细胞生物学：常规制片技术.
细胞生物学实验⑤植物组织切片的制备
二甲苯(5min)→二甲苯(5min)→二甲苯；乙醇(1min)→二甲苯；乙醇(1min)→二甲苯；乙醇(1min)→100%乙醇(1min)→95%乙醇(1min)→90%乙醇(1min)→80%乙醇(1min)→70%乙醇(1min)→50%乙醇(1min)→番红染色(40min)→50%乙醇(1min)→70%乙醇(1min)→80%乙醇(1min)→90%乙醇(1min)→95%乙醇(1min)→
切片染色后经封藏可制作成永久制片。
实验步骤：
1)取材、固定与抽气：
本实验用蚕豆根、向日葵茎、夹竹桃叶为材料，制作横切片观察其内部结构。用刀片切取所需根和茎的部位3-4㎜为一段，叶应取叶片中部主脉约4㎜宽的叶片。小组各取5-6块，立即用FAA固定液固定。固定过程中必须进行抽气。
2)洗涤与保存：
教师代做。
植物组织切片的制备
生物122xx实验目的：
通过石蜡切片法了解和掌握动物和植物材料切片制作的基本原理和一般方法。
实验原理：
进行组织学和细胞学研究，必须把新鲜的组织或器官制作成切片，以便在显微镜下观察。
制作生物制片要求尽量保持细胞结构的完整性和真实性。
石蜡切片法是一种较常用的制片法。一般操作步骤是：
取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→烤片→脱蜡→复水→染色→脱水→透明→封藏。其原理是将样品固定后，包埋于石蜡中，使其具有一定的硬度，便于在石蜡切片机上切片成足够薄的切片。
0.5%固绿(1min)→95%乙醇(1min)→100%乙醇(1min)→二甲苯；乙醇(1min)→二甲苯；乙醇(1min)→二甲苯；乙醇(1min)→二甲苯(1min)→二甲苯(1min)。
10)封片：
将切片从二甲苯中取出，用滤纸擦去材料周围的二甲苯。在材料中央滴加一滴加拿大树胶，然后用镊子轻轻加盖盖玻片。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告实验一、二实验名称石蜡包埋切片技术和苏木精-伊红染色1、为什么生物体的组织要经过如此繁琐的步骤才能观察其组织结构?①首先，生物体是一个非常复杂的组合体。
②其次，这个复杂的组合体是比较脆弱的；作为一个生物研究者，想要观察一个生物体的组织，就必须尽量观察其完整形态，步骤繁琐，并不是在浪费时间，而是为了保证看见的是最真实的，最接近想要看到的结果。
态度严谨了，就不觉得繁琐了。
③石蜡包埋是用于样本固定，方便切片。
切片的目的是方便观察，样本如果厚的话，不利于透光，而且组织重叠，是无法有效观察的。
④染色的目的是也是为了更直观的观察，原始样本不染色的话，在显微镜下是近乎透明的，无法区分细胞或细胞器。
2、查阅文献，有哪些文章采用石蜡包埋切片和H.E染色?请列出这些文献(至少10篇)。
（1）王慧丰,徐亦辰,赵文婧,陈维平.微小组织结构石蜡切片的制备[J].临床与实验病理学杂志,2020,36(08):997-998.（2）赵学影,肖慧,胡子豪,陈云帆,王黎源,隋东莉.HE和免疫组化染色观察人体结肠系膜淋巴管构筑[J].赣南医学院学报,2020,40(01):54-57.（3）万慧颖,徐敏燕,李芳华,胥颖,谢震.荧光原位杂交技术快速鉴定石蜡包埋组织中的曲霉菌感染[J].实用医院临床杂志,2020,17(01):43-46.（4）张晓恒,姚佳,秦冬梅.毛菊苣提取物对小鼠肝纤维化的保护作用[J].世界华人消化杂志,2020,28(03):86-91.（5）连国亮,陈东,商建峰,李彦玮,李倩.胸腔积液凝集物在组织脱落细胞学诊断中的应用[J].医学研究杂志,2019,48(05):152-155+161.（6）张彩丽,张俊霞,刘湘花,孙丽敏,李瑞琴.实验动物多脏器组织石蜡切片统一制做流程及影响条件[J].临床与实验病理学杂志,2019,35(01):108-109.（7）张强,解植伟,尹昊锋,王君,马昊,马福顺.A型肉毒毒素对兔脂肪组织影响的实验研究[J].中国美容整形外科杂志,2019,30(08):467-469.（8）焦哲,王鑫坤,霍军,阴正兴,吴凤笋,吴玉臣,康静静.3例犬淋巴瘤和1例猫淋巴瘤的病理组织学诊断[J].动物医学进展,2019,40(11):137-140.（9）罗晓舟,金小千,温小鹏,罗伦,唐纯志.针刺太冲、太溪对自发性高血压大鼠下丘脑病理形态的影响[J].中华中医药学刊,2019,37(04):781-787+1025.（10）尚宏伟,路欣,郭晓霞.褪色胃组织标本再染色后在教学中的应用[J].继续医学教育,2019,33(03):25-26.3、通过你自己所查阅的文献，谈一下石蜡包埋切片和H.E染色的用途。
细胞生物学实验本科生实验内容
细胞生物学实验（本科生）实验内容实验一细胞的结构目的：1、熟悉实验室规范2、掌握光镜下细胞器的形态、分布特点；3、掌握临时制片法；4、学会生物绘图内容：（一）录像：临时标本片的制作（二）光镜下细胞器形态学观察：1、高尔基体（兔神经节切片）2、细胞核及核仁（蝾螈表皮装片）3、线粒体（肾小管切片）4、细胞骨架（培养肝癌细胞飞片）5、中心体*（马蛔虫受精卵切片）（二）操作：制作人口腔上皮细胞临时制片（显示活体线粒体）（三）实验报告：绘制人口腔粘膜上皮细胞实验二细胞化学细胞工程目的：1、掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及操作技巧2、了解几种化学成分的显示方法及原理；3、观察各种化学成分在细胞中的分布；4、了解PCC原理；5、了解细胞融合及其应用；内容：（一）录象：克隆羊（二）观察：1、糖原（动物肝切片，PAS反应）2、酸性蛋白（蟾蜍血涂片，酸性固绿染色）3、酸性磷酸酶*（鼠腹腔液涂片，金属沉淀法显色）4、DNA* （小鼠睾丸切片，Feulgen反应）5、DNA、RNA*（人口腔粘膜上皮细胞涂片，吖啶橙染色，荧光显微镜观察）6、细胞融合（鸡血细胞、培养细胞）7、PCC*（Hela细胞）（三）操作：制作蟾蜍血涂片，显示DNA、RNA（四）实验报告：甲基绿-派洛咛染色原理、步骤及结果实验三显微测量细胞的生理活动目的：1、掌握显微测量技术；2、观察细胞的生理活动；3、掌握死活细胞的鉴别方法及原理；内容：(一)录象：细胞的活动显微测量（二）观察：1、胞质环流（黑藻叶片）2、吞噬作用*（小鼠白细胞）3、吞噬作用（蟾蜍白细胞）（三）操作：1、显微测量（蟾蜍红细胞）2、死活细胞鉴别（酵母细胞）（四）实验报告：1、测量5-10个细胞的大小，计算平均值；2、计算细胞存活率。
实验四细胞增殖染色体（质）目的：1、熟悉细胞增殖的主要方式；2、掌握细胞增殖周期各期的形态学特点；3、熟悉人染色体的基本形态特征；4、掌握X染色质标本的制备方法及原理；内容：（一）观察：1、动物细胞有丝分裂（马蛔虫受精卵切片）2、植物细胞有丝分裂（洋葱根尖纵切片）3、收缩环*（肝癌细胞飞片）4、无丝分裂*（草履虫装片）5、人染色体的基本形态（人血涂片）（二）操作：1、制作有丝分裂压片（洋葱根尖）2、制作X染色质标本片（人口腔粘膜上皮细胞）（三）实验报告：绘有丝分裂图、X染色质图。
第三章细胞生物学研究方法习题及答案
第三章细胞生物学研究方法习题一、选择题1 正常细胞培养的培养基中长需加入血清，主要是因为血清中含有（C ）A. 氨基酸B. 核酸C.生长因子D.维生素2 冷冻蚀刻技术主要用于（A ）。
A.电子显微镜B. 光学显微镜C.原子力显微镜D.激光共聚焦显微镜3 建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞是通过下列哪种技术构建的？（A ）A. 细胞融合B. 核移植C. 病毒转化D. 基因转移4 关于光镜的使用，下列哪项有误？（C ）A. 观察标本时，应双眼同时睁开、双手并用B. 按照从低倍镜到高倍镜到油镜的顺序进行操作C. 使用油镜时，需要在标本上滴上香柏油，将聚光器降至最低，光圈全部开放。
5 为了实现细胞内某种蛋白质的亚细胞精细定位，可对该蛋白进行标记，下面哪种标记可行（C）A. GFP标记B. 免疫荧光标记C. 免疫电镜技术D. 荧光染料直接染色6 为了提高雌性乳牛出生的比例，可在体外将携带X染色体和Y染色体的镜子分离开，进行人工授精。
最好的分离方法使（A ）A. 流式细胞分选术B. 离心技术C. 细胞电泳D. 层析7 为了观察病毒，可通过何种方法进行观察（B ）A. 相差显微镜观察B. 负染色后用电镜观察C. 激光共聚焦显微镜观察D.以上都错8 以下哪些技术一般不用于分离活细胞？（CD ）（可多选）A. 流式细胞技术B. 细胞电泳C. 超速离心D.差速离心9 某研究生为了研究一特定膜蛋白的胞质结构域的功能，需要制备和分离外翻的细胞膜泡，为了获得无污染的外翻膜泡，下列选项中，哪些是他在实验中有可能使用到的?（BD ）（可多选）A. SDSB. 凝集素C.流式细胞仪D. 柱层析10 绿色荧光蛋白GFP（Green Fluorescent Protein）基因与目的基因融合后，转入细胞后可以（ABD ）（可多选）A. 检测融合蛋白在细胞中的准确定位B. 检测目的基因所编码的蛋白在细胞中的含量C. 检测目的基因所编码的蛋白在细胞中的分子结构D. 检测目的蛋白质在细胞中的表达量E. 以上答案都不对二、填空题1 流式细胞仪可以定量测定细胞中的DNA，RNA或某种特异蛋白的含量及细胞群体中上述成分含量不同的细胞数量。
《细胞生物学》实验教学大纲
《细胞生物学》实验教学大纲（Cell Biology）课程编号：1922011（1923011）课程名称：细胞生物学实验学分：1实验学时：32适用专业：生物技术、生物科学、生物科学（师范）、生物工程实验名称与学时安排实验一、细胞化学技术与显微切片技术实验性质：综合性实验实验内容：①装片、涂片、压片、徒手切片等显微制片技术；②石蜡切片技术；③冰冻切片技术；④鉴定DNA的细胞化学方法；⑤显示多糖的PAS反应；⑥细胞中过氧化物酶的显示方法；⑦显示碱性蛋白与总体蛋白的细胞化学定位。
实验目标与要求：掌握细胞生物学常规的生物制片方法，以及在制片基础上进行细胞化学染色，使细胞内的各种组成结构和化学成分定性、定量地得以显示。
了解常用的原位显示细胞内某些化学成分的一般原理和方法。
掌握细胞内DNA、多糖、蛋白质、酶等在细胞内的分布状况。
注意要点：注意有机溶剂和染料对人体的伤害和污渍；双面刀片的正确使用；切片机的使用。
实验二、细胞凝集反应实验性质：验证性实验实验内容：红细胞的凝集反应。
实验目标与要求：了解及学习细胞凝集反应的过程及操作方法，通过实验加深对细胞表面结构的理解。
注意要点：注意显微镜的正确使用。
实验三、细胞膜的渗透性实验性质：验证性实验实验内容：红细胞的渗透性。
实验目标与要求：了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。
注意要点：对试管轻拿轻放。
实验四、线粒体和液泡系的超活染色与观察实验性质：验证性实验实验内容：人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察；洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察；小麦胚根液泡系的超活染色。
