噬细胞移动抑制因子（rMIF）对其增殖活性的影响，为进一步深入研究其发育、分化以及移植治疗脊髓损伤等奠定基础。
少突胶质前体细胞的培养、鉴定及巨噬细胞移动抑制因子对其促增殖作用研究段朝霞1，2张洁元1，2陈魁君1，2王建民1、2李兵仓1，21.创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室，重庆400042；2.第三军医大学野战外科研究所六室，重庆400042[摘要]目的少突胶质细胞是中枢神经系统的重要组成部分。
本文探讨获取小鼠高纯度少突胶质前体细胞系的培养及鉴定方法，以及巨噬细胞移动抑制因子（MIF）对其增殖活性的调节。
方法取新生（0~2d）C57B6小鼠的大脑皮层进行混合胶质细胞培养，在9~10d时采用振荡、差速贴壁的方法分离、纯化少突胶质前体细胞，然后用添加了神经营养因子（N2）、血小板衍生生长因子-AA（PDGF-AA）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的无血清培养基培养。
倒置显微镜下每天观察细胞的生长情况，免疫荧光法对表面抗原进行细胞鉴定。
然后按104个细胞/孔加入96孔板培养，细胞70%~80%融合时用不同浓度MIF处理细胞，48h后用甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖程度。
结果获得纯度90%以上少突胶质前体细胞（OPCs），少突胶质前体细胞NG2及血小板衍生生长因子受体（PDGFR）抗体阳性；胶质细丝酸性蛋白（GFAP）及髓鞘碱性蛋白（MBP）均为阴性。
缺血性脑损伤中的线粒体质量控制
张巧巧 范荣珍 河北科技大学化学与制药工程学院，【摘要】缺血性脑损伤是世界范围内引起高致死率、I/R）损伤是由于缺血缺氧区域的血流再灌注引起一系列级联反应。
线粒体功能障碍一直被认为是缺血再灌注诱导的神经元死亡的标志之一。
脑缺血后线粒体从星形胶质细胞向受损伤的神经元转移会启动内源性神经保护机制，从而为神经元提供能量的支持。
本文分析讨论了线粒体在缺血性脑损伤的病理状态下的研究进展，损伤对线粒体自噬和线粒体动力学的影响，的作用以及线粒体在细胞间转移途径和机制，【关键词】缺血性脑损伤；【中图分类号】缺血性脑损伤是一种严重的神经内科系统疾病，在我国致死率是第二位的，致残率是第一位的［1］。
缺血性脑损伤的发病机制非常复杂，血管堵塞会引起细胞或者分子的损伤并伴随大量兴奋性谷氨酸的释放、钙离子的超载，造成神经炎症、神经再生和血管的重构。
美国FDA批准的药物溶栓剂阿替普酶溶栓治疗使大脑恢复血供或再灌注是治疗脑缺血最有效的方法，虽然恢复血流（再灌注）对于挽救缺血组织至关重要，但会加剧缺血区神经元结构和功能的损伤，造成缺血再灌注损伤［2］。
其它针对不同靶点的神经保护剂在临床试验阶段的失败也归因于缺血性脑损伤疾病机制的复杂和矛盾性，故寻找更好的治疗方法仍然是我们要努力的目标［3］。
线粒体最重要的功能之一是参与能量代谢［4］。
因此，线粒体提供足够的能量对于细胞的兴奋和存活至关重要。
脑缺血会引起线粒体的结构和功能损害，表现为线粒体肿胀、膜电位下降、能量合成障碍以及线粒体凋亡途径激活等，最终对细胞造成不可逆转的伤害并导致神经细胞死亡［5］。
除了基本的能量供应，线粒体还在动力学和线粒体自噬等质量控制方面起着重要作用。
线粒体功能障碍被认为是缺血再灌注损伤诱导神经元死亡的标志之一。
近年来，不同细胞类型间的细胞间线粒体转移已被广泛研究，并被认为是一种潜在的治疗方法［6］。
在这篇综述中，我们将讨论目前关于线粒体在脑缺血中治疗的进展，强调关于线粒体质量控制的关键内容以及最近关于急性缺血性脑损伤线粒体转移的途径和机制。
早产儿缺氧缺血性脑病诊治与预后最新指南要点
早产儿缺氧缺血性脑病诊治与预后最新指南要点新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)在足月儿中诊断标准明确，但在早产儿中，HIE的定义、临床病程、治疗及预后情况都更为复杂，目前仅少数研究探讨了早产儿HIE的诊治，但纳入对象及研究结果存在明显异质性。
因"医疗警讯事件"的原因，早产儿HIE 发生率可能比目前文献报道更高，且与足月儿相比，其病程更复杂、神经发育伤残率更高。
本文旨在阐明早产儿HIE的病因、病理、临床特点，探讨其诊断标准及治疗措施，以期促进将来研究设计以及神经保护策略的实施，从而改善早产儿HIE的预后。
近年来，围产医学不断发展，早产儿存活率显著提高，然而脑损伤问题仍未得到有效解决，以脑室周围白质软化为代表的脑白质损伤是早产儿脑损伤最经典的神经病理学改变[1]。
新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)在足月儿中定义明确，系因围产期缺氧窒息导致的脑缺氧缺血性损害，包括特征性的神经病理及病理生理过程，并在临床上出现一系列脑病表现。
足月儿HIE诊断标准明确，神经系统发育监测和结局评估也相对标准化。
早产儿因围产期大多接受密切监测，若发现明显宫内窘迫则需立即处理，基于如上"医疗警讯事件"原因，既往很少诊断早产儿HIE。
然而，当缺氧、感染、炎症、低血糖等多因素协同作用时，单个因素在早产儿脑损伤中的作用就复杂起来。
因此，早产儿HIE可能未得到很好的识别与监测。
本文旨在阐明缺氧缺血在早产儿复杂脑损伤过程中的作用，并在目前对其特有病理过程及临床表现认识基础上，探讨适用于早产儿的HIE诊断标准及治疗方案。
一、早产儿HIE发病率现有报道早产儿HIE发病率和流行病学的研究甚少，研究示其发病率为1.3/1 000～9/1 000不等，不同研究中纳入对象存在显著异质性，且研究样本量均较小。
茶多酚对脑缺血大鼠脑内少突胶质细胞的影响
・论著・茶多酚对脑缺血大鼠脑内少突胶质细胞的影响陈应柱,田野,张志琳,包仕尧 【摘要】 目的 观察茶多酚对脑缺血大鼠脑内少突胶质细胞(OLG )的影响。
方法 将雄性S D 大鼠随机分为假手术组、对照组、茶多酚组。
制备全脑缺血模型后,茶多酚组大鼠被分为3组分别按剂量25mg/kg 、50mg/kg 、100mg/kg 茶多酚予以腹腔注射,每日1次,连续7d;免疫组化法检测各组大鼠皮质前体OLG 、未成熟OLG 及成熟OLG 的变化。
结果 与假手术组比较,对照组皮质前体OLG 明显增多,未成熟OLG 及成熟OLG 明显减少(均P <0105);与对照组比较,茶多酚干预后皮质前体OLG 有不同程度的减少,未成熟OLG 及成熟OLG 则有不同程度的增加,差异有统计学意义(25mg/kg 、100mg/kg,均P <0105;50mg/kg,P <0101)。
结论 茶多酚对OLG 缺血性反应有保护作用,并呈现剂量依赖性。
【关键词】 少突胶质细胞;茶多酚;全脑缺血【中图分类号】R743 【文献标识码】A 【文章编号】100421648(2007)0320211203Effects of tea polyphenol on oli godendrocyte i n cerebra l ische m i c ra ts CHEN Y ing 2zhu,TI AN Ye,ZHAN G Zhi 2lin,et al .D epart m ent of N eurology,the Second A ffiliated Hospital of Soocho w U niversity,Suzhou 215004,ChinaAbstract:O bjecti ve To investigate the effects of tea polyphenol on oligodendr ocyte (OLG )in the cerebral ische m ic rats .M ethods Male Sp rague Da wley rats were random ly divided int o sha m 2operated gr oup,contr ol gr oup and tea polyphenol gr oup.The models of whole 2brain ische m ia were established .Then the rats of tea polyphenol gr oup were divided another 3gr oup s and injected intraperit oneally with tea polyphenol at diffenrent dose (25mg/kg,50mg/kg,100mg/kg,res pectively )once a day f or seven days.The exp ressi ons of p recurs or OLG cells,pedo 2OLG cells and mature OLG cells in the cortex were exa m ined by i m munohist oche m istry and the positive cells were counted .Results Compared with sha m 2operated gr oup,the nu mber of p recurs orOLG cells increased and the number of pedo 2OLG cells and mature OLG cells decreased significantly in the contr ol gr oup (all P <0.05).Compared with contr ol gr oup,the nu mber of p recurs or OLG cells decreased significantly after tea polyphenol treat m ent,while the nu mber pedo 2OLG cells and mature OLG cells increased significantly (25mg/kg,100mg/kg ,all P <0.05;50mg/kg,P <0.01).Conclusi on Tea polyphenol p layed a p r otective r ole in OLG ische m ic reacti on at a dose dependent manner .Key words:oligodendr ocyte;tea polyphenol;gl obal cerebral ische m ia基金项目:江苏省卫生厅重大科研课题资助项目(K200406);苏州大学医学发展基金资助项目(EE123504)作者单位:215004苏州大学附属第二医院神经科[陈应柱(现在江苏省苏北人民医院),张志琳,包仕尧],肿瘤放疗科(田野)通讯作者:包仕尧 许多临床缺血缺氧事件中少突胶质细胞(OLG )有选择易损性[1]。
