酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项基础操作，它是获取DNA样本的过程。
DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. 高盐法高盐法是一种简单且常用的DNA提取方法。
其原理是利用高盐溶液中DNA与其他细胞组分（如蛋白质）之间的亲和性差异。
在高盐环境下，DNA更容易溶解而不与蛋白质结合，从而实现DNA的提取。
具体步骤包括细胞破碎、加入高盐溶液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异，将DNA从细胞中分离出来。
具体步骤包括细胞破碎、加入酚/氯仿混合液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性差异。
DNA样本在经过一系列处理后，通过硅胶柱，DNA能够与硅胶颗粒结合，而杂质则被洗脱。
最后，通过洗脱DNA，即可获得高纯度的DNA。
硅胶柱法的优点是提取纯度高、操作简单，适用于分子生物学研究和临床诊断。
4. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的DNA提取方法。
其原理是利用带有亲和基团的磁珠与DNA之间的亲和性，实现DNA的选择性吸附和洗脱。
具体步骤包括磁珠悬浮液制备、样本加入、磁珠与DNA结合、磁珠分离、洗脱DNA等。
除了上述常用的DNA提取方法外，还有其他一些特殊的DNA提取方法，如酶解法、离心法、凝胶切割法等。
这些方法在不同的实验和应用中具有各自的特点和优势。
总结起来，DNA提取的方法多种多样，选择适合的方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验操作，以确保提取到高质量的DNA样本。
DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此在进行DNA提取时，需要注意样本的保存、细胞破碎的方式、溶解液的选择等因素，以获得可靠且高纯度的DNA。
DNA的提取的原理和方法
DNA的提取的原理和方法DNA的提取的原理和方法一、实验原理DNA是生物体遗传信息的主要载体，它是一种长链的生物高分子，由四种碱基（腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶）按照特定的顺序排列组成。
DNA主要存在于细胞的细胞核中，也有一些存在于线粒体和叶绿体中。
DNA提取的原理主要是利用不同物质在特定溶剂中的溶解度不同，通过控制溶剂的种类和条件，将DNA从细胞中分离出来。
在DNA提取过程中，通常需要使用一些化学物质，如苯酚、氯仿等，来破坏细胞膜和核膜，使DNA释放出来。
同时，还需要使用蛋白酶等酶类物质来消化蛋白质，以便更好地分离DNA。
二、实验方法1.材料准备提取DNA的材料可以是动物组织、植物组织、微生物等。
不同的材料需要采用不同的处理方法，以最大限度地获得高质量的DNA。
例如，对于植物组织，可以使用液氮研磨法或CTAB法等方法进行提取。
2.细胞裂解细胞裂解是DNA提取的关键步骤之一，目的是破坏细胞膜和核膜，使DNA释放出来。
常用的裂解方法有机械法、化学法和酶法。
机械法包括研磨、超声波等；化学法使用化学物质如苯酚、氯仿等；酶法使用蛋白酶等酶类物质来消化蛋白质。
3.蛋白质去除在细胞裂解后，蛋白质也会随着DNA一起释放出来。
为了获得纯净的DNA，需要去除蛋白质。
常用的去除蛋白质的方法有苯酚/氯仿抽提法和盐析法。
苯酚/氯仿抽提法利用苯酚和氯仿的特性，将蛋白质和DNA分离开来；盐析法则是利用高浓度的盐溶液使蛋白质沉淀，而DNA则溶解在上清液中。
4.DNA沉淀去除蛋白质后，需要通过一定的方法将DNA沉淀下来。
常用的沉淀方法有乙醇沉淀法和盐析法。
乙醇沉淀法利用乙醇能够使DNA沉淀的特性，将DNA从溶液中分离出来；盐析法则是利用高浓度的盐溶液使DNA沉淀，然后通过离心等方法将DNA 收集起来。
5.DNA洗涤和溶解DNA沉淀后，需要用70%乙醇洗涤数次以去除杂质，然后用适量的TE缓冲液或去离子水溶解DNA。
TE缓冲液是一种常用的维持DNA稳定的缓冲溶液，含有Tris-HCl和EDTA二钠等成分。
提取dna的实验步骤原理
提取dna的实验步骤原理DNA提取是一项重要的实验技术，用于从细胞中分离纯净的DNA。
它在生物学、医学、犯罪学等领域具有广泛的应用。
DNA提取的过程可以分为以下几个步骤：样品收集、细胞破碎、蛋白质消化、DNA分离、洗涤、溶解和纯化。
首先，样品收集是DNA提取的第一步。
样品可以来自不同的来源，如血液、唾液、组织样本等。
对于血液样品，静脉采血是最常见的方式。
收集的血液样品需要采用抗凝剂进行预处理，以防止凝血。
细胞破碎是DNA提取的关键步骤之一。
细胞破碎的目的是将细胞膜以及核膜破坏，释放细胞内的DNA。
常用的细胞破碎方法有物理破碎、化学破碎和酶解法。
物理破碎一般采用高速离心仪或超声波处理，通过机械力量破坏细胞结构。
化学破碎使用适当的溶液，如细胞裂解液（例如EDTA、SDS、蛋白酶K等）来分解膜脂质和蛋白质。
酶解法则通过酶的作用来降解膜和核酸。
蛋白质消化是为了去除提取过程中的蛋白质杂质。
蛋白质会干扰DNA的纯化和测定。
在蛋白质消化过程中，常用的方法是加入蛋白酶K或肾脏酸性蛋白酶等蛋白水解酶，通过其酶解作用将蛋白质降解。