实验目标与要求：观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布，学习一些细胞器的超活染色技术。
注意要点：注意染料的使用。
实验五、植物细胞骨架的光学显微镜观察实验性质：验证性实验实验内容：洋葱鳞茎表皮细胞骨架的分布。
实验目标与要求：了解细胞骨架的相关知识，掌握细胞骨架的简单制备方法。
注意要点：注意戊二醛、考马斯亮兰的使用。
细胞生物学专业硕士研究生培养方案
细胞生物学专业硕士研究生培养方案一、培养目标：1、本学科培养德、智、体全面发展，在细胞生物学领域掌握坚实的理论基础与系统的专业知识以及与本学科有关的实验方法和技能，了解细胞生物学发展的前沿。
在本学科及相关学科领域独立开展研究工作，具有独立承担细胞生物学研究、教学、科技开发与推广等工作的能力。
2、能正确使用计算机，较熟练掌握一门外国语。
3、具有健康的体魄和良好的心理素质。
二、研究方向：1、植物染色体结构与功能：以植物染色体为研究对象，研究染色体的数目、形态结构及物质组成，染色体的运动、染色体的功能等方面特征，以及这些特征的各类变异对遗传传递、重组、表达与调控的作用和影响。
2植物细胞与细胞周期调控：将细胞结构、细胞生理生化方法与基因工程方法结合起来研究植物的遗传本质和遗传规律、细胞增殖与调控、代谢与生长等。
3、植物细胞信号转导：利用各种显微成像（超微、激光共聚焦）和分子遗传学等技术，研究植物生长和发育过程中各种植物细胞信号（细胞分裂素，Ca2+等）对细胞分裂和细胞分化起的各种作用，以及植物细胞生理以及植物感受各种逆境胁迫的信号转导机制，揭示环境信号在植物发育过程中的调节机制。
4、植物细胞工程：本方向主要研究植物生长发育机制、特别是植物胚和胚乳发育机制，重要植物的组织培养。
将植物细胞培养、细胞诱变育种、细胞遗传操作等现代生物技术与常规遗传育种相结合，培育林木和花卉的新品种（新材料），建立相关新技术。
三、学习年限和时间安排全日制硕士研究生学习年限一般为3年。
根据实际情况，经本人申请、导师同意、学校批准，可适当提前或延长一年，在职硕士可延长二年。
累计在学年限一般不超过5年。
第一年一般以课程学习为主，后两年以论文工作为主。
四、课程设置, 学分要求和课程说明硕士生总学分不少于32学分（2学分实践性环节）。
课程分为学位课和非学位课程，其中学位课程不少于18学分，对于同等学力和跨学科考的硕士生需补本科生课程。
硕士生32学分中，学位课约占57%左右，非学位（即选修课）约占43%左右（包括实践环节）。
细胞生物学技术
第二章细胞生物学技术细胞生物学的发展是与实验技术的进步密切相关的，细胞生物学的每一个重大进展都是由于引入了新的研究技术的结果。
光学显微镜的发明开创了细胞学，电子显微镜的出现使人们对细胞结结构的认识深入到超微结构水平。
细胞化学和分析细胞学技术可对细胞的各种成分进行定位和定量的分析，有利于细胞结构与功能的研究。
细胞培养技术可将细胞在体外环境中生长，在体外研究细胞的结构、功能和生命活动规律，而细胞工程技术则可人为地将细胞进行改造，以获得具有特定生物学特性的细胞。
近年来，分子生物学技术的广泛应用，更有力地推动了细胞生物学的发展。
细胞生物学技术种类很多，包括物理技术、化学技术和实验生物学技术等，本章仅对主要的细胞生物学技术作简略的介绍，对于在细胞生物学研究中广泛应用的分子生物学技术，由于篇幅有限，本书不作介绍了。
第一节显微镜技术显微镜技术是细胞学和细胞生物学得以建立和发展的重要工具，包括光学显微镜（light microscope）、电子显微镜(electron microscope )和扫描探针显微镜(scanning probe microscope)三个层次的显微镜和相应的技术。
在光学显微镜下看到的细胞结构称为细胞显微结构（microscopic structure），由于受到分辨率的限制，光学显微镜不能分辨直径小于0.2μm的结构，如生物膜、细胞骨架和一些细胞器等。
电子显微镜下则可以观察到这些光学显微镜下看不到的结构，称为细胞亚显微结构（submicroscopic structure）。
随着电子显微镜分辨率的不断提高，再结合一些其他技术如扫描探针显微镜和X光衍射等，己使人们对细胞结构的认识达到分子水平。
一般把细胞从亚显微水平到分子水平的结构统称为细胞超微结构（ultrastructure）。
图2-1显示了不同分辨率时所看到的拇指表皮结构，从大体、显微、亚显微、一直到分子、原子水平。
图2-1 细胞与原子比例图（引自Alberts等，2002）参照前书图2-1一、显微镜与分辨率人类最初只是用肉眼直接观察周围世界，可是人眼观察事物的能力是有限的，一般情况下在25cm的明视距离内，只能分辨相距0.1～0.2mm的两个物体，如果小于这一距离，人的眼睛就不能分辨。
第三章 细胞生物学研究技术和基本原理
细胞生物学研究技术和基本原理1. 大纲要求1.1. 观察细胞形态结构的技术方法和仪器1.1.1.光学显微技术1.1.1.1 了解普通复式光学显微镜：掌握分辨率及计算公式，像差与复合透镜1.1.1.2 了解观察样品的一般制备：固定、切片、染色1.1.1.3了解荧光显微镜与观察样品的荧光染色1.1.1.4 了解暗视野显微镜：聚光器，分辨率1.1.1.5了解相差显微镜：用途、特有装置（光栏、相版），原理1.1.1.6了解干涉显微镜：用途、特有装置干涉器1.1.1.7了解激光共聚焦扫描显微镜及其原理、用途1.1.1.8了解计算机等技术在光学显微技术中的应用1.1.2.电子显微镜技术1.1.2.1了解透射电镜：基本构造，成像原理，分辨率；超高压电镜1.1.2.2了解透射电镜观察样品制备：超薄切片技术，负染色和暗视场制片术冰冻劈裂一复型技术和金属投影技术1.1.2.3了解扫描电镜和隧道电镜及其原理和用途1.2. 细胞化学组成及其定位和动态分析技术1.2.1理解细胞和细胞器的分离：如匀浆和差速离心技术等1.2.2理解基本生物化学和分子生物学技术1.2.3理解细胞化学、免疫荧光细胞化学、细胞光度和流式细胞分离技术1.2.4了解电镜细胞化学和电镜免疫细胞化学技术1.2.5了解显微放射自显影、分子原位杂交1.3. 了解细胞培养、细胞工程、显微操作、活体染色等技术方法2. 大纲详解2.1. 观察细胞形态结构的技术方法和仪器2.1.1.光学显微技术2.1.1.1 了解普通复式光学显微镜：掌握分辨率及计算公式，像差与复合透镜分辨率：是指区分开两个质点间的最小距离，是任何显微镜最重要的性能参数。
