核医学课件：体外分析技术
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医学超级全核医学——体外分析技ppt课件
• 适应症：小细胞肺癌，神经和细胞瘤、消 化系统内分泌瘤
• 名称：组织多肽抗原TPA • 生化特性：多肽增殖抗原 • 分子量：≈180 000 • 来源：空腔器官的上皮细胞 • 特异性%：≈40 • 适应症：膀胱癌 • 注释：膀胱、支气管、卵巢、胃癌及肝、
肾、肺病等，低特异性。
• 名称：降钙素（CT） • 生化特性：含32个氨基酸多肽 • 分子量：3500 • 来源：C细胞 • 特异性%：＞80 • 适应症：甲状腺髓质瘤
核医学体外分析技术
肿瘤标志物的临床应用
基本概念
• 肿瘤抗原：是细胞在恶变过程中出现的新 抗原及过度表达的抗原物质的总称，可分 为肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原。
肿瘤特异性抗原：是指只存在于某一种或几种肿 瘤细胞而不存于正常细胞的新抗原。此类抗原可 用动物肿瘤移植排斥试验证明度：（Sensitioty）又称真阳性率，是 指将实际有病的人正确判断为患者的能力。 理想试验为100%。
• 特异度：（Specificity）又称真阴性率，是 指将实际未患某病的人正确地判断为未患 某病的能力。理想的试验应为100%。
• AFP的临床规律：
• 这种主要存在于胚胎早期血清中的AFP在出生 后即迅速降到正常成人水平，如果在成人血清重 新升高，则提示有患肝细胞癌或生殖胚胎癌的可 能。此外，妊娠，急慢性肝炎，肝硬化也有一过 性AFP升高，某些消化道癌也会出现AFP升高。
• 名称：β2-微球蛋白 β2-MG • 生化特性：低分子量蛋白 • 分子量：11 500
• 来源：淋巴细胞、巨噬细胞和一些上皮细 胞表面
• 适应症：多发性骨髓瘤 • 注释：对于肾脏的诊断也有很大价值。
核医学体外分析技术
肾功能指标
概述
• “β2-微球蛋白”（β2-microglobulin, β2-m） 是一种由100个氨基酸残基组成的单链多肽， 分子量118000，广泛存在所有核细胞膜上， 正常生理条件下，体液中β2-m含量甚微， 分子量小易通过肾小球滤过，但99.9%的 β2-m在近曲小管被吸收，并完全被分介不 再返流入血。
• 名称：组织多肽抗原TPA • 生化特性：多肽增殖抗原 • 分子量：≈180 000 • 来源：空腔器官的上皮细胞 • 特异性%：≈40 • 适应症：膀胱癌 • 注释：膀胱、支气管、卵巢、胃癌及肝、
肾、肺病等，低特异性。
• 名称：降钙素（CT） • 生化特性：含32个氨基酸多肽 • 分子量：3500 • 来源：C细胞 • 特异性%：＞80 • 适应症：甲状腺髓质瘤
核医学体外分析技术
肿瘤标志物的临床应用
基本概念
• 肿瘤抗原：是细胞在恶变过程中出现的新 抗原及过度表达的抗原物质的总称，可分 为肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原。
肿瘤特异性抗原：是指只存在于某一种或几种肿 瘤细胞而不存于正常细胞的新抗原。此类抗原可 用动物肿瘤移植排斥试验证明度：（Sensitioty）又称真阳性率，是 指将实际有病的人正确判断为患者的能力。 理想试验为100%。
• 特异度：（Specificity）又称真阴性率，是 指将实际未患某病的人正确地判断为未患 某病的能力。理想的试验应为100%。
• AFP的临床规律：
• 这种主要存在于胚胎早期血清中的AFP在出生 后即迅速降到正常成人水平，如果在成人血清重 新升高，则提示有患肝细胞癌或生殖胚胎癌的可 能。此外，妊娠，急慢性肝炎，肝硬化也有一过 性AFP升高，某些消化道癌也会出现AFP升高。
