酚氯仿法提取DNA实验报告

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核酸的提取与鉴定实验报告

核酸的提取与鉴定实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取核酸（DNA 或 RNA）的基本原理和方法。

2、学习使用各种试剂和仪器进行核酸提取的操作步骤。

3、了解核酸鉴定的常用方法及其原理。

4、培养实验操作技能和科学研究的严谨态度。

二、实验原理核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），是生物体遗传信息的携带者。

核酸提取的基本原理是利用细胞裂解液将细胞破碎，使核酸释放出来，然后通过一系列的物理和化学方法将核酸与其他细胞成分分离，最后得到纯度较高的核酸样品。

DNA 提取常用的方法有酚氯仿抽提法、盐析法等。

酚氯仿抽提法是利用酚和氯仿的混合液去除蛋白质，然后通过乙醇沉淀得到 DNA。

盐析法是利用高浓度的盐使蛋白质变性沉淀，从而分离出 DNA。

RNA 提取常用的方法有异硫氰酸胍法、Trizol 法等。

Trizol 法是基于异硫氰酸胍和酚的作用，能够有效地裂解细胞并抑制 RNA 酶的活性，从而提取出完整的 RNA。

核酸鉴定的方法主要有紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法等。

紫外分光光度法通过测定核酸在 260nm 和 280nm 处的吸光度值（A260 和 A280）来评估核酸的纯度和浓度。

A260/A280 的比值在 18 20 之间表示 DNA 纯度较高，在 19 21 之间表示 RNA 纯度较高。

琼脂糖凝胶电泳法则是根据核酸分子在电场中的迁移率不同来分离和鉴定核酸，DNA 分子在琼脂糖凝胶中迁移距离与分子量大小成反比，RNA 通常会呈现出 28S、18S 和 5S 三条带。

三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）或培养的细胞。

大肠杆菌菌液。

2、实验试剂细胞裂解液（含蛋白酶 K）。

酚氯仿混合液（酚：氯仿＝ 1:1）。

无水乙醇、75%乙醇。

3M 醋酸钠（pH 52）。

Trizol 试剂。

异丙醇。

RNA 酶抑制剂。

琼脂糖。

50×TAE 电泳缓冲液。

核酸染料（如 EB 或 GelRed）。

酚氯仿抽提

酚氯仿抽提一、DNA抽提试剂：1.酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）；2.3M NaAc（pH 5.2）；3.80%乙醇。

步骤：1. 样品加去离子水至总体积100 μL；2．加入100 μl已配好的酚/氯仿/异戊醇（25/24/1），充分震荡后，10,000 rpm离心10 min；3. 转移上清于新的离心管中，按体积的1/10加入3M NaAc（pH5.2），按体积的2倍加入100%乙醇，轻轻混匀后，-20 ︒C静至至少30 min沉淀DNA；4. 4 ˚C，12,000 rpm离心10 min，弃去上清；5. 1 mL的80%乙醇洗沉淀，10,000 rpm离心2 min；6. 弃去乙醇，风干后，加入适量去离子水或TE溶解质粒。

二、RNA抽提试剂：1.水饱和酚；2.氯仿；3.3M NaAc（pH 5.2，DEPC水配制）；4.75%乙醇（DEPC水配制）。

步骤：1. 加入DEPC水至总体积为100 μL；2. 加入水饱和酚/氯仿(1:1)，室温混匀；3. 4°C, 12, 000 rpm, 15 min；转移上清至新的离心管中；4. 加入等体积的氯仿，4 ︒C, 12, 000 rpm, 15 min, 取上清；5. 加入上清体积1/10的3M NaAc（pH5.2, DEPC水配制）和2.5倍体积的100%的乙醇，-80 ︒C沉淀过夜；6. 4 ︒C离心，12, 000 rpm, 30 min；7. 去上清，加入100 μL 75%乙醇(DEPC水配制)，洗涤沉淀；8. 12, 000 rpm 离心5 min，去乙醇；风干，溶于适量DEPC水中，-20 ︒C保存。

自己整理外周血DNA 提取-酚氯仿法

DNA 提取实验目的：外周血DNA提取实验试剂：1×RBC裂解液、1×细胞核裂解液、20%SDS、蛋白酶K、Tris饱和酚、氯仿、无水乙醇、70%酒精、TE缓冲液实验耗材：15ml、1.5ml离心管、枪头实验流程：1.将EDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入15ml离心管中，加满1×RBC裂解液，充分混匀（上下颠倒100次），冰上静置30min，直至溶液变透明，离心机4℃3000rp离心12min，去上清液，留白色沉淀（约3-4ml），再次重复上述步骤。

2.在沉淀（2-3ml）中加入1×细胞核裂解液3ml，20%SDS 150-200μL，混匀至粘稠透明状，再加入20mg/ml的蛋白酶K 25-35μL，充分混匀后，37℃50rpm的恒温摇床过夜。

3.加入等体积的Tris饱和酚（约6ml）反复充分摇匀后，置离心机4℃3000rp离心10min4.将上清移至另一离心管中，加入等体积的酚/氯仿（各3ml左右），混匀，室温下离心10min5.再次将上清液移至另一离心管中，加入2倍体积（约10ml）的无水乙醇，轻轻摇晃上下倒转混匀，可析出白色沉淀物（gDNA），离心20℃3000rp 5min 6.用1000μL移液器小心吸出gDNA置于1.5ml的灭菌Ep管中，用70%的酒精漂洗2次，离心4℃10000rp 5min7.用gDNA溶解于200μL TE缓冲液中8.用10μL移液器取2μL TE缓冲液滴入紫外线分光光度计，调零，然后再取2μL直接读数。

