高产纤维素酶菌株原生质体制备及再生条件

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Ｄｅｃ．２Ｏ１３
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产纤维素酶菌株原生质体制备及再生条件
李淼，曾柏全，冯金儒
（中南林业科技大学生命科学与技术学院，湖南长沙４１０００４）
摘要：研究青霉菌ＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍＱ５和枯草芽孢杆菌ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＫ３原生质体制备与再生的最佳条件。采用酶解法制备了青霉菌和枯草芽孢杆菌的高质量的原生质体。试验对亲本菌株的菌丝生长，酶浓度，酶解时间和灭活时间进行了优化。亲本菌株Ｏ５，培养液中加入浓度０．５％甘氨酸和含量１０％的蔗糖处理后，在质量浓度均
ＰｒｏｔｏｐｌａｓｔｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍＱ５ａｎｄ
Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓｋ３
为１０ｍｇ／ｍＬ的溶菌酶和蜗牛酶（１：１）酶解作用下，３５ ℃处理３ｈ，原生质体生成量达到最大值，为７．３５ ×１０。
ｃｆｕ／ｍＬ；亲本菌株Ｋ３，用４Ｕ／ｍＬ的青霉素处理，在１ｍｇ／ｍＬ的溶菌酶作用下，３５℃处理１ｈ，原生质体形成
ｓｕｂｔｉｌｉｓＫ３ｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｈｉｇｈ — ｑｕａｌｉｔｙｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓｏｆＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍＱ５ａｎｄＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＫ３ｈａｖｅｂｅｅｎｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｕｓｉｎｇｅｎｚｙｍａｔｉｃ
ＬＩＭｉａｏ，ＺＥＮＧＢａｉ — ｑｕａｎ，ＦＥＮＧＪｉｎ — ｒｕ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉ￣ｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１ห้องสมุดไป่ตู้０００４，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓｏｆＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍＱ５ａｎｄＢａｃｉｌｌｕｓ
ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｔｅｓｔｓ，ｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｍｉｃｒｏｂｉａｌｇｒｏｗｔｈ，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｃｅｌｌｕｌａｓｅａｎｄｔｉｍｅｏｒｆｒｅａｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅ
关键词：青霉菌Ｏ５；枯草芽孢杆菌Ｋ３；原生质体制备；原生质体再生；原生质体灭活
中图分类号：￥７１８．８
文献标志码：Ａ
文章编号：１６７３ — ９２３Ｘ（２０１３）１２一ｏｌ７４ — ０７
率与再生率的乘积达到最大值，此时Ｋ３原生质体量为１．４６ ×１０ｃｆｕ／ｍＬ。青霉菌在６５℃ 热灭活的时间为ｌｈ，
紫外灭活时间为３ｍｉｎ；枯草芽孢杆菌在６５ ℃热灭活的时间是２．５ｈ，紫外灭活时间为５ｍｉｎ。这为后续原生质体融合选育具有抗逆性的高产纤维素酶菌株打下基础。
ｏｐｔｉｍａｌｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｔｉｍｅｗｅｒｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄ．ＴｈｅａｍｏｕｎｔｏｆｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｆｒｏｍＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍＱ５ｇａｉｎｅｄｌｆｍａｘｉｍｕｍ，７．３５ ×１０ｃｆｕ／ｍＬ，ａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｂｏｖｅｕｓｅｄｖａｌｕｅｓｗｅｒｅ０．５％Ｇｌｙｃｏｌｉｃ，１０％ｓｕｇａｒ，１０ｍｇ／ｍＬｌｙｓｏｚｙｍｅａｎｄｓｎａｉｌｅｎｚｙｍｅ（１：１），３ｈｏｕｒｓ，ａｎｄ３５℃
第３３卷第１２期２０１３年１２月
中南林业科技大学学报
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