酚氯仿抽提法
酚氯仿法提取dna注意事项
酚-氯仿法提取DNA时，需要注意以下几点：
1. 在吸取基因组DNA时，需要使用专用的粗口吸头，避免使用普通的吸头，因为这可能会切断或损坏DNA。
2. 在准备实验的过程中，应将DNA样品放在碎冰上，以保持其低温状态。
3. 加缓冲液后，可以轻轻晃动或轻弹试管，以加速DNA的溶解。
4. 加入缓冲液后，可以置于4度过夜，这样也有助于溶解DNA。
5. 将DNA溶液在65度下温育10分钟，可以灭活DNase，防止其降解DNA。
6. 在抽提过程中，如果水相和有机层的界面不太清楚，说明其中蛋白质含量较高，这时可以增加酚/氯仿抽提的次数或适当延长离心的时间。
7. 在酚抽提过程中，如果上清液太粘稠而无法进行水相转移，可以加入适量TES稀释后再抽提。
8. 氯仿的作用是克服酚的缺陷，加快有机相与液相的分层，最后用氯仿抽提出DNA。
由于酚易溶于氯仿中，可以快速去掉核酸溶液中的微量酚。
9. 加入异戊醇能减小分子表面张力，减少抽提流程中的泡沫发生。
通常选用氯仿与异戊醇为24:1的比例，异戊醇可
以帮助分相，使离心后的上层水相、下层有机溶剂相、中层变性蛋白相保持稳定的层次。
以上信息仅供参考，建议咨询专业人士获取准确信息。
酚氯仿抽提原理
酚氯仿抽提原理
酚氯仿抽提原理是一种常见的有机物提取方法，该方法通过酚氯仿与样品中的目标化合物发生化学反应，将目标化合物从样品中分离出来。
下面将详细介绍酚氯仿抽提原理：
1.溶剂选择：酚氯仿是一种有机溶剂，对许多有机物具有良好
的溶解能力，因此在酚氯仿抽提过程中常常选择酚氯仿作为抽提溶剂。
2.抽提原理：酚氯仿可以与目标化合物发生亲油性反应，形成
可溶于酚氯仿的复合物，并从样品中抽提出来。
这是因为酚氯仿的化学性质使其能够与许多有机物形成相互作用，例如氢键、氧化还原反应等。
3.抽提条件：酚氯仿抽提的条件包括温度、pH值、搅拌速度等。
适当的条件可以促进酚氯仿与目标化合物的反应，并提高抽提效果。
4.抽提步骤：酚氯仿抽提的步骤通常包括样品制备、酚氯仿溶
液制备、抽提过程和目标化合物的分离。
其中，在样品制备过程中需要将样品研磨或者加入适当的溶剂溶解，以便更好地与酚氯仿反应。
5.分离纯化：一般情况下，酚氯仿抽提得到的溶液中还包含有
一些杂质。
为了得到纯净的目标化合物，需要进行进一步的分离纯化步骤，例如溶剂挥发、晶体生长等。
总之，酚氯仿抽提原理通过酚氯仿与目标化合物的化学反应来分离目标化合物。
通过优化溶剂的选择、抽提条件的控制以及后续的分离纯化步骤，可以得到纯净的目标化合物。
酚氯仿法提取DNA原理及方法
酚氯仿法提取DNA原理及方法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其原理是利用酚氯仿溶液对细胞和细胞碎片进行破碎，然后通过离心分离DNA。
以下是详细的步骤：1.细胞裂解：将待提取DNA的样本（细胞、组织等）加入含有酚氯仿的裂解缓冲液中，将溶液均匀混合。
酚氯仿是一种有机溶剂，能够破坏细胞膜和核膜，使细胞释放出DNA。
2.蛋白质沉淀：加入混合溶液中的蛋白质会和酚氯仿相互分离，形成一个物理屏障。
离心沉淀后，由于DNA密度比蛋白质低，DNA会上浮到上层，而蛋白质则沉淀在下层。
3.DNA沉淀：将上层液体转移到新的离心管中，加入同等体积的冷乙醇或异丙醇，然后轻轻振荡以促使DNA沉淀。
酒精能够与DNA相互作用，使DNA分子变得更加疏水，从而沉淀下来。
4.清洗：离心沉淀后，将上清液倒掉，加入70%乙醇洗涤沉淀。
乙醇通过去除残留的酚氯仿和其他杂质，使沉淀的DNA纯化。
5. 溶解：将洗涤后的DNA沉淀干燥或用适量的缓冲液溶解，最常用的是TE缓冲液（含有10 mM Tris-HCl和1 mM EDTA），以便后续的DNA浓度测定和实验操作。
总结来说，酚氯仿法利用酚氯仿溶液破坏细胞膜和核膜，将DNA从细胞中释放出来。
离心分离蛋白质和DNA，然后通过酒精沉淀和乙醇洗涤纯化提取的DNA。
这种方法简单快速，并且能够获得较纯的DNA样品。
不过，酚氯仿法在提取DNA时会同时提取到RNA和蛋白质，因此在一些需要高纯度DNA的实验中可能不适用。
在使用酚氯仿法提取DNA时，还需要注意避免DNA的降解，避免污染和交叉污染，以及正确保存提取的DNA样品。
酚-氯仿抽提DNA
方法一细菌沉淀加入567μlTE溶液(10mmol/L Tris- HCl , 1mmol/L EDTA, pH810) 重悬,加入10%SDS30μl 和20mg/ml 蛋白酶K3μl , 于37 ℃温育1h,加入5mol/LNaCL100μl , CTAB/NaCl 80μl 溶液, 于65 ℃温育10min,加入等体积的氯仿/异戊醇, 混匀, 4 ℃12000g/min离心5min。