脑缺血后髓鞘基因表达变化的规律
脑缺血后髓鞘基因表达变化的规律目的从髓鞘碱性蛋白(MBP)mRNA、髓鞘少突胶质糖蛋白(MOG)mRNA等髓鞘基因表达的角度，探讨脑缺血大鼠髓鞘损伤的变化规律。
方法采用SD大鼠四血管闭塞急性全脑缺血模型，随机分为2 d、4 d、7 d、14 d和28 d五个时间点及假手术组，每组8只；用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)观察海马组织中MBP mRNA、MOG mRNA表达的变化。
结果脑缺血后2 d海马组织中MBP mRNA、MOG mRNA表达水平即已降低，至7 d时降低显著，并持续至28 d时达到高峰。
与假手术组比较，大鼠海马组织内MBP mRNA、MOG mRNA表达于再灌流后7 d、14 d、28 d差异具有统计学意义(P＜0.05)。
结论随着脑缺血一再灌流时间延长，大鼠海马组织MBP mRNA、MOG mRNA表达逐渐降低，呈现时间依赖性。
标签：髓鞘基因；全脑缺血；海马；逆转录聚合酶链式反应急性缺血性神经元损伤的病理生理学机制已经得到了深入研究，但神经胶质细胞的缺血性损伤却很少受到关注。
针对神经元损伤的神经保护剂在卒中临床试验中不能改善患者的预后，而少突胶质细胞对缺血缺氧具有选择易损性，因此有必要对少突胶质细胞缺血性损伤进行深入研究。
本实验采用逆转录聚合酶链式反应(RT，PcR)方法，从髓鞘基因表达的角度，探讨脑缺血大鼠髓鞘损伤的变化规律，旨在为缺血性脑损伤的临床防治提供依据。
1材料与方法1．1实验设计及动物分组健康雄性SD大鼠70只，由苏州大学医学院实验动物中心提供，体重200～240 g。
采用大鼠四血管闭塞急性全脑缺血模型，剔除死亡和造模不成功的大鼠后，随机分为2 d、4 d、7 d、14 d和28 d五个时间点，每组8只；同时设立假手术组8只。
1．2主要试剂Trizol为美国CHEMICON公司产品，MBP引物、MOG引物、β-actin引物由上海申能博彩生物科技有限公司合成，其余分子生物学相关试剂均购自上海申能博彩公司。
CXCL12
㊃综述㊃通信作者:张智芳,E m a i l :s u c c e s s _68@126.c o mC X C L 12/C X C R 4信号通路与缺血性脑卒中新进展张智芳1a ,苏 帅2,赵理乐1b(1.天津市西青医院a .神经内科;b .神经外科,天津300070;2.天津医科大学总医院消化科,天津300052) 摘 要:缺血性脑卒中是一种严重威胁人类健康和生命的疾病,致残率和致死率较高㊂缺血性脑卒中会导致中枢神经系统损伤和功能障碍㊂缺血性脑卒中发生后,内皮祖细胞参与修复血管内皮和神经损伤,在这一过程中C X C L 12/C X C R 4信号通路起着重要的作用㊂本文将对C X C L 12/C X C R 4信号通路与缺血性脑卒中新进展进行综述㊂关键词:脑血管意外;内皮细胞;信号传导中图分类号:R 743.9 文献标志码:A 文章编号:1004-583X (2020)06-0568-05d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2020.06.018 缺血性脑卒中(c e r e b r a l i s c h e m i cs t r o k e ,C I S )又称脑梗死(c e r e b r a l i n f a r c t i o n ),是指因脑部血液循环障碍㊁缺血㊁缺氧所致的局限性脑组织缺血性坏死或软化㊂C I S 是脑血管病中最常见一种类型,约占全部急性脑血管病的69.6%~70.8%[1],其致残率及致死率非常高,随着人口老龄化的加速,我国成为世界上卒中负担最重的国家之一㊂目前临床上静脉溶栓及动脉取栓是改善预后最积极有效的方法,但因时间窗狭窄㊁禁忌证限制以及相关风险性,有很多急性C I S 患者错过溶栓及取栓治疗时机,因此寻找其它治疗方法逐渐成为研究热点㊂内皮祖细胞(e n d o t h e l i a l p r o ge n i t o r c e l l ,E P C )治疗C I S 被认为是一种新型治疗方法[2]㊂骨髓来源的E P S 通过血液循环迁移至缺血损伤部位,参与缺血损伤后内皮细胞的生成和神经的再生,可以促进缺血损伤后的脑功能恢复以及改善生存质量[3-4]㊂目前循证医学证据表明C I S 发生后,趋化因子C X C 配体12(C X C L 12)及其受体C X C R 4能够动员招募内皮组细胞迁移浸润至缺血区域,因此认为C X C L 12/C X C R 4信号通路在这一过程中起着关键性的作用[5]㊂本综述将重点阐述C X C L 12/C X C R 4信号通路与C I S 研究新进展㊂1 C I S 与内皮损伤C I S 会导致大脑血液供应发生障碍,使相对应的脑组织发生缺血㊁缺氧,从而引起相应部位的神经细胞死亡,最终导致相应供血区的神经功能障碍㊂研究发现内皮细胞的损伤及功能障碍是C I S 的始动环节并贯穿疾病发生的全过程[6]㊂因此,脑血管损伤是发生C I S 的重要病理基础㊂近期研究发现在血管闭塞发生前,内皮功能障碍可能已经长期存在,此种情况可能是脑卒中发展的关键早期事件,研究还认为内皮功能障碍可能会加重C I S 患者神经功能的进一步损害[7]㊂另有研究发现内皮功能障碍同样是血脑屏障出现功能障碍的早期事件,其可以导致内皮完整性遭到破坏[8]㊂因此,C I S 患者血管内皮功能障碍逐渐受到临床医师的关注,新近研究发现短暂性脑缺血患者中也出现了血管内皮功能障碍[9]㊂目前认为缺血所导致的脑血管疾病早期可能都存在血管内皮功能障碍,修复内皮完整性可能是预防以及治疗C I S 有效策略之一㊂2 C X C L 12/C X C R 4信号通路与中枢神经系统趋化因子C X C 配体12(C X C L 12),原名基质细胞衍生因子-1(s t r o m a lc e l l -d e r i v e df a c t o r -1,S D F -1),是C X C 趋化因子亚家族中的一员㊂C X C L 12是生理和病理过程中的重要因子,其中包括胚胎发育㊁造血㊁血管生成和炎症参与㊂C X C L 12具有激活和(或)诱导造血干细胞㊁内皮细胞和大多数白细胞迁移的功能[10]㊂C X C L 12在中枢神经系统(c e n t r a ln e r v o u s s y s t e m ,C N S )的发育和成熟阶段均有表达,当在小鼠中敲除C X C L 12基因将会导致神经祖细胞增殖㊁迁移和分化的障碍[11]㊂C X C L 12是表达于脑组织中的趋化因子之一,其在脑组织中主要由星形胶质细胞和神经元所表达㊂在正常神经系统中C X C L 12维持在较低的水平,不能发挥迁移趋化作用,当中枢神经系统发生炎症㊁缺血和缺氧等病变后,可引起C X C L 12水平上调并发挥趋化作用[12]㊂C X C R 4是一种高度保守的G 蛋白跨膜受体,在多种细胞和组织中表达,包括神经元㊁星形胶质细胞㊁小胶质细胞,以及不同的淋巴细胞亚群㊁血管平滑肌细胞等㊂研究发现造血干细胞和E P C s 表面同㊃865㊃‘临床荟萃“ 2020年6月20日第35卷第6期 C l i n i c a l F o c u s ,J u n e 20,2020,V o l 35,N o .6Copyright ©博看网. All Rights Reserved.样能够高度表达C X C R4[13]㊂C X C R4具有维持动脉完整性以及保护内皮屏障的功能[14]㊂C I S发生后C X C L12水平上调,C X C L12可以通过与C X C R4结合,促进E P C s沿C X C L12的浓度梯度发生迁移㊁归巢至受损内皮,进一步修复损伤的血管内皮[15]㊂3C X C L12/C X C R4信号通路与C I S后血管新生众所周知E P S参与脑卒中后血管的新生过程,其关键环节是将E P C归巢至受损区域㊂C X C L12/ C X C R4信号通路在E P S归巢至受损区域发挥着重要的作用㊂体外研究发现C X C L12/C X C R4信号通路对于E P C具有很强的趋化作用,这与C X C L12所引发的血管新生有关[16]㊂体内研究发现C X C L12/ C X C R4信号通路不仅可以促进E P C的增殖和迁移,而且能够促进血管平滑肌细胞和白血病细胞的增殖和迁移[17-18]㊂柚皮苷通过C X C L12/C X C R4信号通路介导激活P I3K/A k t信号通路促进E P S的增殖和迁移,从而促进血管生成和抑制内皮细胞的凋亡[19]㊂应用抗C X C R4的抗体,拮抗C X C L12/C X C R4信号通路,将会部分抑制E P C向缺血区域的迁移和募集[20]㊂以上研究说明C X C L12/C X C R4信号通路可以调节E P C的迁移和新生血管的形成㊂研究发现C X C L12水平与C I S患者的E P C数量及脑梗塞体积和严重程度呈正相关[21]㊂C X C L12/ C X C R4信号通路通过磷酸肌醇3-激酶和R a c1激活可以促进血管内皮细胞屏障的完整性[22],说明C X C L12/C X C