DNA分离是将DNA与其他细胞组分分离的过程。
DNA在细胞破碎后呈现为线性或环状的形态。
为了分离DNA，一般采用盐溶液和有机溶剂共同作用的方案，如添加高浓度的盐类（如NaCl）和异丙醇。
这些溶剂会沉淀细胞残渣和蛋白质，而DNA则溶于水相中。
洗涤过程是为了去除残留的蛋白质和盐类。
洗涤液一般为酒精溶液，如酒精和醋酸盐。
洗涤时，将沉淀的DNA加入洗涤液中，通过离心使DNA沉淀，然后去除上清液。
此过程重复一至三次可以有效去除杂质。
溶解是将沉淀的DNA重新溶解于缓冲液中，以便于后续的操作。
溶解液可以是Tris-EDTA缓冲液、无菌纯水等。
在加入缓冲液后，将溶液置于水浴中进行搅拌和温度控制，使DNA彻底溶解。
纯化是最后一步，目的是去除DNA提取过程中的杂质，获得纯净的DNA。
常见的纯化方法有酚-氯仿抽提法和硅胶纯化法。
酚氯仿抽提原理
酚氯仿抽提原理
酚氯仿抽提原理是一种常见的有机物提取方法，该方法通过酚氯仿与样品中的目标化合物发生化学反应，将目标化合物从样品中分离出来。
下面将详细介绍酚氯仿抽提原理：
1.溶剂选择：酚氯仿是一种有机溶剂，对许多有机物具有良好
的溶解能力，因此在酚氯仿抽提过程中常常选择酚氯仿作为抽提溶剂。
2.抽提原理：酚氯仿可以与目标化合物发生亲油性反应，形成
可溶于酚氯仿的复合物，并从样品中抽提出来。
这是因为酚氯仿的化学性质使其能够与许多有机物形成相互作用，例如氢键、氧化还原反应等。
3.抽提条件：酚氯仿抽提的条件包括温度、pH值、搅拌速度等。
适当的条件可以促进酚氯仿与目标化合物的反应，并提高抽提效果。
4.抽提步骤：酚氯仿抽提的步骤通常包括样品制备、酚氯仿溶
液制备、抽提过程和目标化合物的分离。
其中，在样品制备过程中需要将样品研磨或者加入适当的溶剂溶解，以便更好地与酚氯仿反应。
5.分离纯化：一般情况下，酚氯仿抽提得到的溶液中还包含有
一些杂质。
为了得到纯净的目标化合物，需要进行进一步的分离纯化步骤，例如溶剂挥发、晶体生长等。
总之，酚氯仿抽提原理通过酚氯仿与目标化合物的化学反应来分离目标化合物。
通过优化溶剂的选择、抽提条件的控制以及后续的分离纯化步骤，可以得到纯净的目标化合物。
酚氯仿法提取DNA原理及方法
酚氯仿法提取DNA原理及方法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其原理是利用酚氯仿溶液对细胞和细胞碎片进行破碎，然后通过离心分离DNA。
以下是详细的步骤：1.细胞裂解：将待提取DNA的样本（细胞、组织等）加入含有酚氯仿的裂解缓冲液中，将溶液均匀混合。
酚氯仿是一种有机溶剂，能够破坏细胞膜和核膜，使细胞释放出DNA。
2.蛋白质沉淀：加入混合溶液中的蛋白质会和酚氯仿相互分离，形成一个物理屏障。
离心沉淀后，由于DNA密度比蛋白质低，DNA会上浮到上层，而蛋白质则沉淀在下层。
3.DNA沉淀：将上层液体转移到新的离心管中，加入同等体积的冷乙醇或异丙醇，然后轻轻振荡以促使DNA沉淀。
酒精能够与DNA相互作用，使DNA分子变得更加疏水，从而沉淀下来。
4.清洗：离心沉淀后，将上清液倒掉，加入70%乙醇洗涤沉淀。
乙醇通过去除残留的酚氯仿和其他杂质，使沉淀的DNA纯化。
5. 溶解：将洗涤后的DNA沉淀干燥或用适量的缓冲液溶解，最常用的是TE缓冲液（含有10 mM Tris-HCl和1 mM EDTA），以便后续的DNA浓度测定和实验操作。
总结来说，酚氯仿法利用酚氯仿溶液破坏细胞膜和核膜，将DNA从细胞中释放出来。
离心分离蛋白质和DNA，然后通过酒精沉淀和乙醇洗涤纯化提取的DNA。
这种方法简单快速，并且能够获得较纯的DNA样品。
不过，酚氯仿法在提取DNA时会同时提取到RNA和蛋白质，因此在一些需要高纯度DNA的实验中可能不适用。
在使用酚氯仿法提取DNA时，还需要注意避免DNA的降解，避免污染和交叉污染，以及正确保存提取的DNA样品。
酚氯仿抽提
酚氯仿抽提一、DNA抽提试剂：1.酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）；2.3M NaAc（pH 5.2）；3.80%乙醇。
步骤：1. 样品加去离子水至总体积100 μL；2．加入100 μl已配好的酚/氯仿/异戊醇（25/24/1），充分震荡后，10,000 rpm离心10 min；3. 转移上清于新的离心管中，按体积的1/10加入3M NaAc（pH5.2），按体积的2倍加入100%乙醇，轻轻混匀后，-20 ︒C静至至少30 min沉淀DNA；4. 4 ˚C，12,000 rpm离心10 min，弃去上清；5. 1 mL的80%乙醇洗沉淀，10,000 rpm离心2 min；6. 弃去乙醇，风干后，加入适量去离子水或TE溶解质粒。
二、RNA抽提试剂：1.水饱和酚；2.氯仿；3.3M NaAc（pH 5.2，DEPC水配制）；4.75%乙醇（DEPC水配制）。
步骤：1. 加入DEPC水至总体积为100 μL；2. 加入水饱和酚/氯仿(1:1)，室温混匀；3. 4°C, 12, 000 rpm, 15 min；转移上清至新的离心管中；4. 加入等体积的氯仿，4 ︒C, 12, 000 rpm, 15 min, 取上清；5. 加入上清体积1/10的3M NaAc（pH5.2, DEPC水配制）和2.5倍体积的100%的乙醇，-80 ︒C沉淀过夜；6. 4 ︒C离心，12, 000 rpm, 30 min；7. 去上清，加入100 μL 75%乙醇(DEPC水配制)，洗涤沉淀；8. 12, 000 rpm 离心5 min，去乙醇；风干，溶于适量DEPC水中，-20 ︒C保存。