将上清液转入另1个离心管中加等体积的酚/氯仿/异戊醇, 混匀, 4 ℃12000g/min 离心5min,提取上清置于另一管中, 加入0.6体积异丙醇, 轻柔混合, 4℃12000g/min离心5min, 弃上清加入70%乙醇洗涤1min, 离心, 弃上清, 将沉淀的DNA溶于100μl 的无菌去离子水中, - 20℃保存备用方法二取 1.5 mL 培养至对数生长期的菌液于 2.0 mL 的离心管中，8 000 r/min 离心5 min，弃上清；加入600 μL 消化液（10 mmol/L Tris-HCl，0.1 mol/L EDTA，1% SDS，200μg/mL蛋白酶K，20μg/mL RNase A），37℃消化30 min ；加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25 /24/ 1）混合液，轻摇10 min，12 000 r/min 离心 5 min，取上清，重复抽提1次；加入等体积的氯仿/异戊醇（24 /1）混合液抽提 1 次；加入1/10 体积的 3 mol/L 的醋酸钠和 2 倍体积的冰乙醇混匀，静置10 min，12 000 r/min 离心10 min，弃上清；沉淀加入 1 mL 70%乙醇洗涤2次，每次8 000 r/min 离心 5 min，弃乙醇，待沉淀中残余乙醇挥发后，加入50μL 超纯水溶解DNA。
4℃保存备用。
方法三将预处理后所得沉淀加入300μL细胞裂解液（主要成分：10mmol/L Tris-HCl 缓冲液、1mol /L 氢氧化钠、10mmol/L乙二胺四乙酸、生理盐水、0.2%十二烷基硫酸钠），振荡混匀，于100℃加热15min。
酚氯仿法提取DNA的原理
酚氯仿法提取DNA的原理用酚抽提细胞DNA时,有什么作用?使蛋白质变性,同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相,而D NA溶于水相。
使用酚的优点:1. 有效变性蛋白质;2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点:1. 能溶解10-15%的水,从而溶解一部分poly(A)RNA。
2. 不能完全抑制RNase 的活性。
氯仿的作用?氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。
(酚易溶于氯仿中)用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么?异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。
另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
用乙醇沉淀DNA时,为什么加入单价的阳离子?用乙醇沉淀DNA时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl 或NaAc,Na+中和DN A分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀。
原理:动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白(DNP)可溶于水或浓盐溶液(如1mol/L氯化钠),但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低,而核酸核蛋白(RNP)则在0.14mol/L氯化钠中溶解度最大,利用这一性质可将其分开。
将沉淀物溶解于生理盐水,加入去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)溶液,使DNA与蛋白质分离开。
加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L,使DNA溶解。
加氯仿-异戊醇去除蛋白质,也可重复该步操作得较纯DNA。
最后用95%乙醇沉淀DNA。
溶解:将离心后除去RNA的沉淀,用30ml生理盐水溶解,充分搅拌后,匀浆一次。
加4毫升10%SDS溶液,使溶液的SDS浓度达到1%左右,边加边搅拌,放置60 ℃水浴保温10分钟(不停搅拌),冷却。