R4信号通路可能参与了血管内皮功能障碍的发生㊂在肿瘤中由于肿瘤组织缺氧C X C L12水平会急剧增加,E P C通过C X C L12/ C X C R4信号通路移动到肿瘤床参与肿瘤血管生成[23]㊂以上结果同样表明,C X C L12通过调节E P C 的动员和招募,进而维持血管内皮完整性和促进血管新生㊂因此,在C I S以干细胞为基础的治疗具有巨大的潜力㊂4C X C L12-C X C R4信号通路与C I S后神经祖细胞C X C L12/C X C R4信号通路已被证实在神经E P S的形态发生和功能发挥中起着重要的作用[24]㊂趋化因子C X C L12可以动员神经祖细胞/干细胞(n e u r a l p r o g e n i t o rc e l l s,N P C s)向神经损伤部位迁移以及进一步修复受损神经细胞,这一过程依赖于C X C L12/C X C R4信号通路的信号传导[25]㊂体外实验通过条带测定发现C X C L12及其受体C X C R4可介导N P C形成片状伪足[26]㊂体内研究发现神经干细胞可以通过C X C L12/C X C R4信号通路调节神经胶质细胞的状态,激活胶质细胞促进神经功能恢复和神经元存活[27]㊂缺氧诱导因子(h y p o x i a-i n d u c i b l e f a c t o r-1α,H I F-1α)在脑卒中早期即可上调C X C L12/C X C R4信号通路表达,在脑卒中后期C X C L12/C X C R4信号通路在神经胶质之间和神经胶质与神经元之间信息传递中起着重要的作用[28]㊂新近研究发现,在缺氧应激条件下,C X C L12/C X C R4信号通路在胶质母细胞瘤细胞中,通过正反馈机制可以促进神经祖细胞的存活和增殖[29]㊂既往研究发现C X C L12/C X C R4信号通路在C N S发育中起着关键作用,包括调节神经E P S的迁移和维持神经E P S的数量[30]㊂C X C L12/C X C R4信号通路在成人C N S中具有可以调节神经传递㊁神经毒性和胶质细胞之间信息交换等功能[31]㊂研究发现各种脑损伤后白质修复需要少突胶质细胞前体细胞(o l i g o d e n d r o c y t e p r e c u r s o r c e l l s,O P C s)参与, C X C L12在自身免疫性脑脊髓炎模型和铜诱导的脱髓鞘疾病模型中可以调节E P C s迁移和分化,促进脑白质的修复[32]㊂进一步将C X C L12基因修饰E P C s 后,C X C L12-E P C可以上调表达O P C s中的P D G F R-α㊁b F G F㊁C X C R4和C X C R7,提高了E P C 的能力,进而增加O P C s髓鞘的再生,表明C X C L12-E P C在脑白质修复方面具有很大的潜力[33]㊂5C X C L12/C X C R4信号通路与C I S后炎症反应C I S引起的炎症反应是以脑血管内白细胞被激活㊁一系列炎症介质增加与血管异常反应为特点的炎症反应[34]㊂小胶质细胞是中枢神经系统损伤后的主要免疫炎症细胞,其在C I S发生后可以被迅速激活并迁移㊁招募至损伤区域,并随后启动了一系列炎症因子释放[35-36]㊂在缺血条件下,活化的小胶质细胞/巨噬细胞通过分泌促炎细胞因子可以加重组织损伤[37]㊂在小鼠短暂性大脑中动脉闭塞(t M C A O)模型中,梗死周边区域的M2型小胶质细胞/巨噬细胞数目增多主要出现于梗死后第1周内,而M1型的数目在第2周才开始明显增多并超过M2型小胶质细胞/巨噬细胞[38]㊂趋化因子C X C L12在炎症细胞募集并浸润至缺血损伤处的过程中起到了至关重要的作用㊂卒中后, C X C L12在缺血半暗带的升高,与单核细胞向缺血性损伤区域的浸润相关联,并且可能介导神经炎性发病机制[39]㊂近年来研究表明,C X C L12/C X C R4信号通路在C I S等C N S病理过程中,对炎症细胞的迁移起着至关重要的作用[40]㊂脑梗急性期予㊃965㊃‘临床荟萃“2020年6月20日第35卷第6期 C l i n i c a l F o c u s,J u n e20,2020,V o l35,N o.6Copyright©博看网. All Rights Reserved.AM D3100拮抗C X C L12/C X C R4信号通路可抑制M1型小胶质细胞/巨噬细胞迁移至缺血区域,从而减弱炎症反应并改善C I S后神经功能恢复[41]㊂在新生大鼠的缺血模型中,用地塞米松预处理可以降低在缺血周围区C X C R4的表达,减轻胶质化,进而减小脑梗死体积[42]㊂6C X C L12/C X C R4信号通路与C I S治疗前景C I S的积极治疗对预后很关键,而有效治疗需要缺血周围区的神经保护㊁血管新生和神经再生的协同作用㊂C X C L12/C X C R4信号通路在C I S急性期和恢复期发挥着重要的作用,是治疗C I S的一个潜在靶点㊂近期C X C L12/C X C R4信号通路在基础研究方面有一些新的发现㊂在透明质酸(H A)和层黏连蛋白(L m)水凝胶上培养神经祖细胞/干细胞,48小时后可以观察到N P C表面C X C R4的表达上调,进而促进N P C的迁移作用,但是其迁移作用依赖于C X C L12的浓度梯度[43]㊂生长于含3D-石墨烯神经支架培养基中的小胶质细胞,通过产生条件培养基激活C X C L12/C X C R4信号通路,促进神经球形成以及神经干细胞从神经球迁移[44]㊂目前C X C L12/C X C R4信号通路在体内研究方面的新发现成为治疗C I S的新希望㊂新型C X C R4拮抗剂P2G,对C X C R4具有高拮抗活性,能够高效增强缺血区血管生成和血液灌注[45]㊂低剂量辐射可以上调C X C L12/C X C R4m R N A和蛋白的表达,增强E P S的迁移能力[46]㊂黄体酮可以通过C X C L12/ C X C R4/P I3K/A k t信号通路调节E P S(E P C)的活力进而修复血管内皮细胞[47]㊂西洛他唑通过激活S D F-1/C X C R4/P I3K/A k t信号通路,导致促血管生成功能的E P C数量增多[48]㊂利格列C a2+依赖C X C L12/C X C R4信号通路通过对C a2+稳态和钙蛋白酶活性进行调节,从而促进其发挥神经保护机制,改善中风后生活质量[49]㊂以上说明C X C L12/ C X C R4信号通路在C I S的治疗中被越来越被重视㊂缺血性脑血管病的治疗最关键的是血流灌注的恢复,而E P S在侧枝循环的建立方面起到至关重要的作用,特别是在C I S药物治疗㊁介入治疗及血管内膜剥脱术后的血管内皮修复过程㊂综上所述,通过对C X C L12/C X C R4信号通路与C I S的相关性分析,表明C X C L12/C X C R4信号通路在C I S侧枝循环的建立㊁神经功能的改善及炎症反应方面具有非常重要的价值㊂希望在将来能够对C X C L12/C X C R4信号通路以及E P S的功能进一步深入研究,寻找更为有效的方法治疗C I S,为患者带来新的希望㊂参考文献:[1] W a n g W,J i a n g B,S u n H,e ta l.P r e v a l e n c e,I n c i d e n c e,a n dm o r t a l i t y o f s t r o k e i n C h i n a:r e s u l t s f r o m a n a t i o n w i d ep o p u l a t i o nb a s e ds u r v e y o f480687a d u l t s[J].C i r c u l a t i o n, 2017,135(8):759-771.[2] L i a oS,L u oC,C a oB,e t a l.E n d o t h e l i a l p r o g e n i t o r c e l l s f o ri s c h e m i c s t r o k e:u p d a t e o nb a s i c r e s e a r c ha n da p p l i c a t i o n[J].S t e m C e l l s I n t,2017,2017:2193432.[3] F a n g J,G u o Y,T a n S,e t a l.A u t o l o g o u s e n d o t h e l i a lp r o g e n i t o r c e l l s t r a n s p l a n t a t i o n f o r a c u t e i s c h e m i c s t r o k e:a4-y e a r f o l l o w-u p s t u d y[J].S t e mC e l l sT r a n s lM e d,2019,8(1): 14-21.[4] M a c h a d o-P e r e i r aM,S a n t o sT,F e r r e i r aL,e t a l.C h a l l e n g i n gt h e g r e a t v a s c u l a r w a l l:c a n w e e n v i s i o n a s i m p l e y e tc o m p r e h e n s i v e t h e r a p y f o rs t r o k e[J].JT i s s u eE n g R e g e nM e d,2018,12(1):e350-e354.