分辨率的高低取决于：官员的波长λ、物镜的镜口角α和介质的直射率N，它们之间的关系为D=0.61λ/N sin(α/2)2.1.1.2 了解观察样品的一般制备：固定、切片、染色为了便于光学显微镜、电子显微镜进行观察，经过固定、切片、染色等操作步骤更易于进行。
细胞生物学(第三版) 知识要点
第1章绪论一、填空1．细胞生物学是从显微水平、超微水平、分子水平等3个水平上研究细胞生命活动的科学。
2．细胞最初由胡克在1665年首先发现的。
4.1953年沃森和克里克共同提出了DNA分子的双螺旋结构模型。
5．细胞生物学是研究细胞基本生命活动规律的科学，它在不同层次上研究细胞结构与功能、细胞增殖、分化、衰老与凋亡、细胞信号传递等内容。
6．生命体是多层次、非线性、多侧面的复杂结构体系，而细胞是生命体的结构与生命活动的基本单位，有细胞才有完整的生命活动。
7．生命体的生长、发育、遗传等生命活动的研究都要以细胞为基础。
核心是将遗和发育在细胞水平上结合起来。
8．当前细胞生物学研究中的三大基本问题：基本表达，结构体系和细胞器的组装，生命活动的调节9.生物科学的发展阶段：以形态描述学位主的生物科学时期：实现生物学时期；精细定位与定量的生物学时期三、简答题1．简述细胞学说的主要内容。
①认为细胞是有机体，一切动植物都是由细胞发育而来，并由细胞和细胞产物所构成；②每个细胞作为一个相对独立的单位，既有它“自己的”生命，又对与其它细胞共同组成的整体的生命有所助益；③新的细胞可以通过老的细胞繁殖产生。
第2章细胞概述一、填空题1.细胞中含量最多的4种化学元素是C、H、O、N。
2.细胞中的生物大分子一般包括蛋白质、核酸和酶等。
3.酶分子的主要特性有高效、特异和可调。
4.真核细胞的超微结构可分为生物膜系统和遗传信息表达体系、细胞骨架体系三大类。
5.无机盐在细胞中的主要功能有：调节渗透压和维持酸碱平衡。
6.构成细胞的最基本的要素是细胞膜、遗传信息载体DNA与RNA完整的代谢系统。
7.由于发现了类病毒，有理由推测RNA是最早形成的遗传信息的一级载体。
8.目前发现的最小最简单的原核细胞是支原体。
9.原核细胞的核是原始状态的核，主要表现在没有明显可见的细胞核，同时也没有核膜和核仁，只有拟核，进化地位较低10.细胞是由细胞膜包围着含有遗传物质的细胞核所组成。
2014细胞生物学实验课内容（细胞形态观察、细胞器活体染色、细胞骨架观察）
2014细胞生物学实验课内容（细胞形态观察、细胞器活体染色、细胞骨架观察）第一篇：2014 细胞生物学实验课内容(细胞形态观察、细胞器活体染色、细胞骨架观察)实验三细胞形态的观察【实验目的】1.认识光学显微镜下细胞的形态结构；2.掌握临时制片和显微绘图的方法。
【材料、器材和试剂】材料：人体口腔黏膜上皮细胞、洋葱鳞茎；器材：显微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸；试剂：1%碘液。
【方法和步骤】1.口腔黏膜上皮细胞的制片与观察口腔黏膜细胞涂片标本的制备：吸取一滴碘液滴在一张洁净的载玻片中央，用一根事先灭菌的牙签伸入自己的口腔内壁轻轻刮取黏膜上皮细胞，然后，将其放入载玻片上的染液中并来回搅动使细胞散开，染色1 min左右后小心加盖玻片（尽量避免产生气泡），用滤纸吸去盖玻片周围的液体。
观察：将自制的口腔黏膜上皮细胞标本装片置于显微镜下观察，先用低倍镜观察较分散的、轮廓清晰的黏膜上皮细胞。
由于该细胞体积较小、着色较淡，观察时应稍降低视野亮度以便于较快找到目标（在低倍镜下，用碘液染色的细胞呈黄色，成群或分散分布，形态大小多呈扁平椭圆形）。
选择轮廓清晰的细胞移至视野中央，转换至高倍镜下观察。
在高倍镜下，可见口腔黏膜上皮细胞外围有一层薄薄的细胞膜，扁圆形的细胞核呈深黄色，细胞质呈浅黄色或浅蓝色，核中央致密的结构为核仁。
2.洋葱鳞茎内表皮细胞的制片与观察表皮细胞装片标本的制备：取一干净载玻片，在其中央滴一滴碘液，将洋葱鳞茎用小刀分为几块，取一块肉质鳞叶，用剪刀在内表皮划“田”字形小方格，每一小方格边长3-4mm，然后用镊子轻轻撕下一小方格的膜质表皮，置于载玻片的碘液滴中铺平，取一干净的盖玻片，将其一侧先接触标本旁的碘液，再缓缓地盖上盖玻片，尽量避免产生气泡，用滤纸吸去盖玻片周围的液体。
观察：将制备好的装片标本放到显微镜下，先用低倍镜观察，可见许多长柱状、排列整齐、彼此相连的细胞，选择其中一个典型的细胞移至视野中央，再转换至高倍镜下仔细观察细胞壁、细胞核、细胞质和液泡等结构。
细胞生物学和分子生物学研究中的技术和方法
细胞生物学和分子生物学研究中的技术和方法细胞生物学和分子生物学是现代生物学领域中非常重要的研究方向，涉及的技术和方法也十分复杂多样。
本文将从细胞培养、细胞显微操作、蛋白质分离及质谱分析等多个方面阐述细胞生物学和分子生物学中的技术和方法。
1. 细胞培养细胞培养是细胞生物学研究的基础，也是很多实验的前提。