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿（Phenol-Chloroform）抽提DNA是一种常用的DNA 提取方法。
其原理是基于酚在酸性条件下具有与DNA高度亲和性的特点，可以将DNA从细胞溶液中抽提出来。
具体的步骤如下：
1. 细胞溶解：首先将待提取DNA的细胞样品加入适量的细胞裂解缓冲液中，通过机械或化学方法使细胞壁破裂，释放出细胞内的DNA。
2. 酚抽提：加入相同体积的酚溶液，并进行充分混合。
酚能与DNA形成复合物，并与其他细胞组分（如蛋白质和脂质）发生分层，形成一个DNA上层和一个下层。
3. 脱水：将抽提产物转移至新管中，加入酒精或异丙醇，通过离心将DNA沉淀下来。
脱水过程可以去除溶液中的多余酚，提高DNA沉淀的纯度。
4. 酯化：将DNA沉淀物溶解在适量的TE缓冲液（含有EDTA和Tris）中，经过一定的时间酯化，使DNA变得更为稳定。
5. 沉淀：通过低温离心将DNA沉淀下来，去除上清液。
6. 洗涤：用70%的乙醇洗涤并去除残余的盐、酚和脏物质。
洗涤过程中，可以多次进行离心和上清液倒掉操作。
7. 干燥：最后，将DNA输送液置于干燥器中或者自然风干，以去除溶剂中的残留物质，得到纯度较高的DNA。
通过酚氯仿抽提DNA的方法，可以从复杂的细胞中提取出高质量、高纯度的DNA，以供后续分子生物学研究使用。
酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。
2. 不能完全抑制RNase 的活性。
酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DN A裂解液（300μl），研磨后再加入300μl DNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tri s饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10mi n。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了D Nase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与D NA联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。
2. 不能完全抑制RNase 的活性。
酚氯仿法提取dna流程
酚氯仿法提取dna流程英文回答：The phenol-chloroform method is a widely used technique for DNA extraction. It involves the use of phenol and chloroform to separate DNA from other cellular components. Here is a step-by-step procedure for the phenol-chloroform DNA extraction method:1. Start by preparing a cell lysate: This can be done by lysing the cells in a lysis buffer containing a detergent such as SDS or Triton X-100. This step helps to break open the cells and release the DNA.2. Add phenol: Phenol is added to the cell lysate to denature proteins and disrupt protein-DNA interactions. Phenol also helps to remove proteins and other contaminants from the DNA sample.3. Mix and centrifuge: After adding phenol, the mixtureis thoroughly mixed to ensure proper extraction. The mixture is then centrifuged to separate the aqueous (upper) phase containing DNA