• 名称：β2-微球蛋白 β2-MG • 生化特性：低分子量蛋白 • 分子量：11 500
• 来源：淋巴细胞、巨噬细胞和一些上皮细 胞表面
• 适应症：多发性骨髓瘤 • 注释：对于肾脏的诊断也有很大价值。
核医学体外分析技术
肾功能指标
概述
• “β2-微球蛋白”（β2-microglobulin, β2-m） 是一种由100个氨基酸残基组成的单链多肽， 分子量118000，广泛存在所有核细胞膜上， 正常生理条件下，体液中β2-m含量甚微， 分子量小易通过肾小球滤过，但99.9%的 β2-m在近曲小管被吸收，并完全被分介不 再返流入血。
核医学课件第五章体外分析技术课件
固相分离法(测量B)：
将抗体或抗原通过特殊技术联结在固相载体上，免疫反 应在固相载体上完成，达到平衡后形成固相的Ag-Ab 复合 物，可与游离部分分离。 优点：操作简便，迅速，分离效果好，非特异性结合低。
（五）放射性测量仪器
γ井型计数器：测γ射线，125I标记 液体闪烁计数器：测β射线，3H、14C等标记 配计算机系统，自动测量、数据处理、打印结果。
双抗体＋沉淀法(测量B)： 将双抗体和沉淀法两者结合进行分离。 本法具有两种方法的优点，并克服了双抗体分离时间长 和沉淀法非特异性结合高的缺点。
活性炭吸附法(测量F)： 活性炭吸附小分子游离抗原，离心分离后，复合物留 在上清液中，游离抗原在沉淀物中，测量沉淀物中的放射 性 F。 优点：本法操作简便，分离速度快，价格低廉。 缺点：易于解离，分离效果时间和温度的影响较大，非特 异性结合较高。
一、基本原理：
放射性标记的抗原和非标记抗原(标准抗原或被测抗原) 同时与限量的特异性抗体进行竞争性免疫结合反应，这种竞 争关系可用以下反应来表示：
*Ag：标记抗原 Ab：特异性抗体 Ag-Ab：非标记抗原抗体复合物
Ag：非标记抗原 *Ag-Ab：标记抗原抗体复合物
*Ag与Ag的免疫活性完全相同，对Ab具有同样的亲和力；
（3）分离方法主要是使大分子和小分子物质分离。
双抗体法(测量B)： 用抗原免疫动物而产生的抗体称为第一抗体，用第一抗 体再免疫另一种动物所产生的抗体称为第二抗体。
当RIA反应完成后，于反应液中加入第二抗体，第二抗 体则与含有第一抗体的免疫复合物B相结合形成第二抗体复 合物，其分子量比第一抗体复合物大，可用离心方法分离 出来，称为双抗体法（double antibody method）。
核医学体外放射分析技术课件
有效地排除非特异性物质对结合反应的干 扰。
二、结合反应动力学规律
• 遵守质量作用定律 • [L]+[B] 适当的实验条件 [LB]
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（competitive binding) • 过量的配体与有限量的结合剂发生竞争性
结合反应。 • 2、非竞争结合（non-competitive binding) • 过量的结合剂与有限量的配体，在非竞争
的条件下发生结合反应。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（主要应用：放射免疫分析）
• [L]+ [L*]+[B] [LB] +[L*B]
• 2、非竞争结合
•结合在试管 或包被珠上
• Sp.Ab1+Ag Sp.Ab1.Ag
• Sp.Ab1.Ag +Ab2* Sp.Ab1.Ag.Ab2*+Ab2*
优点
• 慢性淋巴细胞性甲状腺炎： • 早期：T3,T4升高，然后降低，
TSH,TGAB,TPOAB升高。 • 甲状腺肿瘤：TG升高。 • 全身性疾病：心血管疾病、肿瘤等： • T3下降，rT3、TSH升高。
（二）肾上腺疾病
• 皮质醇增多症： • ACTH\COR正常情况下有节律分泌，检测
可以与单纯性肥胖区分。 • 原发性醛固酮增多症：尿游离皮质醇
• 反应误差关系 • 精密度图