[5] W a n g J Q,G u W P,D e n g Q Q,e ta l.E n d o t h e l i a l p r o g e n i t o rc e l lm i R-126p r o m o t e sh o m i n g o fe nd o t he l i a l p r o g e n i t o rc e l l sw i t h i na r t e r i a lt h r o m b u si n p a t i e n t s w i t hc e r e b r a l i n f a r c t i o na n d i t sm o l e c u l a rm e c h a n i s m[J].E u r R e vM e dP h a r m a c o l S c i,2018,22(4):1078-1083.[6] K a l l a d k aD,M u i rKW.B r a i nr e p a i r:c e l l t h e r a p y i ns t r o k e.S t e mC e l l s C l o n i n g[J].S t e mC e l l s C l o n i n g,2014,21(7):31-44.[7] W i l l i a m s o n K,S t r i n g e r S E,A l e x a n d e r MY.E n d o t h e l i a lP r o g e n i t o rC e l l se n t e rt h ea g i n g a r e n a[J].F r o n t P h y s i o l, 2012,3:30.[8] K i m K A,S h i n D,K i m J H,e ta l.R o l e o fa u t o p h a g y i ne n d o t h e l i a l d a m a g e a n d b l o o d-b r a i n b a r r i e r d i s r u p t i o n i ni s c h e m i c s t r o k e[J].S t r o k e,2018,49(6):1571-1579.[9] G a d H,K h a n A,A k h t a r N,e t a l.C o r n e a l n e r v e a n de n d o t h e l i a lc e l ld a m a g ei n p a t i e n t s w i t h t r a n s i e n ti s c h e m i ca t t a c k a n dm i n o r i s c h e m i c s t r o k e[J].P L o SO n e,2019,14(3):e0213319.[10]J a n s s e n sR,S t r u y fS,P r o o s tP.T h eu n i q u es t r u c t u r a la n df u n c t i o n a l f e a t u r e s o fC X C L12[J].C e l lM o l I mm u n o l,2018,15(4):299-311.[11] F r a nço i s eT,A c h r a f J,M i c hèl eS,e ta l.K n o c k d o w no f t h eC X C L12/C X C R7c h e m o k i n e p a t h w a y r e s u l t s i n l e a r n i n gd e f i c i t sa n dn e u r a l p r o g e n i t o r m a t u r a t i o ni m p a i r m e n ti n m i c e[J].B r a i nB e h a v I mm u n,2019,80:697-710.[12]Sán c h e z-M a r tín L,Sán c h e z-M a t e o s P,C a b aña s C.C X C R7i m p a c t o nC X C L12b i o l o g y a n dd i s e a s e[J].T r e n d sM o lM e d,2013,19(1):12-22.[13] Réa u x-L eG o a z i g oA,v a nS t e e n w i n c k e l J,R o s tèn e W,e t a l.C u r r e n ts t a t u so fc h e m o k i n e si nt h ea d u l t C N S[J].P r o gN e u r o b i o l,2013,104:67-92.㊃075㊃‘临床荟萃“2020年6月20日第35卷第6期 C l i n i c a l F o c u s,J u n e20,2020,V o l35,N o.6Copyright©博看网. All Rights Reserved.[14] Dör i n g Y,N o e l sH,v a nd e rV o r s tE m i e lP C,e t a l.V a s c u l a rC X C R4l i m i t s a t h e r o s c l e r o s i s b y m a i n t a i n i n g a r t e r i a l i n t e g r i t y:e v i d e n c ef r o m m o u s e a n d h u m a n s t u d i e s[J].C i r c u l a t i o n,2017,136(4):388-403.[15] Z h a n g Y,Z h a n g H,L i nS,e t a l.S D F-1/C X C R7c h e m o k i n es i g n a l i n g i s i n d u c e d i nt h e p e r i-i n f a r c t r e g i o n s i n p a t i e n t sw i t hi s c h e m i c s t r o k e[J].A g i n g D i s,2018,9(2):287-295.[16] G r i g o r e s c u G O,A n a-M a r i a R,P r e d a M B,e ta l.S y n e r g i ce f f e c t so fV E G F-Aa n dS D F-1o n t h e a n g i o g e n i c p r o p e r t i e so fe n d o t h e l i a l p r o g e n i t o rc e l l s[J].J T i s s u e E n g R e g e n M e d,2017,11(11):3241-3252.[17] Z a i t s e v aL,M u r r a y MY,S h a f a tM S,e t a l.I b r u t i n i b i n h i b i t sS D F1/C X C R4m e d i a t e d m i g r a t i o ni n AM L[J].O n c o t a r g e t, 2014,5(20):9930-9938.[18] B i J J,L i P,L i C Y,e t a l.T h e S D F-1/C X C R4c h e m o k i n e a x i si n u v e a l m e l a n o m a c e l l p r o l i f e r a t i o n a n d m i g r a t i o n[J].T u m o u rB i o l,2016,37(3):4175-4182.[19] Z h a o Z H,M a X L,M a J X,e t a l.N a r i n g i n e n h a n c e se n d o t h e l i a l p r o g e n i t o r c e l l(E P C)p r o l if e r a t i o n a n d t u b ef o r m a t i o nc a p a c i t y t h r o ug hth e C X C L12/C X C R4/P I3K/A k ts i g n a l i n gp a t h w a y[J].C h e mB i o l I n t e r a c t,2018,286:45-51.[20] Y a nX Q,D a iX Z,H eL Q,e t a l.An o v e lC X C R4a n t a g o n i s te n h a n c e s a n g i o g e n e s i s v i a m o d if y i ng th ei s c h a e m i c t i s s u ee n v i r o n m e n t[J].JC e l lM o lM e d,2017,21(10):2298-2307.[21] T a v a k o l i a nF e r d o u s i eV,M o h a mm a d iM,H a s s a n s h a h iG,e ta l.S e r u m C X C L10a n d C X C L12c h e m o k i n e l e v e l s a r ea s s o c i a t e d w i t ht h es e v e r i t y o fc o r o n a r y a r t e r y d i s e a s ea n dc o r o n a r y a r t e r y o c c l u s i o n[J].I n tJC a rd i o l,2017,233:23-28.