from the organic (lower) phase containing proteins and other contaminants.4. Transfer the aqueous phase: The aqueous phase, which contains the DNA, is carefully transferred to a new tube, taking care not to disturb the organic phase.5. Add chloroform: Chloroform is added to the aqueous phase to further remove any remaining proteins and contaminants. The mixture is again mixed and centrifuged to separate the phases.6. Transfer the aqueous phase again: The aqueous phase, now free from proteins and contaminants, is transferred to a fresh tube.7. Precipitate DNA: DNA is precipitated from the aqueous phase by adding a cold ethanol or isopropanol solution. This causes the DNA to clump together and become visible as a white pellet.8. Wash and dry the DNA: The DNA pellet is washed with ethanol to remove any remaining contaminants and salts. The pellet is then air-dried or dried under vacuum to remove residual ethanol.9. Re-suspend the DNA: The dried DNA pellet is re-suspended in a suitable buffer, such as TE buffer, to make it ready for downstream applications.10. Quantify and analyze the DNA: The extracted DNA can be quantified using spectrophotometry or other methods, and its quality can be assessed using agarose gel electrophoresis or PCR.中文回答：酚氯仿法是一种广泛应用的DNA提取技术。
最新酚氯仿法提取DNA实验报告
酚氯仿法和试剂盒法提取DNA实验报告一、实验目的实验原理：酚氯仿法：先从全血中分离白细胞，再通过蛋白酶K消化，通过酚、氯仿的抽提,使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA乙二胺四乙酸二钠存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中晶SDS可破坏细胞膜、核膜晶并使组织蛋白与DNA分离晶EDTA则抑制细胞中Dnase的活性而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸晶使DNA分子完整地分离出来。
氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀晶将核酸物质萃取出来 再向萃取液中加入适量乙醇晶可使DNA析出。
氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在DNA纯化研究中非常常用晶氯仿-异戊醇抽提的原理是晶氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相分层异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。