细胞培养过程主要涉及到细胞的准备、培养基的制备、细胞培养条件的调整和细胞检测等方面。
细胞准备：在进行细胞培养之前，需要进行细胞的筛选和分离。
在分离过程中，可以采用机械分离、酶消化、加热条件分离等多种方式，以获得单个的细胞，以便于后续的培养。
培养基：培养基是细胞生长必不可少的条件，其成分的组成直接影响到细胞的生长和培养效果。
常用的培养基有DMEM、RPMI-1640、MEM等。
培养条件的调整：细胞在不同的培养条件下有着不同的生长和分化表现，因此对于不同的细胞类型需要进行针对性的培养条件调整，如调整培养温度、培养液中添加生长因子等。
细胞检测：细胞培养的过程中，需要通过显微镜观察细胞的状态，判断细胞是否健康，生长是否正常，培养条件是否适合等。
2. 细胞显微操作细胞显微操作是指采用显微镜对活细胞进行观察、加工和实验，主要利用细胞显微技术、光学显微技术等，进行细胞图像的捕捉和分析。
在细胞显微操作中，需要注意以下几个方面：显微镜的选择：根据需要观察的细胞类型、检测内容等要素，选择适合的显微镜，如荧光显微镜、亮场显微镜、透射电子显微镜等。
标记技术：利用荧光标记、抗体标记等技术，使得细胞内某个特定的蛋白质或DNA能够呈现荧光或者颜色，从而通过显微镜观察到。
实验设计：需要针对性地制定实验步骤和观察方法，掌握细胞形态的变化和进程。
3. 蛋白质分离及质谱分析蛋白质是组成生物体结构和功能的基本单位，直接参与到生命活动的调控、传递和调节等诸多方面。
蛋白质分离和质谱分析在现代生物学研究中占有重要地位，其主要步骤包括蛋白质提取、分离和鉴定。
细胞生物学复习题07
细胞生物学复习题第1章绪论一、填空1、细胞生物学是从__________、__________、__________等3个水平上研究细胞生命活动的科学。
2、细胞最初由__________在__________年首先发现的。
4、1953年_______和_______共同提出了DNA分子的_______结构模型。
三、简答题1、简述细胞学说的主要内容。
第2章细胞概述一、填空题1、细胞中含量最多的4种化学元素是____、_____、_____和______。
2、细胞中的生物大分子一般包括______、______和_______等。
3、酶分子的主要特性有___________、_____________和__________。
4、真核细胞的超微结构可分为__________和__________两大类。
5、无机盐在细胞中的主要功能有：______、______、______。
6、构成细胞的最基本的要素是________、________和完整的代谢系统。
7、由于发现了___________，有理由推测RNA是最早形成的遗传信息的一级载体。
8、目前发现的最小最简单的原核细胞是_____________。
9、原核细胞的核是原始状态的核，主要表现在_____________。
10、细胞是由_________包围着含有____________所组成。
11、细菌三种形态：[ ]、球菌、螺旋菌。
12、蓝藻细胞：又称[ ]，是原核生物，又是最简单的自养植物类型之一。
用十分简单的光合作用结构装置。
二、名词解释原生质生物大分子三、简答题1、病毒与细胞在起源和进化中的关系？认为病毒是细胞演化产物的观点依据？2、细菌细胞的表面结构？3、说明对细胞不同组分进行分离所用方法的基本原理？4、最简单、最小的生命形式及最小的细胞各是什么，为什么？第3章一、填空1、电镜制样技术有超薄切片技术、[ ]、冷冻断裂和冷冻蚀刻技术、三维重构技术、喷镀技术2、常用的固定剂有戊二醛、[ ]、饿酸、高锰酸钾。
植物显微技术-细胞学研究基础课程-复习资料-山西农业大学
B染色体（或称超数染色以此作为鉴别单个染色体和染色体组的一种手段。
分带类型(方法)包括Giemsa分带（包括C带、N带、G带等）和荧光分带（包括Q带、H带、D带、R带、带等）rDNASC纤维组成，它与染色体的配对、交换和分离密切相关。
2微米以下而又不易分辨着丝点的染色体。
NaOH,Ba(OH)2）或酸HCL处理，可以使DNA分子的双拆。
DNA在SSC盐溶液中温育，使单链的DNA分子重新形成H键，恢复原来。
，分解细胞之间的中层，使组织中的细胞分离；一种是纤维素酶，4级：第一级微小染色体＜1um，第二级：小4~12um，第四级：大染色体＞12um（1）流程压片法：取材→预处理→固定→酸（或加酶）解离→染色和压片去壁低渗火焰干燥法：取材→预处理→前低渗→酶解离→后低渗｛①制备细胞悬液→固定、滴片、火焰干燥→Giemsa染色。
②固定、涂片、火焰干燥→Giemsa染色。
｝（2）异同相同点：材料的基础条件是相同的不同点：使染色体分散所采用的方法不同，压片法是以人工外加机械压力而使染色体分散；去壁低渗火焰干燥法是以酶解细胞壁，以低渗液使细胞膜吸胀和火焰干燥及水表面张力而使染色体自行展开。
（3）压片法和去壁低渗火焰干燥法的优缺点前者操作快速简便，节省材料；后者操作稍繁且需酶制剂，且染色体易于展开而不易导致染色体变形，尤其对一些含较多成熟细胞的组织，如芽、愈伤组织等，其制片效果明显优于压在核型的比较研究中，NOR的数目和位置的差异，是一个十分重要的细胞学识别特征。
Ag-NOR染色技术定位、定性准确，特异性和可重复性优于其他散热方法。
(2)NOR在种间杂种中的竞争。
在种间杂种或异源多倍体中，会出现两种情况，一种是杂种的NOR数目等于两个亲本NOR数目之和，更多情况是杂种的NOR数与两亲本NOR数之和不符。
(3)核仁周期的研究。
银染研究洋葱根尖细胞的核仁周期表明，在正常和低氧条件下核仁形成时间上的差异，可能与能量的供应和代谢活动的改变有关。
细胞生物学技术