• 2、准确度：测的值与其标称值之间的 相符程度。
• 3、灵敏度（sensitivity): • 4、特异性(specificity) • 5、稳定性(stability)
（三）质量评价
• 内部质量控制 • 外部质量控制
三、以配体与受体间结合反应 为基础的分析系统
二、结合反应动力学规律
• 遵守质量作用定律 • [L]+[B] 适当的实验条件 [LB]
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（competitive binding) • 过量的配体与有限量的结合剂发生竞争性
结合反应。 • 2、非竞争结合（non-competitive binding) • 过量的结合剂与有限量的配体，在非竞争
的条件下发生结合反应。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（主要应用：放射免疫分析）
• [L]+ [L*]+[B] [LB] +[L*B]
• 2、非竞争结合
•结合在试管 或包被珠上
• Sp.Ab1+Ag Sp.Ab1.Ag
• Sp.Ab1.Ag +Ab2* Sp.Ab1.Ag.Ab2*+Ab2*
优点
• 慢性淋巴细胞性甲状腺炎： • 早期：T3,T4升高，然后降低，
TSH,TGAB,TPOAB升高。 • 甲状腺肿瘤：TG升高。 • 全身性疾病：心血管疾病、肿瘤等： • T3下降，rT3、TSH升高。
（二）肾上腺疾病
• 皮质醇增多症： • ACTH\COR正常情况下有节律分泌，检测
可以与单纯性肥胖区分。 • 原发性醛固酮增多症：尿游离皮质醇
• 反应误差关系 • 精密度图
• 2、准确度：测的值与其标称值之间的 相符程度。
• 3、灵敏度（sensitivity): • 4、特异性(specificity) • 5、稳定性(stability)
（三）质量评价
• 内部质量控制 • 外部质量控制
三、以配体与受体间结合反应 为基础的分析系统
核医学体外分析技术(68页).doc
核医学--体外分析技术
7 质控图 通常情况下，实验室技术人员将质控品插 入患者样本之中，并与患者样本同时测定，将所测得的质控 品结果按一定的规则逐日绘集在一起，即形成质控图 （quality control chart）。 定量分析项目的室内质控常选用Levey-Jennings质控图。 按检验结果要求的高低和检验项目质控的难易程度，可选择 高、中、低三水平质控品之一个水平、两个水平或三个水平 进行室内指控。所用质控品，可以是已知值的、也可以是未 知值的质控品。对未知质控品。通常以20次的测定结果来 计算平均值和标准差，定出质控限;对已知质控品，可直接 引用（不推荐）厂家提供的平均值和标准差。
在疾病的早期诊断、治疗决策、疗效评估、判断预后应用价值高。 主要应用于分子、细胞生物学和分子药理学等医学基础研究。
4
核医学--体外分析技术
第一节 放射免疫分析
1 基本原理
2 基本试剂（抗体、标记抗原、标准抗原）
3 检测仪器 （γ----计数仪）
4 4 质量控制
核医学--体外分析技术
本章节掌握要点 1、放射免疫分析的基本原理是什么？ 是利用放射性标记的抗原（*Ag）和非标记抗 原（Ag）同时与限量的特异性抗体（Ab）进行竞 争性免疫结合反应。
核医学--体外分析技术
3.双抗体法+沉淀法 此方法取之前两者的优点，易分离、速 度快、特异性强、价格低廉、使用方便， 弥补了操作时间长等不足。
核医学--体外分析技术
4.吸附分离法 吸附分离法（absorptive separation method）应用特殊处理的吸附剂，最常用 的是葡聚糖包被的活性炭，其表面有微细 网眼，可吸附小分子物质，而大分子的抗 原-抗体复合物则在反应液中，经离心使B 和F分离，简单快速，经济易得，但非特异 性结合偏高，缺乏专一性，干扰因素较多。