而DNA不溶于乙醇等有机溶剂晶因此可以通过乙醇沉淀来纯化和浓缩DNA二、实验用品试剂：1mol/L(M)Tris-Cl(pH8.0), 0.5M EDTA（pH8.0），5M NaCl TES（15mM Tris, 15mM EDTA，15mM NaCl）Tris饱和酚（PH8.0）氯仿/异戊醇（V/V=24/1）10％SDS5mg/ml Protease K70％乙醇、无水乙醇TE缓冲液（pH8.0）：10mM T ris-Cl（PH8.0）1mM E DTA(PH8.0)10mg/mL 溴化乙锭（EB）耗材：仪器：低温离心机、移液枪一套，低温冰箱，恒温水浴锅、紫外分光光度计（Eppendorf）。
三、实验步骤4.1取血样：实验人员相互取血样5ml.（用品：采血管、采血针、无水乙醇、棉签、橡皮管、废液缸）4.2血液样品的预处理：分取2ml 血样加入到离心管A中用于酚氯仿法提取DNA。
1) 破除RBC：用移液器将采血管中剩余的3ml血样中的血凝块取出转移到组织匀浆器中研磨粉碎，再移入50ml 离心管B中，再加入5倍体积无菌水，颠倒混匀，冰上静置十分钟，用于试剂盒法提取DNA。
常规酚-氯仿抽提法改进
常规酚-氯仿抽提法改进第一篇：常规酚-氯仿抽提法改进常规酚-氯仿抽提法改进.取材：取50 mg 肌肉组织放入1.5 mL Ep 管中，加灭菌双蒸水，用灼烧过的剪刀将肌肉剪碎（越碎越好）.消化：吸除Eppendorf 管中的双蒸水，加入500 μL裂解缓冲液及6～7 μL 的20 g/L 的蛋白酶K，置于55 ℃水浴锅中消化.在消化的第1 h 内，每隔10 min 混匀1次，加快消化速度.消化时间根据消化程度而定，大约3～4 h.Tris-平衡酚抽提：4 ℃、5 000 r/min 条件下，将消化后的组织液离心5 min，取上清液至新的Eppendorf 管中，加入等体积的Tris-平衡酚（约500 μL），旋转器上摇匀10 min，在4 ℃、8 000 r/min 条件下离心15 min，上清液移至新的Eppendorf 管中.混合抽提：加入Tris-平衡酚和氯仿异戊醇混合液各250 μL，颠倒混匀10 min，在4 ℃、8 000 r/min 条件下离心15 min，取上清液至新的Eppendorf 管中.氯仿异戊醇抽提：加入等体积的氯仿异戊醇，颠倒混匀10 min，4 ℃、8 000 r/min 条件下离心15 min.将上层水相小心转移至新的Eppendorf 管中.沉淀：加入4 ℃、0.1 倍体积浓度为3 mol/L 的NaAc（约50 μL）、2.5 倍体积冷冻的无水乙醇（约1 mL），旋转混匀.置于-20 ℃冰箱，沉淀3 h 以上.保存：在4 ℃、12 000 r/min 条件下离心10 min 后弃掉溶液，烘干，加入50μL 灭菌双蒸水在4℃冰箱保存.第二篇：酚氯仿抽提法求助】PBS-酚/氯仿抽提法提取的DNA方法大家能介绍一下PBS-酚/氯仿抽提法提取DNA的方法吗, 我们实验室没有钱买试剂盒, 还得自己配试剂, 谢谢！你是提取细胞的还是血液的？PBS是洗涤样品的作用吧，我用酚/氯仿抽提法提过DNA，与试剂盒比较起来，总体感觉是浓度大但是纯度不是很纯，但是做PCR的话是能购满足条件得，如果说要做酶切等操作的话，最好还是用试剂盒抽提以下方法可供你参考，祝你好运细胞DNA的提取PBS洗涤离心2次，弃上清，加入400 μL裂解液（100mg· L－1蛋白酶K，10mmol·L-1 Tris-HCI，15 mmol·L-1 NaCl，10mmol·L－1 EDTA，4g·L－1SDS pH8.0），重悬细胞，37℃保温12～24h。
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提DNA原理是一种常用的DNA提取方法，通过该
方法可以从复杂的生物样品中高效地提取纯度较高的DNA样本。
其原理主要包括以下几个步骤：
1. 细胞破碎：首先将待提取的生物样品经过离心等操作，去除无关细胞和组织，然后使用细胞裂解缓冲液将目标细胞破碎，使细胞内部的DNA释放出来。
2. 蛋白酶处理：在细胞裂解的过程中，蛋白酶会释放出来，为了去除其对DNA的影响，可以加入蛋白酶抑制剂来保护DNA。
此步骤的目的是降解蛋白质，同时保持DNA的完整性。
3. 混合酚氯仿：将细胞裂解液与等体积的氯仿混合，产生两相体系。
氯仿主要用来分离DNA和其他细胞成分，如脂质、蛋
白质等。
在混合过程中，DNA溶于水相，而其他成分溶于有
机相。
这样，通过离心使两相分离。
DNA会聚集在水相中。
4. DNA沉淀：将水相转移到新的离心管中，加入冷酒精或异
丙醇，使DNA沉淀出来。
酒精或异丙醇中的离子会中和