细胞生物学技术细胞生物学技术是一门研究细胞的工具和方法的学科。
借助这些技术，科学家们能够更深入地了解细胞的结构、功能和特性。
本文将介绍几种常见的细胞生物学技术，并探讨它们在科研领域的应用。
一、细胞培养技术细胞培养是一种通过培养基和适当的条件，在体外维持和繁殖细胞的技术。
这种技术被广泛应用于医学、生物学和药物研发等领域。
细胞培养技术可用于分离和纯化特定细胞种群，以研究其生理功能和病理过程；也可用于产生大量的细胞用于药物筛选和体外毒理实验。
二、细胞染色技术细胞染色技术是一种通过使用染料或特定的分子探针来标记细胞组分的技术。
常见的细胞染色技术包括荧光染色、酶染色和核苷酸染色等。
这些技术可用于检测和鉴定特定细胞类型、观察细胞器和分子的分布情况，以及研究细胞内的代谢和功能。
三、流式细胞术流式细胞术是一种通过流式细胞仪分析和计数细胞的技术。
该技术利用细胞的形态、大小、荧光和抗原表达等特征，可以对单一或多种细胞进行鉴定和分类。
流式细胞术广泛应用于免疫学、癌症研究和干细胞领域，可帮助研究人员了解细胞群体的特征和变化。
四、蛋白质分析技术蛋白质分析技术是一组用于研究蛋白质结构、功能和相互作用的方法。
其中最常用的技术包括蛋白质电泳、质谱分析和蛋白质结构解析等。
通过这些技术，科学家们可以鉴定蛋白质组成、研究蛋白质修饰和相互作用，以及探索蛋白质在细胞生理和疾病发展中的作用。
五、基因编辑技术基因编辑技术是一种通过改变细胞或生物体的基因组来研究基因功能和调控网络的方法。
常见的基因编辑技术包括CRISPR-Cas9系统和TALEN技术。
这些技术可以精确地剪切、插入或修复基因，帮助科学家们研究基因与疾病之间的关联，并开发基因疗法和转基因生物。
通过以上介绍，我们可以看到细胞生物学技术在科研领域的广泛应用。
这些技术不仅提供了研究细胞的工具和手段，还带来了许多重要的科学发现和进展。
随着技术的不断发展和创新，相信细胞生物学技术将为我们揭示更多关于生命的奥秘。
细胞生物学实验文档
实验小鼠巨噬细胞吞噬的观察一、实验目的：通过观察小鼠巨噬细胞吞噬红细胞的实验，了解巨噬细胞对异物吞噬的原理和功能。
了解吞噬在机体非特异免疫中的重要作用。
二、实验原理：高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞，具有吞噬的功能。
它们广泛分布在组织和血液中，在机体的非特异免疫功能中起着重要的作用。
当病原微生物或其他异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又具有趋化性，它通过产生活跃的变形运动，主动向病原体和异物移行聚集，首先把异物吸附在细胞表面，随之，吸附区域的细胞膜向内凹陷，伸出伪足包围异物，并吞入胞质，形成吞噬泡，继而在细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。
三、实验仪器、材料和试剂（1）仪器、用具：显微镜、、解剖盘、注射器、吸管、载玻片、盖玻片。
（2）材料：小鼠（体重20g左右），鸡血。
（3）试剂：6%淀粉肉汤（含0.3%台盼蓝）。
四、方法与步骤（1）实验前24h，每天给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝）1ml。
（2）实验时，再往腹腔内注射1ml1%鸡红细胞悬液，并轻柔腹部，使鸡红细胞悬液分散。
（3）20-30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠（右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按住鼠头，使脊髓与脑髓间断开致死）。
（4）迅速剖开腹腔，用未装针头的注射器或吸管吸取腹腔液。
（5）取一张干净的载玻片，滴一滴腹腔液，制成血涂片，盖上盖玻片，显微镜下检查。
四、作业：绘图示出所观察到的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的各种形态。
实验糖类的细胞化学——PAS反应——过碘酸席夫反应（PAS）显示糖原等多糖物质一、实验目的：掌握细胞中糖类物质的鉴别方法，了解糖类物质在细胞中的分布和形态。
二、实验原理：在石蜡切片中，低分子糖和单糖、双糖已在固定和脱水过程中消散，因此在石蜡切片中只含有高分子的糖和糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白等。
高聚物质有自由的醛根，所以不能直接采用醛基反应鉴定，糖中的醛基必须在某些氧化剂和水解剂的作用下才能露出。
第3章生物制片技术
石腊切片的流程
第3章生物制片技术3章生物制片技 术
第一节 石蜡切片法制片技术
一、取材和固定：
(一）取材：新鲜，材料大小、部位因观察的对 象不同而有所差异。
(二)固定：将所要观察的新鲜材料立即投入固定
剂内，借助化学药品的作用，使组织细胞的形态 结构保存起来，不使其形态和内部物质改变的一 种方法。
还原剂，易被氧化成甲酸，故不宜与氧化 剂
铬酸混合使用，但若与酒精混合使用，效果
更佳。
第3章生物制片技术3章生物制片技 术
3、醋酸
醋酸 又称乙酸，常在16、7℃以下凝成冰状固 体 故名冰醋 酸 。
用 0.3%---5%的醋酸作固定液，渗透力极强， 对 一般组织短时间内就可产生固定作用。
醋酸可沉淀核蛋白，所以对染色质或染色体的 固定 和染止收缩；同时由于它不 能凝固细胞质中的蛋白质 ，组织不会硬化 ， 因此可与引起组织收缩的液体相混合，起到相 互平衡的作用。
第3章生物制片技术3章生物制片技 术
5、升汞（氯化汞）
是一种毒性很强的化合物，渗透力仅比醋酸 弱.