明核医学11-神经系统、体外分析技术课件
目前常用方法有二种
双抗体分离法
Ag* + Ab1
Ag* Ab1 + Ab2
Ag*
Ag* Ab1 Ab2
固相分离技术
Ag* Ag* Ag Ag
-Ag* -Ag
-Ab-Ag -Ab-Ag*
去除液相
-Ab-Ag* -Ab-Ag
-Ag -Ag*
双抗体法 固相分离
优点
特异性强 分离完全
操作简便、快速 应用广
胎盘催乳素(HPL) 其 他 肾素(Renin)
血管紧张素(Ang) 内皮素 红细胞生成激素
2.细胞内 信使
3.酶 4.非激素
蛋白 5.肿 瘤
标志物
6.病原体
7.抗 体
8.药 物 9.维生素 10.其 他
环磷酸腺苷(cAMP) 环磷酸乌苷(cGMP)
胃蛋白酶原 肌红蛋白 纤维蛋白
甲胎蛋白(AFP) 癌胚抗原(CEA) 铁蛋白(Ferritin) 乙肝表面抗原(HBsAg) 甲肝相关抗原 抗-HBs 甲状腺球蛋白抗体(TG)
甲状腺
甲状腺素(T4) 三碘甲状腺原氨酸(T3) 甲状旁腺素(PTH)
降钙素(CT)
胰 腺 胰岛素(Ins)
消化道 胃泌素(Gastrin) 舒血管肠肽(VIP)
性 腺 雌二醇(E2) 孕酮(P) 睾丸酮(T)
肾上腺 皮质醇(Cortisol)
醛固酮(Aldos) 胎 盘 绒毛膜促性腺激素(HCG)
受体正常
模糊
柏森氏病
脑多巴胺受体显象
小结
1.原理 --血流、代谢性显像 2.正常图像 --脑皮质对称性显像 3.异常特征 --非对称性改变 4.应用 --脑功能性疾病诊断
思考题
第九版核医学配套课件 6 体外分析技术
改变结合体对
Ag
Ag-Ab
+Ab
*Ag *Ag-Ab
改变标记物
荧光：FIA（RMA）； 化学发光：CLA； 酶：EIA。
小分子半抗联接125I； 单克隆技术； 固相技术； 商品化的药盒。
理论与实践上更丰富 更完善的RIA： ➢ 可测物达300多种； ➢ 涉及生命科学及临床 与基础多个学科； ➢ RIA显像； ➢ RIA治疗。
γ-免疫计数仪
标记物与被测物之间的函数关系可以用标准竞争 抑制曲线（标准曲线）来表示。 制作方法：
将药盒中一系列已知浓度（递增）的标准品 抗原（标准品），分别加入相应的试管； 加入固定量的*Ag和Ab； 待竞争结合反应达到平衡后，分离抗原的结 合部分和游离部分； 用放射性测量仪（γ-计数仪）测定*Ag-Ab 。（B）或游离*Ag（F）的放射性，在坐标纸 或计算机拟合曲线。
20世纪50年代，放射免疫分析法的建立与临床应用，开创了微量物质 检测的新纪元。
1. RIA的基本原理
特异性 抗体 Ab
*Ag与Ag 免疫活性相同 ；
在一定的反应条件下；
*Ag、Ab为恒定量；
*Ag＋Ag > Ab。
Ag =* Ag , AgAb =*AgAb
B%=B/(B+F)
Ag > *Ag , *AgAb (B) *Ag(F)
放射免疫分析法原理与体外分析技术发展示意图 RIA是所有标记免疫分析的基础，超微量分析的检测源于RIA，RIA及在此基 础上发展起来的检测方法，是临床医疗不可缺的诊断、治疗疗效评价的手段
第一节
放射性标记分析技术
一、放射免疫分析
放射免疫分析（RIA）是指在体外条件下, 利用非标记抗原（含待测抗原 及标准品，简称Ag）及定量的放射性核素标记抗原（*Ag）对限量的特异性 抗体（Ab）的竞争结合反应，通过测定放射性复合物的量来计算出Ag量的 一种超微量分析技术。
核医学体外放射分析ppt课件
仪器与设备（不统一，差异等）
测量（统计涨落）
数据处理：拟合不当、方法不一致等。
误差分类
系统误差：原因是确定因素如试剂变性，称量不 准，批号不同。
随机误差：原因属偶然，难以确定，测量结果忽 高忽低呈双向围某数值波动。
过失误差：过失造成的误差，结果失真无规律性 可查。 质控目的：找出误差原因、采取必要措施，保证 实验结果的可信性。