[22] Dör i n g Y,N o e l sH,v a n d e rV o r s t E m i e l PC,e t a l.V a s c u l a rC X C R4l i m i t s a t h e r o s c l e r o s i s b y m a i n t a i n i n g a r t e r i a l i n t e g r i t y:e v i d e n c ef r o m m o u s e a n d h u m a n s t u d i e s[J].C i r c u l a t i o n,2017,136(4):388-403.[23] B i J J,L i P,L i C Y,e t a l.T h e S D F-1/C X C R4c h e m o k i n e a x i si n u v e a l m e l a n o m a c e l l p r o l i f e r a t i o n a n d m i g r a t i o n[J].T u m o u rB i o l,2016,37(3):4175-4182.[24]S a n a iN,N g u y e nT,I h r i eR A,e t a l.C o r r i d o r so fm i g r a t i n gn e u r o n s i nt h eh u m a nb r a i na n dt h e i rd e c l i n ed u r i n g i n f a n c y[J].N a t u r e,2011,478(7369):382-386.[25] A d d i n g t o n C P,D h a r m a w a j S,H e f f e r n a n J M,e t a l.H y a l u r o n i ca c i d-l a m i n i n h y d r o g e l si n c r e a s e n e u r a ls t e m c e l lt r a n s p l a n tr e t e n t i o na n d m i g r a t o r y r e s p o n s et oS D F-1α[J].M a t r i xB i o l,2017,60-61:206-216.[26] Z h a n g M,S o n g A H,L a iS Q,e ta l.A p p l i c a t i o n so fs t r i p ea s s a y i n t h e s t u d y o fC X C L12-m e d i a t e dn e u r a l p r o g e n i t o r c e l lm i g r a t i o na n d p o l a r i z a t i o n[J].B i o m a t e r i a l s,2015,72:163-171.[27] G a o M,D o n g Q,Y a o H,e ta l.I n d u c e dn e u r a ls t e m c e l l sm o d u l a t e m i c r o g l i a a c t i v a t i o n s t a t e s v i a C X C L12/C X C R4s i g n a l i n g[J].B r a i nB e h a v I mm u n,2017,59:288-299. [28] Y a n g F,L u o W J,S u n W,e ta l.S D F1-C X C R4s i g n a l i n gm a i n t a i n s c e n t r a l p o s t-s t r o k e p a i nt h r o u g h m e d i a t i o no f g l i a l-n e u r o n a l i n t e r a c t i o n s[J].F r o n tM o lN e u r o s c i,2017:226.[29] C a l i n e s c uA A,Y a d a v V N,C a r b a l l o E,e ta l.S u r v i v a la n dp r o l i f e r a t i o no fn e u r a l p r o g e n i t o r-d e r i v e d g l i o b l a s t o m a su n d e rh y p o x i c s t r e s s i sc o n t r o l l e db y aC X C L12/C X C R4a u t o c r i n e-p o s i t i v e f e e d b a c k m e c h a n i s m[J].C l i nC a n c e rR e s,2017,23(5):1250-1262.[30] M a o W,Y iX,Q i n J B,e t a l.C X C L12/C X C R4a x i s i m p r o v e sm i g r a t i o no f n e u r o b l a s t s a l o n g c o r p u s c a l l o s u m b y s t i m u l a t i n gmm p-2s e c r e t i o n a f t e rt r a u m a t i c b r a i ni n j u r y i n r a t s[J].N e u r o c h e m R e s,2016,41(6):1315-1322.[31] P a t e l J R,W i l l i a m sJ L,M u c c i g r o s s o MM,e ta l.A s t r o c y t eT N F R2i s r e q u i r e d f o r C X C L12-m e d i a t e d r e g u l a t i o n o f o l i g o d e n d r o c y t e p r o g e n i t o r p r o l i f e r a t i o n a n d d i f f e r e n t i a t i o nw i t h i n t h e a d u l tC N S[J].A c t aN e u r o p a t h o l,2012,124(6): 847-860.[32] W i l l i a m s J L,P a t e l J R,D a n i e l sB P,e t a l.T a r g e t i n g C X C R7/A C K R3a s a t h e r a p e u t i c s t r a t e g y t o p r o m o t e r e m y e l i n a t i o n i nt h e a d u l t c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m[J].JE x p M e d,2014,211(5):791-799.[33] Y u a nF,C h a n g S,L u o L L,e ta l.c x c l12g e n ee n g i n e e r e de n d o t h e l i a l p r o g e n i t o rc e l l sf u r t h e ri m p r o v et h ef u n c t i o n so fo l i g o d e n d r o c y t e p r e c u r s o r c e l l s[J].E x p C e l lR e s,2018,367(2):222-231.[34] D z i e d z i cT.S y s t e m i c i n f l a mm a t i o na sat h e r a p e u t i ct a r g e t i na c u t e i s c h e m i c s t r o k e[J].E x p e r tR e v N e u r o t h e r,2015,15(5):523-531.[35] L a m b e r t s e nK L,B i b e rK,F i n s e nB.I n f l a mm a t o r y c y t o k i n e si ne x p e r i m e n t a la n dh u m a ns t r o k e[J].JC e r e b B l o o d F l o wM e t a b,2012,32(9):1677-1698.[36] T a y l o rR A,S a n s i n g L H.M i c r o g l i a l r e s p o n s e sa f t e r i s c h e m i cs t r o k e a n d i n t r a c e r e b r a lh e m o r r h a g e[J].C l i n D e vI mm u n o l, 2013,746068.[37] G r e g e r s e n R,L a m b e r t s e n K,F i n s e n B.M i c r o g l i a a n dm a c r o p h a g e s a r e t h em a j o r s o u r c eo f t u m o rn e c r o s i s f a c t o r i np e r m a n e n t m i d d l ec e r e b r a la r t e r y o c c l u s i o ni n m i c e[J].JC e r e bB l o o dF l o w M e t a b,2000,20(1):53-65.