DNA上的电荷，从而使DNA不溶于水，形成可见的白色沉淀。
5. 洗涤与溶解：将DNA沉淀用无菌蒸馏水洗涤去除酒精或异
丙醇的残余，并用TE缓冲液溶解DNA，使其得以储存和进
一步应用。
通过酚氯仿抽提DNA，可以将DNA从细胞中高效地提取出
来，纯度较高，适用于许多分子生物学实验和技术的应用，如PCR、酶切、测序等。
基因组提取 (酚氯仿法)
定位克隆实验室2010-12-27 胡文波修订酚氯仿提基因组-大量高纯度DNA的制备原理：酚、氯仿是蛋白质变性剂，能有效去除核蛋白，使核酸从核蛋白中分离出来。
氯仿还能加速有机相与液相的分层，少许异戊醇能稳定界面，减少蛋白质变性过程中产生气泡。
操作步骤：1.将材料放入预冷的研钵中，加入液氮后迅速研磨成粉末状（刚加入液氮时不停上下锤击材料，液氮快挥发完时用研棒旋转搅拌挤压材料使之破碎）。
2.研磨完毕后，加入800ul抽提缓冲液，轻轻摇匀，形成匀浆状。
3.将匀浆液转移至1个2ml离心管中，加入Proteinase K至终浓度为100ug/ml（800ul加4ul蛋白酶K（20ug/ul））,55℃水浴保温过夜。
4.加入等体积平衡酚，室温温和振荡，摇匀，10-15min。
5.离心：12000rpm 4℃ 10min，将粘稠的水相移至洁净的离心管中。
6.再用酚:氯仿（v:v =1:1），氯仿各抽提1次（离心：12000rpm 4℃ 10min）。
7.将上层水相移至洁净的离心管中，加入2倍体积无水乙醇，转动离心管使溶液充分混合，DNA立即形成沉淀。
8.离心：7500g 4℃ 10min，使DNA沉于管底，将离心管倒置于滤纸上，晾干（或用玻璃棒/消毒牙签将DNA沉淀从乙醇沉淀中移出）。
9.用70%乙醇洗涤DNA沉淀2次（离心：7500g 4℃ 10min）。
10.加入200ul TE(pH8.0)使DNA完全溶解。
11.加入RNase至终浓度为50ug/ml，37℃保温1h。
12.紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度。
13.调节DNA终浓度为1000ng/ul。
14.将DNA做梯度稀释：1×102 ，1×101 ，1×100 ，1×10-1 ，1×10-2ng/ul，稀释体积为100ul。
15.取2ul DNA与2ul 2×上样缓冲液混匀，点样到琼脂糖凝胶（w/v = 2%）中，以2.5-5v/cm电泳。
酚氯仿抽提
酚氯仿抽提酚氯仿抽提一、DNA抽提试剂：1.酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）；2.3M NaAc（pH 5.2）；3.80%乙醇。
步骤：1. 样品加去离子水至总体积100 μL；2．加入100 μl已配好的酚/氯仿/异戊醇（25/24/1），充分震荡后，10,000 rpm离心10 min；3. 转移上清于新的离心管中，按体积的1/10加入3M NaAc （pH5.2），按体积的2倍加入100%乙醇，轻轻混匀后，-20 ?C静至至少30 min沉淀DNA；4. 4 ?C，12,000 rpm离心10 min，弃去上清；5. 1 mL的80%乙醇洗沉淀，10,000 rpm离心2 min；6. 弃去乙醇，风干后，加入适量去离子水或TE溶解质粒。
二、RNA抽提试剂：1.水饱和酚；2.氯仿；3.3M NaAc（pH 5.2，DEPC水配制）；4.75%乙醇（DEPC水配制）。
步骤：1. 加入DEPC水至总体积为100 μL；2. 加入水饱和酚/氯仿(1:1)，室温混匀；3. 4°C, 12, 000 rpm, 15 min；转移上清至新的离心管中；4. 加入等体积的氯仿，4 ?C, 12, 000 rpm, 15 min, 取上清；5. 加入上清体积1/10的3M NaAc（pH5.2, DEPC水配制）和2.5倍体积的100%的乙醇，-80 ?C沉淀过夜；6. 4 ?C离心，12, 000 rpm, 30 min；7. 去上清，加入100 μL 75%乙醇(DEPC水配制)，洗涤沉淀；8. 12, 000 rpm 离心5 min，去乙醇；风干，溶于适量DEPC水中，-20 ?C保存。
苯酚 氯仿抽提的技术原理
苯酚氯仿抽提的技术原理
使用氯仿从苯酚溶液中抽提的技术原理可以概括为:
1. 苯酚与氯仿的相对溶解度
苯酚易溶于氯仿而难溶于水,氯仿与水基本不混溶。
2. 抽提过程
将苯酚的水溶液与氯仿混合,搅拌使苯酚转移至氯仿相中。
3. 两相分离
静置后上层为氯仿相,含有苯酚;下层为水相。
根据相对密度分离收集上氯仿相。
