细胞生物学：常规制片技术.

氧化汞
俗称升汞，剧毒，必须严格 保管和注意使用。穿透力慢， 适于固定薄块组织。能沉淀一 切蛋白质，升汞可增加对酸性 燃料的亲和力，如卡红等。
醋酸 又名乙酸、冰醋酸，为无色 透明液体，有刺激性气味。 醋酸的渗透力强。经单纯醋 酸固定的组织，可不经水洗， 直接入酒精脱水。用作固定 剂的醋酸浓度一般在0.3-5%。
• 取材
顺序：先腹腔（肝脏、胆囊、 肾、肾上腺、胰腺、脾、胃、 十二指肠、空肠、回肠、结 肠），然后取胸腔和盆腔内的 器官组织。
取材关键
材料新鲜
勿使组织块受挤压
组织块力求小而薄 选好组织块的切面 尽量保持组织的原有形态 保持材料的清洁
固定和固定液
固定：借助化学药品使组织和细 胞中的有机和无机成分凝固成沉 淀，防止发生死后组织变化，以 保持其生活时状态的过程。此药 品称为固定剂。
组织学常规制 片基本技术Baidu Nhomakorabea
组织学制片方法
切片法 非切片法 1.分离标本 2.活体标本 3.涂片标本

4.磨片标本 5.整体封藏标本 6.铺片标本 7.组织印片
巨噬细胞（macrophage)
精子
石蜡切片HE染色制片方法
•
动物致死和取材
致死方法：麻醉、空气栓塞、股动脉放血 等。
HE染色
避免死后变化。
避免过度膨胀或收缩。
注意事项 组织必须新鲜 组织的厚度 防止因固定发生变形 用量 时间 促使固定

固定剂
单纯固定剂 甲醛 渗透力强，固定均匀，对组织收缩 少。经甲醛固定的组织，细胞核染色甚 佳，胞质着色较差。除单独使用外，常 与其他药品配成混合液，效果更佳。
种类
非石蜡溶剂的脱水剂 石蜡溶剂的脱水剂]
•
方法
将脱水剂配成各种浓度，自低到高 浓度循序进行。
常用脱水剂
酒精
为常用的脱水剂。脱水能力强， 并能使组织硬化，能较好地与二甲 苯透明剂相融合。其缺点是易使组 织收缩，变脆。在一般脱水过程中， 采用循序渐进的方法，逐步升级， 经一系列的不同浓度的酒精，使组 织中的水分逐渐被酒精所替代。
简便的酒精稀释法： 无论任何浓度的酒精稀释时， 需稀释到多大浓度就取多少毫升酒精， 然后用蒸馏水加至该酒精原有浓度即 可。例：将95%酒精稀释为70%浓度 时，则将95%酒精70毫升倒入量筒中， 然后加入蒸馏水至总量95毫升即可。
透

明
目的
一、组织块透明的目的是便于浸蜡包埋，但组 织块脱水后其内部的脱水剂与石蜡不相溶，还必 须用石蜡诱导剂过度，这种物质能够同时溶解于 脱水剂及包埋剂中，它能逐渐渗入组织最终将脱 水剂完全排出，诱导剂渗入后，组织块往往呈透 明状故称之为“透明”。这种药剂称为透明剂。 二、切片透明的目的是有利于光线的透过，便 于显微镜的观察。当组织块中全部为透明剂占有 时，光线可以透过，组织可呈现不同程度的透明 状态。
目的和意义
保持组织和细胞与正常生活时的形态相似。

使细胞内的各种成分转变成不溶性物质。
增加组织硬度，便于组织切片。
防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有 的形态结构。

固定的对象和方法
小块组织固定法 注射、灌注固定法 蒸汽固定法

固定剂的性质和条件

迅速渗入组织而固定细胞质。
有较强的渗透力。
丙酮 脱水作用比乙醇强，但对组织块的收缩 较大，价格较高，一般少用。主要用于快速脱 水或固定兼脱水。 正丁醇 脱水能力较弱，但能与水、乙醇及石 蜡相混合，故这种脱水的组织块可直接浸蜡包 埋。这种脱水剂兼透明剂的最大优点是很少引 起组织块的收缩与变脆。正丁醇在使用时易挥 发，吸入后能发生头痛，使用时应注意安全。
其他常用的混合固定液有中性甲醛 固定液、甲醛-乙醇固定液、Helly固定液 等。
洗
目的
涤
组织在固定后一定要把渗入组织里 面的固定液洗去，防止组织中留有较多 的固定液而影响脱水剂，甚至可在组织 中发生沉淀或结晶而影响观察。
常用方法
固定剂以水配制的 固定剂含乙醇的
脱
水
目的和原则 组织经固定和水洗后，含有大量的 水分，而水和苯及石蜡根本不相融合， 所以组织在透明前必须经过脱水这一环 节。就是用某些溶剂逐步将组织块吸收 的水分置换出来，以利于透明剂和石蜡 等的渗入，这一过程就叫做脱水，使用 的药品为脱水剂。
苦味酸 黄色粉末结晶。能沉淀蛋白 质，对脂肪类脂无效，渗透力 较弱，一般很少单独使用。
乙醇 又名酒精，为无色液体，可 与水在任何比例下相混合。 一般用作固定液的浓度为 95%或纯酒精。 其他常用的单纯固定剂还有 重铬酸钾、铬酸、四氧化 锇、丙酮、三氯乙酸等。
常用混合固定剂
Bouin氏液
配方：苦味酸饱和水溶液 75 ml； 甲醛 25 ml；冰醋酸 5m。此液临 用时配制。 为一种常用良好的固定液， 渗透力强，对组织固定均匀，收缩 较小，染色效果好。一般组织固定 12-24小时。
时间：脱水时间应根据组织的体积和厚度而定，
组织在纯酒精中脱水时间不能过长，过长则组织 过度硬化变脆，不易切片。此外，脱水的时间与 固定液的种类也有关。 如用酒精脱水，一般经水洗的小块组织可 从50%开始，依次经过70%、80%、95% I、 95%II、100% I 和100% II，每一级酒精脱水时间 约为30分钟。 简便的酒精稀释法：无论任何浓度的酒精稀释时， 需稀释到多大浓度就取多少毫升酒精，然后用蒸 馏水加至该酒精原有浓度即可。例：将95%酒精 稀释为70%浓度时，则将95%酒精70毫升倒入量 筒中，然后加入蒸馏水至总量95毫升即可。
Carnoy氏液
配方：纯酒精 60 ml；冰醋酸 10 ml；氯仿（三氯乙酸） 30ml。 此液渗透迅速。适用于一般 细胞学研究。固定后不经水洗， 即入95%酒精脱水或直接入纯酒 精，可缩短制片时间。
Zenker氏液
配方：升汞 5g；重铬酸钾 2.5g； 冰醋酸 5 ml；蒸馏水 100 ml。 为组织学、细胞学及病理学 常用的固定剂，多用于固定一般 组织。固定时间24小时，加热固 定可以加快渗透作用。固定后流 水冲洗12小时，并在以后的脱水 过程中除去汞盐沉淀。