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿（Phenol-Chloroform）抽提DNA是一种常用的DNA 提取方法。
其原理是基于酚在酸性条件下具有与DNA高度亲和性的特点，可以将DNA从细胞溶液中抽提出来。
具体的步骤如下：
1. 细胞溶解：首先将待提取DNA的细胞样品加入适量的细胞裂解缓冲液中，通过机械或化学方法使细胞壁破裂，释放出细胞内的DNA。
2. 酚抽提：加入相同体积的酚溶液，并进行充分混合。
酚能与DNA形成复合物，并与其他细胞组分（如蛋白质和脂质）发生分层，形成一个DNA上层和一个下层。
3. 脱水：将抽提产物转移至新管中，加入酒精或异丙醇，通过离心将DNA沉淀下来。
脱水过程可以去除溶液中的多余酚，提高DNA沉淀的纯度。
4. 酯化：将DNA沉淀物溶解在适量的TE缓冲液（含有EDTA和Tris）中，经过一定的时间酯化，使DNA变得更为稳定。
5. 沉淀：通过低温离心将DNA沉淀下来，去除上清液。
6. 洗涤：用70%的乙醇洗涤并去除残余的盐、酚和脏物质。
洗涤过程中，可以多次进行离心和上清液倒掉操作。
7. 干燥：最后，将DNA输送液置于干燥器中或者自然风干，以去除溶剂中的残留物质，得到纯度较高的DNA。
通过酚氯仿抽提DNA的方法，可以从复杂的细胞中提取出高质量、高纯度的DNA，以供后续分子生物学研究使用。
核酸提取纯化方法
核酸提取纯化方法引言核酸提取是分子生物学研究中的一个重要步骤，它主要包括纯化 DNA 和 RNA 两种核酸的过程。
在研究领域，纯化高质量的核酸样品对于准确分析和解读生物信息至关重要。
本文将介绍几种常用的核酸提取纯化方法，包括酚-氯仿法、离心柱法和磁珠法，并对每种方法的优缺点进行评述。
1. 酚-氯仿法酚-氯仿法是一种传统的核酸提取纯化方法，它基于核酸在酚和氯仿两相体系中具有不同溶解度的原理。
具体步骤如下：1.收集待提取的样品，如细菌培养物或组织样品。
2.加入等体积的酚-氯仿溶液，同时加入破碎剂（如玻璃珠或硅胶），彻底混合。
3.离心样品，使得酚相和氯仿相分离。
4.分离上层透明的水相，其中富含 DNA 或 RNA。
5.加入冷异丙醇或乙醇，沉淀核酸。
6.通过离心将沉淀的核酸分离。
7.用缓冲液溶解核酸沉淀，获得纯化后的 DNA 或RNA 样品。
酚-氯仿法提取的核酸样品质量较高，适用于小规模样品的提取。
然而，由于该方法对操作者的技巧要求较高，并且在操作过程中可能存在酚和氯仿对人体的损害风险，所以目前已逐渐被离心柱法和磁珠法取而代之。
2. 离心柱法离心柱法是一种基于硅胶膜和纤维素膜的核酸提取纯化方法，凭借其简单、快速和高效的特点已经成为目前最常用的核酸提取方法之一。
具体步骤如下：1.添加细胞裂解缓冲液到待提取样品中，通过细胞裂解将核酸释放到溶液中。
2.准备离心柱，将离心柱放入收集管中。
3.将样品溶液加到离心柱中，使其通过硅胶膜或纤维素膜。
4.通过洗涤液洗去杂质。
5.加入低盐缓冲液或水，洗脱核酸。
6.将洗脱的核酸收集到新的收集管中。
离心柱法的优点在于简单、快速且对样品的处理量较大，能够同时提取多个样品。
然而，该方法对于某些特殊样品（如富含多酚化合物或多糖的样品）可能会产生一定的干扰。
3. 磁珠法磁珠法是一种新兴的核酸提取纯化方法，它利用了磁珠的磁性和高亲和性，能够快速、高效地提取纯化核酸。
具体步骤如下：1.准备磁珠混悬液，并加入样品。
酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DN A裂解液（300μl），研磨后再加入300μl DNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tri s饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10mi n。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了D Nase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与D NA联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
DNA提取方法和步骤
DNA提取方法和步骤一、常见的DNA提取方法：1. 酚/氯仿法（Phenol/Chloroform Extraction）：通过使用酚/氯仿等有机溶剂来分离DNA分子。
2. 盐水法（Salting out）：通过使用高盐浓度来析出DNA分子。
3. 硅胶柱法（Silica-based purification）：通过与硅胶矩阵相互作用，从混合溶液中纯化DNA。
4. 高盐法（High salt method）：通过使用高盐浓度来沉淀DNA。
5. CTAB法（Cetyltrimethylammonium bromide method）：通过使用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）来分离DNA。
二、通用的DNA提取步骤：1.样本收集：从所需生物体（如植物组织、动物组织、血液等）中收集样本。
样本的品质对提取后的DNA质量影响很大，因此需要保证样本的新鲜度和完整性。