9.测量好DNA的浓度后，将gDNA稀释至50ng/μL，用200μL无菌EP管分装，每管分装50μL置-80℃冰箱保存10.DNA的浓度测定及纯度判定：取DNA溶液用TE液做适量稀释，以TE做空白对照，在紫外分光光度计上读取A260和A280的光密度值。

按下面公式计算浓度：DNA浓度(ug/ul)= A260*50*稀释倍数/1000 DNA纯度的判定：A260/A280 比值应介于1.7-2.0之间。

植物基因组dna的提取实验报告

植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告。

植物基因组DNA的提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，对于研究植物的遗传特性和基因表达具有重要意义。

本实验旨在通过提取植物细胞中的DNA，为后续分子生物学实验提供基础支持。

在本次实验中，我们选择了小麦叶片作为实验材料，采用CTAB法提取植物基因组DNA，并对提取的DNA进行质量评估。

首先，我们收集了新鲜的小麦叶片样品，并将其置于液氮中迅速冷冻保存，以保持DNA的完整性。

接着，将叶片样品磨成细末状，并加入预冷的CTAB提取液中，进行细胞破裂和DNA的溶解。

随后，通过酚/氯仿提取法分离DNA与蛋白质，最终得到DNA的沉淀物。

在实验过程中，我们注意到了一些关键的操作细节。

首先，样品的冷冻保存和研磨过程需要迅速进行，以防止DNA的降解。

其次，在加入CTAB提取液后，充分混合样品并保持恒温，有助于细胞破裂和DNA的溶解。

最后，在进行DNA的沉淀时，需要注意避免将上清液一同转移，以保证提取得到的DNA纯度。

提取得到的DNA样品经过紫外分光光度计检测，结果显示其纯度较高，吸光比值（A260/A280）约为1.8，符合DNA的纯度要求。

随后，我们进行了琼脂糖凝胶电泳实验，观察到明显的DNA条带，并通过对照DNA分子量标准品的迁移情况，初步评估了提取得到的DNA片段大小。

通过本次实验，我们成功地提取到了小麦叶片样品中的基因组DNA，并对其质量进行了评估。

下一步，我们将利用提取得到的DNA样品，开展进一步的分子生物学实验，包括PCR扩增、基因克隆等，以深入研究小麦的遗传特性和基因表达。

本次实验为我们提供了可靠的DNA样品，为后续实验奠定了坚实的基础。

总之，植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，本次实验通过CTAB法成功提取了小麦叶片样品中的DNA，并对其进行了质量评估。

提取得到的DNA样品具有较高的纯度和完整性，为后续实验提供了可靠的基础支持。

DNA提取与测序实验报告

DNA提取与测序实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取 DNA 的基本原理和方法。

2、熟悉 DNA 测序的基本流程和操作要点。

3、学会对 DNA 提取和测序结果进行分析和评估。

二、实验原理DNA 提取原理DNA 在细胞中以与蛋白质结合的状态存在。

提取 DNA 的基本思路是通过裂解细胞，使细胞膜和核膜破裂，释放出 DNA，然后去除蛋白质、RNA 等杂质，得到纯净的 DNA。

常用的裂解方法包括物理方法（如研磨、超声破碎）、化学方法（如使用去污剂）和酶解法（如使用蛋白酶K）。

去除杂质的方法则包括使用酚/氯仿抽提、乙醇沉淀等。

DNA 测序原理目前常用的 DNA 测序技术是 Sanger 测序法。

其基本原理是在DNA 合成过程中，通过掺入特定的双脱氧核苷酸（ddNTP）来终止DNA 链的延伸。

由于 ddNTP 缺少3’OH 基团，一旦掺入到 DNA 链中，链的延伸就会终止。

通过在多个反应中分别加入不同的 ddNTP，可以得到一系列不同长度的 DNA 片段。

这些片段经过电泳分离，根据条带的位置可以读取 DNA 的碱基序列。

三、实验材料与设备实验材料1、新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）或植物组织（如叶片）。

2、细胞培养物（如细菌、酵母）。

实验试剂1、细胞裂解液（包含去污剂、蛋白酶 K 等）。

2、酚/氯仿/异戊醇混合液（25:24:1）。

3、无水乙醇、70%乙醇。

4、 TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）。

5、 DNA 测序试剂盒（包含引物、dNTP、ddNTP、DNA 聚合酶等）。

实验设备1、离心机。

2、移液器。

3、恒温水浴锅。

4、电泳仪。

5、凝胶成像系统。

6、 DNA 测序仪。

四、实验步骤DNA 提取步骤1、样本处理对于动物组织，将其剪碎后加入适量的裂解液，在匀浆器中匀浆。

对于植物组织，先在液氮中研磨成粉末，然后加入裂解液。

对于细胞培养物，离心收集细胞，加入裂解液重悬。

DNA提取(苯酚-氯仿小体法)

苯酚-氯仿法小提DNA试剂配制：1：细胞裂解液：0.32 M 的蔗糖；5 mM 的MgCl22：DNA稀释缓冲液：0.375 M的NaCl；12 mM的Tris-HCl [PH 7.5]3：10%的SDS [PH 7.2]4：5 M的NaCl5：苯酚-氯仿混合液V/V = 1:16：无水乙醇和70%的乙醇DNA 抽提：1、收集白细胞:500 μl新鲜/冻存全血(EDTA-2Na抗凝),加入1 ml的细胞裂解液充分混匀后孵育10分钟，,13000 rpm离心15 sec/3min；2、洗涤白细胞:离心后弃去上清液,加入1ml双蒸水重悬沉淀,将沉淀充分吹打使起完全溶解后, 13000 rpm离心1 /5min；3、稀释DNA，去除蛋白:弃离心后上清液，加入80 μl DNA 稀释缓冲液,重悬沉淀，完全溶解后，加入10 μl 10% SDS 和5 M NaCl 100μl，用手摇匀,再加双蒸水240 μl稀释DNA；4、加入300 μl苯酚-氯仿-异戊醇溶液(V/V=25:24:1,PH=7.5).盖紧试管,彻底混合均匀后, 13000 rpm离心12 min;5、取上清相转至另一1.5 ml EP管中，加入上清液体积比的1.5-2倍体积的预冷无水乙醇。

