核医学课件：体外分析技术

B%
标准曲线
未知样品的测量
➢ 在同等条件下，用待测抗原与一定量的标记 抗原和限量特异性抗体发生反应，并用同样 的方法分离待测抗原的B和F，测量其放射性 （cpm），计算出B/(B+F)，在剂量反应曲线 上就可以查出对应的抗原浓度。
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B1% B2% B3% B4% B5% B6% B%
Ab
分离B、F,测
作为横坐标（即一系列标准抗原）作一条曲线，就 得到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲 线，这就是标准曲线。
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B1% B2% B3% B4% B5% B6%
Ab
分离B、F，分别
测量B、F的cpm
*Ag
B%=B/(B+F)
F%=F/(B+F)
R=B/F
Ag 1
2
3
4
5
6
浓度 25 50 100 200 400 800
Ag + *Ag + Ab ++
+
+
++
*AgAb + AgAb + *Ag +Ag
+
+
+
+
+
+
++
+
+
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标准曲线
*Ag-Ab复合物与Ag（被测物）之间的函数关系
可以用标准曲线来表示。标准曲线是用一系列标 准抗原反应而绘制出来的。
标准曲线是放射免疫分析的定量的基础，是衡量
物质浓度的客观尺度
量B、F的cpm
*Ag
B%=B/(B+F)
Ag 1
2
3
4
5 6？
25 50 100 200 400 800
B%
B% 标准曲线
常 用 的 反 应 参 数 有 B%，B/F，F/B、 F%等这些反应变量都可以用作纵坐标来对 应标准抗原的浓度作标准曲线，选用的反应 变量不同，标准曲线的形状也不同。但是这 些标准曲线都是反映的反应变量对应标准抗 原浓度变化而变化的函数关系。
分类:
放射性竞争 结合分析
放射免疫分析
(radioimmunoassay, RIA)
体外放射分析Leabharlann Baidu
体
放射性非竞 免疫放射分析
外
争结合分析 (immunoradiometric
分
assay, IRMA)
析
酶标记免疫分析
技
(EIA)
术
化学发光免疫分析技术
(CLIA)
体外非放射分析
时间分辨荧光免疫分析技术
标准曲线
目前已普遍采用计算机进行数据处 理，自动绘制标准曲线，自动换算 样品中被测物质的浓度
实验操作基本步骤
1.加样：加样总体积要保持一致，所处的介质环境 也要一致。
2.孵育：根据不同的分析对象孵育的温度和时间 不同，一般是37℃。
3.分离：选择好的分离方法分离游离抗原和 抗原－抗体复合物。 4.测量：测量游离或结合物部分的放射性。 5.数据处理：绘制标准曲线和待测物浓度的计算
二、基本试剂
1.抗体 2.标记抗原 3.标准抗原（标准品）
2、标记抗原
1）比活度
比活度——每微克抗原上标记放射性核素的千贝 可数（KBq/μg）比活度要求足够高
2）放射化学纯度
放化纯度——具有免疫活性的标记抗原占总放射 性的百分数。 应>90%。
3）免疫活性是指保持原有抗原的特性
从标记到使用的全过程中各种因素都会造成标记 抗原的免疫活性下降，与抗体的结合力下降
标准抗原(标准品)是厂家在试剂盒中提供的已知 剂量的非标记抗原。
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标准曲线的绘制方法
用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原 在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应；
在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B和F 分别测量B和F的放射性计数； 用反应变量（如B/(B+F)）作为纵坐标，反应剂量
体外放射分析技术是核医学不可缺少的重 要组成部分，利用体外分析技术检测体内 超微量生物活性物质的变化，已经广泛应 用于疾病的早期诊断、治疗决策、疗效评 估、和预后判断，以及应用于分子生物学 、细胞生物学和分子药理学等医学基础研 究
优点
灵敏度高 特异性强 重复性好 准确度高 操作简便 应用范围广
(FIA)
胶体金标记分析技术
(CGIA)
第一节 放射免疫分析 (radioimmunoassay，RIA)
放射免疫分析技术是核医 学中建立最早、应用最广泛的 体外放射分析技术
Yalow
Berson
发展史
1959年，美国学者Yalow 和Berson 创立了放 射免疫分析技术，并首先用于糖尿病人血浆 中胰岛素含量的测定。这是医学和生物学领 域中方法学的一项重大突破，开辟了医学检 测史上的一个新纪元。
体外分析技术
(in vitro analysis techniques)
概述
体外分析技术： 广义地讲，它是泛指以离体组 织、血液或体液等作为生物样 本，在人体外进行的、分析样 本中成分或含量的检测技术
具体在核医学中体外分析技术是指在体 外利用放射性核素标记配体（ligand） 为示踪剂，以结合反应为基础，在试管 内或反应杯内进行的检测微量生物活性 物质的标记免疫分析技术。
* Ag
基本反应式
Ag-Ab
*Ag:标记抗原，Ag 非标记抗原 Ab：抗体 *Ag- Ab 标记抗原抗体复合物 Ag- Ab 非标记抗原抗体复合物
Ag-Ab+Ag
条件：1.*Ag与Ag 免疫活性相同
2. *Ag与Ab 恒量
*Ag-Ab+*Ag
3.*Ag＋Ag > Ab
（B） (F)
分析原理
*Ag与Ag由于免疫化学性质一致，共同竞争 性与Ab结合，当*Ag和Ab的量保持恒定， *Ag与Ag之和大于Ab时，则*Ag-Ab复合物的 形成受Ag含量的制约，二者之间存在函数关 系 ， 即 Ag 量 越 大 ， *Ag-Ab 量 越 小 ； Ag 量 越 小，*Ag-Ab量越大；测定*Ag-Ab或*Ag量即 可推算出被测Ag量
3.标准抗原（标准品）
是厂家给出已知剂量的非标记抗原。一 般每一个RIA试剂盒里都有浓度由小到大 的多瓶标准抗原。 要求：
化学结构、免疫活性与被测抗原相同
放射化学纯度高 定量精确
（四）分离方法
分离方法的要求：
➢ 分离完全、快速。
➢ 不影响免疫反应的平衡，即是要求在分离过 程中不使抗原-抗体复合物解离或形成新的复 合物。
1977年，这项技术的发明者Yalow分享了诺 贝尔医学与生理学奖。
一、基本原理
是在体外条件下，利用非标记抗原（ Ag） 与定量的标记抗原（* Ag）对限量的特异 性抗体（Ab）发生可逆性竞争性结合反应 ，通过测定放射性复合物的量来计算出非 标记抗原（ Ag）量的一种超微量检测技术
Ag+Ab
Ag+Ab +