4. 回流提纯
可以通过多次氯仿回流提纯,进一步提高苯酚纯度。
5. 除水干燥
使用无水硫酸钠等干燥剂除去氯仿相中的残留水分。
6. 蒸馏浓缩
简单蒸馏可以回收氯仿;减压蒸馏可浓缩提纯苯酚。
7. 萃取机械提高效率
采用连续萃取设备,可以提高抽提效率。
8. 溶剂回收
通过蒸馏、萃取等方式回收氯仿溶剂,实现循环利用。
9. 过程参数控制
控制好溶液pH、温度、流量等参数,可以提高提取效果。
10. 环保处理
对废溶剂、废水等要进行处理,减少污染。
综上,该技术利用溶解度差异实现苯酚的溶剂萃取和提纯。
酚氯仿法提取DNA的原理
酚氯仿法提取DNA的原理酚氯仿法是一种用于提取DNA的常见方法，它基于DNA与酚氯仿在两相溶液中由于密度差异而发生分离的原理。
下面将详细介绍酚氯仿法提取DNA的原理及步骤。
DNA是一个带有负电荷的双链分子，其溶解度与其环境的离子力有关。
酚氯仿可以形成无水酚、蛋白质和DNA、RNA在其中既不溶于水又不溶于酚氯仿的界面。
当DNA溶液与酚氯仿混合时，DNA会从水相转移到有机相（酚氯仿相）中，实现分离。
1.细胞裂解：将待提取DNA的细胞加入缓冲液中，并通过机械、热力或化学方法使细胞裂解，释放DNA。
2.去除蛋白质：加入蛋白酶K等蛋白酶使蛋白质降解，形成胶冻样物质。
3.DNA溶解：加入盐酸溶解胶冻样物质，使DNA溶于溶液中。
4.全球胆碱设备实验室的志愿者在2024年完成了其中一个针对雌激素和其他抗生素的研究试验。
5.沉淀DNA：加入冰冷的异丙醇或乙醇，在DNA溶液中形成DNA沉淀。
6.制备DNA：将DNA沉淀转移到新的管中，并用乙醇洗涤去除杂质。
7.定量和存储：使用分光光度计测量DNA的浓度，然后将其保存在适当的条件下，以便后续实验中使用。
1.方法成本较低，步骤简单易行。
2.可以提取高纯度的DNA。
3.可以在较短时间内提取大量DNA。
1.操作要注意安全，避免酚氯仿的接触和吸入。
2.使用无菌技术和无菌材料，以避免外源性DNA的污染。
3.避免DNA溶液的过热和过长的暴露于空气中，以避免降解DNA。
总结：酚氯仿法提取DNA是一种常用的DNA提取方法，其原理是通过DNA与酚氯仿在两相溶液中的密度差异实现DNA的分离。
该方法简单易行，可以提取高纯度的DNA，适用于很多生物学实验和研究领域。
在进行实验时，需注意操作安全和避免DNA污染，以保证提取到高质量的DNA。
生物化学实验十、参考酚氯仿提取方法
蛋白酶K：
水解蛋白质的作用，消化DNA酶和细胞中的蛋白质 蛋白酶K与其他蛋白酶相比，它具有更强的水解能
力，而且在SDS、EDTA存在时仍保持较高活性，可 同时使用
苯酚的特点： 蛋白质强变性剂、抑制DNA酶活性 苯酚溶于有机溶剂，微溶于水 提取DNA前苯酚用Tris-Hcl饱和，防止吸收过多
DNA，降低DNA的损失率 氧化苯酚会破坏DNA
为什么苯酚要重蒸饱和后才能用于DNA的分离？
苯酚在空气中经常被氧化生成醌，它能够产生自 由基，直接用于DNA分离，会使磷酸二酯键断裂， 造成DNA降解。 氧化苯酚需要经过高温重蒸以除去氧化物，并用 Ttis-Hcl饱和酚，并调节至中性。
PH8.0的Tris溶液可以似的抽提出的DNA进 入水相，减少在蛋白质层滞留。
用大口径tip头小心移走上清（切勿移走甚至搅动两相界面的蛋白质沉 淀），加入等体积氯仿，缓慢颠倒混匀5min，12000rpm离心3min；
用大口径tip头小心移走上清，加入15μl5M NaCl，混匀，再加入两倍 体积的无水乙醇，颠倒混匀后，15000rpm离心3min；
倾去上清（小心别把沉淀也倒掉！），12000rpm离心3秒钟，用枪头 将离心管底残留液体吸掉，晾干沉淀，所得即DNA大分子，根据产量 溶解于适量无菌蒸馏水中备后用。
在酚或酚-氯仿中加入少许的异戊醇，是可 以减少实验中的气泡的产生，而且利于分 相，保持分相的稳定性。
DNA的沉淀
1）无水乙醇沉淀 沉淀前往往加入NaCl等盐离子，作用是中和核酸分子表面 的负电荷，有助于分子之间的聚集。
无水乙醇可以吸收分子之间的水，使DNA沉淀析出，无水 乙醇使用前冰冻，可以减少DNA沉淀析出过程释放热量 对DNA的损伤。 2）异丙醇沉淀 除了使DNA沉淀外，还可以溶解少量的小的RNA分子
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求助】PBS-酚/氯仿抽提法提取的DNA方法
大家能介绍一下PBS-酚/氯仿抽提法提取DNA的方法吗, 我们实验室没有钱买试剂盒, 还
得自己配试剂, 谢谢!!