2.细胞破碎：将收集到的样本进行细胞破碎，使DNA从细胞的内部释放出来。
这可以通过机械方法（搅拌、刮擦等）、溶解酶或离心等方法来实现。
3. 除去蛋白质和RNA：加入蛋白酶等酶解蛋白质，使其降解分解。
同时，也可以加入RNase酶降解RNA，以免在提取过程中受到污染。
4.DNA沉淀：加入盐溶液以增加DNA的溶解性，然后加入酒精来沉淀DNA分子。
酒精的加入可以调节盐溶液中Na+和DNA的酒精沉淀剂（如异丙醇或乙醇）的比例，从而沉淀出DNA。
5.洗涤：将沉淀下的DNA溶于适当的缓冲液中，以去除沉淀剂、盐等杂质。
6. 保存：最后，将DNA保存在适当的缓冲液中，如TE缓冲液（Tris-EDTA），并在低温下存储。
三、酚/氯仿法DNA提取步骤：1.细胞破碎：将细胞或组织加入到含有裂解缓冲液的试管中，使用机械方法（高速离心、搅拌等）或酶解来破碎细胞膜。
2.调整pH值：加入适量的酚/氯仿溶液，并快速倒转试管数次，使试管中的溶液充分混合。
酚会与细胞残渣中的蛋白质结合形成亲水性复合物，而氯仿可以帮助去除蛋白质。
dna纯化方法
dna纯化方法
DNA纯化方法
DNA纯化是分子生物学中的一个重要步骤，它是从混合物中分离出DNA分子的过程。
DNA纯化方法有很多种，其中常用的方法包括酚/氯仿法、离心柱法、磁珠法等。
酚/氯仿法是最常用的DNA纯化方法之一。
它的原理是利用酚和氯仿的密度差异，将DNA分子从其他杂质中分离出来。
具体操作步骤如下：首先将细胞裂解，使DNA分子释放到溶液中；然后加入等体积的酚/氯仿混合液，混合均匀后离心分层；最后将上层的DNA溶液取出，加入等体积的异丙醇，沉淀DNA分子。
离心柱法是一种快速、简便的DNA纯化方法。
它利用离心柱的特殊结构，将DNA分子从其他杂质中分离出来。
具体操作步骤如下：首先将细胞裂解，使DNA分子释放到溶液中；然后将DNA溶液加入离心柱中，离心分离DNA分子和其他杂质；最后将离心柱中的DNA分子洗涤、洗脱，得到纯净的DNA分子。
磁珠法是一种高效、自动化的DNA纯化方法。
它利用磁珠表面的亲和分子与DNA分子的特异性结合，将DNA分子从其他杂质中分离出来。
具体操作步骤如下：首先将细胞裂解，使DNA分子释放到溶液中；然后加入磁珠，使其与DNA分子结合；最后利用磁力将磁珠与DNA分子分离，得到纯净的DNA分子。
DNA纯化方法有很多种，每种方法都有其优缺点。
在选择纯化方法时，需要根据实验的具体要求和样品的特点进行选择。
酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。
2. 不能完全抑制RNase 的活性。
酚氯仿法提取DNA要紧步骤和原理
酚氯仿法提取DNA要紧步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，别离用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每一个梯度脱水时刻为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，基层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍通过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃留宿。
13.将样品掏出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的通过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处置匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
利用酚的优势：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部份poly（A）RNA。
2. 不能完全抑制RNase的活性。
dna提取方法
dna提取方法DNA提取方法。
DNA提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，它是从生物样本中分离出DNA分子的过程。
DNA提取的目的是为了获得足够纯度和浓度的DNA样本，以便进行后续的实验操作，比如PCR扩增、测序等。
在实际操作中，DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法。
1. 酚/氯仿提取法。
酚/氯仿提取法是最早的DNA提取方法之一，它利用酚和氯仿两种有机溶剂的密度差异来分离DNA。
首先，将生物样本经过细胞裂解，然后加入酚/氯仿混合溶液，混合均匀后离心，DNA会在上清液中，而蛋白质和其他杂质则会沉淀在底部。
接着将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的异丙醇，再次离心，DNA会沉淀在离心管底部。
最后将上清液倒掉，用70%乙醇洗涤DNA沉淀，最后溶解于适量的缓冲液中。
酚/氯仿提取法简单易行，适用于各种类型的生物样本。
2. 离心柱法。
离心柱法是一种基于硅胶膜或硅胶颗粒的DNA提取方法，它利用DNA与硅胶的亲和性来实现DNA的分离纯化。
首先，将样本加入裂解缓冲液，然后加入蛋白酶和蛋白酶K进行细胞裂解。
接着将裂解液加入离心柱中，经过离心后，DNA会在离心柱上残留，而其他杂质则会通过离心柱底部的滤膜排除。