[38] M o r r i s o n HW,F i l o s a J A.A q u a n t i t a t i v e s p a t i o t e m p o r a la n a l y s i so f m i c r o g l i a m o r p h o l o g y d u r i n g i s c h e m i cs t r o k ea n dr e p e r f u s i o n[J].JN e u r o i n f l a mm a t i o n,2013,10:4.[39] H i l l WD,H e s s D C,M a r t i n-S t u d d a r d A,e t a l.S D F-1(C X C L12)i su p r e g u l a t e d i nt h e i s c h e m i c p e n u m b r a f o l l o w i n gs t r o k e:a s s o c i a t i o n w i t hb o n e m a r r o w c e l lh o m i n g t oi n j u r y[J].JN e u r o p a t h o l E x p N e u r o l,2004,63(1):84-96. [40] T i v e r o n M C,C r e m e r H.C X C L12/C X C R4s i g n a l l i n g i nn e u r o n a l c e l lm i g r a t i o n[J].C u r ro p i n N e u r o b i o l,2008,18(3):237-244.[41] H u a n g M,W a nY,M a oL,e t a l.I n h i b i t i n g t h em i g r a t i o no fM1m i c r o g l i aa th y p e r a c u t e p e r i o dc o u l d i m p r o v eo u t c o m eo f t M C A Or a t s[J].C N SN e u r o s c i T h e r,2017,23(3):222-232.[42] F e l s z e g h y K,B a n i s a d rG,R o s t e n e W,e t a l.D e x a m e t h a s o n e㊃175㊃‘临床荟萃“2020年6月20日第35卷第6期 C l i n i c a l F o c u s,J u n e20,2020,V o l35,N o.6Copyright©博看网. All Rights Reserved.d o w n re g u l a t e s c h e m o k i n e r e c e p t o r C X C R4a n d e x e r t sn e u r o p r o t e c t i o na g a i n s th y p o x i a/i s c h e m i a-i n d u c e db r a i n i n j u r yi nn e o n a t a l r a t s[J].N e u r o i mm u n o m o d u l a t i o n,2004,11(6):404-413.[43] A d d i n g t o n C P,H e f f e r n a n J M,M i l l ar-H a s k e l l C S,e ta l.E n h a n c i n g n e u r a l s t e m c e l l r e s p o n s e t o S D F-1αg r a d i e n t st h r o u g hh y a l u r o n i ca c i d-l a m i n i nh y d r o g e l s[J].B i o m a t e r i a l s, 2015,72:11-19.[44]J i a n g Z Y,S o n g Q,T a n g M L,e ta l.E n h a n c e d m i g r a t i o no fn e u r a ls t e m c e l l sb y m i c r o g l i a g r o w no nat h r e e-d i m e n s i o n a lg r a p h e n e s c a f f o l d[J].A C S A p p l M a t e rI n t e r f a c e s,2016,8(38):25069-25077.[45] Y a nX Q,D a iX Z,H eL Q,e t a l.A N o v e lC X C R4a n t a g o n i s te n h a n c e s a n g i o g e n e s i s v i a m o d if y i ng th ei s c h a e m i c t i s s u ee n v i r o n m e n t[J].JC e l lM o lM e d,2017,21(10):2298-2307.[46] W a n g P,Z h a n g H F,L i Z,e t a l.L o w-d o s e r a d i a t i o n p r o m o t e st h e p r o l i f e r a t i o n a n d m i g r a t i o n o f A G E-t r e a t e d e n d o t h e l i a lp r o g e n i t o r c e l l s d e r i v e d f r o mb o n em a r r o wv i a a c t i v a t i n g S D F-1/C X C R4/E R Ks i g n a l i n gp a t h w a y[J].R a d i a tR e s,2019,191(6):518-526.[47] Y u P,Z h a n g Z F,L i S J,e t a l.P r o g e s t e r o n e m o d u l a t e se n d o t h e l i a l p r o g e n i t o r c e l l(E P C)v i a b i l i t y t h r o u g h t h eC X C L12/C X C R4/P I3K/A k t s i g n a l l i n g p a t h w a y[J].C e l lP r o l i f,2016,49(1):48-57.[48] T s e n g S,C h a o T,L i Y,e t a l.C i l o s t a z o l i m p r o v e sp r o a n g i o g e n e s i s f u n c t i o n s i n h u m a n e a r l y e n d o t h e l i a l p r o g e n i t o r c e l l s t h r o u g h t h e s t r o m a l c e l l-d e r i v e d f a c t o r s y s t e ma n dh yb r i dt h e r a p yp r o v i d e sas y n e r g i s t i ce f f ec t i nv i v o[J].B i o m e dR e s I n t,2016,3639868.[49] C h i a z z aF,T a mm e nH,P i n t a n aH,e t a l.T h e e f f e c t o fD P P-4i n h i b i t i o n t oi m p r o v ef u n c t i o n a lo u t c o m e a f t e rs t r o k ei sm e d i a t e d b y t h e S D F-1α/C X C R4p a t h w a y[J].C a r d i o v a s cD i a b e t o l,2018,17(1):60.收稿日期:2019-12-29编辑:武峪峰㊃275㊃‘临床荟萃“2020年6月20日第35卷第6期 C l i n i c a l F o c u s,J u n e20,2020,V o l35,N o.6Copyright©博看网. 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谷氨酸受体在新生大鼠缺氧缺血脑损伤海马组织中的表达
谷氨酸受体在新生大鼠缺氧缺血脑损伤海马组织中的表达唐晓娟;孙斌;王莹;丁欣;于论;徐利晓;冯星【摘要】目的：探讨Ca-A/K通道相关分子谷氨酸受体1（GluR1）及谷氨酸受体2（GluR2）在新生大鼠缺氧缺血脑损伤（HIBD）后海马组织中表达以及在自噬发生中的作用。
方法选取7日龄SD新生大鼠60只，随机分为HIBD组和假手术组，于HIBD造模后0、1、6、24、48、72 h取海马组织，采用Western blot法检测GluR2、GluR1及自噬标记蛋白LC3、Beclin-1的表达。
结果 HIBD组6 h后脑组织即出现水肿，可见点状软化坏死灶。
与假手术组相比，各时间点HIBD组的GluR2表达水平均下降，而GluR1、Beclin-1、LC3表达水平均增加，差异有统计学意义（P均<0.05）。
HIBD组海马组织中LC3、Beclin-1、GluR1和GluR2蛋白表达水平在HIBD造模后各个时间点间差异有统计学意义（F=10.65~701.14，P均<0.01）。