反复颠倒数次后,可见有絮状DNA沉淀析出；6、13000 rpm离心5 min,去上清水相。

加入和无水乙醇等量的70%预冷乙醇洗去DNA中的盐后,离心5 min。

用100 μl ddH2O或50 μl TE保存DNA备用。

为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。

加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。

一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比。

也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24:1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。

实验报告DNA提取与纯化

实验报告DNA提取与纯化实验报告：DNA 提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是从不同的生物样本中提取并纯化 DNA，以获取高纯度、高质量的 DNA 用于后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等。

二、实验原理DNA 存在于细胞核内，与蛋白质等成分结合形成染色质。

在提取过程中，需要通过裂解细胞，使 DNA 释放出来，然后去除蛋白质、RNA 等杂质，从而获得纯净的 DNA。

常用的提取方法包括酚氯仿抽提法、盐析法、硅胶膜吸附法等。

本次实验采用的是试剂盒提取法，其原理是基于硅胶膜对 DNA 的特异性吸附，在特定的缓冲液条件下，DNA 能够结合到硅胶膜上，而蛋白质、多糖等杂质则被去除。

经过洗涤去除杂质后，用洗脱液将 DNA 从硅胶膜上洗脱下来，从而得到纯化的 DNA。

三、实验材料与设备1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）植物叶片细菌培养液DNA 提取试剂盒无水乙醇异丙醇氯仿蛋白酶 KRNA 酶 A2、实验设备离心机移液器恒温振荡器电泳仪紫外分光光度计四、实验步骤1、样本处理动物组织：称取适量的动物组织，剪碎后加入裂解液和蛋白酶 K，在 55℃恒温振荡器中孵育，直至组织完全裂解。

植物叶片：取新鲜的植物叶片，用液氮研磨成粉末，加入提取缓冲液和蛋白酶 K，在 65℃水浴中孵育。

细菌培养液：离心收集细菌沉淀，加入裂解液和溶菌酶，重悬后在37℃孵育。

2、 DNA 提取将处理后的样本加入到吸附柱中，离心使液体通过吸附柱，DNA 被吸附到硅胶膜上。

加入洗涤液，离心洗涤吸附柱，去除杂质。

加入洗脱液，离心洗脱 DNA，收集洗脱液。

3、 DNA 纯化向洗脱液中加入等体积的异丙醇，混匀后离心沉淀 DNA。

用 70%的乙醇洗涤 DNA 沉淀，离心去除乙醇。

干燥 DNA 沉淀，用适量的 TE 缓冲液溶解 DNA。

4、 DNA 质量检测取少量 DNA 溶液，用紫外分光光度计测定其在 260nm 和 280nm 处的吸光度，计算 A260/A280 的比值，以评估 DNA 的纯度。

提取目的基因实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 掌握从细胞中提取目的基因的方法。

2. 了解目的基因提取过程中的原理和操作步骤。

3. 通过电泳检测目的基因的提取效果。

二、实验原理目的基因提取实验主要利用DNA的碱基互补配对特性和分子生物学技术，通过以下步骤实现目的基因的提取：1. 细胞裂解：利用去垢剂（如SDS）和蛋白酶K等试剂，破坏细胞膜，使细胞内的DNA释放出来。

2. 去除蛋白质：通过酚/氯仿抽提法，去除细胞裂解液中蛋白质等杂质。

3. DNA沉淀：通过乙醇或异丙醇等试剂，使DNA沉淀，从而纯化DNA。

4. DNA溶解：将沉淀的DNA溶解于适量的水中，以便后续实验使用。

三、实验材料1. 细胞样本：大肠杆菌或其他细胞株。

2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚/氯仿、乙醇、异丙醇、NaCl、Tris-HCl、EDTA等。

3. 仪器：离心机、电泳仪、紫外分光光度计等。

四、实验步骤1. 细胞裂解：- 将细胞样本加入含有SDS和蛋白酶K的裂解液中，混匀，室温放置30分钟。

- 12,000 rpm离心10分钟，收集上清液。

2. 去除蛋白质：- 将上清液与等体积的酚/氯仿混合，混匀，12,000 rpm离心10分钟。

- 取上清液（即酚/氯仿相）转移至新管中。

3. DNA沉淀：- 向酚/氯仿相中加入1/10体积的3M NaCl和2.5倍体积的乙醇，混匀。

- -20℃放置1小时或过夜。

- 12,000 rpm离心10分钟，收集沉淀。

4. DNA溶解：- 将沉淀溶于适量的Tris-HCl（pH 8.0）缓冲液中，即为提取的目的基因。

5. DNA浓度测定：- 利用紫外分光光度计测定DNA的浓度。

6. 电泳检测：- 将提取的目的基因进行琼脂糖凝胶电泳，观察DNA条带。

五、实验结果1. DNA浓度测定：利用紫外分光光度计测定DNA的浓度为50 ng/μl。

2. 电泳检测：在琼脂糖凝胶电泳中，观察到一条清晰的DNA条带，与目的基因大小相符。

六、实验讨论1. 本实验成功提取了目的基因，说明实验操作步骤正确。

实验报告DNA提取与纯化

实验报告DNA提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是从给定的生物样本中提取并纯化 DNA，以获取高纯度、高质量的 DNA 样品，为后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等提供可靠的材料。