然后用洗涤缓冲液洗涤离心柱，最后用去离子水或低盐缓冲液洗脱DNA。
离心柱法操作简便，能够快速、高效地获得纯度较高的DNA样本。
3. 硝酸盐法。
硝酸盐法是一种利用硝酸盐沉淀DNA的提取方法。
首先，将生物样本进行细胞裂解，然后加入等体积的乙醇和适量的硝酸盐溶液，混合后DNA会沉淀出来。
接着用乙醇洗涤DNA沉淀，最后溶解于适量的缓冲液中。
硝酸盐法操作简单，适用于大规模DNA提取。
4. 磁珠法。
磁珠法是一种利用磁珠颗粒与DNA的亲和性来实现DNA的分离纯化的方法。
首先，将生物样本进行细胞裂解，然后加入磁珠颗粒，DNA会在磁场的作用下与磁珠结合，然后用磁场将DNA与磁珠分离出来。
接着用洗涤缓冲液洗涤磁珠，最后用去离子水或低盐缓冲液洗脱DNA。
提取dna的方法及步骤
提取dna的方法及步骤提取DNA的方法及步骤DNA（脱氧核糖核酸）是构成生物遗传信息的基本单位，因此，准确提取DNA样本是进行遗传研究、基因工程和犯罪侦查等领域的重要步骤。
以下将介绍几种常见的DNA提取方法及其步骤。
方法一：酚氯仿法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其步骤如下：1. 收集样本：可以是人体组织、血液、细胞培养物等。
确保样本新鲜，并避免受到污染。
2. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
3. 酚氯仿提取：将沉淀加入酚氯仿混合液中，轻轻混匀，并离心以分离DNA。
4. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。
5. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法二：盐析法盐析法是一种简单易行的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
2. 盐析提取：加入高盐缓冲液使DNA与其他核酸和蛋白质分离。
3. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。
4. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。
5. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法三：硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
2. 硅胶柱处理：将细胞沉淀加入硅胶柱中，经过洗涤和离心，将DNA吸附在硅胶柱上。
3. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤硅胶柱，以去除杂质。
4. DNA洗脱：加入低盐缓冲液，使DNA从硅胶柱上洗脱出来。
5. 洗涤：用70%乙醇洗涤洗脱后的DNA，以去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。
方法四：酶解法酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提DNA原理是一种常用的DNA提取方法，通过该
方法可以从复杂的生物样品中高效地提取纯度较高的DNA样本。
其原理主要包括以下几个步骤：
1. 细胞破碎：首先将待提取的生物样品经过离心等操作，去除无关细胞和组织，然后使用细胞裂解缓冲液将目标细胞破碎，使细胞内部的DNA释放出来。
2. 蛋白酶处理：在细胞裂解的过程中，蛋白酶会释放出来，为了去除其对DNA的影响，可以加入蛋白酶抑制剂来保护DNA。
此步骤的目的是降解蛋白质，同时保持DNA的完整性。
3. 混合酚氯仿：将细胞裂解液与等体积的氯仿混合，产生两相体系。
氯仿主要用来分离DNA和其他细胞成分，如脂质、蛋
白质等。
在混合过程中，DNA溶于水相，而其他成分溶于有
机相。
这样，通过离心使两相分离。
DNA会聚集在水相中。
4. DNA沉淀：将水相转移到新的离心管中，加入冷酒精或异
丙醇，使DNA沉淀出来。
酒精或异丙醇中的离子会中和
DNA上的电荷，从而使DNA不溶于水，形成可见的白色沉淀。
5. 洗涤与溶解：将DNA沉淀用无菌蒸馏水洗涤去除酒精或异
丙醇的残余，并用TE缓冲液溶解DNA，使其得以储存和进
一步应用。
通过酚氯仿抽提DNA，可以将DNA从细胞中高效地提取出
来，纯度较高，适用于许多分子生物学实验和技术的应用，如PCR、酶切、测序等。
基因组提取 (酚氯仿法)
定位克隆实验室2010-12-27 胡文波修订酚氯仿提基因组-大量高纯度DNA的制备原理：酚、氯仿是蛋白质变性剂，能有效去除核蛋白，使核酸从核蛋白中分离出来。
氯仿还能加速有机相与液相的分层，少许异戊醇能稳定界面，减少蛋白质变性过程中产生气泡。
操作步骤：1.将材料放入预冷的研钵中，加入液氮后迅速研磨成粉末状（刚加入液氮时不停上下锤击材料，液氮快挥发完时用研棒旋转搅拌挤压材料使之破碎）。
2.研磨完毕后，加入800ul抽提缓冲液，轻轻摇匀，形成匀浆状。
3.将匀浆液转移至1个2ml离心管中，加入Proteinase K至终浓度为100ug/ml（800ul加4ul蛋白酶K（20ug/ul））,55℃水浴保温过夜。
4.加入等体积平衡酚，室温温和振荡，摇匀，10-15min。
5.离心：12000rpm 4℃ 10min，将粘稠的水相移至洁净的离心管中。