GluR2蛋白表达于HIBD后1 h即开始下降，6 h下降较明显，24 h达最低点；GluR1、Beclin-1及LC3表达于6 h开始增加，24 h达高峰，48 h仍持续较高水平；上述蛋白表达均在72 h逐渐恢复。
结论 Ca-A/K通道相关分子GluR2及GluR1在新生大鼠HIBD后海马组织自噬性死亡中发挥重要的作用。
%Objective To study the expression of Ca-A/K channel-related molecules glutamate receptor 2 and 1(GluR2/1) in hippocampus tissues of neonatal rats with hypoxic-ischemic brain damage (HIBD). Methods A total of 60 7-day-old Sprague-Dawley rats were randomly divided into sham operation group and HIBD group. Hippocampal tissues were obtained at 0 h, 1 h, 6 h, 24 h, 48 h and 72 h after HIBD. The expression of GluR2, GluR1 and autophagy marker protein Beclin-1, LC3 were detected by Westernblot assay. Results Edema and focal softening and necrosis were observed6 h after HIBD in the brains of neonatal rats. Compared with Con group, at each time point, the expression levels of GluR2 were lower while the levels of GluR1, Beclin-1 and LC3 were higher significantly in HIBD group(P<0.05). The protein levels of LC3, Beclin-1, GluR1 and GluR2 in hippocampus tissues of HIBD group were significantly different among different time points after the estab-lishment of HIBD model(F=10.65~701.14, P<0.01). The protein level of GluR2 was decreased from 1 h to 24 h after HIBD and reached the lowest level at 24 h. The levels of GluR1, Beclin-1 and LC3 were increased at 6 h, plateaued at 24 h and remained there until 48 h. The levels of these proteins returned back to the initial level at 72 h. Conclusions Ca-A/K channel-related mol-ecules GluR2 and GluR1 play important roles in the autophagic cell death of hippocampus tissues in neonatal rats with hypoxic-ischemic brain damage.【期刊名称】《临床儿科杂志》【年(卷),期】2014(000)004【总页数】4页(P368-371)【关键词】缺氧缺血脑损伤;谷氨酸受体;自噬;海马;大鼠【作者】唐晓娟;孙斌;王莹;丁欣;于论;徐利晓;冯星【作者单位】苏州大学附属儿童医院新生儿科江苏苏州 215003;苏州大学附属儿童医院新生儿科江苏苏州 215003;苏州大学附属儿童医院新生儿科江苏苏州215003;苏州大学附属儿童医院新生儿科江苏苏州 215003;苏州大学附属儿童医院新生儿科江苏苏州 215003;苏州大学附属儿童医院儿科研究所江苏苏州215003;苏州大学附属儿童医院新生儿科江苏苏州 215003【正文语种】中文新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encepha⁃lopathy，HIE）是围生期窒息缺氧导致的缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD），是新生儿期死亡和致残的最主要原因[1]，但其发病机制至今尚未完全阐明。
少突胶质细胞体外培养纯化及鉴定、细胞体外缺氧模型建立的开题报告
少突胶质细胞体外培养纯化及鉴定、细胞体外缺氧模型建立的开题报告开题报告题目：少突胶质细胞体外培养纯化及鉴定、细胞体外缺氧模型建立研究背景和研究意义：少突胶质细胞（oligodendrocyte）是中枢神经系统中主要的髓鞘细胞之一，通过合成并包裹轴突上的髓鞘，保护神经元，同时也参与了神经元的代谢活动以及神经元发育、修复等功能。
因此，研究少突胶质细胞在正常情况下的生理功能及其在神经系统疾病中的作用具有重要的意义。
然而，由于少突胶质细胞数量比较少，且细胞体积小，难以进行纯化和鉴定，限制了其相关研究的开展。
因此，针对少突胶质细胞的体外培养和纯化以及细胞体外缺氧模型的建立，对于进一步深入研究少突胶质细胞功能具有十分重要的现实意义和理论价值。
研究内容和方法：1. 少突胶质细胞体外培养纯化：（1）采集小鼠或大鼠的脑组织，并利用胶体离心及离心梯度法分离出脑组织细胞。
（2）采用细胞分选技术，筛选并分离出少突胶质细胞。
（3）采用流式细胞术鉴定筛选纯化后的少突胶质细胞。
2. 少突胶质细胞体外缺氧模型的建立：（1）采用无血清缺氧培养法，对少突胶质细胞进行体外缺氧处理。
（2）利用细胞形态学观察、细胞凋亡检测、基因表达谱分析等方法，对缺氧处理前后的少突胶质细胞功能变化进行评估。
研究预期结果：1. 成功实现少突胶质细胞体外培养并纯化，得到较高纯度的少突胶质细胞。
2. 成功建立少突胶质细胞体外缺氧模型，并对其进行评估。
3. 通过研究，深入了解少突胶质细胞在正常情况和缺氧应激下的功能变化和分子机制，并为相关疾病的研究提供基础数据和理论依据。
研究团队：本研究课题由主持人牵头，共同参与的研究团队成员包括起始研究者、合作者等人员，共计5人。
主持人拥有丰富的细胞培养和分子生物学方面的实验经验，合作者们分别拥有与本课题密切相关的免疫学分析、形态学分析等方面的实验经验。
参考文献：1. Simons M, Trotter J. Wrapping it up: the cell biology of myelination. Current Opinion in Neurobiology, 2007, 17(5): 533-540.2. 陈晓兰, 林健海, 邹春芳等. 小鼠OL细胞体外培养和克隆化的初步研究[J]. 实验室科学, 2004, 12(4): 45-48.3. 吕茸, 黄玉梅, 王海龙等. 少突胶质细胞缺氧损伤对脑白质组织的影响及机制研究[J]. 中华病理学杂志, 2015, 44(10): 738-743.。
细胞缺氧复氧模型建立方法的研究进展
５ Ｏ ％Ｃ 培养 箱 中复 氧２ｈ 为缺血 预适 应 组 。 作 缺氧复氧损伤模 型的建立对 于机 体缺血／ 再灌注及 １２ 混合 气 体 培 养 法 是 物 理 性 缺 氧模 型 中最 常 ． 缺血 预适 应／ 后适 应从 细 胞 水 平进 行 生理 生 化 、 理 见 的 ， 病 应用 较 前 述 方 法 更 为 普 遍 。如 Ｗｅｅｔｒ ｂｓ 等 ｅ 药理 及 临床等 深 入研 究 有 着 重 要 意义 。本 文 就 细 胞 方 法 ： 先 培 养 １ｈ 去 掉 培养 液 ， 入 预 先 用 Ｎ 预 ； 加 饱 缺氧 复氧 损伤 模 型的文 献 综述 如下 。
关
中图分类号 ： ３ １ Ｒ－３
欣 李应 东 ，
文章编 号 ：０ ６２ ８ ２ ０ ） ８２ ３ －３ １０ －０ ４（０ ８ １－７ ７０
（． １ 甘肃 中医学 院 ， 兰州 ７ ００ ２ 甘肃 中医学院科研实验 中心 ， ３０ ０； ． 兰州 ７０ ０ ３ ００） 文献标 识码： Ａ
缺血性疾病严 重危害人类健康 。因此 ， 缩短 组 织缺 血 时间 、 早 恢 复 血 流 是 防 治 缺 血 损 伤 的最 有 尽 效措 施 。然而 ， 定情 况 下 在恢 复血 流 同 时 ， 一 组织 器 官损 伤往 。常发 生 于 心 、 、 等 重 要 器 官 。 因此 ， 胞 Ｊ 脑 肾 细
缺血性脑白质损伤的治疗新靶点和新策略研究
缺血性脑白质损伤的治疗新靶点和新策略研究胡薇薇;周怡亭;张菁;马婧;陈忠【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2018(32)9【摘要】大脑长期慢性缺血将可能导致脑白质损伤及认知功能损害,造成皮质下缺血性血管性痴呆。
目前临床上缺乏针对性的有效药物,因此急需针对其发病机制寻找促进髓鞘再生、脑白质修复的治疗新靶点。
本课题组研究发现,慢性缺血后脑室下区增殖的少突胶质前体细胞(OPC)向白质区迁移过程受到阻碍,导致了髓鞘再生过程受到抑制。
进一步通过IL-1β的受体IL-1R1敲除以及病毒介导的IL-1R1过表达发现,慢性缺血早期胶质细胞高表达的炎症因子IL-1β通过抑制OPC的迁移阻碍了髓鞘再生,而IL-1R1是重要的药物干预靶点。
IL-1β的多肽类似物KdPT可以在慢性缺血后进入脑内促进OPC的迁移,从而促进脑白质修复和改善认知功能。
此外,小胶质细胞抑制剂米诺环素在慢性缺血早期应用可显著减轻白质损伤和认知功能损害,为二次开发"老药"米诺环素提供了重要的实验依据。