二、实验原理DNA 存在于细胞核内，与蛋白质等物质结合形成染色质。

在提取过程中，需要通过细胞裂解、去除蛋白质和其他杂质等步骤来分离DNA。

细胞裂解可以使用物理方法（如研磨、超声破碎）或化学方法（如使用裂解液）。

去除蛋白质常用的方法有蛋白酶 K 消化和酚/氯仿抽提。

DNA 在一定浓度的盐溶液中可溶解，而在乙醇中会沉淀，利用这一特性可对其进行纯化。

三、实验材料与试剂（一）实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）或植物叶片。

（二）实验试剂1、细胞裂解液：包含 TrisHCl、EDTA、SDS 等成分，用于破坏细胞膜和核膜，释放 DNA。

2、蛋白酶 K：能分解与 DNA 结合的蛋白质。

3、酚/氯仿/异戊醇混合液：用于去除蛋白质。

4、无水乙醇、70%乙醇：用于沉淀和洗涤 DNA。

5、 NaCl 溶液：提供适当的离子强度。

6、 TE 缓冲液（TrisEDTA 缓冲液）：用于保存 DNA。

（三）实验仪器1、离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、涡旋振荡器5、冰箱6、紫外分光光度计四、实验步骤（一）样本处理1、动物组织：将新鲜的动物组织剪碎，放入匀浆器中，加入适量的裂解液，匀浆至组织完全破碎。

2、植物叶片：取适量新鲜叶片，液氮研磨成粉末，加入裂解液。

（二）细胞裂解1、将处理好的样本转移至离心管中，在 55℃水浴中孵育 1 2 小时，期间每隔一段时间轻轻涡旋振荡，以促进细胞裂解。

（三）去除蛋白质1、加入蛋白酶 K，使其终浓度达到一定值，在 55℃继续孵育 1 2小时。

2、冷却至室温后，加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混合液，充分混匀，然后在离心机中以一定的转速离心一定时间。

3、吸取上清液至新的离心管中，重复酚/氯仿抽提步骤 1 2 次，直至中间层无白色蛋白质沉淀。

生物基因的实验报告(3篇)

第1篇一、实验名称生物基因的提取与鉴定二、实验目的1. 学习生物基因提取的方法和原理。

2. 掌握DNA提取、纯化及检测的基本操作。

3. 鉴定提取的DNA是否为纯DNA。

三、实验原理生物基因提取的原理是利用细胞破碎、蛋白质变性、DNA与蛋白质分离等方法，从生物细胞中提取出DNA。

实验中常用的提取方法有酚-氯仿法、柱层析法等。

DNA鉴定通常采用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法。

四、实验材料1. 植物材料：新鲜植物叶片（如水稻、玉米等）。

2. 试剂：酚-氯仿、NaCl溶液、Tris-HCl缓冲液、琼脂糖、DNA标准品、DNA酶、DNA荧光染料等。

3. 仪器：离心机、电泳仪、紫外分光光度计、显微镜等。

五、实验方法1. 植物材料的处理：将新鲜植物叶片洗净，剪成小块，加入适量液氮研磨成粉末。

2. DNA提取：（1）将研磨好的植物粉末加入酚-氯仿溶液，充分振荡，静置分层。

（2）取上清液，加入等体积的NaCl溶液，混匀后加入等体积的冷无水乙醇，充分混匀。

（3）室温静置30分钟，离心取沉淀。

（4）将沉淀溶于适量Tris-HCl缓冲液，得到粗提DNA。

3. DNA纯化：（1）将粗提DNA加入柱层析柱，用适量Tris-HCl缓冲液洗脱。

（2）收集洗脱液，加入适量无水乙醇，静置沉淀。

（3）离心取沉淀，溶于适量Tris-HCl缓冲液，得到纯化DNA。

4. DNA鉴定：（1）取适量纯化DNA，用紫外分光光度计测定其浓度。

（2）将纯化DNA与DNA标准品在同一琼脂糖凝胶电泳槽中电泳，观察DNA条带。

（3）对电泳后的凝胶进行紫外透射，观察DNA条带。

六、实验结果1. DNA浓度：通过紫外分光光度计测定，纯化DNA浓度为20ng/μl。

2. 琼脂糖凝胶电泳：纯化DNA在琼脂糖凝胶电泳中呈现清晰的条带，与DNA标准品对照，条带大小相符。

七、实验讨论1. 在实验过程中，注意避免DNA污染，如使用无DNA酶的试剂、操作过程严格无菌等。

2. 提取的DNA浓度受植物材料、提取方法等因素影响，可通过优化实验条件提高DNA浓度。

基因组提取 (酚氯仿法)

定位克隆实验室2010-12-27 胡文波修订酚氯仿提基因组-大量高纯度DNA的制备原理：酚、氯仿是蛋白质变性剂，能有效去除核蛋白，使核酸从核蛋白中分离出来。

氯仿还能加速有机相与液相的分层，少许异戊醇能稳定界面，减少蛋白质变性过程中产生气泡。

操作步骤：1.将材料放入预冷的研钵中，加入液氮后迅速研磨成粉末状（刚加入液氮时不停上下锤击材料，液氮快挥发完时用研棒旋转搅拌挤压材料使之破碎）。

2.研磨完毕后，加入800ul抽提缓冲液，轻轻摇匀，形成匀浆状。

3.将匀浆液转移至1个2ml离心管中，加入Proteinase K至终浓度为100ug/ml（800ul加4ul蛋白酶K（20ug/ul））,55℃水浴保温过夜。