几乎可沉淀所有蛋白质，升汞能充分固定细 胞质和细胞核，并可增加对酸 性 染料的亲 和力，升汞能使组织收缩，但硬化作用不强， 多与冰醋酸、铬酸盐及甲醛混合使 用。
第三章 制片技术
一、概念: 生物制片技术是动物学、植物 学、细胞学、组织胚胎学、病理解剖学等 生物科学及医学科学研究观察组织细胞的 生理、病理形态变化的一种重要方法。
第3章生物制片技术3章生物制片技 术
二 、分类：生物制片法可分 为切片法和非 切片法两种类型。 切片法就是将新鲜的材料经过特殊的处理， 用刀切 成薄片的过程。 主要有徒手、石蜡、冰冻、火棉胶切片法 等。 非切片法是用物理或化学的 方法，将生物 体 组织分离成单全细胞或薄片，或将整个 生物体进行封藏。 常用的非切 片法有整体装片法、压片法、 滴片法、解离法、伸展法等。
细胞学制片流程
细胞学制片流程
1. 取材呀！就好比去果园摘果子，咱得挑那新鲜又好的细胞样本，比如从人体组织或者细胞培养物中取，这可太关键啦！
2. 固定呢！想象一下，把细胞像宝贝一样固定住，让它们保持原本的形态和结构，就像给它们拍张不会变形的照片一样，一般常用的有甲醛固定。
3. 洗涤啦！这就像是给细胞洗个澡，把那些不需要的杂质洗掉，让细胞干干净净的。
4. 脱水哟！哎呀，这就好像把细胞里的水分抽走，让它们变得干燥一些，通常会用一系列不同浓度的酒精来处理。
5. 透明呀！这一步就像是给细胞蒙上一层神秘的面纱，让它们变得更清晰可见，会用到一些透明剂呢。
6. 浸蜡哈！把细胞放到蜡里面泡一泡，就像给它们穿上一件保护衣，这样后面切片就更容易啦。
7. 包埋咯！把处理好的细胞和蜡一起做成一个小方块，就像做一个小模型一样。
8. 切片嘿！这可是个技术活呀，就像切面包一样把那个小方块切成薄薄的片子，可别切厚了哟！
9. 贴片哇！把切好的片子贴到玻片上，要贴得稳稳当当的呢。
10. 染色啦！这可是让细胞变得五彩斑斓的关键一步呀，就像给细胞化个妆，让我们能更清楚地看到它们的结构，常用的有苏木精-伊红染色呢。
11. 封片呀！最后给细胞加上一层盖子，保护它们，就像给宝贝放在一个安全的小盒子里。
你看，这细胞学制片流程是不是很有趣呀？每一步都像是在精心雕琢一件艺术品呢！你难道不想自己动手试试吗？。
细胞生物学常用技术1
B 样品制备
细胞悬液制备 细胞固定 细胞染色
B 应用
* 细胞分选 cell in 1000 5000 cells/sec * 细胞大小测量 * DNA 含量测定 * 免疫表型分析 * 细胞功能分析 * 细胞凋亡研究
细胞周期分析
G0/G1 37.68% S 37.56% G2 24.76%
G0/G1 60.86% S 29.14% G2 10.00%
原代培养 传代
传代培养(保持分化特性)
3.细胞系（Cell line）
在细胞培养中，偶然情况下产生的具有无限繁 殖能力，能够无限传代的细胞群。 变异细胞
无限繁殖
细胞系
HeLa 人宫颈癌上皮细胞 3T3 小鼠成纤维细胞
相差显微镜观察培养中的HeLa细胞
4.细胞融合（Cell fusion）
（1）定义 在自然或人工条件下，使二个或二个以上 细胞合并形成一个细胞的过程。
（4）应用
A 免疫荧光显微技术
（Immunofluorescence microscopy）
抗体 + 荧光染料
B 绿色荧光蛋白
GFP
4.相差显微镜
(1)原理
波长 振幅 速度
（phase contrast microscope）
颜色 亮度 相位
(2)应用
活体细胞观察
5.激光扫描共焦显微镜
紫外光 short
可见光 λ
红外光 long
（2）荧光显微镜的基本构造
A 紫外光光源 B 二向色镜：反射短波光线，透过长波光线 C 滤光片
（3）常用的荧光染料
A 有机染料
荧光素 罗丹明 FITC
B 量子点 quantum dot
Ⅱ-Ⅵ族、Ⅲ-Ⅴ族元素构成的半导体纳米结晶 良好的光学稳定性 抗光漂白性
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Carnoy氏液
配方：纯酒精 60 ml；冰醋酸 10 ml；氯仿（三氯乙酸） 30ml。 此液渗透迅速。适用于一般 细胞学研究。固定后不经水洗， 即入95%酒精脱水或直接入纯酒 精，可缩短制片时间。
Zenker氏液
配方：升汞 5g；重铬酸钾 2.5g； 冰醋酸 5 ml；蒸馏水 100 ml。 为组织学、细胞学及病理学 常用的固定剂，多用于固定一般 组织。固定时间24小时，加热固 定可以加快渗透作用。固定后流 水冲洗12小时，并在以后的脱水 过程中除去汞盐沉淀。
其他常用的混合固定液有中性甲醛 固定液、甲醛-乙醇固定液、Helly固定液 等。
洗
目的
涤
组织在固定后一定要把渗入组织里 面的固定液洗去，防止组织中留有较多 的固定液而影响脱水剂，甚至可在组织 中发生沉淀或结晶而影响观察。
常用方法
固定剂以水配制的 固定剂含乙醇的
脱
水