P0与复合物B呈一定的函数关系
放免反应的定量依据：
剂量反应曲线或叫标准曲线
剂量反应曲线的含义
以已知的标准品为横坐标，以放射性复合物 测定值的某种表达式做纵坐标，绘制剂量 --- 反 应曲线 P64图4—1 P74图4—13
曲线的斜率是关键因素，斜率不同精密 度不同（P64图4—1）
斜率 = tg α（代表曲线或直线的倾斜度） 影响斜率的常见因素有以下几点： 1、Ab亲和力：K大，斜率也大 2、Ag用量：Ag少，斜率大 3、Ag的免疫活性：活性强，斜率大 4、*Ag的比活度和放化纯度：↑→↑ 5、Ab用量：B=33—50%斜率最大。
4、五参logistic数模型：
a—b Y= --------------- + d x [1+(----)b]E c
引入了一个不对称因子E。 E计算机能求出。 可用于非平衡反应系统
5、四参数单位点质量作用定律模式：
按质量作用定律导出的模式 优点：①质量作用定律，稳健回归拟合； ②适于平衡和非平衡系统； ③个别坏点对曲线影响小。 模型的选择（拟合优度法来选）
样品采集与保存应注意的几个 问题
① 用原样品、新鲜样品、减少存放、最 好不纯化、浓 缩萃取、减少变异 ② 尽快做实验，避免反复冻融
③ 尽可能少用添加剂等，抗凝剂也少用。 RIA数据处理的数学模型 （补充概念）后页
核医学体外放射分析ppt课件【可编辑全文】
误差分类
系统误差：原因是确定因素如试剂变性，称量不准， 批号不同。 随机误差：原因属偶然，难以确定，测量结果忽高 忽低呈双向围某数值波动。 过失误差：过失造成的误差，结果失真无规律性可 查。 质控目的：找出误差原因、采取必要措施，保证实 验结果的可信性。
质控分类
实验室内质控
实验室间质控
常用的质控指标：灵敏度、特异性、精密度、偏差、准 确度、稳定性、临床有效性。
d=NSB
4、五参logistic数模型：
a—b Y= --------------- + d
x [1+(----)b]E
c
引入了一个不对称因子E。
E计算机能求出。
可用于非平衡反应系统
5、四参数单位点质量作用定律模式：
按质量作用定律导出的模式 优点：①质量作用定律，稳健回归拟合；
②适于平衡和非平衡系统； ③个别坏点对曲线影响小。
大于±3SD不得超过1%
如果有下列情况之一发生，说明实验失败、 应舍弃该批数据：
1） 三个QC样品有一个SD大于3SD 2） 三个QC样品有二个SD大于2SD 3） 三个QC样品都同侧超出1SD
后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用
资料仅供参考，实际情况实际分析
主要经营：课件设计，文档制作，网络软件设计、 图文设计制作、发布广告等
QC—H 首
QC—M QC—L
QC首 首样品 品QC尾
2SD A B D 尾样
A区：准确区
B区：正偏差区
C区：负偏差区
D区：不精密区
意义：一种简便，直观、有效地评价精密度和偏倚的 方法。
5、Cusum图：把每批实验的QC测定值与靶值相减后 做图。 评价： 1）小斜线连续上升或下降提示有正、负偏差 2）小斜线的斜率反映偏差的大小 3）斜线两端点落差的绝对值超出QC的3SD说明有偏 差出现，超出5SD说明有明显偏差，数据不可靠。
核医学体外分析技术培训课件
❖ RIA法是一种高特异性、
❖ 高灵敏度的微量检测技术。
American physicist and medical researcher Rosalyn Yalow, corecipient of the 1977 Nobel Prize in physiology
核医学体外分o析r m技e术dicine, "for the development of radioim3munoassays