4.加入等体积平衡酚，室温温和振荡，摇匀，10-15min。

5.离心：12000rpm 4℃ 10min，将粘稠的水相移至洁净的离心管中。

6.再用酚:氯仿（v:v =1:1），氯仿各抽提1次（离心：12000rpm 4℃ 10min）。

7.将上层水相移至洁净的离心管中，加入2倍体积无水乙醇，转动离心管使溶液充分混合，DNA立即形成沉淀。

8.离心：7500g 4℃ 10min，使DNA沉于管底，将离心管倒置于滤纸上，晾干（或用玻璃棒/消毒牙签将DNA沉淀从乙醇沉淀中移出）。

9.用70%乙醇洗涤DNA沉淀2次（离心：7500g 4℃ 10min）。

10.加入200ul TE(pH8.0)使DNA完全溶解。

11.加入RNase至终浓度为50ug/ml，37℃保温1h。

12.紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度。

13.调节DNA终浓度为1000ng/ul。

14.将DNA做梯度稀释：1×102 ，1×101 ，1×100 ，1×10-1 ，1×10-2ng/ul，稀释体积为100ul。

15.取2ul DNA与2ul 2×上样缓冲液混匀，点样到琼脂糖凝胶（w/v = 2%）中，以2.5-5v/cm电泳。

酚氯仿法提取DNA实验报告

酚氯仿法提取DNA实验报告酚氯仿法和试剂盒法提取DNA实验报告一、实验目的实验原理：酚氯仿法：先从全血中分离白细胞，再通过蛋白酶K 消化，通过酚、氯仿的抽提,使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。

蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA乙二胺四乙酸二钠存在下保持很高的活性。

在匀浆后提取DNA的反应体系中晶SDS可破坏细胞膜、核膜晶并使组织蛋白与DNA分离晶EDTA则抑制细胞中Dnase的活性而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸晶使DNA分子完整地分离出来。

氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀晶将核酸物质萃取出来再向萃取液中加入适量乙醇晶可使DNA析出。

氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在DNA纯化研究中非常常用晶氯仿-异戊醇抽提的原理是晶氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相分层异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。

而DNA不溶于乙醇等有机溶剂晶因此可以通过乙醇沉淀来纯化和浓缩DNA二、实验用品试剂：1mol/L(M)Tris-Cl(pH8.0), 0.5M EDTA（pH8.0），5M NaCl TES（15mM Tris, 15mM EDTA，15mM NaCl）Tris饱和酚（PH8.0）氯仿/异戊醇（V/V=24/1）10％SDS5mg/ml Protease K70％乙醇、无水乙醇TE缓冲液（pH8.0）：10mM T ris-Cl（PH8.0）1mM E DTA(PH8.0)10mg/mL 溴化乙锭（EB）耗材：仪器：低温离心机、移液枪一套，低温冰箱，恒温水浴锅、紫外分光光度计（Eppendorf）。

三、实验步骤4.1取血样：实验人员相互取血样5ml.（用品：采血管、采血针、无水乙醇、棉签、橡皮管、废液缸）4.2血液样品的预处理：分取2ml 血样加入到离心管A中用于酚氯仿法提取DNA。

1) 破除RBC：用移液器将采血管中剩余的3ml血样中的血凝块取出转移到组织匀浆器中研磨粉碎，再移入50ml 离心管B中，再加入5倍体积无菌水，颠倒混匀，冰上静置十分钟，用于试剂盒法提取DNA。

实验报告DNA提取实验步骤及结果分析

实验报告DNA提取实验步骤及结果分析实验报告：DNA提取实验步骤及结果分析一、引言DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一，能够从样本中纯化出DNA，用于后续的分析和实验。

本实验旨在探究DNA提取的步骤和方法，并对提取结果进行分析和评估。

二、实验步骤1. 样本准备：选择合适的样本进行DNA提取，如植物组织、动物组织或微生物培养物。

样本应储存于-80℃的冰箱中，以防止DNA降解。

2. 细胞破碎：将样本取出，加入细胞破碎缓冲液，使用均质机或研钵等方法将细胞破碎，使细胞膜被破坏，释放DNA。

3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶，将样本中的蛋白质降解，以去除蛋白质的干扰。

4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，混匀后离心，使混合液分为上下两层，上层为DNA上清液。

5. DNA沉淀：将DNA上清液转移至新离心管中，加入等体积的冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，待DNA逐渐沉淀出来。

6. 洗涤：使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除异丙醇和其他杂质。

7. 重溶：将洗涤后的DNA沉淀物用适量的TE缓冲液重溶，使其溶解。

8. 定量和纯化：使用紫外可见分光光度计测定DNA的浓度，并使用凝胶电泳验证DNA的纯度和完整性。

三、结果分析通过以上步骤，我们成功提取了DNA，并进行了初步的纯化。

下面是对实验结果进行分析和评估：1. DNA提取效果评估：- 可见分光光度计测定DNA浓度：根据光度计读数，我们可以计算出DNA的浓度。

通常，越高的读数代表着更高的DNA浓度。

- 凝胶电泳：通过凝胶电泳，我们可以观察到DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况。

理想情况下，DNA应该呈现出清晰的条带，并且没有明显的降解现象。

2. 实验结果评价：- DNA浓度：根据光度计读数，我们可以评估DNA提取的效果。

如果浓度较高，说明提取效果较好；如果浓度较低，说明可能存在提取效果不佳或DNA被降解的情况。

- DNA完整性：通过观察凝胶电泳结果，我们可以评估提取的DNA是否完整。

动物组织提取实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 掌握从动物组织中提取DNA的基本原理和方法。

2. 熟悉实验操作流程，包括组织处理、裂解、纯化、沉淀和溶解等步骤。

3. 学习使用酚-氯仿法提取DNA，并掌握相关试剂和仪器的使用。

二、实验原理动物组织中的DNA主要以染色体的形式存在于细胞核内。

提取DNA的目的是将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，同时保持DNA分子的完整性。

本实验采用酚-氯仿法提取DNA，其原理如下：1. 使用SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K处理组织，破坏细胞膜，使蛋白质变性并溶解。