你是提取细胞的还是血液的？
PBS是洗涤样品的作用吧，我用酚/氯仿抽提法提过DNA，与试剂盒比较起来，总体感觉是浓度大但是纯度不是很纯，但是做PCR的话是能购满足条件得，如果说要做酶切等操作
的话，最好还是用试剂盒抽提
以下方法可供你参考，祝你好运
细胞DNA的提取
PBS洗涤离心2次，弃上清，加入400 μL裂解液（100mg· L－1蛋白酶K，10mmol·L-1 Tris-HCI，15 mmol·L-1 NaCl，10mmol·L－1 EDTA，4g·L－1SDS pH8.0），重悬细胞，37℃保温12～24h。
加450μL平衡酚，混匀，5000 g离心10min．转移上层水相，重复酚抽提1次．转移上层水相，加入450μL氯仿：异戊醇（24：1），混匀，5000g 离心10min。
转移上层水相，加入1／10体积3mol·L－1乙酸钠（pH 5.2）和2.5倍体积无水乙醇，混匀．置—20℃1h后，IO000g离心15min。
以700mL·L－1乙醇洗涤2次，晾干后，加入50μLTE，－20℃保存备用．
血液提DNA
①300ul抗凝全血加1000ul PBS，充分混匀，8000rpm离心5min。
②去上清液，加1000ul PBS，充分混匀，8000rpm离心5min。
③去上清液，加500ul消化Buffer（100mg· L－1蛋白酶K，10mmol·L-1 Tris-HCI，
15 mmol·L-1 NaCl，10mmol·L－1 EDTA，4g·L－1SDS pH8.0），充分混匀，56℃
水浴5h以上。
④加500ul 25:24的酚氯仿，混匀，13000rpm离心10min。
⑤取上清液，加等量的25:24的酚氯仿，混匀，13000rpm离心10min。
⑥取上清液，加2倍体积的无水乙醇，轻摇混匀，直到出现絮状沉淀。
（未见沉淀提示
DNA量不多）
⑦15000rpm离心3min。
⑧去上清液，加500ul 70%的乙醇，充分混匀，15000rpm离心3min。
⑨去上清液，晾干，加50ul TE完全溶解备用。
我觉得酚/氯仿抽提法提取DNA还是可以的，除了开始做的少数几个标本，我一般提取的纯度没有低于1.8，甚至一些超过了2.0。
不过，我们也不要完全相信仪器的数值，它只能
提供一个参考。
我做的方法是：
1 DNA提取（血液）
（1）加入等体积的PBS磷酸盐缓冲液，充分混匀后12000rpm离心5min，弃上清；加400μlSTE，10%SDS 40μl，蛋白酶-K 10μl（10mg/ml）
（2）56度水如2小时，也可以37度消化过夜；不过后者我做的较少；
（3）等体积饱和酚，倒转摇匀。
12000rpm 5分钟，离心，吸上层入另一1.5ml离心管；
小心一点，不要吸入蛋白层；
（4）上清液加等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），倒转混匀。
12000rpm 5分
钟，离心，吸上层入另一1.5ml离心管；
（5）上清液加等体积氯仿：异戊醇（24：1），倒转混匀10分钟，12000rpm5分钟，
取上清入另一管；
（6）加1/12体积3M 醋酸钠，混匀后再加3倍体积的4℃冰箱冷却后的无水乙醇，轻柔
振摇；然后你会看到白色絮状物（DNA）。
（7）-20℃放置20~30分钟，12000rpm 低温（4℃）离心10分钟，沉淀DNA，去上
清；可以直接倒掉；
（8）加1ml 70%乙醇洗涤，12000rpm 低温（4℃）离心10分钟，去上清，重复1
次；
（9）自然干燥后，用pH8.0TE溶解，保存在-20℃备用。
我觉得，在提取的时候，吸取上清要根据实际情况，不要有的上清不是很多而偏要定个统一的标准，只要提取的与加入的试剂成一定比例就可以了。
否则，会影响实验结果的。
不过，看到一个战友说“加入酚的液体分层抽吸上层液时，在避免吸入蛋白的前提下，要尽量把上层液吸多点，因为很多DNA就在两层中间；加入醋酸钠和预冷无水乙醇后，放置在－20度冰箱，时间长一点，2小时，以充分沉淀DNA。
”
最好一次不要做得太多，容易出错。
2 DNA浓度的测定
取3ul DNA 标本加72μl 双蒸水，充分混匀后，用紫外分光光度计测定，计算浓度和比值，
判断DNA的浓度和纯度。
若DAN纯度<1.6, 表明有残存酚或蛋白含量太高，用氯仿抽提纯化就可以了。