6.再用酚:氯仿（v:v =1:1），氯仿各抽提1次（离心：12000rpm 4℃ 10min）。
7.将上层水相移至洁净的离心管中，加入2倍体积无水乙醇，转动离心管使溶液充分混合，DNA立即形成沉淀。
8.离心：7500g 4℃ 10min，使DNA沉于管底，将离心管倒置于滤纸上，晾干（或用玻璃棒/消毒牙签将DNA沉淀从乙醇沉淀中移出）。
9.用70%乙醇洗涤DNA沉淀2次（离心：7500g 4℃ 10min）。
10.加入200ul TE(pH8.0)使DNA完全溶解。
11.加入RNase至终浓度为50ug/ml，37℃保温1h。
12.紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度。
13.调节DNA终浓度为1000ng/ul。
14.将DNA做梯度稀释：1×102 ，1×101 ，1×100 ，1×10-1 ，1×10-2ng/ul，稀释体积为100ul。
15.取2ul DNA与2ul 2×上样缓冲液混匀，点样到琼脂糖凝胶（w/v = 2%）中，以2.5-5v/cm电泳。
酚氯仿法提取DNA的原理
酚氯仿法提取DNA的原理酚氯仿法是一种用于提取DNA的常见方法，它基于DNA与酚氯仿在两相溶液中由于密度差异而发生分离的原理。
下面将详细介绍酚氯仿法提取DNA的原理及步骤。
DNA是一个带有负电荷的双链分子，其溶解度与其环境的离子力有关。
酚氯仿可以形成无水酚、蛋白质和DNA、RNA在其中既不溶于水又不溶于酚氯仿的界面。
当DNA溶液与酚氯仿混合时，DNA会从水相转移到有机相（酚氯仿相）中，实现分离。
1.细胞裂解：将待提取DNA的细胞加入缓冲液中，并通过机械、热力或化学方法使细胞裂解，释放DNA。
2.去除蛋白质：加入蛋白酶K等蛋白酶使蛋白质降解，形成胶冻样物质。
3.DNA溶解：加入盐酸溶解胶冻样物质，使DNA溶于溶液中。
4.全球胆碱设备实验室的志愿者在2024年完成了其中一个针对雌激素和其他抗生素的研究试验。
5.沉淀DNA：加入冰冷的异丙醇或乙醇，在DNA溶液中形成DNA沉淀。
6.制备DNA：将DNA沉淀转移到新的管中，并用乙醇洗涤去除杂质。
7.定量和存储：使用分光光度计测量DNA的浓度，然后将其保存在适当的条件下，以便后续实验中使用。
1.方法成本较低，步骤简单易行。
2.可以提取高纯度的DNA。
3.可以在较短时间内提取大量DNA。
1.操作要注意安全，避免酚氯仿的接触和吸入。
2.使用无菌技术和无菌材料，以避免外源性DNA的污染。
3.避免DNA溶液的过热和过长的暴露于空气中，以避免降解DNA。
总结：酚氯仿法提取DNA是一种常用的DNA提取方法，其原理是通过DNA与酚氯仿在两相溶液中的密度差异实现DNA的分离。
该方法简单易行，可以提取高纯度的DNA，适用于很多生物学实验和研究领域。
在进行实验时，需注意操作安全和避免DNA污染，以保证提取到高质量的DNA。
酚氯仿法提取DNA实验报告
酚氯仿法和试剂盒法提取DNA实验报告一、实验目的实验原理：酚氯仿法：先从全血中分离白细胞，再通过蛋白酶K消化，通过酚、氯仿的抽提,使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA乙二胺四乙酸二钠存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中晶SDS可破坏细胞膜、核膜晶并使组织蛋白与DNA分离晶EDTA则抑制细胞中Dnase的活性而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸晶使DNA分子完整地分离出来。
氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀晶将核酸物质萃取出来再向萃取液中加入适量乙醇晶可使DNA析出。
氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在DNA纯化研究中非常常用晶氯仿-异戊醇抽提的原理是晶氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相分层异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。
而DNA不溶于乙醇等有机溶剂晶因此可以通过乙醇沉淀来纯化和浓缩DNA二、实验用品试剂：1mol/L(M)Tris-Cl(pH8.0), 0.5M EDTA（pH8.0），5M NaCl TES（15mM Tris, 15mM EDTA，15mM NaCl）Tris饱和酚（PH8.0）氯仿/异戊醇（V/V=24/1）10％SDS5mg/ml Protease K70％乙醇、无水乙醇TE缓冲液（pH8.0）：10mM T ris-Cl（PH8.0）1mM E DTA(PH8.0)10mg/mL 溴化乙锭（EB）耗材：仪器：低温离心机、移液枪一套，低温冰箱，恒温水浴锅、紫外分光光度计（Eppendorf）。
三、实验步骤4.1取血样：实验人员相互取血样5ml.（用品：采血管、采血针、无水乙醇、棉签、橡皮管、废液缸）4.2血液样品的预处理：分取2ml 血样加入到离心管A中用于酚氯仿法提取DNA。
1) 破除RBC：用移液器将采血管中剩余的3ml血样中的血凝块取出转移到组织匀浆器中研磨粉碎，再移入50ml 离心管B中，再加入5倍体积无菌水，颠倒混匀，冰上静置十分钟，用于试剂盒法提取DNA。
苯酚氯仿提取法原理