2. 加入酚和氯仿/异戊醇，通过酚的变性作用和氯仿/异戊醇的相容性，使蛋白质和DNA分离。

3. 通过离心，将蛋白质和杂质与DNA分离。

4. 用乙醇沉淀DNA，得到纯净的DNA。

三、实验材料1. 实验动物：小鼠或鸡2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚、氯仿/异戊醇、乙醇、TE缓冲液、NaCl、EDTA、液氮、离心机、移液器、玻璃匀浆器、离心管、吸头等四、实验步骤1. 组织处理- 称取适量动物组织（如肝脏、肌肉等），用液氮迅速冷冻。

- 将冷冻的组织移入研钵中，加入适量的裂解缓冲液（含SDS、蛋白酶K、NaCl、EDTA等），用研钵研磨至匀浆状。

- 将匀浆移入离心管中，加入等体积的酚和氯仿/异戊醇，充分混匀。

- 4℃下静置30分钟，待蛋白质变性沉淀。

2. 离心分离- 将离心管以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。

- 将沉淀中加入适量的TE缓冲液，充分混匀。

- 再次以12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液。

3. DNA沉淀- 向沉淀中加入适量的乙醇，混匀后静置2-3分钟。

- 将沉淀移入新的离心管中，以12,000 rpm离心5分钟。

- 弃去上清液，用75%乙醇洗涤沉淀1次。

- 将沉淀干燥，加入适量的TE缓冲液溶解。

4. DNA纯化- 将溶解的DNA溶液通过0.22 μm滤膜过滤，去除杂质。

- 使用紫外分光光度计测定DNA浓度。

“酚氯仿裂解法”提取质粒DNA

“酚氯仿裂解法”提取质粒DNA作者：张林琳，李翔，张栋，贺大林，李磊，王新阳【关键词】质粒DNA；酚氯仿；提取；内切酶；聚合酶链反应；电泳【关键词】质粒DNA；酚氯仿；提取；内切酶；聚合酶链反应；电泳1材料和方法1.1材料含有人柯萨奇腺病毒受体 (human Coxsackie and adenovirus receptor, hCAR）基因的真核表达质粒载体pIRES2EGFPhCAR由本研究所构建；转化菌E.coli DH5a由本研究所保存；内切酶PstI购自TaKaRa公司. LB培养基（蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，氯化钠10 g）. Tris饱和酚、氯仿按1∶1体积比配制成混合液；无水乙醇；RTE溶液： 10 mmol/L TrisHCl (pH 8.0), 1 mmol/L EDTA＋20 mg/mL RNase A（无DNase）. 直径35 mm可反复使用针式小滤器及0.22 μm滤膜购自华美生物生物公司.1.2方法①从琼脂平板上挑取转化菌阳性克隆，接种到标准LB培养液中（含有卡那霉素30 μg/mL）摇菌12 h；收集1.5 mL 菌液，8000 g/min离心3 min，弃上清，沉淀加入200 μL TE，充分混匀；加入400 μL酚氯仿（1∶1体积）混合液，剧烈振动10 s，混匀；12 000 g/min离心5 min，1 mL胰岛素注射针收集上清，尽量避免吸入蛋白沉淀层；上清经国产0.22 μm针式滤器过滤1次；向过滤上清液内加入2倍体积无水乙醇，振荡10 s，12 000 g/min离心5 min；沉淀溶于20 μL的RTE溶液中，37℃水浴. ②按PstI内切酶说明书进行酶切反应（37℃，1 h）. 酶切产物10 μL，10 g/L琼脂糖凝胶电泳. ③ PCR引物根据参考文献［1］设计，预计扩增产物片断大小为714 bp. ④常规制备感受态菌E.coli DH5a，提取质粒DNA常规转化感受态，涂于含有卡那霉素（30 μ/mL）LB培养平板中，37℃培养，15 h后观察筛选克隆情况.2结果提取质粒DNA经Pst I酶切能获得1.17 kb的目的片断（图1）. 以提取质粒DNA为模版，进行目的基因hCAR的PCR，可以获得714 bp产物片断，与预期大小一致（图2）. 提取质粒DNA常规转化感受态细菌，能获得较多的阳性克隆. M: maker；1：未酶切质粒，星号所示为超螺旋结构的质粒DNA；2：经PstI酶切质粒片断.图1质粒酶切片断的电泳结果（略）M: marker;1~2: PCR产物.图2PCR电泳（略）3讨论目前常用的质粒提取方法是在“碱裂解法”［2］基础上优化和改进形成. “碱裂解法”所需溶液试剂比较多，配制过程繁琐. “酚氯仿裂解法”［3］利用酚氯仿混合有机溶剂破碎细菌，使菌体蛋白质变性析出，细菌核酸、质粒DNA经无水乙醇沉淀后，用RNase A降解RNA，细菌基因组DNA和质粒DNA被提取出. 由于该方法质粒DNA未经变性复性过程，三级结构保持较完整，所以提取的质粒DNA以超螺旋结构为主. 本方法提取的质粒DNA中含有细菌基因组DNA，影响提取质粒DNA的准确定量，但这并不影响下一步的实验，如酶切、转化、亚克隆以及聚和酶链反应等基本分子生物学实验.【参考文献】［1］Lai YJ, Pong RC, McConnell JD, et al. Surrogate marker for predicting the virus binding of urogenital cancer cells during adenovirusbased gene therapy ［J］. Biotechniques, 2003,35(1):186-190,192-194.［2］Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular cloning: A laboratory manual, 3nd ed ［M］. Cold Spring Harbor, NY:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001:16-19.［3］Song J, Geltinger C, Sun K, et al. Direct lysis method for the rapid preparation of plasmid DNA ［J］. Anal Biochem,1999,271(1):89-91.。