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核医学体外分析技术
6
放射免疫分析（RIA）的特点：
1.*Ag和Ag与Ab有相同的亲和力 2. *Ag和Ab为恒量时，*Ag和Ag的总
量大于Ab上的有效结合位点。 3. Ag的量与*AgAb 的量成反比，
而与游离的*Ag成正比。
核医学体外分析技术
7
建立标准曲线
❖ 目的：利用标准曲线来推算出病人样品（Ag）的含量。 ❖ 配制一系列的标准品浓度：（0、20、40、80、160和320ng/L）
质量控制的目的： ⑴保证实验分析误差控制在可接受的范围。 ⑵判断试剂盒质量和方法学的稳定性。
核医学体外分析技术
32
1.实验室内部质量控制：
• 零标准管结合率（ Bo %） • 非特异结合率（NSB%） • 最低和最高浓度管之差 • 标准曲线直线回归参数 • ED25、ED50、ED75 • 质控图
1.反应动力学：非竞争性抗原抗体结合反应。Ag-*Ab 复合物的量与非标记抗原的量呈正相关。
2.灵敏度：灵敏度高出RIA10倍。特别在低剂量区。 3.特异性 4.稳定性 5.标准曲线的工作范围 6.缺点：抗原必须有两个以上的抗原决定簇。
❖ 高灵敏度的微量检测技术。
American physicist and medical researcher Rosalyn Yalow, corecipient of the 1977 Nobel Prize in physiology
核医学体外分o析r m技e术dicine, "for the development of radioim3munoassays
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核医学体外分析技术
6
放射免疫分析（RIA）的特点：
1.*Ag和Ag与Ab有相同的亲和力 2. *Ag和Ab为恒量时，*Ag和Ag的总
量大于Ab上的有效结合位点。 3. Ag的量与*AgAb 的量成反比，
而与游离的*Ag成正比。
核医学体外分析技术
7
建立标准曲线
❖ 目的：利用标准曲线来推算出病人样品（Ag）的含量。 ❖ 配制一系列的标准品浓度：（0、20、40、80、160和320ng/L）
质量控制的目的： ⑴保证实验分析误差控制在可接受的范围。 ⑵判断试剂盒质量和方法学的稳定性。
核医学体外分析技术
32
1.实验室内部质量控制：
• 零标准管结合率（ Bo %） • 非特异结合率（NSB%） • 最低和最高浓度管之差 • 标准曲线直线回归参数 • ED25、ED50、ED75 • 质控图
1.反应动力学：非竞争性抗原抗体结合反应。Ag-*Ab 复合物的量与非标记抗原的量呈正相关。
2.灵敏度：灵敏度高出RIA10倍。特别在低剂量区。 3.特异性 4.稳定性 5.标准曲线的工作范围 6.缺点：抗原必须有两个以上的抗原决定簇。
核医学 标记免疫体外分析技术二护理课件
应急预案
制定针对可能出现的意外情况 的应急预案，确保在紧急情况 下能够迅速、有效地应对。
质量监控
建立完善的质量监控体系，对 分析过程进行全程监控，确保
结果的准确性和可靠性。
05
核医学标记免疫体外分析 技术护理案例分享
案例一：肿瘤标志物检测在肿瘤护理中的应用
总结词
肿瘤标志物检测在肿瘤护理中具有重要价值，有助于早期发现肿瘤、评估病情和治疗效果。
标记免疫体外分析技术实验操作
01
02
03
标记抗体
将特异性抗体与放射性同 位素或荧光染料结合，形 成标记抗体。
抗原抗体反应
将标记抗体与待测样本中 的抗原进行反应，形成抗 原-抗体复合物。
洗涤与分离
通过洗涤去除未结合的抗 体和抗原，分离出抗原-抗 体复合物。
结果分析与报告解读
结果分析
根据实验数据，分析抗原含量、抗体活性等指标，判断患者 的病情状况。