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.;
苯酚/氯仿提取法原理
苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，
SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA从核蛋白中游离出来。
DNA易溶于水，不溶于有机溶剂。
蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。
当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。
离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。
酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。
氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。
抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在NaCl存在下沉淀DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐，真空干燥，用TE缓冲液溶解DNA备用。
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酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。
2. 不能完全抑制RNase 的活性。
氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。
（酚易溶于氯仿中）用酚－氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。
另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。
原理：动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（DNP）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠），但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（RNP）则在0.14mol/L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。
将沉淀物溶解于生理盐水，加入去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）溶液，使DNA与蛋白质分离开。
加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L，使DNA溶解。
加氯仿-异戊醇去除蛋白质，也可重复该步操作得较纯DNA。
最后用95%乙醇沉淀DNA。
溶解：将离心后除去RNA的沉淀，用30ml生理盐水溶解，充分搅拌后，匀浆一次。
加4毫升10％SDS溶液，使溶液的SDS浓度达到1％左右，边加边搅拌，放置60 ℃水浴保温10分钟（不停搅拌），冷却。
加固体氯化钠，使溶液氯化钠浓度达到1mol/L，充分搅拌10分钟；除杂质：加等体积氯仿-异戊醇混合液，充分震荡10分钟， 8000 r/min离心7分钟，取上层液量好体积，倒入烧杯中（离心管），加同体积的氯仿-异戊醇混合液，重复上次操作。
直至界面不出现蛋白凝胶为止；沉淀：准确量取上清液体积，加2倍体积95％冷乙醇，搅拌后，置冰箱静止冷却，待有白色丝状物出现，约10-15分钟，离心8000 r/min离心7分钟，得白色沉淀；溶解：将沉淀物用0.1mol/L NaOH约10毫升溶解,得DNA溶液。
溶液I—溶菌液：溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。
当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
溶液II－NaOH－SDS液：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。
它主要功能有：（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。
但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
溶液III--3mol／L NaAc（pH4.8）溶液：NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH至4.8，必须加入大量的冰醋酸。
所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。
用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性，使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。
而高盐的3mol／L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。