生物实验的实验报告

实验名称：DNA提取与鉴定实验目的：1. 学习DNA提取的基本原理和方法。

2. 掌握DNA纯化、鉴定和保存的方法。

3. 了解DNA在生物学研究中的应用。

实验原理：DNA是生物体内的一种重要生物大分子，具有遗传信息传递和表达的功能。

DNA提取是将DNA从细胞中分离出来的过程。

本实验采用酚-氯仿法提取DNA，该方法基于DNA与蛋白质在不同溶剂中的溶解度差异。

实验材料：1. 人发或口腔拭子2. Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）3. NaCl溶液4. 95%乙醇5. 10%氯化钠溶液6. 酚-氯仿溶液7. 0.1mol/L NaCl溶液8. 100mg/ml二苯胺溶液9. 显微镜10. 离心机实验步骤：1. 取适量人发或口腔拭子放入离心管中，加入1ml Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）。

2. 将离心管置于55℃水浴中加热30分钟，以充分溶解DNA。

3. 加入等体积的酚-氯仿溶液，充分混匀后静置10分钟。

4. 4℃离心10分钟，取上清液转移至新的离心管中。

5. 加入等体积的95%乙醇，充分混匀后静置10分钟。

6. 4℃离心10分钟，弃去上清液，沉淀用70%乙醇洗涤一次。

7. 将沉淀干燥后，加入100μl 0.1mol/L NaCl溶液溶解DNA。

8. 加入等体积的酚-氯仿溶液，充分混匀后静置10分钟。

9. 4℃离心10分钟，取上清液转移至新的离心管中。

10. 加入2倍体积的95%乙醇，充分混匀后静置10分钟。

11. 4℃离心10分钟，弃去上清液，沉淀用70%乙醇洗涤一次。

12. 将沉淀干燥后，加入50μl 0.1mol/L NaCl溶液溶解DNA。

13. 加入2μl二苯胺溶液，充分混匀后沸水浴5分钟。

14. 观察溶液颜色变化，若出现蓝色，则证明DNA提取成功。

实验结果：经过以上步骤，成功提取了DNA，溶液颜色由无色变为蓝色。

实验讨论：1. 在实验过程中，酚-氯仿法提取DNA是一种常用的方法，具有操作简便、效率高等优点。

核酸提取试剂实验报告

一、实验目的1. 熟悉核酸提取试剂的使用方法。

2. 掌握核酸提取的原理和操作步骤。

3. 了解不同核酸提取试剂的优缺点。

二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。

DNA主要存在于细胞核中，负责储存遗传信息；RNA主要存在于细胞质中，参与蛋白质的合成。

核酸提取是将核酸从生物样本中分离出来的过程，常用的提取方法有酚-氯仿法、磁珠法等。

本实验采用酚-氯仿法提取DNA，该方法利用酚和氯仿的变性作用，将蛋白质与DNA 分离，然后通过离心、沉淀等步骤，获得纯化的DNA。

三、实验材料1. 样本：细菌、真菌、植物、动物组织等。

2. 试剂：酚-氯仿、氯仿、无水乙醇、NaCl溶液、TE缓冲液等。

3. 仪器：离心机、电子天平、移液器、离心管等。

四、实验步骤1. 样本处理：将样本剪碎，加入适量TE缓冲液，充分研磨，制成匀浆。

2. 混合：将匀浆液加入等体积的酚-氯仿，充分振荡，静置10分钟。

3. 离心：将混合液以12,000 rpm离心10分钟，取上清液。

4. 沉淀：在上清液中加入等体积的氯仿，充分振荡，静置10分钟。

5. 离心：将混合液以12,000 rpm离心10分钟，取上清液。

6. 沉淀：在上清液中加入1/10体积的3mol/L NaCl溶液和2.5倍体积的无水乙醇，充分混匀，静置2小时。

7. 离心：将混合液以12,000 rpm离心10分钟，弃上清液。

8. 洗涤：用75%乙醇洗涤沉淀，以12,000 rpm离心5分钟，弃上清液。

9. 洗涤：用无水乙醇洗涤沉淀，以12,000 rpm离心5分钟，弃上清液。

10. 溶解：将沉淀溶于适量TE缓冲液，混匀，即为提取的DNA。

五、实验结果与分析1. 实验结果：通过酚-氯仿法提取的DNA呈白色絮状沉淀，溶解于TE缓冲液后，在紫外分光光度计下，A260/A280比值在1.8-2.0之间，表明DNA纯度较高。

2. 结果分析：实验结果表明，酚-氯仿法能够有效提取DNA，且提取的DNA纯度较高。

氯仿细胞实验报告

一、实验目的1. 了解氯仿在细胞实验中的应用及作用原理；2. 掌握氯仿提取DNA的方法及操作步骤；3. 熟悉DNA纯化的原理及操作过程。

二、实验原理氯仿是一种有机溶剂，具有较强的溶解能力。

在细胞实验中，氯仿常用于提取DNA。

其作用原理是：氯仿能破坏细胞膜，使细胞内的DNA与蛋白质分离，从而实现DNA的提取。

同时，氯仿还能与DNA结合，形成复合物，便于后续的DNA纯化。

三、实验材料与仪器1. 材料：植物叶片、氯仿、异戊醇、无水乙醇、NaCl、酚、氯仿、异丙醇等；2. 仪器：高速冷冻离心机、电子天平、移液器、锥形瓶、玻璃棒、试管等。