近期研究还发现,在慢性脑缺血后,利用光遗传手段激活表达光敏感通道ChR2的感觉(或运动)皮质的谷氨酸能神经元,可以通过建立神经-少突胶质突触联系显著促进脑白质区OPC的增殖,并且这些增殖的前体细胞可以进一步分化为成熟少突胶质细胞,并有利于脑白质损伤修复、认知功能改善。
此外,还发现只有激活浅层的谷氨酸能神经元或激活由其投射于胼胝体区的轴突纤维末梢,能促进OPC增殖,而激活皮质深层谷氨酸能神经元对少突胶质前体细胞的增殖无影响,提示了慢性缺血后激活皮质浅层的谷氨酸能神经元可能是治疗缺血性脑白质损伤的新方法。
以上研究发现,促进慢性缺血后白质修复的新靶点,并为皮层下缺血性血管性痴呆的治疗提供了新途径和新策略。
【总页数】2页(P677-678)【关键词】慢性缺血;白质损伤;少突胶质前体细胞;髓鞘再生;光遗传学【作者】胡薇薇;周怡亭;张菁;马婧;陈忠【作者单位】浙江大学医药学部药理系,神经科学研究中心,浙江杭州310058【正文语种】中文【中图分类】R722.6【相关文献】1.环氧合酶-2:治疗心肌缺血性损伤的新靶点 [J], 郝言杰;王元书;牟艳玲2.陈忠教授团队“缺血性脑损伤的药物治疗新靶点及意义”成果获2015年浙江省科学技术奖 [J],3.不同褪黑素治疗方案对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑白质损伤的影响 [J], 马瑞;马瑜徽;张新月;耿印;陈岚芬;张学宁;王晓莉4.以炎症为靶点治疗慢性缺血后的脑白质损伤 [J], 胡薇薇;周怡亭;张菁;马婧;陈忠5.脑疾病新靶点研究的新策略 [J], 陈忠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
少突胶质前体细胞对脊髓伤治疗作用的实验研究
行 心脏灌流 固定， 后取 出脊髓组 织 ， 分 别经 １ ５ ％及 ３ ０ ％蔗糖梯 度脱水 后进
行冰冻切片， 片厚５ ｐ ｒ ｆ ｌ 。
２ ． 结果 ：
２ ０ ０ 目不 锈钢筛 网过滤 ， 取滤液 以１ ５ ０ ０ ｒ ｐ ｍ， 离・ Ｌ ， ５ ｍｉ ｎ 。收集沉淀 ， 加 入完 全培 养液 （ Ｄ ＭＥ Ｍ／ Ｆ １ ２ 、 １ ０ ％Ｆ Ｂ Ｓ 、 １ ％双抗） ｌ ｍｌ ，用吸管 吹打 制成细胞 悬 液， 计数后 接种Ｔ 一 ７ ５ 培 养瓶 中 ， 密度 为２ ×１ ０ ‰１ 。３ ７ ＂ Ｃ ５ ％Ｃ ０２ 条件下 培 养， 以后每２ ～３ ｄ 换 液１ 次。
１ ． 材料 与方法．
１ ． １ 材料 主要试剂 为ＤＭＥ Ｍ／ Ｆ １ ２ （ １ ： １ ） 培养基 ， ｂ Ｆ Ｇ Ｆ、 Ｐ Ｄ ＧＦ 。 胰 蛋 白酶 、 胎 牛血 清 、胎 盘蓝染液 、硫 瑾染液 、 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ、多聚赖氨酸 。抗体Ａ２ Ｂ ５ 、 ０ ４ 、 Ｃ ｙ ３ 、 Ａｌ ａ ｘ ４ ８ ８ 、 Ｄ ＡＰ Ｉ 和Ｐ Ｉ 。Ｃ ５ ７ Ｂ Ｌ ／ ６ 小鼠， Ｂ６ Ｃ ３ 一 Ｔ ｇ （ Ｅ ＧＦ Ｐ ） Ｊ Ｊ Ｉ ］ 强型 绿色荧 光蛋 白 转基 因。
科 学 理 论
科 学 与财 富
少突胶质前体细胞对脊髓伤 治疗作用的实验研究
赵 慧 敏
摘 （ 哈药集 团三 精制药股份有 限公司 黑龙江 哈尔滨 １ ５ ０ ０ ６ ９ ） 要： 采用Ａ ｌ ｌ ｅ ｎ ＇ ｓ 重物撞击法 建立小 鼠 Ｓ Ｃ 【 模型， 致小 鼠脊髓损伤 。 体外分离、 培养和纯化Ｇ Ｆ Ｐ 转基 因鼠的Ｏ Ｐ Ｃ ｓ 。 同时 ， 对Ｏ Ｐ Ｃ ｓ ￣行诱 导分化 通过 眶静脉将Ｏ Ｐ Ｃ ｓ 移植 到脊髓 损伤模 型 鼠体 内。 体外实验证 明分离 、 培养 并纯化 的Ｏ Ｐ Ｃ ｓ 具有 自我增殖 的能力 ， 并且可以分化为少突胶质细胞 。 移植后 的Ｏ Ｐ Ｃ ｓ 不仅可 以与宿主 脊髓组织较好 的整 合， 并可迁 移到损伤部位 ， 替代损伤组织 。
少突胶质前体细胞移植对新生儿缺氧缺血性脑病炎性反应的影响
Ｅｆｅ ｔ ｆｏ ｌ Ｏ ｎ Ｏ ｙ ｅ Ｔｙ ｅ Ｉ ・ ｔ ｏ ｙ ｅ Ｐｒ ｇ ｎ ｔ ｒ Ｇ ｒ ｆ ｎ ｔ ｅ ｆ ｃ ｓ Ｏ ｉ ｄｅ ｄｒ ｃ ｔ － ｐ Ｉ Ａｓ ｒ ｃ ｔ ｏ ｅ ｉｏ ａ ｏ ｈ ｇ ｔ
Ｐａ ｈｏ ｏ ｙ ｏ ｎ ｌ ｍ ｍ ａ ｉ ｎ・ ｎ ｕｃ ｄ Ｎｅ ｎａ ａ ｙ ｏ ｉ － ｓ ｈ ｍ ｉ ｔ ｌ ｇ ｆ Ｉ ｆａ ｔｏ － ｄ ｅ ｏ ｔ ｌＨ ｐ ｘ ｃ・ ｃ ｅ ｃ Ｉ Ｉ
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少突胶质前体细胞缺血缺氧损伤模型的建立
目的：建立少突胶质前体细胞缺血缺氧脑白质损伤模型。
方法：将大鼠少突胶质前体细胞分为正常对照组和缺氧缺糖组，正常对照组细胞用DMEM-F12培养基培养，不做缺氧缺糖处理，缺氧缺糖组细胞用无糖DMEM和Na2S2O4处理，Na2S2O4终浓度为10mmol/L。
取处理后10min、30min、60min和90min 为观察点，进行形态学观察和MTT测定。
结果：与对照组相比，缺氧缺糖组OPCs 形态随缺氧缺糖时间的延长而发生明显改变，细胞存活率降低。
讨论：联合应用无糖培养基和连二亚硫酸钠可以在常氧培养条件下建立少突胶质前体细胞缺氧缺糖模型。
标签：少突胶质前体细胞缺血缺氧模型建立
目前，脑白质损伤已成为早产儿脑损伤的重要形式。
研究表明，缺氧缺血（HI）、感染和免疫损伤等多种因素均可以导致新生儿脑白质损伤的发生[1]。
尤其是缺氧缺血，这与脑白质的主要细胞成分-少突胶质细胞有关[3]。
不同发育阶段的少突胶质细胞对缺氧缺血的耐受性不同，晚期少突胶质祖细胞和未成熟少突胶质细胞最为易损，成熟少突胶质细胞最为耐受。
由于神经胶质中少突胶质细胞发育最晚，在胎龄24周左右才逐渐由其前体细胞向成熟少突胶质细胞转化，因此，早产儿的胎龄越小，其脑白质中少突胶质的前体细胞含量越多，就越容易发生脑白质损伤。
而目前对新生儿缺血缺氧性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE）的治疗仅局限于支持疗法，尚无促进神经再生的手段[7]。
探讨缺血缺氧脑白质损伤发生的特点和机制己成为迫切的需要，寻求简单可行的方法建立缺血缺氧脑白质损伤模型，则有助于深入了解缺血缺氧引起少突胶质前体细胞损伤的机制，同时也能够为探寻有效的干预、治疗措施提供平台。
1 OPCs的培养
按照本实验室牛建钦的“少突胶质前体细胞的分离纯化方法”[12]培养OPCs。
2 少突胶质前体细胞缺氧缺糖离体模型的建立
取纯化培养2天，经鉴定为PDGFαR阳性的大鼠少突胶质前体细胞制作缺氧缺糖模型。
将大鼠少突胶质前体细胞分为正常对照组和缺氧缺糖组，正常对照组细胞用DMEM-F12培养基培养，不做缺氧缺糖处理，缺氧缺糖组细胞用无糖DMEM和Na2S2O4处理，Na2S2O4终浓度为10mmol/L。
取处理后10min、30min、60min和90min为观察点。
进行形态学观察和MTT的测定。
3 结果
3.1 倒置相差显微镜下观察少突胶质前体细胞的形态变化
缺氧缺糖组OPCs形态随缺氧缺糖时间的延长而发生明显改变。
缺氧缺糖10
分钟时，细胞仍贴壁生长，细胞折光性无明显改变，部分突起出现轻度肿胀，呈节段样或“串珠样”改变，胞体肿胀尚不明显。
缺氧缺糖30分钟，少量细胞不能贴壁而开始漂浮，贴壁细胞折光性减弱，胞体轻度肿胀，细胞突起节段样或“串珠样”改变更加明显，部分突起回缩。
缺氧缺糖60分钟，漂浮细胞增加，贴壁细胞明显肿胀、胞体混浊，细胞突起多数节段性肿胀明显，可见较多突起断裂。
缺氧缺糖90分钟，大部分细胞漂浮，剩余细胞多数胞体极度肿胀，胞质内可见大小不等的空泡，细胞核不清，突起断裂，可见较多细胞已经崩解。
3.2 MTT法（四哇氮盐比色实验）测定少突胶质前体细胞存活率
结果显示，在缺氧缺糖早期，缺氧缺糖组细胞存活率较正常对照组已有降低，但尚无统计学意义（P>0.05）；随着缺氧缺糖时间的延长，细胞存活率逐渐降低，60min时，细胞存活率已降到接近50%，到90min时，已剩下不到一半细胞存活，与对照组相比，差异均有显著性（P＜0.05）（表1）
4 讨论
本实验中，在缺氧缺糖后开始后，细胞很快就出现形态学上面的改变，随着缺氧缺糖时间的延长，细胞开始出现水肿、细胞活力明显减退，细胞突起水肿、断裂，直至最后多数细胞漂浮，细胞极度肿胀乃至崩解。
MTT法检测也提示细胞存活率随着时间的延长逐渐降低，至60分钟时已降至正常的一半左右，90分钟时则已降至正常的一半以下，说明连二亚硫酸钠和无糖培养基的联合应用使少突胶质细胞在较短的时间内即出现了缺氧性损伤和丢失，可以模拟严重脑白质损伤的细胞改变情形。
但由于缺氧缺糖至90分钟时，大部分细胞己经死亡和丢失，不利于后续的实验研究，故选用存活细胞大约有50%的60分钟来作为终止缺氧缺糖的时间。
参考文献
[1]Michael V，Johnston，William H，et al. Neurobiology of Hypoxic-Ischemic Injury in the Developing Brain. Pediatric Research，2001，49（6）：735-741.
[2]V olpe JJ. Hypoxic-ischemic encephalopathy. Neurology of the Newborn，4th edi. Philadelphia：W.B. Saunders company，2001，217.
[3]Snyder EY，Wolfe JH. Central nervouse system cell tansplantation：a novel therapy for storage diseases？Curr Opin Neurol，1996，9（2）：126-136.
[4]牛建钦，肖岚.P.少突胶质前体细胞的分离纯化方法.2011，7.。