前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合，后者是因为钠盐与SDS－蛋白复合物作用后，能形成较小的钠盐形式复合物，使沉淀更完全。
为什么用无水乙醇沉淀DNA？用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。
乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。
DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。
一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。
因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）。
但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。
折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。
也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。
一般在室温下放置15－30分钟即可。
在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1～0.25mol/L？在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。
在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。
加核糖核酸酶降解核糖核酸后，为什么再要用SDS与KAc来处理？加进去的RNase本身是一种蛋白质，为了纯化DNA，又必须去除之，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀，再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物，使沉淀更加完全。
也可用饱和酚、氯仿抽提再沉淀，去除RNase。
在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到较好效果。
7．为什么在保存或抽提DNA过程中，一般采用TE缓冲液？在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作用。
磷酸盐缓冲系统（pKa＝7.2）和硼酸系统（pKa=9.24）等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH)，可作DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与Ca2＋产生Ca3(PO4)2沉淀；在DNA反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高离子浓度，有的则要求低盐浓度，采用Tris-HCl（pKa=8.0）的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl 系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳苯酚、氯仿、异戊醇在DNA提取时的作用抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好？酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。
经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。
而酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在最下层。
作为表面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约10％～15％的水溶解在酚相中，因而损失了这部分水相中的DNA，而氯仿的变性作用不如酚效果好，但氯仿与水不相混溶，不会带走DNA。
所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果最好。
经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯仿是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带走。
也可以在第二次抽提时，将酚与氯仿混合（1:1）使用。
为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。
加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。
一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比。
也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24:1酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。