四、实验步骤1. 样品制备：取新鲜植物叶片，用液氮研磨成粉末状；2. 氯仿提取：将研磨好的样品加入适量的氯仿，充分振荡，使细胞膜破裂，DNA与蛋白质分离；3. 沉淀：将振荡后的样品置于高速冷冻离心机中，离心5分钟，取上清液；4. DNA纯化：向上清液中加入等体积的酚，充分振荡，使DNA与酚结合；5. 沉淀：将振荡后的样品置于高速冷冻离心机中，离心5分钟，取上清液；6. DNA纯化：向上清液中加入等体积的氯仿，充分振荡，使DNA与氯仿结合；7. 沉淀：将振荡后的样品置于高速冷冻离心机中，离心5分钟，取上清液；8. DNA纯化：向上清液中加入2倍体积的无水乙醇，充分振荡，使DNA沉淀；9. 沉淀：将振荡后的样品置于高速冷冻离心机中，离心10分钟，弃去上清液；10. 洗涤：向沉淀中加入1/10体积的70%乙醇，充分振荡，洗涤DNA；11. 沉淀：将振荡后的样品置于高速冷冻离心机中，离心5分钟，弃去上清液；12. 干燥：将沉淀干燥，加入适量的蒸馏水溶解。

五、实验结果与分析通过以上实验步骤，成功提取并纯化了植物叶片中的DNA。

观察实验结果，DNA呈白色沉淀，溶解于蒸馏水中，说明实验操作正确。

六、实验讨论1. 氯仿提取DNA的关键步骤是细胞膜的破裂，使DNA与蛋白质分离。

在实验过程中，需确保氯仿与样品充分混合，以提高DNA提取效率；2. 氯仿提取DNA过程中，需注意避免DNA降解。

酚-氯仿抽提DNA

方法一细菌沉淀加入567μlTE溶液(10mmol/L Tris- HCl , 1mmol/L EDTA, pH810) 重悬,加入10%SDS30μl 和20mg/ml 蛋白酶K3μl , 于37 ℃温育1h,加入5mol/LNaCL100μl , CTAB/NaCl 80μl 溶液, 于65 ℃温育10min,加入等体积的氯仿/异戊醇, 混匀, 4 ℃12000g/min离心5min。

将上清液转入另1个离心管中加等体积的酚/氯仿/异戊醇, 混匀, 4 ℃12000g/min 离心5min,提取上清置于另一管中, 加入0.6体积异丙醇, 轻柔混合, 4℃12000g/min离心5min, 弃上清加入70%乙醇洗涤1min, 离心, 弃上清, 将沉淀的DNA溶于100μl 的无菌去离子水中, - 20℃保存备用方法二取 1.5 mL 培养至对数生长期的菌液于 2.0 mL 的离心管中，8 000 r/min 离心5 min，弃上清；加入600 μL 消化液（10 mmol/L Tris-HCl，0.1 mol/L EDTA，1% SDS，200μg/mL蛋白酶K，20μg/mL RNase A），37℃消化30 min ；加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25 /24/ 1）混合液，轻摇10 min，12 000 r/min 离心 5 min，取上清，重复抽提1次；加入等体积的氯仿/异戊醇（24 /1）混合液抽提 1 次；加入1/10 体积的 3 mol/L 的醋酸钠和 2 倍体积的冰乙醇混匀，静置10 min，12 000 r/min 离心10 min，弃上清；沉淀加入 1 mL 70%乙醇洗涤2次，每次8 000 r/min 离心 5 min，弃乙醇，待沉淀中残余乙醇挥发后，加入50μL 超纯水溶解DNA。

4℃保存备用。

方法三将预处理后所得沉淀加入300μL细胞裂解液（主要成分：10mmol/L Tris-HCl 缓冲液、1mol /L 氢氧化钠、10mmol/L乙二胺四乙酸、生理盐水、0.2%十二烷基硫酸钠），振荡混匀，于100℃加热15min。

做核酸过程实验报告

一、实验目的1. 熟悉核酸提取、纯化的基本原理和方法。

2. 掌握核酸的定量分析方法。

3. 了解实验过程中可能遇到的问题及解决方法。

二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA。

核酸提取、纯化是分子生物学实验中常用的技术，目的是获取高纯度的核酸。

本实验采用酚-氯仿法提取DNA，通过乙醇沉淀、氯化钠盐析等方法进行纯化，最后采用紫外分光光度法对核酸进行定量分析。

三、实验材料1. 实验动物（如鸡血、鸭血等）；2. 生理盐水；3. 无菌器械；4. 酚-氯仿混合液；5. 95%乙醇；6. 0.1mol/L NaCl溶液；7. 1mol/L Tris-HCl（pH 8.0）；8. 紫外分光光度计；9. 电子天平；10. 移液器；11. 离心机；12. 玻璃器皿等。

四、实验方法1. 核酸提取（1）取实验动物血液，加入生理盐水稀释；（2）用无菌器械将血液移入离心管，加入等体积的酚-氯仿混合液；（3）充分振荡，室温下静置10分钟；（4）4℃、12000r/min离心10分钟；（5）将上清液转移至另一离心管，加入等体积的95%乙醇；（6）室温下静置30分钟；（7）4℃、12000r/min离心10分钟；（8）弃去上清液，用少量70%乙醇洗涤沉淀；（9）4℃、12000r/min离心5分钟；（10）弃去上清液，晾干沉淀。

2. 核酸纯化（1）将晾干的核酸沉淀溶解于1mol/L Tris-HCl（pH 8.0）；（2）加入0.1mol/L NaCl溶液，调节pH至7.0；（3）4℃、12000r/min离心10分钟；（4）取上清液即为纯化的核酸。

3. 核酸定量分析（1）取纯化后的核酸溶液，用紫外分光光度计测定A260、A280；（2）计算核酸浓度：C（ng/μl）=（A260×50）×10^-9；（3）计算DNA和RNA的相对含量：DNA相对含量=（DNA浓度/总浓度）×100%；RNA相对含量=（RNA浓度/总浓度）×100%。