目的和原则 组织经固定和水洗后，含有大量的 水分，而水和苯及石蜡根本不相融合， 所以组织在透明前必须经过脱水这一环 节。就是用某些溶剂逐步将组织块吸收 的水分置换出来，以利于透明剂和石蜡 等的渗入，这一过程就叫做脱水，使用 的药品为脱水剂。
氧化汞
俗称升汞，剧毒，必须严格 保管和注意使升汞可增加对酸性 燃料的亲和力，如卡红等。
醋酸 又名乙酸、冰醋酸，为无色 透明液体，有刺激性气味。 醋酸的渗透力强。经单纯醋 酸固定的组织，可不经水洗， 直接入酒精脱水。用作固定 剂的醋酸浓度一般在0.3-5%。
组织学常规制 片基本技术
组织学制片方法
切片法 非切片法 1.分离标本 2.活体标本 3.涂片标本
4.磨片标本 5.整体封藏标本 6.铺片标本 7.组织印片
巨噬细胞（macrophage)
精子
石蜡切片HE染色制片方法
•
动物致死和取材
致死方法：麻醉、空气栓塞、股动脉放血 等。
HE染色
丙酮 脱水作用比乙醇强，但对组织块的收缩 较大，价格较高，一般少用。主要用于快速脱 水或固定兼脱水。 正丁醇 脱水能力较弱，但能与水、乙醇及石 蜡相混合，故这种脱水的组织块可直接浸蜡包 埋。这种脱水剂兼透明剂的最大优点是很少引 起组织块的收缩与变脆。正丁醇在使用时易挥 发，吸入后能发生头痛，使用时应注意安全。
时间：脱水时间应根据组织的体积和厚度而定，
组织在纯酒精中脱水时间不能过长，过长则组织 过度硬化变脆，不易切片。此外，脱水的时间与 固定液的种类也有关。 如用酒精脱水，一般经水洗的小块组织可 从50%开始，依次经过70%、80%、95% I、 95%II、100% I 和100% II，每一级酒精脱水时间 约为30分钟。 简便的酒精稀释法：无论任何浓度的酒精稀释时， 需稀释到多大浓度就取多少毫升酒精，然后用蒸 馏水加至该酒精原有浓度即可。例：将95%酒精 稀释为70%浓度时，则将95%酒精70毫升倒入量 筒中，然后加入蒸馏水至总量95毫升即可。
简便的酒精稀释法： 无论任何浓度的酒精稀释时， 需稀释到多大浓度就取多少毫升酒精， 然后用蒸馏水加至该酒精原有浓度即 可。例：将95%酒精稀释为70%浓度 时，则将95%酒精70毫升倒入量筒中， 然后加入蒸馏水至总量95毫升即可。
透
明
目的
一、组织块透明的目的是便于浸蜡包埋，但组 织块脱水后其内部的脱水剂与石蜡不相溶，还必 须用石蜡诱导剂过度，这种物质能够同时溶解于 脱水剂及包埋剂中，它能逐渐渗入组织最终将脱 水剂完全排出，诱导剂渗入后，组织块往往呈透 明状故称之为“透明”。这种药剂称为透明剂。 二、切片透明的目的是有利于光线的透过，便 于显微镜的观察。当组织块中全部为透明剂占有 时，光线可以透过，组织可呈现不同程度的透明 状态。
种类
非石蜡溶剂的脱水剂 石蜡溶剂的脱水剂]
•
方法
将脱水剂配成各种浓度，自低到高 浓度循序进行。
常用脱水剂
酒精
为常用的脱水剂。脱水能力强， 并能使组织硬化，能较好地与二甲 苯透明剂相融合。其缺点是易使组 织收缩，变脆。在一般脱水过程中， 采用循序渐进的方法，逐步升级， 经一系列的不同浓度的酒精，使组 织中的水分逐渐被酒精所替代。
苦味酸 黄色粉末结晶。能沉淀蛋白 质，对脂肪类脂无效，渗透力 较弱，一般很少单独使用。
乙醇 又名酒精，为无色液体，可 与水在任何比例下相混合。 一般用作固定液的浓度为 95%或纯酒精。 其他常用的单纯固定剂还有 重铬酸钾、铬酸、四氧化 锇、丙酮、三氯乙酸等。
常用混合固定剂
Bouin氏液
配方：苦味酸饱和水溶液 75 ml； 甲醛 25 ml；冰醋酸 5m。此液临 用时配制。 为一种常用良好的固定液， 渗透力强，对组织固定均匀，收缩 较小，染色效果好。一般组织固定 12-24小时。
• 取材
顺序：先腹腔（肝脏、胆囊、 肾、肾上腺、胰腺、脾、胃、 十二指肠、空肠、回肠、结 肠），然后取胸腔和盆腔内的 器官组织。
取材关键
材料新鲜
勿使组织块受挤压
组织块力求小而薄 选好组织块的切面 尽量保持组织的原有形态 保持材料的清洁
固定和固定液
固定：借助化学药品使组织和细 胞中的有机和无机成分凝固成沉 淀，防止发生死后组织变化，以 保持其生活时状态的过程。此药 品称为固定剂。
避免死后变化。
避免过度膨胀或收缩。
注意事项 组织必须新鲜 组织的厚度 防止因固定发生变形 用量 时间 促使固定
固定剂
单纯固定剂 甲醛 渗透力强，固定均匀，对组织收缩 少。经甲醛固定的组织，细胞核染色甚 佳，胞质着色较差。除单独使用外，常 与其他药品配成混合液，效果更佳。
目的和意义
保持组织和细胞与正常生活时的形态相似。
使细胞内的各种成分转变成不溶性物质。
增加组织硬度，便于组织切片。
防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有 的形态结构。
固定的对象和方法
小块组织固定法 注射、灌注固定法 蒸汽固定法
固定剂的性质和条件
迅速渗入组织而固定细胞质。
有较强的渗透力。