利用标记免疫体外分析技术监测患者体内 药物浓度，有助于指导临床合理用药，提 高治疗效果并降低不良反应的发生。
03
核医学标记免疫体外分析 技术护理操作流程
样本采集与处理
样本采集
采集患者的血液、尿液等样本，确保 采集过程无菌、准确，避免交叉污染 。
样本处理
对采集的样本进行离心、分离等处理 ，提取出所需的组分，为后续实验做 准备。
感染性疾病的早期诊断
肿瘤标志物的监测
利用标记免疫体外分析技术检测感染性疾 病的特异性抗体或抗原，有助于早期诊断 和及时治疗。
通过标记免疫体外分析技术监测肿瘤标志 物的水平，有助于肿瘤的早期发现、病情 监测和治疗效果的评价。
内分泌疾病的诊断
药物浓度监测
相关主题
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标准曲线
目前已普遍采用计算机进行数据处 理，自动绘制标准曲线，自动换算 样品中被测物质的浓度
实验操作基本步骤
1.加样：加样总体积要保持一致，所处的介质环境 也要一致。
2.孵育：根据不同的分析对象孵育的温度和时间 不同，一般是37℃。
3.分离：选择好的分离方法分离游离抗原和 抗原－抗体复合物。 4.测量：测量游离或结合物部分的放射性。 5.数据处理：绘制标准曲线和待测物浓度的计算
* Ag
基本反应式
Ag-Ab
*Ag:标记抗原，Ag 非标记抗原 Ab：抗体 *Ag- Ab 标记抗原抗体复合物 Ag- Ab 非标记抗原抗体复合物
Ag-Ab+Ag
条件：1.*Ag与Ag 免疫活性相同
2. *Ag与Ab 恒量
*Ag-Ab+*Ag
理
*Ag与Ag由于免疫化学性质一致，共同竞争 性与Ab结合，当*Ag和Ab的量保持恒定， *Ag与Ag之和大于Ab时，则*Ag-Ab复合物的 形成受Ag含量的制约，二者之间存在函数关 系 ， 即 Ag 量 越 大 ， *Ag-Ab 量 越 小 ； Ag 量 越 小，*Ag-Ab量越大；测定*Ag-Ab或*Ag量即 可推算出被测Ag量
量B、F的cpm
*Ag
B%=B/(B+F)
Ag 1
2
3
4
5 6？
25 50 100 200 400 800
B%
B% 标准曲线
常 用 的 反 应 参 数 有 B%，B/F，F/B、 F%等这些反应变量都可以用作纵坐标来对 应标准抗原的浓度作标准曲线，选用的反应 变量不同，标准曲线的形状也不同。但是这 些标准曲线都是反映的反应变量对应标准抗 原浓度变化而变化的函数关系。
(FIA)
胶体金标记分析技术
(CGIA)
第一节 放射免疫分析 (radioimmunoassay，RIA)
放射免疫分析技术是核医 学中建立最早、应用最广泛的 体外放射分析技术
Yalow
Berson
发展史
1959年，美国学者Yalow 和Berson 创立了放 射免疫分析技术，并首先用于糖尿病人血浆 中胰岛素含量的测定。这是医学和生物学领 域中方法学的一项重大突破，开辟了医学检 测史上的一个新纪元。
二、基本试剂
1.抗体 2.标记抗原 3.标准抗原（标准品）
2、标记抗原
1）比活度
比活度——每微克抗原上标记放射性核素的千贝 可数（KBq/μg）比活度要求足够高
2）放射化学纯度
放化纯度——具有免疫活性的标记抗原占总放射 性的百分数。 应>90%。
3）免疫活性是指保持原有抗原的特性
从标记到使用的全过程中各种因素都会造成标记 抗原的免疫活性下降，与抗体的结合力下降
标准抗原(标准品)是厂家在试剂盒中提供的已知 剂量的非标记抗原。
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标准曲线的绘制方法
用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原 在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应；
在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B和F 分别测量B和F的放射性计数； 用反应变量（如B/(B+F)）作为纵坐标，反应剂量
作为横坐标（即一系列标准抗原）作一条曲线，就 得到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲 线，这就是标准曲线。
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B1% B2% B3% B4% B5% B6%
Ab
分离B、F，分别
测量B、F的cpm
*Ag
B%=B/(B+F)
F%=F/(B+F)
R=B/F
Ag 1
2
3
4
5
6
浓度 25 50 100 200 400 800
分类:
放射性竞争 结合分析
放射免疫分析
(radioimmunoassay, RIA)
体外放射分析
体
放射性非竞 免疫放射分析
外
争结合分析 (immunoradiometric
分
assay, IRMA)
析
酶标记免疫分析
技
(EIA)
术
化学发光免疫分析技术
(CLIA)
体外非放射分析
时间分辨荧光免疫分析技术
体外放射分析技术是核医学不可缺少的重 要组成部分，利用体外分析技术检测体内 超微量生物活性物质的变化，已经广泛应 用于疾病的早期诊断、治疗决策、疗效评 估、和预后判断，以及应用于分子生物学 、细胞生物学和分子药理学等医学基础研 究
优点
灵敏度高 特异性强 重复性好 准确度高 操作简便 应用范围广
体外分析技术
(in vitro analysis techniques)
概述
体外分析技术： 广义地讲，它是泛指以离体组 织、血液或体液等作为生物样 本，在人体外进行的、分析样 本中成分或含量的检测技术
具体在核医学中体外分析技术是指在体 外利用放射性核素标记配体（ligand） 为示踪剂，以结合反应为基础，在试管 内或反应杯内进行的检测微量生物活性 物质的标记免疫分析技术。
B%
标准曲线
未知样品的测量
➢ 在同等条件下，用待测抗原与一定量的标记 抗原和限量特异性抗体发生反应，并用同样 的方法分离待测抗原的B和F，测量其放射性 （cpm），计算出B/(B+F)，在剂量反应曲线 上就可以查出对应的抗原浓度。
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B1% B2% B3% B4% B5% B6% B%
Ab
分离B、F,测
Ag + *Ag + Ab ++
+
+
++
*AgAb + AgAb + *Ag +Ag
+
+
+
+
+
+
++
+
+
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标准曲线
*Ag-Ab复合物与Ag（被测物）之间的函数关系
可以用标准曲线来表示。标准曲线是用一系列标 准抗原反应而绘制出来的。
标准曲线是放射免疫分析的定量的基础，是衡量
物质浓度的客观尺度
3.标准抗原（标准品）
是厂家给出已知剂量的非标记抗原。一 般每一个RIA试剂盒里都有浓度由小到大 的多瓶标准抗原。 要求：
化学结构、免疫活性与被测抗原相同
放射化学纯度高 定量精确
（四）分离方法
分离方法的要求：
➢ 分离完全、快速。
➢ 不影响免疫反应的平衡，即是要求在分离过 程中不使抗原-抗体复合物解离或形成新的复 合物。
1977年，这项技术的发明者Yalow分享了诺 贝尔医学与生理学奖。
一、基本原理
是在体外条件下，利用非标记抗原（ Ag） 与定量的标记抗原（* Ag）对限量的特异 性抗体（Ab）发生可逆性竞争性结合反应 ，通过测定放射性复合物的量来计算出非 标记抗原（ Ag）量的一种超微量检测技术
Ag+Ab
Ag+Ab +